lncRNA MALAT1调控GPx3去甲基化参与非小细胞肺癌的发生发展

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1通过调控谷胱甘肽过氧化物酶3(GPx3)对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖与侵袭的影响及其机制。方法通过TCGA数据库分析NSCLC患者的mRNA表达信息、甲基化数据及其临床信息,确定关键基因MALAT1与GPx3在NSCLC中的表达差异及其与患者预后之间的关系。采用免疫组织化学染色评估GPx3在肺腺癌组织中的表达水平,通过细胞培养、实时定量PCR、MTT法检测细胞增殖、细胞克隆形成以及迁移与侵袭能力来研究抑制MALAT1表达对A549细胞增殖与侵袭能力的影响。蛋白免疫印迹实验用于检测相关蛋白表达的变化。结果在NSCLC组织中,MALAT1的表达显著升高且与患者不良预后相关;GPx3的表达水平则显著降低,GPx3低表达患者的总生存率显著低于高表达组。其中MALAT1高甲基化水平与肺腺癌发生发展关系密切。沉默MALAT1可显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移和侵袭能力,同时促进GPx3的表达。蛋白表达分析进一步证实MALAT1的沉默减少了肿瘤干细胞标志物的表达,并抑制了上皮-间充质转化(EMT)过程。MALAT1通过募集LSD2调控GPx3的表达,从而在NSCLC的发展中发挥关键作用。结论lncRNA MALAT1通过抑制GPx3表达,促进NSCLC肿瘤细胞的增殖与侵袭能力。MALAT1高表达及高甲基化水平与NSCLC患者不良预后之间存在密切关联,为NSCLC的早期诊断、治疗及预后评估提供了新的生物标志物。

LncRNA MALAT1对PCOS颗粒细胞凋亡、自噬和PI3K/Akt/mTOR通路的影响

目的探讨长链非编码RNA-肺腺癌转移相关转录子1(LncRNA MALAT1)对多囊卵巢综合征(PCOS)颗粒细胞的凋亡、自噬和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的影响。方法qRT-PCR检测PCOS卵巢组织、正常卵巢组织、人卵巢颗粒细胞KGN及正常卵巢上皮细胞IOSE80中LncRNA MALAT1的表达水平。体外培养KGN细胞,将KGN细胞分为control组、si-NC组、si-MALAT1组、pc-NC组、pc-MALAT1组、pc-MALAT1+740Y-P(PI3K激活剂)组。q RT-PCR检测各转染组细胞MALAT1 mRNA的表达水平;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;透射电镜观察KGN细胞中自噬小体;Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、微管相关蛋白Ⅱ轻链3(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3Ⅰ)、Beclin1、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果PCOS卵巢组织MALAT1 mRNA表达水平低于正常卵巢组织,KGN细胞中MALAT1 mRNA表达水平低于正常卵巢上皮IOSE80细胞;control组KGN细胞中可见少量的自噬小体;干扰MALAT1表达后KGN细胞OD_(450)值(24、48、72 h)、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR增高(P<0.05),自噬小体数量增多;过表达MALAT1后上述指标变化均逆转(P<0.05);与pc-MALAT1组相比,pc-MALAT1+740Y-P组OD_(450)(24、48、72 h)值、Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR升高(P<0.05),自噬小体数量增多。结论过表达MALAT1可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而抑制PCOS颗粒细胞凋亡和自噬。

