食品包装材料中丙烯酰胺在大鼠肝微粒和S9中的体外代谢研究

目的研究食品包装材料中丙烯酰胺(acrylamide)的体外代谢情况,并确证其代谢产物。方法采用肝微粒体及肝S9体外温孵法,优化代谢条件,对丙烯酰胺进行了体外代谢研究,并用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测并确证丙烯酰胺的代谢物。结果通过检测结果发现,丙烯酰胺分别在肝S9和肝微粒体作用下发生显著的代谢反应,其代谢产物之一为环氧丙酰胺。结论丙烯酰胺能通过代谢转化成毒性更强的环氧丙酰胺,因此,监控食品、饮水和周围环境中的丙烯酰胺的含量对于维护人们的健康具有重要的意义。

基于肝微粒体和肝S9成分的食品接触材料中五氯苯酚体外代谢分析

目的通过体外代谢方法,研究五氯苯酚(pentachlorophenol,PCP)的代谢情况。方法采用肝微粒体和肝S9成分2种体外代谢试剂模拟体内代谢模式,通过优化代谢反应条件,建立PCP、四氯苯醌(Cl4BQ)2种目标物的气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测方法,对PCP进行体外代谢研究分析。结果体外代谢分析的最佳反应条件为代谢试剂浓度0.75 mg/m L、代谢反应时间4 h。结论在最优反应条件下分析比较2种试剂对PCP的代谢情况,验证了PCP的代谢产物为Cl4BQ,且在肝微粒体和肝S9成分中的代谢没有显著差异。

HPLC-MS法检测大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及一种羟基代谢产物

目的应用HPLC-MS技术,建立高灵敏度的大鼠肝S9蛋白中T-2毒素及其一种羟基化代谢产物的分析方法。方法以XDB-C18色谱柱（4.6 mm×50 mm,1.8μm）分离,以5 mmol·L-1的乙酸铵水溶液和甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱,以玉米赤霉酮为内标,在正离子多反应监测模式下对各分析物进行定性和定量分析。结果 T-2毒素、3＇-OH-T-2分别在5~5000 nmol·L-1、25~5000 nmol·L-1的浓度范围内具有良好的线性。检测限分别为2、5 nmol·L-1,定量限分别为5、25 nmol·L-1,回收率介于72.6%~125.8%。结论方法学验证表明本方法快速、重复性好、灵敏度高,已成功应用于T-2毒素羟基化产物制备的监测。

柱前衍生化HPLC法测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体

目的:建立柱前衍生化HPLC法研究大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体体外代谢的立体选择性。方法:以二-O-乙酰基-L-酒石酸酐(DATAAN)为衍生化试剂,采用反相高效液相色谱法拆分川丁特罗对映体,测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体的浓度。结果:川丁特罗对映体达到基线分离,分离度为2.24,线性范围2.50～200μmol·L^(-1),平均回收率(S)-川丁特罗为89.3%,(R)-川丁特罗为91.3%。平均日内、日间RSD均小于15%。在大鼠肝S9组分中川丁特罗的代谢呈现立体选择性。结论:此法专属性强、准确可靠,可用于大鼠肝S9组分中川丁特罗代谢的立体选择性研究。

肝微粒体和肝S9转化藜芦酸葡萄糖酯比较研究

目的比较2种体外肝代谢模型转化藜芦酸葡萄糖酯的转化样式和转化率差异。方法通过大鼠肝微粒体和肝S9体外转化模型对藜芦酸葡萄糖酯进行生物转化,采用HPLC检测转化底物及产物的含量,检测波长254 nm,流动相为乙腈(A)-1%乙酸溶液(B),梯度洗脱(0~6 min,5%~40%A;6~9 min,40%~50%A;9~11 min,50%~5%A),流速1.0 m L/min。结果 2种模型均可将藜芦酸葡萄糖酯转化为藜芦酸,但应用肝S9模型得到的代谢产物多于肝微粒体模型,且肝S9模型对酯类的转化率高于肝微粒体模型。结论肝S9模型对酯类的转化能力高于肝微粒体模型。

钩吻素甲在猪肝S9中的代谢产物鉴定

研究钩吻素甲在猪体外肝S9的代谢。采用高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(HPLC/QqTOFMS)对孵育后的代谢物进行结构鉴定。结果表明,钩吻素甲在猪肝S9中仅检出2种代谢产物,根据原形及其代谢物的精确分子质量差和产物离子,鉴定了这2种代谢物结构,进而表明钩吻素甲的主要代谢途径是氧化和去甲基。

