沙参四味汤诱导人肺癌NCI-H460细胞凋亡的实验研究

目的:研究沙参四味汤诱导人肺癌NCI-H460细胞的凋亡及其机制。方法:采用免疫组化方法检测不同浓度沙参四味汤作用后的肺癌NCI-H460细胞GADD45a的表达,测定GADD45a在细胞内的范围及数量;应用流式细胞术(FCM)技术检测细胞凋亡改变;应用荧光定量PCR方法检测Caspase-3和Caspase-7基因表达变化。结果:沙参四味汤组GADD45a显著升高,不同浓度沙参四味汤组与对照组之间均有统计学差异。FCM观察Annexin-V/PI双染结果显示,沙参四味汤组细胞发生的凋亡率较对照组增多(P<0.05)。荧光定量PCR检测发现,与对照组比较,沙参四味汤组NCI-H460细胞Caspase-3和Caspase-7基因表达降低(P<0.05)。结论:沙参四味汤对人肺癌NCI-H460细胞具有潜在的体外增殖抑制作用,沙参四味汤诱导肺癌细胞中GADD45a、Caspase-3和Caspase-7产生,促使人肺癌NCI-H460细胞凋亡,因此推断沙参四味汤能抑制肺癌H460细胞生长。

茯苓多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用

为评价茯苓(Poria cocos)多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用,用CCK-8法测定茯苓多糖对细胞增殖的抑制率,用DAPI染色法、AOEB双荧光染色法分析茯苓多糖对细胞凋亡的影响,用细胞划伤愈合实验测定茯苓多糖对细胞迁移能力的影响,用蛋白免疫印迹实验检测茯苓多糖对细胞凋亡、迁移相关蛋白表达的影响。结果表明:茯苓多糖具有抑制NCI-H460细胞增殖、集落形成和迁移的能力,可诱导NCI-H460细胞凋亡;500、1000μg·mL^(-1)的茯苓多糖可使Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2和MMP-2蛋白表达量降低。

鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。

新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制

肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261（从固体发酵物中提取,纯度大于95%）具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步探讨。

腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应

目的研究腺病毒介导的IL-24基因表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及分子机制。方法将Ad-IL-24重组腺病毒感染NCI-H460细胞。以Western blot法鉴定IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;MTT法检测重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经Annexin-V-PE/7-AAD染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化;RT-PCR检测NCI-H460细胞中bax、caspase-3、bcl-2、survivin等因子的表达。结果腺病毒介导的IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;Ad-IL-24组对NCI-H460细胞的生长具有明显的抑制作用,Ad-IL-24能够上调bax、caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、survivin等因子的表达,诱导细胞凋亡。结论腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应

研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P<0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。

TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度（0.00110μg/ml）和时间（24、48、72 h）依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%77.5%、23.4%74.8%、22.3%80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml。两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1∶0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率最大。吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率（49.04%vs29.33%、25.69%,P〈0.01）。结论：吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡。

石蒜碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡作用及其机制

目的通过研究石蒜碱在体外对人肺癌NCI-H460细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨石蒜碱抗肿瘤机制。方法 MTT法检测石蒜碱对NCI-H460细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡率,比色法检测凋亡因子相关因子Caspase 3活性。结果石蒜碱能够有效抑制肺癌NCI-H460细胞增殖,IC_(50)为(5.79±0.11)μmol/L,对NCI-H460细胞的凋亡具有诱导效应,可增强肺癌Caspase 3的活性。结论石蒜碱在体外能有效地抑制NCI-H460细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与激活Caspase 3的表达从而诱导肿瘤细胞凋亡有关。

可替宁对穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨可替宁对穿孔素/粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的NCI-H460非小细胞肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法以人肺癌细胞株NCI-H460为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色检测细胞生长增殖活性,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞仪定量检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot法检测凋亡抑制蛋白XIAP及Survivin的表达量。结果 (1)不同浓度可替宁单独作用NCI-H460细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长,其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.25μg/ml浓度穿孔素作用NCI-H460细胞(1×106个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1.5μl粒酶B(1μg/ml)孵育6h时,穿孔素/粒酶B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)166ng/ml浓度可替宁作用穿孔素/粒酶B预处理的细胞6h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP、survivin表达量时,发现穿孔素/粒酶B组表达量明显降低,可替宁组表达量较高,而当可替宁联合穿孔素/粒酶B时表达量最高。结论可替宁可明显抑制穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP、survivin的表达上调有关。