lncRNA MALAT1通过海绵吸附miRNA-141-3p调控Wnt/β-catenin促进卵巢癌的生长及转移

目的 研究长链非编码RNA MALAT1(lncRNA MALAT1)在卵巢癌中的作用及调控机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测MALAT1在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80及人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达,选取SKOV3及HO-8910PM细胞进行后续研究。利用siRNA干扰SKOV3和HO-8910PM细胞中MALAT1表达,CCK-8法检测细胞增殖,划痕及Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,并通过Western blot法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)相关指标E-cadherin、N-cadherin的表达。利用生物信息学分析MALAT1与miRNA-141-3p的靶向关系,并利用双荧光素报告基因验证。MALAT1敲低及miRNA-141-3p抑制剂共同作用细胞,检测其对SKOV3及HO-8910PM细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并通过Western blot法分析其对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达调控。结果 与人正常卵巢上皮细胞系IOSE80比较,卵巢癌细胞系内MALAT1表达明显上调(P<0.05);而在SKOV3及HO-8910PM中下调MALAT1表达,细胞增殖、侵袭迁移及EMT均受到抑制,同时miRNA-141-3p表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果证明MALAT1和miRNA-141-3p具有靶向关系。而在下调MALAT1表达的同时使用miRNA-141-3p抑制剂,则可逆转下调MALAT1的所产生的抑制效应(P<0.05)。进一步的研究发现,MALAT1/miRNA-141-3p轴可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响卵巢癌进展。结论 MALAT1可能通过海绵吸附miRNA-141-3从而调控Wnt/β-catenin影响卵巢癌的发生和发展。

栀子醇提物下调lncRNA MALAT1影响帕金森病模型细胞增殖和凋亡

目的 探讨栀子醇提物对帕金森病进展的影响,并探讨其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)肺癌转移相关转录本(MALAT)1表达有关。方法 1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)处理SK-N-SH构建模型帕金森病细胞模型。将SK-N-SH细胞分为对照组、模型组、实验1组(25μg/ml栀子醇提物)、实验2组(50μg/ml栀子醇提物)、实验3组(100μg/ml栀子醇提物)、si-NC组(转染si-NC)、si-MALAT1组(转染si-MALAT1)、实验3+pcDNA组(转染pcDNA联合100μg/ml栀子醇提物)、实验3+pcDNA-MALAT1组(转染pcDNA-MALAT1联合100μg/ml栀子醇提物)。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)用于检测细胞活力、凋亡及lncRNA MALAT1表达。结果 与对照组比较,模型组细胞活力显著降低,lncRNA MALAT1表达、凋亡率显著升高(P<0.05)。与模型组比较,实验2组、实验3组细胞活力显著升高,lncRNA MALAT1表达、凋亡率显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组细胞活力显著升高,凋亡率显著降低(P<0.05)。与实验3+pcDNA组比较,实验3+pcDNA-MALAT1组细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 栀子醇提物可促进帕金森病模型细胞增殖,抑制细胞凋亡,其机制与下调lncRNA MALAT1表达有关。

JAG1影响单核-巨噬细胞重塑三阴性乳腺癌转移前微环境:基于外泌体中的LncRNA MALAT1

目的探讨JAG1对单核-巨噬细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)中肿瘤转移前微环境(PMN)中作用的影响及其可能的调控机制,以期为TNBC诊疗提供新的思路和靶点。方法人TNBC细胞MDA-MB-231,MDA-MB-231B体外培养,qRT-PCR检测JAG1的表达。动物实验将雌性裸鼠分为MDA-MB-231组和MDA-MB-231B组,5只/组,分别往乳腺脂肪垫注射细胞5×10^(6),6周取肿瘤组织进行免疫组化分析。人源单核细胞THP-1为研究对象,分别经人源JAG1重组蛋白(rhJAG1)直接处理或经TNBC条件培养基(CM)处理,通过单核-内皮粘附、Transwell、qRT-PCR和Western blot实验检测JAG1对单核细胞的直接作用和在PMN中的影响。实验分为5组:Control组:THP-1正常培养;231-CM组:THP-1+231-CM;231-JAG1-CM组:THP-1+rhJAG1处理后231-CM;231B-CM组:THP-1+231B-CM;231-DAPT-CM组:THP-1+DAPT处理后231-CM。透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测JAG1对TNBC外泌体分泌影响。生物信息学筛选与LncRNA MALAT1相互作用的miRNA并行qRT-PCR验证。结果与MDA-MB-231相比,侵袭株MDA-MB-231B的JAG1表达更高(P<0.01),肝转移面积更大;rhJAG1直接处理和TNBC条件培养基处理均能促进单核细胞的黏附、迁移,并影响其分化(均P<0.05);透射电镜和NTA检测显示JAG1能促进MDA-MB-231外泌体分泌数量增多(P<0.01),外泌体中LncRNAMALAT1含量升高(P<0.0001)。生物信息学分析得到与LncRNA MALAT1和JAG1相关的5个候选miRNA,实验证实miR-26a-5p在TMN中的单核-巨噬细胞中受到MALAT1的靶向调控(P<0.0001)。结论JAG1能促进TNBC的外泌体分泌并影响其中Lnc MALAT1的表达,从而靶向PMN中单核-巨噬细胞miR-26a-5p的表达,从而使单核-巨噬细胞中JAG1表达升高,进而影响单核-巨噬细胞在PMN中的黏附、迁移和破骨分化作用。

