Modernization of Chinese herbal compound and the high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-MS)

Chinese herbal compound is playing an important role on curing human diseases.And it has been a trend that Chinese herbal compound is being used all over the world in 21 century.However,our Chinese herbal compound is facing serious challenge for the lack of canonical system of quality criterion for Chinese herbal compound so it has been a urgent problem to set up the quality control standards and reveal therapeutic basis of Chinese herbal compound.In order to give full play to the advantages of Chinese herbal compound,modern scientific and technological is used to research of Chinese herbal compound,especially the high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(HPLC-MS),because it is high sensitive,rapid,and obtain more information.It is very necessary that HPLC-MS is uesed to elucidate the effective components of basic substances of Chinese Herbal Compound,and endow traditional Chinese medicine with modern scientific connotation.

Determination of Voriconazole in Human Plasma by Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry: Application in Therapeutic Drug Monitoring

A sensitive, accurate and robust Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry method has been developed and validated to measure voriconazole trough levels in human plasma. The plasma samples were mixed with fluconazole as an Internal Standard and directed to protein precipitation and drug extraction. An aliquot of 1 μl was injected into the chromatographic system and separated by the Acquity BEH C18 column at a flow rate of 0.30 ml/min in a gradient mobile phase consisting of acetonitrile, Ultrapure water (UPW), methanol and formic acid. Voriconazole was detected by a Triple Quadrupole Detector (TQD) operating on Multiple Reaction Monitoring (MRM) and a positive ion mode Electrospray ionization (ESI) Q1 mass: 350.1 m/z, Q3 mass: 281.1 m/z. Method linearity of the calibration curve (0.10 - 8.00 μg/ml) indicated a correlation coefficient r ≥ 0.99. The intra and inter-assay accuracy was within 85% - 115% and the intra and inter-assay precision was ≤5.76%. Voriconazole recovery percentage was between 97.69 - 119.62%. The method was successively applied in routine voriconazole TDM.

HPLC及LC-MS测定榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留

本文采用高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱法(LC-MS)对干果榛子中氯吡苯脲和多菌灵残留量进行含量测定.HPLC和LC-MS均使用C18色谱柱,含量测定采取等度洗脱,流动相:甲醇-水(55∶45,体积比);体积流量:1.0 mL·min-1;测定波长:260 nm;柱温:30℃.LC-MS采取电喷雾离子源,梯度洗脱,体积流量:0.6 mL·min-1,柱温:30℃.结果表明,榛子中氯吡苯脲与多菌灵存在残留,氯吡苯脲质量浓度在1.00~10.00μg·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率在95.58%~100.58%;多菌灵质量浓度在1.005~15.075μg·mL-1范围内具有良好的线性关系,加样回收率在95.61%~104.39%.实验证明,HPLC与LC-MS相结合的方法具有操作简便、灵敏度高、检出限低等优点,能有效地检测到榛子样品中膨大剂氯吡苯脲及杀菌剂多菌灵的残留,并确定其残留量,线性关系和回收率结果均令人满意.根据被检测的8批样品中氯吡苯脲和多菌灵两项农药残留量推断,作为一般干果食用榛子是安全的.

自动化磁珠法提取血清脂溶性维生素应用LC-MS/MS检测的性能评价

目的评估自动化磁珠法提取血清脂溶性维生素应用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测的性能。方法收集200例临床剩余血清样本,采用自动化磁珠法提取血清中脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K;同时联合LC-MS/MS检测脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K的线性、定量限、精密度、正确度、携带污染率等性能指标以及基质效应。并比较此方法与传统萃取法检测结果的一致性。结果自动化磁珠法提取脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K线性相关系数均>0.99;五种物质的定量限分别为5,0.25,0.25,125和0.025ng/ml;批内精密度和批间精密度分别为0.66%~4.83%,0.15%~3.70%;平均加标回收率为87.05%~111.11%;基质效应为95.43%~99.07%;高-低值样本循环进样结果均值与低-低值样本循环进样结果均值之差,均小于低-低值样本循环进样结果均值的3s;统计学结果显示自动化磁珠法和传统萃取法提取的脂溶性维生素结果相关性良好(r>0.99),两种方法的检测结果无显著偏倚。结论自动化磁珠法提取脂溶性维生素的检测性能良好,有望提高样品通量和分析效率。

