A Novel Oligosaccharide from the Mucus of the Loach

A novel oligosaccharide was isolated and purified from the mucus of the loach, Misgurnus anguillicaudatus. It was identified by several qualitative tests and characterized by elementary analysis, UV and IR spectrum. Its average molecular weight (Mw=1539.4) was determined by gel permeation chromatography. The major structural monomers of Misgurnus anguillicaudatus oligosaccharide were identified to be D-galactose and L-fucose by paper chromatography and gas chromatography.

鄱阳湖区泥鳅遗传多样性研究

采用同工酶电泳、RAPD引物PCR扩增和线粒体DNA细胞色素b基因全序列3种方法,对鄱阳湖3种斑纹泥鳅的遗传结构进行分析。同工酶电泳显示3种斑纹泥鳅在LDH、MDH和EST这3种同工酶之间存在群体和组织差异;RAPD试验结果显示6条RAPD引物在18尾鄱阳湖泥鳅个体中共扩增出了169条不同分子量的RAPD标记,其中多态性带101条,多态性带的比例为59.56%,平均每个引物产生9.39条带和5.61条多态性带,不同斑纹泥鳅的遗传多样性指数显示3种斑纹泥鳅的遗传水平处于较高水平。以特异性引物进行PCR扩增,获得了1140bp的细胞色素b基因全序列。结果显示,3种不同斑纹泥鳅中检测出了1个共有单倍型和3个特有单倍型。与共有单倍型相比,大花斑泥鳅特有单倍型有91个变异位点,而小花斑泥鳅与无花斑泥鳅特有单倍型的变异位点为20和24个。基于单倍型构建的NJ树和MP树,显示大花斑泥鳅的特有单倍型EU145023处于独立的分支上,这反映出鄱阳湖地区不同斑纹的泥鳅之间在线粒体DNACytb基因中出现了一定距离的分化。

泥鳅ACE抑制肽的体外活性研究

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽,研究该肽的稳定性。在加热温度≤80℃条件下加热2h,泥鳅降血压肽(<2.5ku)的ACE抑制活性没有显著变化。当2.0≤pH≤8.0时,泥鳅降血压肽的ACE抑制活性变化不显著。冷冻干燥优于喷雾干燥。Mg2+对泥鳅降压肽的降压活性起到促进作用,而Zn2+和Mn2+抑制了肽的降压活性。葡萄糖对降压肽活性的影响程度明显大于蔗糖,随着浓度的升高,其ACE抑制活性逐渐降低,褐变程度加深;氯化钠对降压活性的影响不明显。在模拟胃肠道消化体系中,胃蛋白酶的消化显著提高了产物的降压活性;胰酶的消化降低了产物的降压活性。泥鳅多肽属于底物型ACE抑制肽。

泥鳅养殖水体中一株芽孢杆菌的筛选及其净水效果研究

旨在寻找具有益生菌特性的泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)养殖池塘土著芽孢杆菌(Bacillus),提供可靠和针对性强的制备微生态制剂的菌种,有效改善泥鳅养殖池塘水质。从泥鳅养殖池塘水体中分离到4株芽孢杆菌,通过降解培养液中亚硝酸盐筛选出1株优势目的菌株NQ1。根据形态学特征和生理生化特性结果,鉴定NQ1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。设置NQ1浓度105、106、107cfu/m L组、对照组(加入灭菌生理盐水)、NQ1+嗜水气单胞菌组(2种细菌的终浓度均为107cfu/m L)和嗜水气单胞菌组(107cfu/m L)进行安全性试验。3个NQ1组和对照组的泥鳅均能正常摄食和活动,成活率均为100%;嗜水气单胞菌组泥鳅的成活率仅为40%;加入1×107cfu/m L浓度NQ1组泥鳅成活率(65%)比单独加入1×107cfu/m L浓度嗜水气单胞菌攻毒组(40%)高。水质净化试验结果显示,在泥鳅养殖水体中加入1×107cfu/m L浓度的NQ1,14 d后氨氮和亚硝酸盐含量较对照组分别降低34.97%和89.46%。

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明:制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。

