李斯特菌多重PCR检测方法的建立

李斯特菌属包含6个种,致病力存在差异,其中单增李斯特菌是重要的人兽鱼共患食源性病原菌。比较基因组学研究表明,细胞壁水解酶基因iap存在于李斯特菌各个种,具有两端保守区与中间可变区;liv22-228基因区域则特异存在于伊氏李斯特菌。通过对iap竞争性PCR与liv22-228特异性PCR的反应条件优化,建立可同时鉴定李斯特菌各个种的多重PCR反应体系,敏感性达102CFU/mL,对其余15种细菌均无扩增。将该反应体系应用于135株疑似李斯特菌的水产品分离株,并结合种别确证试验,表明该多重PCR的准确率达100%。该检测体系操作简便,并具有较高的特异性、灵敏性、准确性与稳定性,能够满足水产品中李斯特菌快速筛选与种别鉴定的需求。