基于不确定度评估研究ID-LC-MS/MS法检测鸡蛋中氟虫腈砜残留量的关键控制点

为了控制检测结果准确性,以鸡蛋粉中氟虫腈砜残留分析标准物质[GBW(E)100779]为测试样,采用“自下而上”法对基于多功能净化柱(PAC柱)净化的同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)法进行测量不确定度评估。“鱼骨图”分析表明,不确定度分量主要来源有样品称样量、内标溶液添加体积、标准工作溶液浓度及其移取体积。内标溶液添加体积引入的不确定度最大,对检测结果不确定度的贡献率为68.59%;万分之一天平称量引入的不确定度可忽略不计。同位素内标的添加过程是ID-LC-MS/MS法检测的关键控制点,参考基准的合理选择和目标物的完全提取是准确测量的前提。进一步用LC-MS/MS法对参考物质、稀释剂和内标溶液的适用性进行了评估,并基于国家有证标准物质[GBW(E)100779]对提取方法进行了优化。研究结果有利于提升鸡蛋食品安全的检测质量和质控水平,为精准检测质控方案的设计提供新思路。

经典名方羌活胜湿汤中12种成分的LC-MS/MS定量分析

[目的]建立液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)分析方法用于测定羌活胜湿汤颗粒中5-O-甲基维斯阿米醇苷、紫花前胡苷、蔓荆子黄素、羌活醇、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯、异甘草苷、甘草苷、绿原酸、异甘草素、甘草素、阿魏酸12种成分的含量。[方法]色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为0.1%的甲酸水溶液和乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为5μL。采用电喷雾离子源(ESI)、多反应监测模式(MRM)进行正负离子同时扫描。[结果]羌活胜湿汤颗粒中12种成分在线性范围内线性关系良好,精密度、重复性、稳定性及加样回收率试验均满足要求。[结论]实验建立的含量测定方法高效、稳定、可靠,可用于羌活胜湿汤颗粒的质量控制研究。

HPLC-MS/MS法同时测定胆木不同部位6个成分的含量

目的:测定胆木茎、枝和叶中异长春花苷内酰胺、喜果苷、乌檀酰胺C、绿原酸、3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-呋喃芹糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,4-二甲氧基苯基-1-O-β-呋喃芹糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷6个成分的含量。方法:采用HPLC-MS/MS法,色谱柱为Phenomenex Kinete EVO C18100Å(50 mm×2.1 mm,2.6μm)柱;流动相为0.5‰甲酸溶液-甲醇,梯度洗脱;流速为0.4 mL/min;柱温为40℃;进样量为3μL;电喷雾离子源,多反应监测负离子模式。结果:异长春花苷内酰胺、喜果苷、乌檀酰胺C、绿原酸、3,4,5-三甲氧基苯基-1-O-β-呋喃芹糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、3,4-二甲氧基苯基-1-O-β-呋喃芹糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的线性范围分别为0.025~2μg/mL、0.0125~2μg/mL、0.05~2μg/mL、0.025~2μg/mL、0.0125~2μg/mL、0.0125~2μg/mL(r≥0.9991),精密度、稳定性(24 h)、重复性试验RSD<5.00%,平均加样回收率为95.13%~103.02%(RSD<4.00%)。含量测定结果显示6个成分在胆木不同部位中的含量存在较大差异。结论:所建立的方法简便、快速、灵敏,适用于胆木药材中6个成分的同时检测。

自动QuEChERS结合UPLC-MS/MS测定莲雾中苯并咪唑类农药残留

为了建立自动QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱法测定莲雾中多菌灵、噻菌灵、苯菌灵及甲基硫菌灵4种苯并咪唑类农药残留量的检测方法。将莲雾样品采用混合试剂(5.5 g硫酸镁+1.5 g氯化钠+1.0 g柠檬酸钠+0.5 g柠檬酸二钠)进行净化,经QuEChERS自动样品制备系统进行制备后,应用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法进行分析。结果表明,4种农药在1.00~10.00 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,决定系数(R2)均大于0.99;0.1、1.0、5.0 mg/kg 3个添加水平下,在莲雾基质中添加回收率为84%~105%,相对标准偏差为0.8%~9.5%(n=3),方法检出限和定量限分别为0.1~0.5μg/kg和0.5~10.0μg/kg。综上,该方法简便省时,净化效果好,灵敏度及准确度高,可用于同时测定莲雾中多菌灵、噻菌灵、苯菌灵及甲基硫菌灵4种苯并咪唑类农药的残留量。