泥鳅多糖对化学性肝损伤的保护作用

目的 :研究泥鳅多糖的护肝作用。方法 :用泥鳅多糖给小鼠灌胃 6d ,观察他们对四氯化碳、硫代乙酰胺和 1-萘异硫氰酸酯致小鼠肝损伤所引起肝肿胀、血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶以及血清黄疸指数升高的影响。结果 :泥鳅多糖能明显降低模型组的血清转氨酶和肝肿胀 ,而且还能显著抑制 1-萘异硫氰酸酯引起小鼠血清黄疸指数升高。结论

离子液体[C_16 mim]Cl对泥鳅的毒性效应

以泥鳅为受试动物,采用急性毒性、微核试验及酶活分析实验,研究了离子液体[C16mim]Cl对水生生物的生物毒性作用。急性实验表明:[C16mim]Cl对泥鳅有明显的毒性,其对泥鳅24、48和96h的LC50分别为2.533、1.763和1.379mg.L-1;微核实验表明:对照组红细胞微核率为0.5‰左右,而处理组红细胞微核率最高达到12.89‰,且各处理组均明显高于对照组(P<0.05);酶活分析实验表明:处理组血清的GPT和GOT活力均明显高于对照组,且随[C16mim]Cl浓度增高而呈现上升趋势。从以上结果可以得出:[C16mim]Cl对泥鳅具有显著的遗传毒性和生理毒性效应,因而推测其大量使用可能对水生生物及生态环境具有一定的毒害作用。

蝇蛆粉替代鱼粉对泥鳅生长及体成分的影响

用蝇蛆粉替代基础饲料配方中0(CK)、25%、50%、75%和100%的鱼粉,分别配制了5组等氮饲料(粗蛋白含量为39.82%),研究其对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)生长及体成分的影响。结果表明,当用蝇蛆粉替代鱼粉的比例为50%时,泥鳅的增重率和特定生长率与对照组相比无显著差异;不同替代水平对泥鳅全鱼体水分、粗蛋白和粗灰分含量无显著差异;替代比例为25%及以上时,全鱼粗脂肪含量显著高于对照组。综合分析泥鳅生长和体成分等指标,泥鳅配合饲料中蝇蛆粉替代鱼粉的适宜比例为50%,该替代水平可以节省鱼粉用量,降低饲料成本,并对泥鳅的生长无明显影响。

黑龙江与广州颚口线虫幼虫分离株的形态学观察及其分子鉴定

本研究从来自黑龙江及广州地区的泥鳅中分离到10条颚口线虫幼虫,采用光学显微镜观察幼虫的形态特征,并对虫体的ITS2与CO1基因进行扩增测序、系统发育分析以鉴定虫种。结果显示10条颚口线虫幼虫头球均有3环小钩,其形态学特征与日本颚口线虫(Gnathostoma nipponicum)第3期幼虫相符。序列分析结果显示与GenBank中登录的日本颚口线虫ITS2和CO1基因的同源性分别为100%和99%。邻位连接法构建的50%一致树也均与日本颚口线虫处于同一分支。表明从黑龙江及广州地区泥鳅中分离的颚口线虫幼虫为日本颚口线虫幼虫,首次证明了中国存在日本颚口线虫。

泥鳅肉酶解物对羟自由基的清除作用

为了探讨深度开发泥鳅蛋白制备功能性肽的可能性,采用比色法研究泥鳅肉酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从复合风味蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、菠萝蛋白酶5种酶中,筛选出菠萝蛋白酶作为酶解泥鳅肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适宜水解酶。用响应面分析法(RSM)对该酶的酶解条件进行优化,并采用Sephadex G-15凝胶层析测定最佳酶解条件下制得的酶解液中活性肽的相对分子质量分布。结果表明,菠萝蛋白酶的最佳酶解条件为:固液比1:4、加酶量0.2%、pH6.47、温度54.48℃、酶解时间59.97min,酶解物对羟自由基的清除率为99.03%,IC50值为0.57mg/mL。酶解液中活性肽的相对分子质量范围为1129～2344。

