金钗石斛生物总碱对脂多糖激活星形胶质细胞产生炎症因子的影响

目的观察金钗石斛生物总碱对外源性内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活大鼠大脑皮层星形胶质细胞(astrocyte)及诱导其产生和释放炎症介质的影响,探讨石斛生物总碱对星形胶质细胞的抗炎作用。方法通过MTS检测细胞存活率,ELISA法检测TNF-α炎性因子蛋白的表达,实时定量多聚酶链反应(real time RT-PCR)检测炎症相关基因TNF-α、IL-6 mRNA的表达。结果①LPS刺激星形胶质细胞后,MTS检测吸光度明显升高,与正常组比较差异有显著性;②金钗石斛生物总碱能够降低LPS所致的TNF-α蛋白的高表达(P<0.05);③金钗石斛生物总碱能够降低LPS诱导的星形胶质细胞吸光度的升高,同时明显抑制LPS所致的TNF-α、IL-6 mRNA的高表达。结论金钗石斛生物总碱能够拮抗LPS所引起的炎症反应,其作用与抑制星形胶质细胞的激活及其炎症因子的释放密切相关。

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖(LPS)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及分泌细胞外基质(ECM)的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组:对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑(MTT)比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR(RT-PCR)法检测ECM中层黏连蛋白(LN)β2 mRNA表达的变化。结果(1)LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义(P<0.05);(2)正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义(P<0.01);(3)正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义(P<0.01)。结论从蛋白和 mRNA两个水平同时观察到ECM成分(如FN、LN和ColⅣ)的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。

金顶侧耳多糖体外抗肿瘤作用的研究

通过深层发酵获得金顶侧耳菌丝体。用水提法分别提取金顶侧耳菌丝体多糖、胞外(过滤液)多糖和全液(菌丝体+发酵液)多糖。用MTT比色法测定金顶侧耳多糖体外对小鼠S-180癌细胞及人结肠低分化腺癌细胞的抑制率。结果表明,金顶侧耳胞外多糖对体外培养的S-180癌细胞有抑制作用,全液多糖和菌丝体多糖无抑制作用。这3种多糖体外对人结肠低分化腺癌细胞有抑制作用,其中金顶侧耳胞外多糖抑制率最高,全液多糖次之,菌丝体多糖最低。

多磺酸黏多糖乳膏治疗血栓性浅静脉炎的药物经济学评价

目的:分析多磺酸黏多糖乳膏治疗血栓性浅静脉炎的成本-效果。方法:收集多中心非随机同期病例数据,采用增量成本-效果分析对其成本-效果进行评价。结果:多磺酸黏多糖乳膏治疗组相对于对照组,每增加1个效果单位,成本可节约42.68元。使用多磺酸黏多糖乳膏可直接降低治疗的总费用。结论:多磺酸黏多糖乳膏治疗血栓性浅静脉炎是有效、安全、经济的。

鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤小鼠Bcl-2和P53表达的影响

用鳞盖红菇(Russula lepida)菌丝体多糖连续灌胃H22荷瘤小鼠10d。与阴性对照组相比,多糖组的瘤重降低,Bcl-2和突变型P53的表达下调,表明鳞盖红菇菌丝体多糖对H22荷瘤鼠有抑瘤作用,可以抑制H22肝癌细胞的增殖。

激素联合内毒素所致骨坏死微循环障碍超微结构观察

目的:观察激素联合内毒素所致骨坏死骨内微血管内皮表面的超微结构损害和血栓形成.方法:实验动物分为模型组和正常对照组.模型组前2d间隔24h于静脉缓慢注射脂多糖(LPS),每次剂量30μg/kg;第3～8日静脉注射地塞米松,1次/d,剂量7.5mg/kg.对照组给予生理盐水0.5mL/kg.满8wk时取材前,股骨头压力灌注肝素钠、100mL/L中性甲醛固定液.一半股骨头标本制备脱钙切片,苏木素伊红染色,观察骨坏死情况.另一半标本制备不脱钙切片,脱掉包埋剂,临界点干燥、喷金、扫描电镜观察软骨下微血管内皮表面超微结构改变.结果:模型组股骨头软骨下微血管内皮表面凹凸不平,管腔不规则,可见管腔填塞、血栓形成;此结果与组织学观察结果一致.结论:激素联合内毒素所致骨坏死微循环障碍的主要表现为微血管内皮损伤和微血栓形成.