MicroRNA-26b下调MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的机制研究

目的 探索microRNA-26b(miR-26b)通过MALAT-1抑制乳腺癌MCF-7细胞恶性生物学行为的分子机制。方法 以乳腺癌细胞系MCF-7作为研究对象,采用慢病毒LV-miR-26b-ctrl和LV-miR-26b转染肿瘤细胞,逆转录聚合酶链反应检测MALAT-1、miR-26a和miR-26b的mRNA表达,平板克隆形成实验、CCK-8细胞增殖实验、软琼脂成瘤实验、细胞划痕实验、Transwell细胞侵袭实验分别检测肿瘤细胞的增殖、体外成瘤、迁移和侵袭能力。结果 E2组与Mock组MCF-7细胞24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)两组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),与Mock组比较,E2组72和96 h时细胞增殖能力较Mock组提高(P <0.05);(3)两组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。与Mock组相比,E2组MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),miR-26a、miR-26b mRNA相对表达量下降(P <0.05)。高表达miR-26b的乳腺癌患者的生存情况优于低表达miR-26b组,死亡风险更低(P <0.05),低表达miR-26a组患者的生存情况优于高表达miR-26a组(P <0.05),用Cox比例风险回归模型,将miR-26a作为一个独立的预后因素来比较,两组患者的死亡风险比较无差异(P>0.05)。与LV-miR-26b-ctrl组比较,LV-miR-26b-ctrl/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量升高(P <0.05),与LV-miR-26b-ctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组乳腺癌细胞的MALAT-1相对表达量降低(P <0.05)。LV-miR-26b-ctrl组、LV-miR-26b-ctrl/E2组、LV-miR-26b/E2组细胞在24、48、72和96 h时吸光度值比较,经重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05);(2)各组吸光度值比较,差异有统计学意义(P <0.05),LV-miR-26b-ctrl/E2组72和96 h时细胞增殖能力明显较LV-miR-26b-ctrl组增强(P <0.05),LV-miR-26b/E2组72和96 h时细胞增殖能力较LV-miR-26b-ctrl/E2组降低(P <0.05);(3)各组吸光度值变化趋势比较,差异有统计学意义(P <0.05)。E2处理后的LV-miR-26b-ctrl肿瘤细胞增殖和体外成瘤能力增强。与LV-miR-26bctrl/E2组比较,LV-miR-26b/E2组肿瘤细胞的增殖和体外成瘤能力降低。在24 h时,LV-miR-26b-ctrl/E2组细胞划痕间隙较LV-miR-26b-ctrl组变窄,LV-miR-26b/E2组24 h时细胞的划痕间隙较LV-miR-26bctrl/E2组明显增宽。LV-miR-26b-ctrl/E2组Transwell小室下方的乳腺癌细胞数量较LV-miR-26b-ctrl组增多,LV-miR-26b/E2组的肿瘤细胞数量较LV-miR-26b-ctrl/E2组减少。结论 下调MALAT-1可能是miR-26b抑制乳腺癌恶性生物学行为的分子机制之一,miR-26b有望成为乳腺癌治疗的调控靶点。