反义寡核苷酸药物AD00510-AS在小鼠、大鼠、猴、人肝S9和血浆中的代谢产物研究

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule ProfilerTM软件分析空白样品和给药后孵育24h样品的提取离子流图(XIC)的差异,得到可能的代谢产物,并推测代谢途径.结果:AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人肝S9孵育24h后,共检测到3个代谢产物(M1,M4和M5),母药的相对丰度分别为73.9%,87.1%,78.4%和81.3%;AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人血浆孵育24h后,共检测到4个代谢产物(M2,M3,M4和M5),母药的相对丰度分别为69.1%,94.5%,67.8%和68.1%;通过MS及MS/MS的测定,鉴定的代谢产物如下:M1:3'末端丢失9个核苷酸代谢产物(MW=4544);M2:3'末端丢失2个核苷酸代谢产物(MW=6857);M3:3'末端丢失1个核苷酸代谢产物(MW=7232);M4:双脱硫代谢产物(MW=7559);M5:脱硫代谢产物(MW=7575).结论:采用确认的LC-UV-Q-TOF方法可以检测到AD00510-AS及其5个代谢产物,AD00510-AS在体外肝S9和血浆中主要通过降解(丢失核苷酸)和脱硫进行代谢.

双酚A和邻苯二甲酸二丁酯对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖的影响

目的研究环境内分泌干扰物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯在经大鼠肝微粒体酶混合物(S9)作用后对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7增殖作用的影响。方法分别将不同浓度的阳性对照物(17β-雌二醇)以及受试物双酚A、邻苯二甲酸二丁酯经大鼠肝S9酶系作用后,用其代谢产物刺激体外培养的MCF-7细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖的量。结果17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后,其促进MCF-7细胞增殖的活性降低,而经S代谢后的双酚A则表现为较强的促进MCF-7细胞增殖的活性。结论17β-雌二醇和邻苯二甲酸二丁酯经S9代谢后雌激素活性减弱,而双酚A经S代谢后雌激素活性增强。

液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析乌头碱及其代谢物

为了研究乌头碱的生物转化规律,建立了乌头碱及其代谢物分离与鉴定的液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-ITMS)方法。首先利用体外代谢法得到大鼠肝微粒体S9组分中乌头碱及代谢产物混合体系,然后利用LC-ESI-ITMS联用技术对各代谢物进行分析,得到乌头碱代谢物的[M+H]+分子质量信息,进一步结合多级串联质谱(LC/MSn)分析结果获得结构信息,对代谢物进行鉴定,从而推测代谢物结构,并结合大鼠尿中乌头碱及其代谢物的分析结果,得到乌头碱的生物转化规律。本方法在大鼠肝微粒体S9组分中鉴定得到8种体外代谢产物。

代谢活化作用对多溴代联苯类污染物类／抗甲状腺激素活性的影响

选用大鼠肝匀浆(S9)和鼠肝癌细胞(H4ⅡE)两种体系代谢活化多溴代联苯醚混标(BDEs)和十溴联苯醚(BDE209),采用重组甲状腺激素受体基因酵母检测BDEs和BDE209母体及其代谢产物的类/抗甲状腺激素效应.结果表明,BDEs和BDE209母体均不表现甲状腺激素效应(p>0.05);但是经S9和H4ⅡE细胞代谢活化后,其代谢产物表现出明显的类甲状腺激素活性和抗甲状腺激素活性(p<0.05),BDEs和BDE209的干扰甲状腺激素效应需要经过代谢活化步骤.比较不同代谢活化体系,重组酵母细胞本身的代谢活化作用并不显著,而H4ⅡE细胞和S9代谢活化体系均能够导致活性中间体.

液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析3种兴奋剂类毒品及其代谢物

建立了3种常见兴奋剂类毒品3,4-亚甲二氧甲基苯丙胺(MDMA)、甲基苯丙胺(MA)、可卡因及其代谢物同时分离与鉴定的液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-ITMS)方法。通过体外代谢方法得到大鼠肝微粒体S9组分中MDMA、MA、可卡因及代谢产物混合体系后,利用LC-ESI-ITMS联用技术对各代谢物进行分析,得到各代谢物的[M+H]+分子量信息,进一步结合多级串联质谱(LC-MSn)分析结果获得结构信息,对代谢物进行鉴定,从而快速推测代谢物结构,得到MDMA、MA、可卡因的主要代谢产物。所建立的方法用于3种常见兴奋剂类毒品及其代谢物的分析,具有快速、高效、灵敏、选择性好等特点。

