产生物表面活性剂菌SP-7发酵液的性能

从胜利油田井口土壤中分离并培育出一株可产生生物表面活性剂的假单胞菌,命名为SP 7,考察了SP 7发酵液作为微生物采油用剂的相关性能。在含各种营养物的培养基中在37℃培养48h的SP 7菌发酵液,与等体积比的胜利河口油田一口井的原油(50℃粘度1019mPa·s)混合,生成O/W乳状液,长时静置后生成下相微乳状液。发酵液的油水界面张力为1.3mN/m。发酵液20℃时生成的泡沫稳定性(半衰期)较商品发泡剂新咪唑啉溶液略差,但50℃时则较好,泡沫体细小致密。发酵液在20～110℃热处理2h后,室温表面张力大体维持恒定(29.7～30.5mN/m);pH值在5.0～10.0范围的发酵液,室温表面张力基本不变(29.7～31.2mN/m);矿化度(NaCl质量浓度)在5.0×103～1.0×105mg/L范围的发酵液,室温表面张力也基本不变(29.7～30.3mN/M),矿化度为1.5×105mg/L时小幅上升至33.3mN/m。从发酵液中提取并纯化的生物表面活性剂,含量为2.1g/L,用IR方法鉴定为脂肽和糖脂,室温时其临界胶束浓度仅为36mg/L。SP 7发酵液可直接用于三次采油。介绍了筛选和培养菌种所用培养基的组成及从发酵液中分离和提纯生物表面活性剂的程序。图3表2参6。

pH对兼性嗜碱菌Alcaligenes sp.XJ-T-1产生物破乳剂性能的影响

从受石油污染土壤中筛选出一株生物破乳剂产生菌Alcaligenes sp.XJ-T-1,生长的最适初始pH范围为9.0～11.0,为兼性嗜碱菌,能在初始pH 6.0～pH 11.0生长并产生生物破乳剂,但只有在碱性环境下才产生胞外产物。XJ-T-1菌悬液和胞外产物溶液可将蒸馏水表面张力分别降低到30 mN/m左右和35 mN/m左右。经过TLC分析,初步推测XJ-T-1产生的胞外产物为脂肽类和糖脂类的混合物。XJ-T-1菌悬液主要针对O/W型乳状液破乳,胞外产物主要针对W/O型乳状液破乳,初始pH 9.0培养下的菌悬液和胞外产物破乳效果最好。投加210 mg/L菌悬液可使O/W型乳状液在24 h的破乳率达77.5%,投加40 mg/L胞外粗产物溶液可使W/O型乳状液在24 h的破乳率达90.0%。通过透射电镜照片推测,随着培养pH提高到9.0以上,胞外产物的产生使XJ-T-1利用石蜡的过程发生变化。

脂肽-糖脂混合型生物表面活性剂的性能及助剂

分离提取了枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis THY-8发酵产物中的生物表面活性剂，采用飞行时间质谱鉴定为鼠李糖脂和表面活性素、芬芥素等的混合物。考察了该混合型生物表面活性剂的性能，研究了其对油砂原油的驱油效率，并探索了合适的助剂种类及配伍浓度。结果表明，THY-8所产的脂肽-糖脂混合型生物表面活性剂具有良好的表面活性、热稳定性和乳化性，pH值为5.5时表面张力为27.59 mN/m，临界胶束浓度为15 mg/L；在70℃放置5天，表面张力基本不变；可将液体石蜡乳化形成粒径10～30μm的乳液。正辛醇助剂与该混合生物表面活性剂复配后界面张力降低到10-3 mN/m，驱油效率提高3.2倍。含0.9 g/L生物表面活性剂的发酵液驱油效果与正辛醇-生物表面活性剂复配体系相当。

解淀粉芽孢杆菌gfj-4发酵上清液和化学杀菌剂混配抑制葡萄白腐病菌的室内筛选

为探明解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)gfj-4次级代谢产物及其和化学杀菌剂的复配剂对葡萄白腐病菌(Coniella diplodiella)的抑制活性。采用菌丝生长速率法测定发酵上清液、脂肽粗提物以及发酵上清液与化学杀菌剂的混配剂对病菌的抑制特性。结果表明,种子液培养时间为4h与发酵培养时间为84h对病菌的抑制率最高。拮抗菌发酵上清液和脂肽粗提物对病菌的EC_(50)分别为11.10μL/mL和3.02μL/mL。葡萄白腐病菌对苯醚甲环唑、腈菌唑和戊唑醇的敏感性较高。其中,苯醚甲环唑对病菌的抑制活性最高,EC_(50)为0.02μg/mL。保护性杀菌剂福美双和百菌清对病菌抑制活性较高,EC_(50)分别为2.81μg/mL和3.51μg/mL。解淀粉芽孢杆菌gfj-4发酵上清液和苯醚甲环唑混配对葡萄白腐病菌的抑制活性表现为增效作用,其中与苯醚甲环唑以3∶7的体积比混配毒性比最高,达1.60。解淀粉芽孢杆菌gfj-4发酵上清液、脂肽粗提物以及发酵上清液与苯醚甲环唑的混配剂对葡萄白腐病菌有较强的抑制活性,具有潜在的利用价值。

一株分离自海水的产生物表面活性剂菌株的鉴定及其发酵优化

为研究分离白海水的芽孢杆菌dhs．330产生物表面活性剂的培养条件和产物特性，采用16SrDNA基因序列分析鉴定菌种，对发酵培养基的碳源、氮源、pH值和培养温度进行优化，采用飞行时间质谱进行产物鉴定及抑菌圈法考察产物抑菌活性。结果显示，该菌株与Bacillusmojavensis菌株16SrDNA的序列相似性为99％。菌株发酵液表面张力可由70mN·m-1降低至27mN·m-1。发酵培养基的最适碳源、有机氮源和无机氮源分别为甘油、酵母膏和尿素；pH值为6．5～7．0、温度为30-35℃条件下，菌体生长和生物表面活性剂合成最为有利。发酵产物为脂肽-糖脂混合型生物表面活性剂，对海洋污损微生物Bacilluspumilusdhs04有显著的抑菌活性。菌株dhs-330是能合成脂肽一糖脂混合生物表面活性剂、具有海洋污损微生物防除潜力的优选菌株。

脂肽-糖脂混合生物表面活性剂产生菌筛选和优化培养

结合脂肽和糖脂的性能优势,致力于产脂肽-鼠李糖脂混合型生物表面活性剂的新菌株选育和培养条件优化。采用血平板溶血圈法初筛菌株、改进排油圈法快速检测产量以及飞行时间质谱鉴定产物结构。对优选菌株的碳源、氮源和磷酸盐缓冲液、重要金属离子浓度等进行了单因子和正交试验,优化了培养基和培养条件。采用高压液相色谱和蒽酮比色法定量分析了产物组成。筛选获得了同时积累糖脂和脂肽的新菌株,鉴定命名为芽胞杆菌Bacillus subtilis THY-7。摇瓶分批培养48 h,细胞OD600为37.0,产物浓度2.4 g/L,分别是优化前的3.4倍和3.1倍。发酵罐补料分批培养,泡沫中产物浓度达到4.5 g/L,且74%为表面活性素,22%为鼠李糖脂。B.subtilis THY-7是具有脂肽-鼠李糖脂高产潜力的优选菌株。