乌头汤调控IncRNA MALAT1/miR-124途径抑制软骨细胞焦亡的机制研究

目的:探讨乌头汤是否通过调控Lnc RNA MALAT1/mi R-124途径抑制软骨细胞焦亡。方法:使用LPS(1μg/mL)24h+ATP(5.5mmol/L)4h诱导软骨细胞发生细胞焦亡反应;构建lncRNA MALAT1沉默细胞株;将软骨细胞随机分为空白对照组(Lenti-control组)、病毒沉默组(sh-MALAT1)、模型对照组(LPS+ATP+Lenti-control组)、模型沉默组(LPS+ATP+sh-MALAT1)。制备乌头汤含药血清,再将细胞再随机分为空白组、模型组(LPS+ATP)、乌头汤组(LPS+ATP+WTD含药血清)进行干预。Real-time PCR检测各组软骨细胞中的lncRNA MALAT1、miR-124基因水平变化;Western Blot检测各组软骨细胞中中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18的蛋白含量表达。结果:lncRNA MALAT1在LPS+ATP诱导的细胞焦亡软骨细胞核中表达增高。与空白对照组相比,模型沉默组中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白含量下降(P<0.05),而与模型对照组相比,病毒沉默组中上述指标蛋白含量下降(P<0.05)。与模型组相比,乌头汤组中lncRNA MALAT1及上述指标表达降低(P<0.05),miRNA-124 mRNA表达升高(P<0.05)。结论:乌头汤可通过调控lnc RNA MALAT1/miR-124途径抑制软骨细胞焦亡。

基于“LncRNA MALAT1-巨噬细胞焦亡”新视角探讨加味四妙勇安汤促进大鼠糖尿病足溃疡愈合机制

【目的】探讨加味四妙勇安汤通过长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)-巨噬细胞焦亡轴对大鼠糖尿病足溃疡的治疗作用。【方法】将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、siLncRNA MALAT1(慢病毒质粒)组、加味四妙勇安汤组,每组10只。除正常组,其余各组大鼠构建糖尿病足溃疡模型。成功造模后,进行相应干预。观察大鼠治疗前及治疗4、8周后足溃疡创面愈合情况,计算大鼠治疗前后创面愈合面积百分比。干预结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平,免疫荧光化学染色法检测足溃疡创面组织M2巨噬细胞标志蛋白(CD206)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)法检测足溃疡创面组织LncRNA MALAT1表达,Western Blot法检测足溃疡创面组织细胞焦亡关键蛋白消皮素D(GSDMD)、NLRP3、proCaspase-1、核转录因子kappaB(NF-κB)p65等的蛋白表达。【结果】(1)与模型组比较,siLncRNA MALAT1组、加味四妙勇安汤组足溃疡创面面积减小。(2)与正常组比较,模型组血清IL-18、IL-1β水平,足溃疡创面组织LncRNA MALAT1表达水平,ASC、NLRP3、GSDMD、pro-Caspase-1、NF-κB p65蛋白表达水平升高,CD206蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,siLncRNA MALAT1组、加味四妙勇安汤组血清IL-18、IL-1β水平,足溃疡创面组织LncRNA MALAT1水平,ASC、NLRP3、GSDMD、pro-Caspase-1、NF-κB p65蛋白表达水平降低,CD206蛋白表达水平升高(均P<0.05)。加味四妙勇安汤组上述各指标与siLncRNA MALAT1组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】加味四妙勇安汤可通过下调LncRNA MALAT1抑制巨噬细胞焦亡,从而促进大鼠糖尿病足溃疡愈合。

人参皂苷Rg1通过LncRNA MALAT1相关通路对脊髓损伤后神经再生修复的影响

目的探讨人参皂苷Rg1通过LncRNA MALAT1通路对脊髓损伤大鼠神经再生修复的影响。方法30只大鼠随机分为Rg1治疗组、假手术组、脊髓损伤对照组。将成年雌性鼠随机分为假手术组,脊髓损伤对照组和Rg1治疗组,建立大鼠脊髓损伤模型。Rg1治疗组大鼠每天腹腔注射Rg1溶液(100 mg/kg),脊髓损伤对照组和假手术组每天腹腔注射等量生理盐水。采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分评估大鼠脊髓损伤后的运动恢复情况。连续治疗28 d后处死老鼠。取脊髓组织,通过Western blot检测细胞黏附分子层粘连蛋白(Laminin,LN)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)以及神经营养因子胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的表达。实时荧光定量PCR测LncRNA MALAT1,采用免疫组化分析LAMC1的表达水平。结果BBB评分显示,Rg1治疗组BBB评分显著优于假手术组、脊髓损伤对照(P<0.05)。免疫组化及免疫荧光显示:Rg1治疗组LN、FN、GDNF、NGF、LAMC1表达与对照组相比显著升高。结论Rg1能够上调LncRNA MALAT1表达,进一步调控LAMC1而促进大鼠脊髓损伤修复。