秦岭地区泥鳅生物学特性及人工繁殖技术研究

泥鳅是珍禽朱的主要食物之一 ,开展人工繁殖技术研究 ,意义重大 .泥鳅一冬龄性成熟 ,耐低氧 ,最适生长水温 2 4℃～ 2 7℃ ,繁殖水温不得低于 18℃ ,参加繁殖试验的亲鱼要求体重雌性 2 0 g左右 ,雄性不得低于 12g ,雄性泥鳅一般体小 ,胸鳍末端较尖 .雌性泥鳅体大 ,胸鳍末端展开呈扇形 ,性腺发育至Ⅳ—Ⅴ期 ,可注射适量LRHA - 2 和HCG ,雌雄性等量 ,♀∶♂ =1∶2 (3 ) .水族箱内催产受精 ,水泥池中孵化网内孵化 ,效果较好 .

嗜水气单胞菌脂多糖及绣球菌多糖对泥鳅免疫功能及消化功能的影响

以灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)脂多糖和绣球菌(Sparasis crispa)多糖作为免疫增强剂,对接种免疫后的泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)进行抗氧化性能、免疫功能及消化功能等指标进行测定。结果表明:嗜水气单胞菌脂多糖和绣球菌多糖不仅可以提高泥鳅的抗氧化性能和免疫功能,而且可以增强泥鳅的消化功能,质量浓度为1g/L的灭活嗜水气单胞菌脂多糖和9g/L的绣球菌多糖对泥鳅的作用效果较明显,能较明显地提高泥鳅抗氧化性能、免疫功能及消化功能,与注射灭活的嗜水气单胞菌脂多糖相比,9g/L绣球菌多糖对泥鳅的作用时间更持久。

泥鳅血清凝集素的研究

采用DEAE-SepharoseFF离子交换层析和Superdex20010/300GL凝胶过滤层析技术,从泥鳅血清中分离出两种天然凝集素MSL-I和MSL-Ⅱ。SDS-PAGE检测表明,MSL-I及MSL-Ⅱ均显示两条蛋白质着色带。采用凝胶过滤法测得MSL-I相对分子质量为25000,MSL-Ⅱ相对分子质量为82000。根据凝胶过滤测定及SDS-PAGE检测结果可知,MSL-Ⅱ由相对分子质量分别为29000和13600两种亚基组成,MSL-I的亚基组成有待进一步研究。MSL-Ⅱ能结合多种糖,其中对乳糖的亲和力最强。MSL-Ⅱ具有较强的热稳定性,在pH4～11范围内具有凝集活性,最适pH为6～8。

泥鳅精子入卵程序的扫描电镜观察

用扫描电镜对泥鳅精子入卵全过程进行了观察，力图找出精子受精时限，为人工繁殖提供理论依据；对单精受精机制作了些探讨，为丰富我国鱼类受精生物学基础理论积累资料．

池塘养殖患病泥鳅两种病毒病原的电镜观察初报

利用电子显微镜技术,对湖北荆州池塘养殖患病泥鳅的组织进行超薄切片电镜观察。电镜观察结果显示:在患病泥鳅的脾脏、肾脏、心脏及肠道组织中观察到大量球形和杆状两种形态的病毒颗粒。球形病毒颗粒无囊膜,直径约50~75 nm;杆状病毒颗粒有囊膜,形态多样,大小约为(50~100)nm×(300~500)nm;细胞培养分离病毒结果显示,球状病毒可在鲫鱼脑组织细胞系(Gi CB)中增殖,可导致细胞出现典型的细胞病变效应(CPE,cytopathic effect),但没有观察到Gi CB细胞中杆状病毒的增殖。

硫酸铜对泥鳅精子活力的影响

以泥鳅精子为受试材料,应用计算机辅助精子分析系统,研究硫酸铜(0.1、1、10 mg/L)对泥鳅的精子活力的影响。结果表明,在0 h试验组,0.1 mg/L的硫酸铜明显降低泥鳅精子运动速度,1 mg/L的硫酸铜对运动时间和速度产生显著抑制作用,10 mg/L的硫酸铜对运动百分数、运动时间和速度都产生明显影响(P<0.05);泥鳅精子在硫酸铜中暴露2 h后,各运动参数均明显下降;硫酸铜对泥鳅精子运动能力的影响具有浓度和时间依赖性。表明硫酸铜对泥鳅精子运动具有抑制作用,对泥鳅具有潜在的生殖毒性。

