苏拉明对肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的研究苏拉明联合顺铂对肺腺癌LA795细胞T739小鼠移植瘤的抑制作用和移植瘤内bFGF表达的影响。方法复制小鼠移植瘤模型,将32只接种高转移性LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成4组:对照组、顺铂组、苏拉明组和顺铂+苏拉明组。用药干预16d,用药中观察肿瘤生长情况,于接种后24d处死各组小鼠,取出双肺和剥离皮下肿瘤,计算出肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率。移植瘤标本行病理观察,免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织微血管密度(MVD)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达。结果各用药组肿瘤的生长受到抑制,瘤重明显低于对照组,其抑瘤率分别为23.03%、34.40%和56.30%。苏拉明组与对照组比肺表面转移结节数、肺转移发生率下降,肺表面结节转移抑制率上升,联合组更为明显。病理观察见各用药组肿瘤细胞出现坏死、苏拉明组及联合组肿瘤间质中血管数减少。苏拉明组,顺铂+苏拉明组MVD、bFGF的表达都比对照组减少,差异有显著性(P<0.01);两者联合有协同下调MVD、bFGF表达的作用,而单用顺铂组与对照组比差异无显著性。结论苏拉明可明显抑制肺腺癌细胞在小鼠体内的生长和转移,与顺铂有协同作用,其机制可能与下调bFGF表达,抑制其微血管形成有关。

TGF-beta1诱导人肺腺癌PC9细胞上皮-间质转化的研究

背景与目的研究表明上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅参与胚胎形成与发育,而且参与肿瘤侵袭转移。此外,人转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂。本研究旨在探讨TGF-β1诱导人肺腺癌PC9细胞发生EMT及其对PI3K/AKT信号通道的影响。方法将体外培养的PC9细胞用不同浓度TGF-β1处理48h,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot和细胞免疫荧光验证EMT相关标记蛋白表达变化。同时,采用Western blot方法检测AKT和P-AKT的表达水平。结果TGF-β1可诱导PC9细胞向间质型细胞形态转化,并上调间质标记蛋白Fibronectin的表达及下调P-AKT的表达。结论TGF-β1可诱导PC9细胞发生EMT,并影响PI3K/AKT信号通道。

苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的转移

目的研究苏拉明联合槲皮素对小鼠肺腺癌转移的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组:对照组、顺铂(DDP)组、槲皮素组、苏拉明组、苏拉明+槲皮素组。实验3周后,处死全部小鼠,取出双肺和剥离皮下肿瘤,计算肺转移发生率,计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率,测量各组小鼠肺湿重。免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达并定量分析。结果苏拉明组、槲皮素组与对照组相比肺表面转移结节数明显下降,同时苏拉明组中肺转移发生率、皮下肿瘤内MVD、VEGF的表达与对照组相比也明显下降,相反顺铂组对此则无明显影响。联合用药组则显著抑制肺表面转移结节数且具有协同作用。结论苏拉明和槲皮素对LA795肺腺癌的肺结节转移具有协同抑制作用,苏拉明抑制LA795肺腺癌转移与其抑制其肿瘤内VEGF表达相关。

hnRNP K在肺腺癌中表达及其作用的研究

目的研究核内不均一核糖核蛋白K（hnRNP K）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法采用SP免疫组织化学方法对经手术切除病理确诊为肺腺癌的70例肺癌组织标本进行hnRNP K蛋白表达的检测,根据不同肿瘤的直径,计算阳性表达率;构建hnRNP K siRNA表达载体,采用Lipofectamine 2000瞬时转染A549细胞24h后,RT-PCR、Western blot检测A549细胞hnRNP K mRNA及其蛋白表达量;以流式细胞仪检测重组质粒hnRNP K siRNA及siRNAn转染A549细胞后细胞周期及凋亡的变化。结果肺腺癌组织中肿瘤直径≤3cm、3～5cm、≥5cm的hnRNP K的阳性表达率分别为38.5%、95.2%、91.7%;hnRNP K siRNA转染24h后的A549细胞hnRNPK mRNA及蛋白表达明显被抑制（P〈0.01）;hnRNP K siRNA能显著抑制A549的生长及细胞周期的分布,G0/G1的细胞数从37.21%增加到85.60%,S和G2/M的细胞数分别从47.71%、13.00%减少到13.50%和0.32%,差异均有统计学意义（P〈0.01）。hnRNP K siRNA能促进A549的凋亡,其凋亡率达到4.79%（P〈0.01）。结论hnRNP K能促进肺腺癌细胞的生长;hnRNP K siRNA可抑制肺腺癌细胞的生长,促进其凋亡。