肢体骨肉瘤患儿外周血中LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1表达及与预后的关系

目的:探讨肢体骨肉瘤患儿外周血中LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1表达及与预后的关系。方法:选择我院于2016年09月至2021年09月肢体骨肉瘤患儿93例作为研究对象;另选择我院2016年09月至2021年09月健康体检儿童50例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定外周血LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量。随访至2022年08月31日,记录患儿总生存期(OS)。比较2组外周血LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量;骨肉瘤不同病理特征LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量;预后与LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响骨肉瘤患儿预后的独立危险因素。结果:骨肉瘤组外周血LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量高于对照组(P<0.05)。不同性别、年龄、组织学分型和发病部位外周血LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量比较无显著差异(P>0.05);Ⅲ期外周血LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1相对表达量高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05)。肢体骨肉瘤患儿随访12~72个月,中位随访时间43个月。LncRNA ANRIL高表达OS时间短于LncRNA ANRIL低表达(P<0.05);LncRNA MALAT1高表达OS时间短于LncRNA MALAT1低表达(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析显示,Enneking分期Ⅲ期、LncRNA ANRIL高表达和LncRNA MALAT1高表达为影响骨肉瘤患儿预后的独立危险因素。结论:肢体骨肉瘤患儿外周血中LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1高表达,且与患儿Enneking分期和预后密切相关,Enneking分期Ⅲ期、LncRNA ANRIL和LncRNA MALAT1高表达为影响肢体骨肉瘤患儿预后的独立危险因素。

LncRNA MALAT1通过调控miR-181d-5p对脂多糖诱导的库普弗细胞增殖活性和炎性因子表达的影响

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)对脂多糖(LPS)诱导的库普弗细胞(kupffer cells,KCs)存活和炎性因子表达的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导KCs建立细胞损伤模型,随机分组为对照(Con)组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-MALAT1组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-181d-5p组、LPS+si-MALAT1+anti-miR-NC组、LPS+si-MALAT1+anti-miR-181d-5p组;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LncRNA MALAT1、miR-181d-5p的表达量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖活性;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-6、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;双荧光素酶报告实验检测LncRNA MALAT1与miR-181d-5p的靶向关系。结果与Con组比较,LPS组LncRNA MALAT1的表达量升高(P<0.05),IL-6、IL-12、TNF-α的水平升高(P<0.05),miR-181d-5p的表达量降低(P<0.05),细胞增殖活性降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-MALAT1组细胞增殖活性升高(P<0.05),IL-6、IL-12、TNF-α的水平降低(P<0.05)。LncRNA MALAT1可负向调控miR-181d-5p的表达;与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-181d-5p组细胞增殖活性升高(P<0.05),IL-6、IL-12、TNF-α的水平降低(P<0.05)。与LPS+si-MALAT1+antimiR-NC组比较,LPS+si-MALAT1+anti-miR-181d-5p组细胞增殖活性降低(P<0.05),IL-6、IL-12、TNF-α的水平升高(P<0.05)。结论干扰LncRNA MALAT1表达可通过促进miR-181d-5p表达而促进LPS诱导的KCs存活及抑制细胞炎性因子表达。

lncRNA MALAT1调节miR-106b-5p/TLR4轴对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织炎性损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)调节miR-106b-5p/Toll样受体4(TLR4)轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织炎性损伤的影响。方法以气管滴注脂多糖溶液并联合烟熏法构建COPD模型大鼠,随机分成5组(每组12只模型大鼠):模型组、lncRNA MALAT1敲低组、miR-106b-5p antagomir组、阴性对照组、lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组,选12只正常大鼠气管内滴注与造模大鼠等剂量的生理盐水,且不进行烟熏,作对照组,分组干预处理后,检测大鼠肺功能,比较各组用力肺活量(FVC)、呼气峰流值(PEF)、吸气阻力(Ri)、潮气量(VT);实时荧光定量PCR实验检测肺组织lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA表达;Giemsa染色对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数;HE染色观察各组大鼠肺组织炎性损伤,并做Holfbauer评分;酶联免疫吸附测定(ELASA)法测量各组大鼠BALF和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-10(IL-10)水平;双荧光素酶报告基因实验检测L2细胞中lncRNA MALAT1对miR-106b-5p、miR-106b-5p对TLR4的靶向调节。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织发生炎性损伤,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。与模型组比较,lncRNA MALAT1敲低组大鼠肺组织肺炎性损伤减轻,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平升高(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05);阴性对照组大鼠各指标无显著差异(P>0.05)。与lncRNA MALAT1敲低组比较,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。L2细胞中lncRNA MALAT1可靶向下调miR-106b-5p,且miR-106b-5p可靶向下调TLR4表达。结论下调lncRNA MALAT1可通过促进miR-106b-5p分泌而降低TLR4表达,进而减少促炎因子产生,增加抗炎因子产生,阻止炎症发生发展,最终减轻COPD大鼠肺组织炎性损伤。

