长效重组蛋白药物的研究进展

重组蛋白药物经静脉和皮下注射后通常半衰期较短,目前延长蛋白药物半衰期的方法主要基于三种原理:1、增大蛋白药物分子量;2、利用血浆药物平衡;3、减少免疫原性。针对构建突变体、PEG化修饰和与血清白蛋白融合三种延长重组蛋白药物半衰期的方法,及其已上市的和正在研发中的长效重组蛋白药物的特征、半衰期和免疫原性问题进行了综述。

从噬菌体展示随机肽库中定量筛选人血清白蛋白黏附肽

人血清白蛋白作为长效化载体蛋白可用于改善蛋白质药物的半衰期。除了以人血清白蛋白融合方式提高蛋白质药物的半衰期,黏附人血清白蛋白也已成为改善蛋白质药物药代动力学特性的策略。本研究以人血清白蛋白为靶分子,利用噬菌体表面展示技术对随机七肽库进行生物淘选,挑取噬菌体单克隆进行特异性鉴定。经4轮生物淘选后回收率和选择比都有了一定提高,使用滴度检测方法对所挑选的噬菌体阳性克隆进行了相对亲和力的测定,并经过DNA测序得到了4个特异性黏附肽HSA-1、HSA-5、HSA-6和HSA-10的序列。将此类多肽插入到蛋白质药物上,将有助于提高蛋白质药物在血清中的半衰期,从而达到长效目的。

PTH融合蛋白研究进展

甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone)是由甲状旁腺主细胞合成和分泌的一种单链多肽激素,是人体内维持血钙恒定的主要激素。PTH在人体内的生理功能非常广泛,PTH类似物已被开发成为治疗骨质疏松症的一系列新型药物。为了克服人PTH分子量小、在人体内代谢快、临床应用不方便的缺点,长效融合蛋白体的研究逐渐成为一种趋势,并且取得了一定的成就。主要依据国内外对PTH重组体和PTH融合蛋白体的研究现状,对PTH的构效关系与生理活性、PTH类似物的研究成果及PTH的应用前景进行综述。

《唐六典》记载的土贡药材分析

《唐六典》卷三《户部》"郎中、员外郎"详细记载了开元年间各道州的土贡药材。这些土贡药材具有明显的区域性,《药出州土表》可以清晰的显示有些土贡药材只来自于一州,有些土贡药材出自几个州,但这几个州在地域上往往是相邻的;通过与传统中医典籍比对,可以发现这些进贡的药材有唐朝皇帝追求长生不死之药,再者就是保健药,通过分析可以得知有这两种功效的药材占了土贡药材的大多数,其它药材有利胎药、美容药、刀疮药等,这充分反映了唐朝宫廷的用药倾向。

托瑞米芬在中国健康受试者中的生物等效性研究

目的建立具有特异性和高灵敏度的人血浆中托瑞米芬浓度测定的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,研究长半衰期药物托瑞米芬在健康人体的药代动力学特征并且采用截取的AUC_(0-72 h)来评价其生物等效性。方法用单中心、随机、开放、两周期、两序列、双交叉的试验设计,共入组56例健康受试者,空腹试验28例,餐后试验28例,分别单次口服试验制剂或参比制剂60 mg,用LC-MS/MS法测定人肝素钠血浆样品中托瑞米芬的浓度,用WinNonlin 7.0计算托瑞米芬药代动力学参数,以C_(max)和适当截取的AUC_(0-72 h)药物暴露量评价受试药物和参比药物的生物等效性。结果空腹组托瑞米芬受试制剂和参比制剂的药代动力学参数分别如下:C_(max)为(525.69±91.65)和(557.59±120.98)μg·L^(-1),t_(max)为2.50(1,4.5)和2.50(1.5,4.5)h,t_(1/2)为(65.32±35.65)和(59.69±31.18)h,AUC_(0-72 h)为(9261.71±1658.41)和(9550.77±1881.95)μg·h·L^(-1)。餐后组受试制剂和参比制剂托瑞米芬的主要药代动力学参数如下:C_(max)为(457.79±93.85)和(482.56±65.24)μg·L^(-1),t_(max)为4.50(2,12)和4.50(2,12)h,t_(1/2)为(55.08±22.00)和(56.56±28.73)h,AUC_(0-72 h)为(10896.95±2265.89)和(11554.71±2319.89)μg·h·L^(-1),空腹及餐后单次服用托瑞米芬受试制剂和参比制剂的C_(max)、AUC_(0-72 h)的几何均值比90%置信区间均落在80.00%~125.00%。结论LC-MS/MS检测方法特异性强、灵敏度高,用于托瑞米芬药代动力学和生物等效性研究可靠;空腹和餐后给药条件下,采用截取的AUC_(0-72 h)评价国产托瑞米芬受试药物和进口托瑞米芬参比药物主要药代动力学参数指标相近,具有生物等效性。