食品包装材料中有害物质双酚A二缩水甘油醚体外代谢研究

目的通过模拟体内代谢,对双酚A二缩水甘油醚(BADGE)的体外基本代谢情况进行研究。方法采用肝微粒体、肝S9 2种体外代谢试剂,通过模拟体内肝脏代谢,对BADGE的代谢行为及其代谢产物进行研究。通过代谢试剂浓度及代谢时间条件的优化,采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)作为检测手段对BADGE的体外代谢产物进行分析确证。结果体外代谢最佳孵化时间为60 min,最佳体外代谢试剂浓度为0.5mg/m L,在肝S9及肝微粒体2种体外代谢试剂的作用下,BADGE发生显著的代谢反应。结论本研究与传统的动物试验相比,节约了时间、精力,对食品包装材料的毒理学研究和安全性评价有重要的推动作用。

食品接触材料中芘的体外代谢模拟分析

目的模拟体内代谢条件,分析芘的体外基本代谢情况。方法采用肝微粒体及肝S9成分2种代谢试剂,体外模拟了肝脏代谢条件,对代谢试剂浓度及代谢时间条件进行优化,采用气相色谱-质谱(GC-MS)法检测芘和羟基芘,比较分析2种代谢试剂对PYR的代谢情况。结果体外代谢最佳孵化时间为60 min,最佳体外代谢试剂浓度为0.5 mg/m L。结论 PYR在肝微粒体代谢试剂中无明显代谢反应发生,在肝S9成分的作用下,代谢生成羟基芘,推断参与PYR代谢的主要为二相酶类。

关注肝脏分段第S9段的临床价值和意义

Couinaud于1994年首次提出肝S9段的命名,刘允怡于2016年在他的著作《肝切除与肝移植应用解剖学》中进一步推介了这一命名,但是长期以来在肝脏外科界并没有获得广泛认可及支持。近年来,由于腔镜技术的推广与逐步成熟,对肝脏的解剖和肝脏管道走行有了更精细的了解和需求,因此本文对肝S9段的临床价值和意义作进一步的探讨。

不同代谢活化条件对N-亚硝胺类化合物细菌回复突变结果的影响

目的检测N-亚硝基二甲胺(NDMA)和N-亚硝基二乙胺(NDEA)的致突变风险,探讨不同肝微粒体S_(9)混合液对N-亚硝胺类化合物致突变结果的影响。方法将鼠疫伤寒杆菌TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537和待测化合物分别与SD大鼠、CD-1小鼠和人的肝脏S_(9)混合液混合后于37℃预培养1 h,之后接种于6孔细胞培养板,并继续在37℃孵箱中培养约48 h,观察回复突变菌落的数目。结果在非S_(9)条件下NDEA、NDMA均无致突变性。小鼠S_(9)及人S_(9)条件下NDEA、NDMA均无致突变性且在小鼠S_(9)及人S_(9)预培养条件下NDEA、NDMA也无致突变性。SD大鼠S_(9)预培养条件下NDMA、NDEA使TA97、TA100、TA102和TA1535菌株发生回复突变。当大鼠S_(9)含量为30%时,NDEA、NDMA产生明显致突变性的浓度范围为10~1000μg/孔,与阴性对照(DMSO,20μl/孔)比较存在显著性差异(回复突变率超过阴性对照组的2~3倍),且存在一定剂量相关性。结论证实使用经诱导的SD大鼠S_(9)混合液检测N-亚硝胺类化合物致突变性的合理性和准确性,为后续研究N-亚硝胺类化合物遗传毒性奠定基础。

不同方法诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝模型的CYP酶活性比较研究

目的研究四氯化碳(CCl4)诱导大鼠非酒精性单纯性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver,NAFL)模型在不同时间段对主要细胞色素P450 (cytochrome P450 proteins,CYP)酶活性的影响,并与高脂饲料诱导大鼠NAFL模型相比较。方法将实验动物分为模型组和溶媒/空白对照组,模型组采用每周2次皮下注射40%CCl4,连续9周(CCl4模型)或连续给予高脂饲料9周(高脂模型)。通过组织病理学观察,测定肝脏脂质含量及肝脏系数(肝脑比)等确认大鼠NAFL造模成功,并测定血生化谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),测定主要CYP酶活性变化。结果两种模型的组织病理学所见符合NAFL特点,肝内脂质含量及肝脑比均有显著性增加。在不同周龄,CCl4模型组的主要CYP酶活性(第4周CYP2B6除外)与溶媒组相比,有显著性下降(P <0. 001),且随时间延长有加重趋势;高脂模型的主要CYP酶活性与空白对照组比较无明显变化。ALT和AST在CCl4模型组显著升高,而在高脂模型组无明显变化。结论肝脏组织中主要CYP酶活性可用于鉴别两种不同途径(CCl4或高脂饲料)诱导的大鼠NAFL模型。