UPLC-MS/MS联合m-PFC测定罗汉果中60种农药残留量

目的:建立罗汉果中60种农药残留的定量筛查方法。方法:样品经乙腈高速匀浆提取、多壁碳纳米管固相萃取小柱净化,采用超高效液相色谱-质谱法,以正、负离子同时扫描的动态多反应监测模式采集数据,采用空白基质匹配法进行定量计算。结果:60种农药线性关系良好,r均大于0.996。其中,59种农药单体的平均回收率为63.9%~108.3%,RSD均小于15%。55批样品中共检出2种禁用农药和12种常用农药。结论:该方法灵敏度高、准确性好,适用于罗汉果中多种农药残留的筛查。

UPLC-MS/MS法检测3种食品中松仁过敏原

基于食品基质中松仁过敏原Pin k 2建立了一种超高效液相色谱-串联质谱法。将松仁经过研磨、脱脂、浸提、酶解后经Easy-nLC 1000-QExactive高分辨质谱仪进行分离分析,结合Uniprot蛋白数据库以及ProteinPilotTM软件对质谱图进行数据处理,经BLAST验证特异性,最终筛选3条松仁特异性肽段。方法学验证结果表明,方法在0.001~50mg/mL范围内线性关系良好,定量限为1mg/kg;在饼干、巧克力和饮料3种空白基质中的平均回收率为88.50%~107.57%,相对标准偏差不高于6.08%,基质效应为89.77%~96.13%。该方法具有灵敏度高、特异性好的优势,可应用于饼干、巧克力、饮料等食品样品中松仁过敏原的检测,为我国食品标签真实性检验及食品中隐性过敏原的检测提供技术支持。

肾功能亢进患者血浆中亚胺培南浓度UPLC-MS/MS测定方法的建立及药代动力学研究

目的建立了测定肾功能亢进(ARC)患者血浆中亚胺培南(IMP)浓度的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,并研究IMP在ARC患者体内的药代动力学特征。方法血浆样品用乙腈沉淀蛋白处理,以阿莫西林为内标,采用UPLC-MS/MS法分析。筛选IMP的给药方案为1 g,静脉滴注,每隔8 h的ARC患者,收集不同时间点的血药浓度,计算药代动力学参数。结果IMP在0.40~200.00μg/mL范围内线性良好,精密度、准确度、基质效应、方法回收率和稳定性均符合要求。IMP在ARC患者体内的半衰期为(0.97±0.06)h,血药浓度-时间曲线下面积(AUC)为(48.49±14.93)mg/(L·h),表观分布容积为(16.15±7.90)L,肌酐清除率为(18.30±5.70)L/h,达峰浓度为(15.63±4.60)μg/mL。结论UPLC-MS/MS法准确度高、灵敏度强,可有效用于测定ARC患者血浆中IMP浓度。ARC患者体内IMP的代谢速率和清除率可能发生变化,为临床用药提供重要参考。

基于LC-MS/MS测定人体类固醇激素的研究进展

类固醇激素是一类具有环戊烷多氢菲结构的化合物,由细胞色素P450酶催化形成,在调节机体代谢、促进性器官发育等方面起着重要作用。临床上将类固醇激素水平作为肾上腺疾病、精神类疾病等的诊断指标。液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)联用技术因具有高灵敏度、高通量和高专属性的特点,已成为类固醇临床测定的首选方法。本文综述了LC-MS/MS在内源性类固醇激素测定中的应用,特别是在样品前处理、色谱条件和质谱条件优化等方面的研究进展,为临床上类固醇激素的诊断检测提供参考。