人肺腺癌细胞株A549和GLC-82的计算机图像色度学定量分析

目的从色度学角度定量分析人肺腺癌细胞株A549和GLC-82的相似性和差异性,为更好地认识、分析、理解及比较这两株细胞的有关研究结果奠定基础。方法用计算机图像分析技术分别测试A549和GLC-82细胞蜡块切片之HE染色和细胞甩片之巴氏染色的色度学参数,包括细胞浆的红、绿、蓝三基色(Rp、Gp、Bp)及其三基色系数(rp、gp、bp),核的红、绿、蓝三基色(Rn、Gn、Bn)及其三基色系数(rn、gn、bn)。结果色度学参数测试结果显示:除Gp外,A549和GLC-82细胞甩片巴氏染色细胞及胞核三基色参数Rp、Rn、Gn、Bp、Bn及其三基色系数rp、rn、gp、gn、bp、bn差异均具有显著性(P<0.01);A549细胞的Rp、Rn、rp、rn均高于GLC-82细胞,GLC-82细胞的Gp、Gn、Bp、Bn、gp、gn、bp、bn均高于A549细胞。GLC-82细胞蜡块切片HE染色细胞及胞核之Rp、Rn、Gp、Gn、Bp、Bn、gp、gn、bn均高于A549细胞(P<0.05),而A549细胞的rp、rn、bp均高于GLC-82细胞(P<0.01)。结论人肺腺癌细胞株A549和GLC-82细胞蜡块切片HE染色之色度学参数Rp、Rn、Gp、Gn、Bp、Bn、rp、rn、gp、gn、bp、bn差异具有显著性;两者细胞甩片巴氏染色之色度学参数Rp、Rn、Gn、Bp、Bn、rp、rn、gp、gn、bp、bn差异同样具有显著性,这些差异有助于这两株细胞的甄别。

Wnt5a在肺鳞癌和腺癌中的表达及意义

目的探讨Wnt5a基因及蛋白在肺鳞癌和腺癌中的表达水平及其临床意义。方法用Northern blot及Westernblot分析对43例肺鳞癌和腺癌癌组织及10例非肺癌正常肺组织的Wnt5a基因及蛋白的表达进行检测。结果Wnt5a在肺癌组织中的表达高于正常肺组织,有淋巴结转移的肺癌组织Wnt5a表达高于无转移的肺癌组织。结论Wnt5a与肺鳞癌和腺癌的转移与恶化密切相关。

端粒酶活性两种检测方法的相关性研究

〔目的〕用TRSP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法测定端粒酶活性并对其特异性、敏感性及相关性进行研究。方法 :以人肺腺癌A5 49细胞为实验材料 ,用RNA酶、加热、倍比稀释的等因素处理A5 49细胞 ,TRAP -银染法对其特异性、敏感性进行检测 ;用 2mmol/LCINN加入A5 49细胞培养体系 ,用两种方法检测诱导分化剂CINN对肿瘤细胞前后端粒酶活性的改变 ,及对其相关性进行分析。结果 :端粒酶活性在A5 49细胞中有很强的特异性 ,且可以检出约 10 2 个肿瘤细胞的端粒酶活性 ;CINN可抑制端粒酶活性并对时间有依赖性 ;TRAP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法作等级相关分析 ,呈正相关 (rs=1.0 0 0 ,P <0 .0 1)。结论 :两种方法测定端粒酶活性有很高的特异性及敏感性且呈正相关。

肿瘤标志物联合检测在肺癌分型中的应用价值

目的通过肿瘤标志物联合检测,评价血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)50、CA125、CA153、鳞状细胞癌抗原(SCCA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平在肺癌分型中的临床价值。方法用化学发光法测定了80例肺癌患者血清CEA、CA50、CA125、CA153、SCCA、CYFRA21-1、ProGRP、NSE水平,探讨了该8项肿瘤标志物在肺癌组织分型中的应用价值。结果小细胞肺癌(SCLC)患者NSE、ProGRP水平分别为(356.7±298.7)pg/mL和(52.03±28.98)μg/L,明显高于非小细胞肺癌(NSCLC)患者的(22.7±11.9)pg/mL和(37.01±18.01)μg/L,而CEA、CA50、CA125、CA153水平明显高于肺鳞癌,NSCLC患者明显高于SCLC患者。SCCA是肺鳞癌较特异的标志物,在判别SCLC与NSCLC类型中,CYFRA21-1是NSCLC最灵敏的肿瘤指标。结论该8项肿瘤标志物联合检测在肺癌组织分型方面可为临床提供有价值的参考资料。

