超声微泡造影剂携增殖1阻断基因短发夹RNA抑制大鼠肝纤维化的研究

目的探讨超声辐照携载短发夹RNA干扰增殖1阻断(block of proliferation1,BOP1)基因的超声微泡造影剂治疗大鼠肝纤维化的可行性。方法成功构建大鼠肝纤维化模型,将40只肝纤维化大鼠随机分为携载质粒的超声微泡组(BOP1-shRNA+US/MB)、携载质粒的常规超声组(BOP1-shRNA+US)、单纯质粒组(BOP1-shRNA)及空白对照组(CON),每组10只。BOP1-shRNA+US/MB组及BOP1-shRNA+US组分别经股静脉注入1mL微泡溶液及1mL携载单纯质粒的生理盐水后,行肝区超声辐照。所有分组大鼠在干预21d后行磁共振扩散加权成像检查后麻醉脱颈处死,取肝脏组织行苏木精-伊红(HE)染色观察病理变化。应用Western blot法检测BOP1蛋白在大鼠肝脏组织中的表达,检验BOP1的沉默效果。结果 BOP1-shRNA+US/MB组的表观弥散系数(ADC)值高于其他3组,而指数表观弥散系数(EADC)值低于其他3个组(P<0.05)。HE染色示BOP1-shRNA+US/MB组肝脏细胞排列尚整齐,汇管区纤维组织增生,见少量炎性细胞浸润,小叶结构完整,其肝纤维化程度低于其他组。Western blot结果显示BOP1-shRNA+US/MB组大鼠肝脏组织的BOP1蛋白表达敲减成功。结论超声辐照携载BOP1基因短发夹RNA的微泡造影剂可成功治疗大鼠肝纤维化,可为肝纤维化的精准靶向治疗提供新的理论依据。

低频超声联合微泡造影剂通过激活自噬和凋亡对乳腺癌细胞活力的影响

自噬和凋亡是乳腺癌细胞数量和活力减少的重要因素,低频超声对肿瘤细胞的作用引起了研究者们的广泛兴趣,但是低频超声对乳腺癌细胞自噬和凋亡的作用尚不清楚。该文采用功率0.5 W/cm2的1 MHz低频超声联合微泡造影剂,作用于人乳腺癌细胞株MDA-MB-231 60s后,吖啶橙染色,电镜观察自噬的数量,Western blot检测微管相关蛋白轻链3-II(microtubule associated protein1 light chain 3-II,LC3-II)、自噬相关基因5(autophagy related 5,ATG5)和SQSTM1(sequestosome 1)/p62蛋白质水平变化,分别分析自噬的水平。Western blot检测caspase-3,膜联蛋白V/PI染色和DAPI染色方法分析MDA-MB-231细胞凋亡水平。ATG5 si RNA转染细胞可抑制自噬,caspase抑制剂Z-VAD-FMK可抑制凋亡,使用CCK-8分析自噬和凋亡对MDA-MB-231细胞的作用。结果显示,低频超声联合微泡造影剂促使LC3-II和ATG5蛋白质表达水平显著升高,而使SQSTM1/p62蛋白质表达水平显著下降(P<0.05)。透射电镜和共聚焦观察发现,MDA-MB-231细胞自噬体数量增加。低频超声联合微泡造影剂促使caspase-3蛋白质表达水平升高,凋亡率增加。抑制自噬和凋亡后均明显缓解低频超声联合微泡造影剂对细胞活力的抑制作用(P<0.05)。该研究结果说明,低频超声联合微泡造影剂通过激活自噬和凋亡抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖活力。