QuEChERS-UPLC-MS/MS同时测定畜禽肉中23种驱虫类药物残留量

研究旨在建立同时检测畜禽肉中多种驱虫类药物的分析方法,通过优化前处理方法和仪器分析条件,建立了分散固相萃取法-超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定畜禽肉中23种驱虫类药物残留的分析方法,目标物以乙腈提取,分散固相萃取法(QuEChERS)净化,用乙腈+0.1%甲酸水作为流动相、UPLC-MS/MS确证检测、外标法定量。结果显示:所建立的方法定量限为0.2~1.0μg/kg,回收率为71.4%~107.5%,相对标准偏差为0.9%~8.8%。表明该方法定量限低,稳定性好,适用于畜禽肉中23种驱虫类药物残留的同时检测。

基于LC-MS法研究百合地黄汤单煎及共煎液中化学成分变化

目的测定仲景古方百合地黄汤水煎液成分,并对鲜百合和鲜地黄的水煎液所含成分进行对比,为优化百合地黄汤提取工艺提供初步依据。方法以液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术为基础,定性分析百合地黄汤水煎液所含化学成分并进行归属及聚类分析,同时对百合水煎液、地黄汁所含化学成分进行比对。结果百合水煎液、鲜地黄汁中分别检测到35种、36种化学成分;古法煎煮后,在百合地黄汤水煎液中发现69种化学成分,其中有机酸类16种、糖类及苷类共6种、氨基酸及多肽类共8种、生物碱类3种;其中有8种物质为原百合水煎液与地黄汁共有,较两种原煎液新产生36种物质,且抗抑郁有效成分毛蕊花糖苷仅存在于共煎液中。结论古法百合地黄汤共煎液中抗抑郁有效成分比单煎液丰富,有助于抗抑郁有效成分的提取,LC-MS技术适用于复方提取液的含量测定,通过此研究,构建了基于质谱技术的中药复方化学物质组成表征的指纹图谱。

基于UHPLC-MS/MS法分析补肾利咽汤物质基准的特征图谱暨多指标成分的筛选与含量测定研究

目的采用超高效液相-质谱(UHPLC-MS/MS)法同时测定补肾利咽汤(BSLYT)中化学成分,建立BSLYT物质基准的高效液相色谱指纹图谱及莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷等6种主要成分的含量测定方法,为质量控制提供参考。方法利用质谱数据,建立指纹图谱。用外标法计算BSLYT样品中主要成分的含量,并结合化学计量学方法分析不同批次样品的差异。结果质谱共指认出了69种化合物,经过与高效液相色谱比对,共指认出13种化合物。15批BSLYT物质基准特征图谱的相似度在0.90以上,共指认了27个共有峰。聚类分析(CA)将物质基准分为2类,即S1、S2、S5、S8、S9、S13、S15为一类,S3、S4、S6、S7、S10-S12、S16为一类。通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLSDA),筛选出影响物质基准分类的化学成分,分别归属于木蝴蝶、山茱萸和土茯苓。多指标成分含量测定6个成分,分别为莫诺苷、马钱苷、木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黄芩苷、落新妇苷含量范围分别在0.31%-0.51%、0.12%-0.22%、0.09%-0.19%、0.09%-0.24%、0.07%-0.18%、0.08%-0.29%。结论本文建立的指纹图谱和多指标含量测定方法准确、稳定,为补肾利咽汤的物质基准及相关制剂的质量控制提供依据。

HPLC-MS/MS法测定棉花纤维中6种脱叶剂的残留量

建立了一种高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定棉花纤维中噻苯隆、噻节因、敌草隆、脱叶磷、乙烯利、环丙酸酰胺6种脱叶剂残留量的检测方法。超声萃取溶剂采用乙腈和水(体积比1∶1),超声萃取20 min后过滤,采用高效液相-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析。该方法的目标物质在一定的浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.995,6种化合物的平均回收率在60.8%~101.6%,相对标准偏差RSD在2.1%~8.6%,乙烯利、噻节因、脱叶磷的定量限为1.0 mg/kg,环丙酸酰胺、噻苯隆、敌草隆的定量限为0.5 mg/kg。