rhGH-Fc工程细胞的构建及筛选

目的研制具有较长半衰期的长效重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH),构建并筛选出高表达rhGH-Fc免疫融合蛋白的细胞株。方法将hGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4Fc段用柔性linker连接,克隆至GS双表达载体上,构建重组表达质粒,经两次双酶切鉴定及测序分析后,将构建正确的质粒稳定转染CHO-k1细胞。通过逐渐提高蛋氨酸磺酰胺(methionine sulphoximine,MSX)浓度,ELISA法筛选高表达的细胞株;利用亲和层析初步纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、HPLC、等电聚焦电泳分析;通过大鼠去垂体法测定长效rhGH的生物学活性,比较本课题研制的长效GH与其他普通GH的半衰期。结果重组质粒phGH-Fc-1经两次双酶切及测序鉴定,证明构建正确;成功筛选出高表达rhGH-Fc融合蛋白的细胞株,表达量可达1g/L;纯化的目的蛋白相对分子质量大小及等电点均与理论值一致,纯度可达95%以上;经大鼠去垂体体内活性测定,其比活为1.1IU/mg,依大鼠体重增长情况判断,其生物半衰期高于普通rhGH。结论成功构建并筛选出高表达长效rhGH的工程株,为后续长效rhGH的研制奠定了基础。

FDA《特定药物的生物等效性指导原则》长半衰期药物生物等效性指导原则介绍分析

目的研究FDA《特定药物的生物等效性指导原则》对长半衰期药物生物等效性研究相关规定,为我国仿制药质量和疗效一致性评价工作提供借鉴和帮助。方法针对长半衰期药物,从剂型、给药方式、试验设计、受试者选择、给药条件、检测物质选择、豁免条件、体外溶出试验等多个方面对FDA公布《特定药物的生物等效性指导原则》进行详细分析,并特别指出涉及我国仿制药质量与疗效一致性评价首批品种的长半衰期药物品种。结果 FDA公布的涉及长半衰期药物《特定药物的生物等效性指导原则》对具体化学仿制药的生物等效性评价从多个方面进行较为详细的规范,是对FDA相关生物等效性总则的补充和解读,对仿制药的发展有重要的推动作用。结论在我国国家食品药品监督管理总局尚未颁布针对具体长半衰期药物相关生物等效性指导原则的背景下,FDA特定药物的生物等效性指导原则中对长半衰期药物相关规范对我国正在进行的仿制药质量和疗效一致性评价具有一定指导和借鉴意义。

长效化融合蛋白药物及其药动学分析技术的研究进展

融合蛋白技术应用于生物制药行业已超过25年,其目的为改善原来天然蛋白的性质,从而具有新的理化特征和生物学功能,其中最为显著的特点是改善了小分子蛋白及多肽半衰期短的缺陷。基于该技术所诞生的融合蛋白类药物已成为当前生物药研发的热点。结合已上市融合蛋白类药物,通过与传统多肽蛋白类药物比较,重点突出融合蛋白类药物自身特点,主要从融合抗体Fc段和人血清白蛋白以延长小分子蛋白及多肽半衰期的角度对融合蛋白药物长效化策略进行评述;对融合蛋白类药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄的显著特征进行概述;综述该类药物在体内的分析技术并指出当前分析技术的优缺点及发展方向,为长效化融合蛋白药物的设计、分析研究与开发提供依据和思路。

长半衰期药物无清洗期时的生物等效性研究

目的:探讨长半衰期药物(t1/2>24 h)在无清洗期时生物等效性研究中的AUC和Cmax的计算,通过无清洗期的实验数据推算出正常清洗期的数据。方法:利用SPSS软件,建立二室模型口服药物在无清洗期时的半衰期为100小时的生物等效性模型,通过优化AUC和Cmax的计算方法,降低药物残留对第二周期药物浓度的影响,进而增加AUC和Cmax的计算的精确性,最后用较精确的方法推算出正常清洗期的AUC和Cmax,利用精确的数据进行生物等效性的进一步验证。结果:在无清洗期的状态下,取样时间在大于0.8个半衰期时,平均值法计算的AUC和Cmax的结果误差小于5%,变异系数小于25%,较为精确,生物等效性研究进一步验证了这一观点。结论:在无清洗期的情况下,生物等效性研究最小的采样时间为0.8个半衰期。