老年克罗恩病血清lncRNA MALAT1和LUCAT1表达情况及其与肠道菌群数量的相关性

目的探讨老年克罗恩病(CD)患者血清lncRNA MALAT1和LUCAT1表达及其与肠道菌群数量的相关性。方法选取2021年1月~2022年1月浙江省丽水市第二人民医院收治的老年CD患者120例为CD组,另外选择同期正常健康体检者80例为对照组。应用qRT-PCR法检测血清中lncRNA MALAT1、LUCAT1表达水平;通过革兰染色对菌群鉴定并计算肠道菌群数量;采用Pearson相关性分析血清lncRNA MALAT1、LUCAT1表达水平与肠道菌群数量的相关性。结果(1)CD组血清中lncRNA MALAT1的表达水平显著低于对照组(P<0.01),LUCAT1的表达水平显著高于对照组(P<0.01);lncRNA MALAT1和LUCAT1CD在CD组三个不同活动期中差异有统计学意义(P<0.01),其中,重度活动期血清lncRNA MALAT1的表达水平显著低于中度活动期和缓解期,中度活动期表达水平显著低于缓解期(P<0.01);重度活动期血清LUCAT1的表达水平显著高于中度活动期和缓解期,中度活动期表达水平显著高于缓解期(P<0.01)。(2)相关性分析显示,缓解期、中度活动期和重度活动期CD患者血清lncRNA MALAT1的表达水平与普氏菌、双歧杆菌的数量呈正相关,与肠球菌、大肠杆菌的数量呈负相关(P<0.01);LUCAT1表达水平与普氏菌、双歧杆菌的数量均呈负相关,与肠球菌、大肠杆菌的数量呈正相关(P<0.01)。结论CD患者血清lncRNA MALAT1表达水平显著降低,而LUCAT1表达水平显著增高,两者与肠道菌群数量有相关性。

lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌组织的表达变化

目的分析lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌(BC)组织的表达变化。方法选取2017年1月6日至2020年1月6日本院收治的90例膀胱癌病患为研究样本,病患接受手术治疗疾病,留取膀胱癌组织、癌旁组织。应用荧光实时定量PCR法对于以上组织内的lncRNA MALAT1、miR-146b-5p进行测定,分析以上物质在BC组织内的表达变化。结果癌旁组织和BC内miR-146b-5p、lncRNA MALATI相对表达量对比具有统计学意义(P<0.05);BC淋巴结转移和miR-146b-5p、lncRNA MALATI表达存在相关性;BC组织内的miR-146b-5p、lncRNA MALAT1表达情况呈负相关(P<0.05)。结论膀胱癌组织内的miR-146b-5p表达降低,lncRNA MALAT1表达上升。以上两者负相关。这种情况的出现和病患淋巴结转移有关联性,日后其可能成为诊治膀胱癌疾病的重要标记物。

基于lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化探讨白花蛇舌草抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭

目的研究白花蛇舌草(HDW)通过lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化(EMT)对结肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。方法取对数生长期人结肠癌HCT-116细胞,分为空白组、药物组、病毒组和药物联合病毒组。空白组和药物组加入不含lncRNA MALAT1的空载慢病毒液,病毒组和药物联合病毒组加入含lncRNA MALAT1过表达慢病毒液,获得稳定转染的细胞系。空白组和病毒组用0 mg/mL HDW药液干预,药物组和药物联合病毒组用0.5 mg/mL HDW药液干预,均干预24 h。RT-qPCR法检测细胞lncRNA MALAT1 mRNA相对表达水平;MTT法检测细胞活力;划痕实验检测细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞锌指转录因子Slug、锌指转录因子Snail、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达量以及p-Smad/Smad。结果与空白组比较,药物组lncRNA MALAT1 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.05),细胞活力明显降低(P<0.05),细胞划痕愈合能力与迁移、侵袭能力明显降低,Slug、Snail、TGF-β、N-cadherin、Vi⁃mentin蛋白表达量和p-Smad/Smad明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量明显提高(P<0.05);病毒组lncRNA MALAT1 mRNA相对表达水平明显升高(P<0.05),细胞活力明显升高(P<0.05),细胞划痕愈合能力与迁移、侵袭能力明显提高,Slug、Snail、TGF-β、N-cadherin、Vimentin蛋白表达量和p-Smad/Smad明显提高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量明显降低(P<0.05)。与病毒组比较,药物联合病毒组lncRNA MALAT1 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.05),细胞活力明显降低(P<0.05),细胞划痕愈合能力与迁移、侵袭能力明显降低,Slug、Snail、TGF-β、N-cadherin、Vimentin蛋白表达量和p-Smad/Smad明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量明显提高(P<0.05)。结论HDW可通过抑制lncRNA MALAT1/Slug/Smad信号通路,减少EMT,进而抑制大肠癌细胞的迁移和侵袭。

lncRNA MALAT1通过miR-124-3p/SOX7分子轴促进视网膜血管内皮细胞增殖及迁移和血管生成

目的:探讨lncRNA MALAT1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管生成的影响及其分子机制。方法:qPCR检测正常对照组、糖尿病患者无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变患者组血清中lncRNA MALAT1的表达水平以及葡萄糖培养对lncRNA MALAT1的表达水平的影响。qRT-PCR检测miR-124-3p表达水平;Western blotting检测SOX7表达水平;双荧光素酶报告系统检测lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7的靶向作用关系;CCK-8实验检测细胞的增殖活力;Transwell实验检测细胞的迁移能力;体外成管实验检测hRMECs血管形成能力。结果:lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者血清中的表达水平显著高于糖尿病患者无视网膜病变组和正常对照组(P<0.001);体外葡萄糖培养显著促进lncRNA MALAT1在hRMECs细胞的表达,并显著促进hRMECs细胞的增殖、迁移和血管形成(均P<0.05)。敲低lncRNA MALAT1显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验表明,lncRNA MALAT1与miR-124-3p、miR-124-3p与SOX7之间存在靶向结合作用。过表达miR-124-3p显著抑制hRMECs细胞的增殖、迁移和成管能力(均P <0.05);过表达lncRNA MALAT1+miR-124-3p,同时过表达miR-124-3p+SOX7,敲低lncRNA MALAT1+过表达SOX7均显著消除了过表达miR-124-3p对hRMECs细胞增殖、迁移和血管形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:lncRNA MALAT1通过下调miR-124-3p对SOX7的负调控作用促进糖尿病视网膜病变中视网膜内皮细胞增殖、迁移和血管形成。lncRNA MALAT1在糖尿病视网膜病变患者的异常上调可能是微血管功能障碍的潜在生物标志。

LncRNA MALAT-1对弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖和耐药性的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)MALAT-1对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)增殖和耐药性的影响。方法:收集2015年3月至2018年11月我院81例DLBCL患者的淋巴组织标本作为研究对象,另选取60例健康淋巴组织标本作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测MALAT-1在DLBCL组织和健康淋巴组织中的mRNA表达水平;构建NC-shRNA和MALAT-1-shRNA慢病毒稳定细胞系,CCK-8法检测MALAT-1下调对DLBCL细胞增殖的影响;在耐药性分析中,NC-shRNA和MALAT-1-shRNA细胞用200 ng/ml阿霉素分别处理48 h。采用Western blot检测NC-shRNA和MALAT-1-shRNA细胞耐药基因MDR1和MRP1的蛋白表达水平。结果:DLBCL组织中MALAT-1的mRNA相对表达水平显著高于健康淋巴组织,差异有统计学意义(1.46±0.11 vs 0.41±0.08,P<0.05);CCK-8结果显示,与NC-shRNA组相比,MALAT-1-shRNA组细胞在24 h、36 h、48 h、72 h时的增殖能力均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);耐药性检测结果表明,与NC-shRNA组、MALAT-1-shRNA组和NC-shRNA+Adriamycin组比较,MALAT-1-shRNA+Adriamycin组增殖曲线的平均斜率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC-shRNA组比较,MALAT-1-shRNA组细胞中MDR1和MRP1的蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT-1在DLBCL组织中呈高表达,下调MALAT-1的表达可显著抑制DLBCL细胞的增殖能力和耐药性。