采用冷冻真空干燥法保存肝微粒体酶（S_9）的探讨

本实验采用冷冻真空干燥法保存肝微粒体酶（Ｓ９），经过冻干前后，冻干后一年及冻干后二年零四个月各时间点测试，结果表明，冻干Ｓ９与新鲜制备的Ｓ９活性比较一致，冻干Ｓ９对间接诱变剂２ＡＦ具有活化作用。实验结果表明：采用冷冻真空干燥法保存肝微粒体酶Ｓ９是可取的。

肝脏S9段的应用解剖及精准微创消融

肝段的精准解剖划分是肝脏外科的基础,而肝脏S9段的解剖划分是对肝尾状叶的进一步精准分区。本文通过回顾性分析总结了南方医科大学附属东莞医院收治的肝脏S9段原发性肝癌、肝复发癌、肝转移癌、肝局灶性增生共4例代表性病变的精准微创消融及随访情况,旨在探索CT引导下肝脏S9段病变的微创消融效果。

比阿培南在人肝微粒体、人肾S9和体外人血浆中的稳定性及其代谢产物鉴定

目的:考察比阿培南在人肝微粒体、人肾S9和体外人空白血浆中的代谢稳定性,并推测代谢产物的结构及可能的代谢途径。方法:采用高效液相色谱-串联质谱联用仪(HPLC-MS/MS)检测比阿培南分别与人肝微粒体、人肾S9和人空白血浆孵育后孵育液中剩余的比阿培南含量,比较代谢稳定性。此外,利用快速液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用仪(UFLC/MS-IT-TOF)分析比阿培南与人肝微粒体和人肾S9孵育后的提取离子流图,比较差异峰并通过质谱图推测代谢产物和代谢途径。结果:比阿培南与人肝微粒体、人肾S9和人空白血浆孵育120 min后的剩余百分比分别为(89.2±2.66)%、(52.0±7.6)%和(96.3±5.4)%,计算得到其在人肝微粒体和人肾S9中代谢的体外消除半衰期(t_(1/2))分别为1 046.2和120.9 min,在人肝微粒体中固有清除率(C_(Lint, h))和人肾S9中固有清除率(CLint, R)分别为0.57和2.05 mL·min^(-1)·kg^(-1),肝清除率(C_(Lh))和肾代谢清除率(CL_(R))分别为0.53和1.72 mL·min^(-1)·kg^(-1)。此外,比阿培南在人肝微粒体和人肾S9孵育体系中都只鉴定出1个体外代谢产物,推测比阿培南的主要代谢途径为β-内酰胺环水解。结论:比阿培南主要在人肾S9中代谢,少量在人肝微粒体中代谢,产生的代谢物为β-内酰胺环水解产物。

羟基化多溴联苯醚(OH-PBDEs)在小鼠肝脏S9中的体外代谢研究

羟基化多溴联苯醚(OH-PBDEs)是一类具有内分泌干扰性质的酚类化合物,且内分泌干扰效应大于其母体多溴联苯醚(PBDEs),研究OH-PBDEs的体外代谢行为对于理解其在生物体内的富集转化具有重要意义.以小鼠肝脏S9部分作为研究对象,考察了3-OH-BDE-47、5-OHBDE-47、6-OH-BDE-47和2'-OH-BDE-68在小鼠肝脏中的体外代谢.结果表明小鼠肝脏S9中的I相酶和II相酶均能代谢4种OH-PBDEs;醚键与OH官能团及Br原子互为邻位时,I相酶对OH-PBDEs的代谢率最高,即6-OH-BDE-47表现出较高的代谢率,此外,4种OH-PBDEs经I相酶代谢后均能生成2,4-二溴苯酚,表明醚键断裂是其主要的I相酶代谢途径;OH-PBDEs的OH官能团与醚键互为间位时,II相酶对其葡萄糖醛酸结合反应最高,也就是5-OH-BDE-47表现出较高的去除率.