表面活性蛋白-A对脂多糖诱导的人肾小管近曲上皮细胞白介素-6表达的影响

目的：探讨表面活性蛋白-A（SP-A）的表达改变对脂多糖（LPS）诱导的人肾小管近曲上皮细胞（HK-2细胞）白介素-6（IL-6）表达的影响及机制。方法培养HK-2细胞，ELISA方法检测不同浓度的LPS（0、0．1、1、2、5、10 mg／L）作用8 h及5 mg／L的LPS于不同时间（0、2、4、8、16、24 h）作用HK-2细胞后IL-6蛋白表达的变化；应用脂质体转染法将SP-A SiRNA转染入HK-2细胞，筛选稳定转染细胞株，采用5 mg／L的LPS刺激SP-A SiRNA稳定转染的HK-2细胞8 h，ELISA方法检测细胞上清中IL-6的分泌量，Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白的表达。结果应用1、2、5、10 mg／L的LPS刺激HK-2细胞8 h后，IL-6蛋白表达水平较0、0．1 mg／L的LPS刺激后显著升高（P＜0．05）；同时，应用5 mg／L的LPS作用HK-2细胞4、8、16、24 h后，IL-6蛋白的表达水平较5 mg／L的LPS作用0、2 h显著升高（P＜0．05）。SP-A SiRNA转染的HK-2细胞经LPS刺激后，其NF-κBP65和IL-6蛋白表达较未转染经LPS刺激细胞明显升高（P＜0．05）。结论 SP-A可能通过抑制NF-κB p65的表达进而下调LPS诱导的HK-2细胞IL-6的表达，在脓毒症急性肾损伤时发挥保护作用。

六菌子颗粒水提工艺研究

目的优化六菌子颗粒的经水提取工艺条件,为六菌子颗粒的进一步开发奠定基础。方法选用L9(34)正交试验,以六菌子颗粒水提液中总多糖的含量为考察标准,研究加水量、煎煮时间、煎煮次数对水提工艺的影响,并对水提工艺的稳定性进行验证,筛选出六菌子颗粒的最佳水提工艺。结果水提工艺中选取的各因素对多糖含量影响的作用为:C提取次数>A加水量>B煎煮时间,试验得出六菌子颗粒的最佳提取工艺是A2B2C3,即10倍水,提3次,每次1.5 h。结论优化的水提工艺稳定、可行,可用于六菌子颗粒中各药材的提取,为六菌子颗粒制剂的开发提供实验依据。

吡格列酮对脑室注射脂多糖所致大鼠海马损伤的保护作用机制探讨

目的研究吡格列酮(Pio)对脂多糖(LPS)所致大鼠海马神经元损伤保护作用的信号传导机制。方法取SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,即生理盐水对照组,LPS组,LPS+Pio 40和80 mg.kg-1组。大鼠灌胃给予Pio24 h后,脑室注射LPS 5μl(1.0 mmol.L-1),生理盐水对照组注射等量生理盐水。脑室注射后继续给药7 d后,快速取海马CA1区,Western blot观察磷酸化的c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)、c-Jun、Akt、p70S6K和Caspase-3表达,应用荧光免疫组织化学进行磷酸化JNK和OX-42双染,激光共聚焦显微镜观察磷酸化JNK的表达部位。结果 Western blot结果显示注射LPS后,与对照组相比海马CA1区磷酸化JNK1、c-Jun和Caspase-3表达水平明显增加(P<0.01),磷酸化Akt、p70S6K表达水平明显降低(P<0.01)。与LPS损伤组比较,Pio(40和80 mg.kg-1)能对抗LPS引起的海马CA1区磷酸化JNK1、c-Jun、Akt、p70S6K和Caspase-3表达的改变(P<0.01),激光共聚焦显微镜观察结果显示,脑室内注射LPS后小胶质细胞磷酸化的JNK表达明显增加。结论 Pio通过抑制JNK和Akt激酶信号传导通路的改变,对抗LPS引起的海马神经元损伤。

流式细胞仪测定单克隆抗体识别福氏2a痢疾杆菌及其突变株表面抗原分子表达的分析

本文报告应用流式细胞仪测定4株单克隆抗体(McAbs)识别的抗原分子在福氏2a痢疾杆菌及其突变株表面表达情况,结果表明4株McAbs所识别的抗原分子在福氏2a痢疾杆菌有毒株表面的表达高于其无毒和突变株;同一菌株中不同抗体表面“0”糖链抗原分子的表达具有明显的不均一性,这进一步说明痢疾杆菌的抗原结构非常复杂。