脂质体介导的CBP基因对肺腺癌SPC-A1细胞生长侵袭的抑制作用

目的:研究外源性CSK结合蛋白(CBP)基因转染对人肺腺癌SPC-A1细胞体外生长的影响。方法:构建CBP基因的真核表达质粒pcDNA3.0-CBP,应用重组质粒pcDNA3.0-CBP和空载体质粒pcDNA3.0(-),以脂质体转染法转染体外培养的人肺腺癌细胞株SPC-A1,用G418(800mg/L)筛选出抗性克隆。Western blot检测转染前后CBP蛋白水平的变化,MTT法分析细胞生长抑制作用,Transwell体外侵袭实验和Wound-healing实验观察细胞的侵袭和迁移能力。结果:稳定转染CBP基因的细胞株有外源目的基因的整合和相应蛋白的高表达。MTT检测表明,pcDNA3.0-CBP转染组活细胞数低于未转染组和pcDNA3.0(-)空载体质粒细胞转染组(P<0.01)。细胞侵袭、迁移实验表明转染pcDNA3.0-CBP的瘤细胞侵袭与迁移能力均明显下降(P<0.01)。结论:外源性CBP基因稳定转染可抑制人肺腺癌SPC-A1细胞增殖、侵袭的恶性表型。

5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇体外抗A549作用的实验研究

目的筛选出5-氟苄氧基杨梅醇抗人肺腺癌A549作用强的同分异构体。方法通过3H-TdR掺入法观察5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇体外对人肺腺癌A549细胞的抑制作用,确定抑瘤效果最好的5-氟苄氧基杨梅醇结构。结果 100、50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL 5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇衍生物抑制率:5-对氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞抑制率分别为(100.0±0.0)%、(100.0±0.0)%、(99.5±0.8)%、(80.6±6.7)%、(42.0±5.5)%、(26.5±4.3)%;5-间氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞抑制率分别为(100.0±0.0)%、(99.9±0.0)%、(90.6±3.2)%、(49.2±8.5)%、(22.1±3.6)%、(0.7±1.0)%;5-邻氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞抑制率分别为(100.0±0.0)%、(100.0±0.0)%、(92.5±4.2)%、(60.2±10.6)%、(10.7±2.3)%、(4.8±2.8)%。5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞均有较好的抑制作用,随着浓度的降低,抑制作用减弱,其中5-对氟苄氧基杨梅醇抑瘤效果最好(P<0.01),3.125μg/mL浓度也有较好的抑制作用(P<0.01)。结论 5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞均有较好的抑制作用,其中5-对氟苄氧基杨梅效果最好。

培美曲塞加顺铂化疗联合热疗治疗进展期肺腺癌

目的 评价培美曲塞加顺铂化疗联合热疗对进展期肺腺癌的近期疗效和不良反应.方法 经病理组织学或细胞学证实的中晚期肺腺癌39例患者,采用培美曲塞、顺铂全身化疗,培美曲塞500 mg/m^2静脉滴注,第1天;顺铂60 mg/m^2分第1～3天给药,同时配合内生场热疗,2次/周,21 d为1周期.结果 39例患者中无CR,PR 21例（53.85％）,SD 12例（30.77％）,PD 6例（15.38％）,疾病缓解率（CR＋PR）为53.85％,疾病控制率（CR＋PR＋SD）为84.62％.不良反应主要为骨髓抑制、胃肠道反应等,大部分为Ⅰ、Ⅱ度,患者耐受良好.结论 培美曲塞加顺铂化疗联合内生场热疗是一种对中晚期肺腺癌安全有效的治疗方案.