泥鳅原始生殖细胞的发生、迁移和性腺分化

通过光学显微镜对泥鳅原始生殖细胞（Ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｓ，即ＰＧＣｓ）的发生、迁移和性腺分化进行初步研究，发现泥鳅ＰＧＣｓ最初出现在原肠晚期预定中胚层内，体节中胚层与侧板中胚层分离后而位于侧板中胚层．随着胚胎进一步发育，ＰＧＣｓ沿着脏壁中胚层从消化道腹侧迁移到背面，进入系膜两侧的背壁上皮形成的生殖嵴，与生殖嵴共同组成未分化的生殖腺，此时的原始生殖细胞为性原细胞．ＰＧＣｓ在迁移过程中数量基本不变．另外，未分化生殖腺的不对称分布可能是雌雄分化的最早特征．

离子液体[C_8 mim]Cl对泥鳅胚胎和仔鱼的毒性

以泥鳅的胚胎及仔鱼为试验材料，选择胚胎发育的4个不同时期（囊胚期、原肠胚中期、神经胚期、尾芽期）及仔鱼期为处理开始的时间点，探讨了离子液体[C8 min]CI的毒性作用。结果表明，随着[C8 min]CI浓度增加，泥鳅胚胎的孵化率下降，畸形率上升，具有明显的剂量-效应关系，67～150 mg·L-1的[C8 min]CI对泥鳅胚胎均表现出明显的致畸毒性效应；随着[C8 min]CI浓度增加，泥鳅仔鱼死亡率上升，而100～225 mg·L-1的[C8 min]CI对泥鳅仔鱼具有明显的致畸、致死作用。其中，[C8 min]CI对孵出期泥鳅仔鱼的24 h、48 h的半致死浓度分别为97．95和86．77 mg·L-1；而[C8 min]CI对孵出后3 d泥鳅仔鱼的24 h、48 h的半致死浓度分别为73．77和40．98 mg·L-1。由上可知，在一定的剂量内，[C8 min]CI对泥鳅胚胎及仔鱼的发育有明显的致畸、致死作用，这为离子液体[C8 min]CI的合理使用提供了理论依据。

泥鳅脱腥技术比较研究

[目的]研究比较泥鳅加工中的不同脱腥方法的脱腥效果。[方法]确定用于即食泥鳅加工的香辛料腌制脱腥的最佳配方以及用于膨化泥鳅加工的柠檬酸盐混合液浸泡脱腥的最佳配方,并采用GC-MS法对脱腥前后泥鳅的挥发性成分及变化情况进行检测。[结果]用于即食泥鳅加工的香辛料腌制脱腥最佳配方为食盐3%,料酒8%,姜汁4%,五香粉1%;用于膨化泥鳅加工的柠檬酸盐混合液浸泡脱腥最佳配方为食盐2%,柠檬酸0.15%,鱼液质量比为1∶4。未脱腥泥鳅肉中共检测出38种化合物,醛类、酮类是其主要腥味物质,经脱腥处理后,腥味物质含量明显减少。[结论]研究可为开发生产不同的泥鳅产品所需相应的脱腥工艺提供参考依据。

渗透压、pH和温度对泥鳅精子活力及受精率的影响

采集成熟的泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)精子,在不同的渗透压、pH和温度条件下进行活力观察。结果表明:①保持泥鳅精子活力较强的适宜渗透压和pH分别是(100～200)mOsm(1mOsm≈0.248kPa)和pH7.0～8.0,而活力最强时的渗透压和pH则分别为150mOsm和7.6;②在(20～30)℃范围内泥鳅精子激活率均较高,且当温度为25℃时,其激活率最高;③泥鳅受精率最高时的最适渗透压和pH分别为150mOsm和7.6,这与泥鳅精子活力最强时的渗透压和pH条件保持高度一致。