ω-3多不饱和脂肪酸对内毒素致大鼠急性肺损伤的影响

目的观察肠道给予ω-3多不饱和脂肪酸（PUFA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠急性肺损伤模型的作用。方法将58只雄性SD大鼠分为5组：空白对照组（n=10），模型组（各组n=12），ω-3 PUFA高、中、低剂量组（各组n=12）。造模前7d开始，ω-3PUFA高、中、低剂量组分别口服灌胃t｜）-3PUFA1、0．5、0．25g／kg体重，1次／d，连续7d。末次给药后24h，除空白对照组外，其余各组大鼠尾静脉注射LPS（6mg／kg）造成急性肺损伤模型，造模后观察大鼠一般情况。0、6、24h测量大鼠体温。造模24h后眼静脉丛采血检测血常规和血生化指标。大鼠活杀后取左叶肺称量湿重、干重和湿／干重比（W／D），取右叶肺做光学显微镜下病理学观察，计算半定量病理指数（PI）。结果造模24h后，除空白对照组外其他各组均有死亡，各组指标按n=10计算。大鼠注射LPS后均出现蜷卧少动等症状。6h时模型组体温明显高于空白对照组[（37．4±O．27）℃比（35．9±0．05）℃，P：0．00]；ω-3PUFA高、中、低剂量组体温分别为（36．2±0．38）、（36．3±0．30）、（36．3±0．32）℃，均显著低于模型组（P均=0．01）。模型组白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞计数均升高，但与其他组比较，差异无统计学意义。模型组血清谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）水平明显高于空白对照组[（353±235）U／L比（157±55）U／L，P=0．02；（141±103）U／L比（54±23）U／L，P=0．03]，CO-3PUFA高剂量组的GOT和GPT水平低于模型组[（167±94）U／L，P=0．03；（63±57）U／L，P=0．04]。模型组大鼠肺湿重；（371±38）mg比（281±24）mg，P=0．01]和W／D均显著高于空白对照组（7．34±1．40比5．41±0．84，P=0．01）；ω-3 PUFA高、中、低剂量组W／D较模型组显著降低（6．17±0．58，P=O．03；6．17±O．76，P=0．03；6．13±1．23，P=0．04）。光学显微镜下观察，模型组肺泡因充血而明显扩张，间质可见散在炎性细胞浸润；ω-3 PUFA各组大部分肺泡结构尚好。模型组PI值显著高于空白对照组（3．9±0．9比0．0±O．0，P=0．00），ω-3 PUFA高、中、低剂量组PI值均显著低于模型组（2．1±0．3、2．1±0．3、2．3±0．5，P均=0．01）。结论LPS可成功建立大鼠急性肺损伤模型。高、中、低剂量ω-3PUFA均可改善大鼠急性肺损伤。早期肠道给予（o-3PUFA可减轻LPS诱导的急性肺损伤，理想的干预时机及剂量仍需进一步研究。

寒凝血瘀状态对子宫内膜异位症小鼠肠道菌群结构的影响

目的观察寒凝血瘀状态对子宫内膜异位症C57BL/6小鼠肠道菌群结构和腹腔内脂多糖(LPS)含量的影响。方法采用随机数字表法将小鼠随机分为空白对照组(空白组),寒凝血瘀模型组(寒瘀组),内异症模型组(内异症组),寒凝血瘀型内异症复合模型组(复合模型组),每组5只并分别进行造模。采用16S核糖体基因测序法对小鼠粪便样本进行分析。小鼠LPS酶联免疫试剂盒检测小鼠腹腔灌洗液中LPS浓度。结果与内异症组比较,复合模型组小鼠肠道菌群中放线菌门等4种菌门及乳杆菌属等2种菌属丰度显著增加(P<0.01, P<0.05);而拟杆菌门及拟杆菌目S24-7组等4种菌属丰度显著降低(P<0.01, P<0.05)。复合模型组小鼠腹腔灌洗液中LPS浓度显著高于空白组与寒瘀组(P<0.05),亦高于内异症组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论寒凝血瘀状态能够改变正常小鼠和内异症小鼠肠道菌群结构,并影响小鼠腹腔内LPS浓度。