pcDNA3．0-CBP真核表达质粒的构建及对肺腺癌SPC—A1细胞的影响

目的观察外源性CBP基因稳定转染对人肺腺癌SPC—A1细胞体外生长的影响。方法构建CBP真核表达质粒pcDNA3．0-CBP，应用pcDNA3．0-CBP和空载体质粒pcDNA3．0（-），脂质体转染法转染体外培养的人肺腺癌细胞株SPC—A1，G418（800mg／L）筛选出抗性克隆。Westem blot检测转染前后CBP蛋白水平变化，噻唑蓝（MTT）比色法分析细胞生长抑制作用，Transwell体外侵袭实验和Wound—healing实验对细胞进行侵袭和迁移能力研究。结果转染CBP基因的细胞株有目的基因整合和相应蛋白高表达。MTT检测pcDNA3．0-CBP转染组活细胞吸光度（0．2787±0．0786）低于未转染组（0．5089±0．1301）和pcDNA3．0（-）空载体转染组（0．4804±0．1547）。pcDNA3．0-CBP转染组与两对照组吸光度的差异有统计学意义（P〈0．01）。细胞侵袭实验表明pcDNA3．0-CBP转染组穿透滤膜数（3．52±0．77）明显少于未转染组（8．17±0．86）和空载体转染组（8．22±1．30），转染组与两对照组侵袭力的差异有统计学意义（P〈0．01）。细胞迁移实验转染组细胞迁移数（71．30±7．68）明显少于未转染组（119．40±8．38）和空载体转染组（111．41±12．56），转染组与两对照组迁移力的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论外源性CBP基因稳定转染可抑制人肺腺癌SPC—A1细胞的恶性表型，可能通过对Src家族激酶（SFKs）的负反馈调节抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭。

肺癌细胞A549和H322爬片巴氏及HE染色图像色度学定量分析

为了从色度学角度定量认识人肺腺癌细胞A549和H322细胞爬片巴氏染色及HE染色图像的特征及差异性,作者用图像分析技术测试A549和H322细胞爬片HE染色和巴氏染色之色度学参数,包括细胞浆的红、绿、蓝三基色(Rp、Gp、Bp)和其三基色系数(rp、gp、bp),以及核的红、绿、蓝三基色(Rn、Gn、Bn)和其三基色系数(rn、gn、bn)。结果发现,A549和H322细胞HE染色之Rp、Bp、Rn、Gn、Bn、rp、bp、gn和bn,以及巴氏染色之Gp、Rn、Gn、Bn、bp、rn、gn和bn差异均具有显著性(P<0.01),但差值不大。A549和H322细胞爬片HE及巴氏染色色度学属性相近,略有不同。

细胞集落刺激因子诱导肺癌干细胞分化的临床应用

目的诱导肺癌干细胞进入分裂期以提高对化疗药物的敏感度。方法未手术晚期肺腺癌患者115例随机分为诱导化疗组(试验组)和常规化疗组(对照组)。两组均予以长春瑞滨+顺铂(NP)方案化疗;试验组化疗期间加用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)诱导肺癌干细胞分化。化疗2个周期后2周比较两组的疗效。结果试验组近期有效率明显高于对照组(61.8%vs.41.5%)(P<0.05)。结论通过诱导肺癌干细胞向相应的成熟细胞分化使其对化疗敏感,可以提高治疗效果。

慢病毒介导RNA干涉Cbl-b抑制A549细胞增殖机制研究

目的探讨敲减Cbl-b对程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1, PD-L1)蛋白表达及肺腺癌A549细胞增殖能力的影响。方法对数生长期A549细胞分为对照组和敲减组,2组采用慢病毒感染法转染目的基因,对照组转染空载体,敲减组转染慢病毒介导的干涉Cbl-b基因,转染后72 h采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白情况,判断转染效率。采用MTT法检测2组细胞转染成功后第1～5天细胞增殖率,采用Western blot检测2组细胞转染后Cbl-b蛋白相对表达量及转染成功后第3、4天PD-L1、Ki-67蛋白相对表达量。结果转染后,敲减组细胞Cbl-b蛋白相对表达量(0.18±0.03)低于对照组(0.75±0.01)(P<0.05);转染后第4、5天,敲减组细胞增殖率[(59.6±0.4)%、(87.2±1.4)%]低于对照组[(65.5±1.7)%、(98.2±2.8)%](P<0.05);转染后第3、4天,敲减组细胞PD-L1(0.51±0.00、0.55±0.02)和Ki-67蛋白相对表达量(0.35±0.01、0.25±0.00)低于对照组(0.55±0.01、0.67±0.02,0.47±0.01、0.33±0.02)(P<0.05),敲减组转染后第4天PD-L1相对表达量高于第3天,Ki-67蛋白相对表达量低于第3天,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论转染慢病毒介导RNA干涉Cbl-b基因能抑制A549细胞Cbl-b蛋白表达及细胞增殖;该过程伴随PD-L1表达上调和Ki-67表达下调。