基于硅烷化三聚氰胺海绵的改良QuEChERS结合UPLC-MS/MS快速测定猪肉中49种抗生素多残留

采用十八烷基三氯硅烷(octadecyltrichlorosilane,OTS)与N-[3-(三甲氧基硅基)丙基]乙二胺(N-[3-(trimethoxysilyl)propyl]ethylenediamine,ATS)改性三聚氰胺海绵(melamine sponge,MeS)制备得到2种新型弹性多孔硅烷化MeS(OTS@MeS和ATS@MeS)净化材料,将其用于改良QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged and safe)基质净化过程,通过溶液自发浸润和物理挤压过程即可快速、高效分离干扰基质,结合超高效液相色谱-串联质谱技术建立了同时测定猪肉中49种抗生素多残留的分析方法。样品用1.0%乙酸-乙腈溶液提取并用2.0 g Na_(2)SO_(4)和0.5 g NaCl盐析,离心后取1 mL上清液复配使用OTS@MeS与ATS@MeS净化,随后使用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱,以甲醇溶液和含有0.1%甲酸、5 mmol/L乙酸铵的甲醇-水溶液(5∶95,V/V)为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾电离源、正离子多反应监测模式进行定性定量分析。结果表明:49种抗生素的相关系数均大于0.999,基质效应为-13.5%~10.9%,检出限在0.1~10μg/kg之间,定量限在0.3~30.3μg/kg之间;利用该方法在低、中、高3个加标水平下进行回收率实验,回收率范围为65.0%~112.7%,日内和日间相对标准偏差分别为0.3%~11.8%和2.4%~18.4%。该方法样品前处理过程简单、快捷、灵敏度高、准确性好,可用于猪肉中49种抗生素多残留的高效快速检测。

固相萃取-UPLC-MS/MS法测定环境水体中多种抗生素

采用固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定环境水样中25种磺胺类和喹诺酮类抗生素,通过优化试验条件,使方法在2.00μg/L~200μg/L范围内线性良好,方法检出限为1.01 ng/L~2.85 ng/L,7次测定结果的RSD为2.3%~8.0%。将该方法用于自来水和地表水测定,结果均为未检出,高、低质量浓度水平的加标回收率为61.2%~102%。

UPLC-MS/MS法同时测定蛋白饮料和液体调味品中36种防腐剂

采用提取和净化相结合的前处理方式,建立并优化了同时测定蛋白饮料、液体调味品中36种防腐剂的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品采用饱和NaCl溶液(用磷酸调节pH=3)净化和乙腈-甲醇(9∶1,体积比)(含体积分数为0.2%的甲酸)提取。采用C18反向色谱柱进行分离,以甲醇和5 mmol/L乙酸铵为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源正负离子同时扫描,动态多反应监测模式,基质匹配标准曲线,外标法定量。结果表明,36种防腐剂在1~250 ng/mL线性良好(相关系数≥0.999),方法定量限为0.04~0.2 mg/kg;空白样品不同加标水平下的平均加标回收率为75%~119%;相对标准偏差为0.90%~9.8%。建立的高通量检测方法灵敏、快速,准确度高,操作简便且能有效减少基质干扰、降低检测成本,极大提高多种防腐剂的定性定量检测效率。

High Performance Liquid Chromatography-Electrospray Ionization-Mass Spectrometric Analysis of Bilobalide and Ginkgolides in Ginkgo biloba L. Leaves

The ginkgo terpenoids including bilobalide and ginkgolides are the main pharmaceutical components in the leaves or extracts of Ginkgo biloba L. In this paper, the analysis of bilobalide and ginkgolides in leaves of Ginkgo biloba L. by high performance liquid chromatography (HPLC)-electrospray ionization (ESI)-mass spectrometry (MS) was carried out. The separation was performed on Inertsil ODS3 column with methanol-water (36:64) as mobile phase, with 1 mL·min -1 of flow rate at 35℃. Then the mass spectrum analysis was conducted by ZMD micromass electrospray ionization (ESI)-mass spectrometer (MS). The HPLC total ion chromatogram and selected ion chromatogram (with 325, 407, 423, 439 of m/z) of the sample and ESI-/MS mass spectra of the peaks in the chromatograms were obtained. So bilobalide, ginkgolide A, B, C and J in Ginkgo biloba L. leaves were identified. The method is easy and rapid, with a good accuracy.