芍药苷上调lncRNA MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进人类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞凋亡

目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1的小干扰RNA(si-MALAT1)片段,脂质体转染48 h后,实时定量PCR检测筛选出敲除效果最佳si-MALAT1。将细胞分对照组、PAE组、si-NC组、si-MALAT1组、PAE联合si-MALAT1组。敲低MALAT1表达后,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测各组Wnt1、β联蛋白(β-catenin)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的mRNA表达;Western blot法检测各组Wnt1、β-catenin、caspase-3、caspase-9、Bcl2、BAX的蛋白表达。结果不同浓度PAE对RA-FLS均有抑制作用,相同浓度RA-FLS活力呈时间依赖性下降;与FLS对照组相比,RA-FLS组MALAT1表达下调,经PAE处理后细胞凋亡率增加;RA-FLS中si-MALAT1组细胞凋亡率最低,而PAE联合si-MALAT1组显著增高;PAE组较对照组Bcl2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达降低,caspase-3、caspase-9、BAX的mRNA表达则升高;si-MALAT1组的Bcl2表达显著增高,PAE联合si-MALAT1组的Bcl2表达则显著下调,BAX、caspase-3、caspase-9表达显著升高。结论PAE通过上调MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进RA-FLS凋亡。

LncRNA MALAT1在2型糖尿病患者中的表达及临床意义

目的探讨LncRNA MALAT1在2型糖尿病患者中的表达及临床意义。方法收集正常健康体检者25例,糖尿病患者69例,Real-time PCR法(qPCR)测定两组血清白细胞中LncRNA MALAT1的表达。结果糖尿病组血清白细胞中LncRNA MALAT1表达水平较对照组明显升高(P<0.05)。二元回归分析显示LncRNA MALAT1及超氧化物歧化酶(SOD)是2型糖尿病发病的危险因素。Spearman相关分析提示LncRNA MALAT1表达与糖化血红蛋白、SOD、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)中胰岛素分泌(60 min)及血糖(60、120、180 min)存在相关性。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示ROC曲线下面积(AUC)为0.807,敏感度为78.3%,特异度为84.0%。结论LncRNA MALAT1在2型糖尿病患者中高表达,可作为糖尿病诊断的潜在生物标志物。

人参皂苷Rb1对脑缺血再灌注损伤小鼠LncRNA Malat1表达的调控作用

目的探讨人参皂苷Rb1是否可以增加脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死半暗带区LncRNA Malat1的表达。方法将30只C57/B6小鼠按随机数字表法分成假手术组、模型+生理盐水对照组、模型+人参皂Rb1组,每组10只。采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型。人参皂苷Rb1组和模型组大鼠在制模后即刻分别腹腔注射人参皂苷Rb1(40 mg/kg)和等量生理盐水。再灌注损伤后24 h观察各组小鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、Bcl-2蛋白表达量和LncRNA Malat1含量。结果与假手术组相比,模型组小鼠神经行为学评分和脑梗死体积明显增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量和LncRNA Malat1表达水平明显增加(P<0.05);与模型组相比,人参皂苷Rb1组小鼠神经行为学评分和脑梗死体积明显减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量和LncRNA Malat1表达水平进一步增加(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1可以改善MCAO小鼠的神经行为学评分、减小脑梗死体积和增加Bcl-2蛋白表达量。人参皂苷Rb1具有脑保护作用,其可能的机制与增加小鼠脑梗死半暗带区LncRNA Malat1的表达有关。