异甘草素对人肺癌细胞株H460增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

研究异甘草素对人肺癌NCI-H460细胞增殖、周期及凋亡的影响,并探讨其相关分子机制为其治疗肺癌提供新的科学依据。取对数生长期人肺癌NCI-H460细胞,用不同浓度异甘草素处理,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p-p65,IκBα、IκBβ、Bax、Bcl-2表达量变化;细胞免疫荧光实验观察异甘草素对NF-κB p65分布的影响;结果显示,异甘草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖和诱导细胞周期阻滞,并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化,抑制NF-κB p65入核使其不能发挥转录活性,最终影响其下游凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。

CD40信号通过TNFRⅠ途径抑制肺癌细胞增殖的研究

背景与目的:CD40活化信号可抑制多种肿瘤细胞体外生长 ,但其分子机制尚不明确,本研究旨在探讨激发CD40信号对肺癌细胞株NCI-H460、A549的增殖及肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)、膜型TNF-α(mTNF-α)表达的影响及相关机制。方法:免疫荧光标记和流式细胞术检测肺癌细胞表面CD40的表达以及激发CD40对细胞表面TNFR和mTNF-α表达谱的影响;Westernblot检测激发CD40对细胞TNFR和mTNF-α蛋白含量表达的影响;采用四氮唑盐(MTT)比色法抗体中和实验分析阻断TNFRⅠ及TNF-α对CD40激发效应的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测激发CD40对肺癌细胞培养上清中可溶性TNF-α(sTNF-α)含量的影响。结果:(1)肺癌细胞株NCI-H460、A549表面CD40表达分别为(89.0±3.2)%、(62.2±4.5)%。(2)免疫荧光和流式细胞术示,激发NCI-H460和A549细胞表面CD40分子48h后,其表面TNFRⅠ表达率分别为(36.2±4.6)%、(38.5±5.9)%,较对照组分别为(7.2±1.9)%、(15.2±3.1)%明显升高(P<0.05);而其表面TNFRⅡ表达率分别为(5.8±1.2)%、(18.0±1.6)%,较对照组分别为(38.8±4.3)%、(58.1±3.6)%明显降低(P<0.05);其表面TNF-α表达率分别为(7.0±0.9)%、(8.7±1.1)%,较对照组分别为(15.0±2.1)%、(26.5±3.2)%也明显降低(P<0.05)。(3)Western blot示,激发CD40可使NCI-H460和A549细胞TNFRⅠ蛋白表达增强,TNFRⅡ蛋白表达减弱,而mTNF-α蛋白表达无明显变化。(4)CD40激发前后肺癌细胞培养上清中未检测到sTNF-α的存在。(5)激发CD40能明显抑制NCI-H460、A549细胞的增殖(P<0.05),而阻断TNFRⅠ后CD40信号的细胞增殖抑制效应消失。(6)阻断TNF-α亦可明显抑制两肺癌细胞株增殖(P<0.05),而同时激发CD40未见两者存在协同效应。结论:CD40信号是通过mTNF-α/TNFRⅠ途径抑制CD40表达阳性肺癌细胞株的体外增殖。

干蟾皮醇提物对A549和NCI-H460肺癌细胞活性的影响

目的：观察干蟾皮醇提物抗肺癌细胞生长和促凋亡的作用。方法：将A549、NCI-H460肺癌细胞悬液分别接种于96孔培养板中,细胞贴壁后依次加入不同浓度的含干蟾皮醇提物培养液干预,并设RPMI-1640培养液空白对照组。实验结束,用MTT法测定药物对细胞增殖的影响,Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果：与空白对照组比较,干蟾皮醇提物在不同浓度下对A549和NCI-H460细胞的生长均有抑制作用（P〈0.05~0.001）,且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为15μg/ml和1.5μg/ml。不同浓度的干蟾皮醇提物作用于A549、NCI-H460细胞后,随着药物浓度梯度的增加,凋亡细胞数目明显增加,伴随出现细胞的坏死,细胞轮廓不清,甚至细胞解体。结论：干蟾皮醇提物可显著降低A549和NCI-H460细胞的活性及促进其凋亡,且呈剂量依赖性。

对叶百部总生物碱抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制

目的:观察对叶百部总生物碱对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以非小细胞肺癌NCI-H460细胞作为研究对象,设置空白组和对叶百部总生物碱组(50、100、150、200、250 mg·L^(-1))。通过噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆形成实验观察对叶百部总生物碱对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖的影响;Hoechst33258染色法和流式细胞术观察细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测对叶百部总生物碱对胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测对叶百部总生物碱对Caspase-3、Bax、Bcl-2、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt、EGFR、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及p-p38 MAPK蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,对叶百部总生物碱组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);细胞克隆形成数目和克隆形成率明显降低(P<0.05,P<0.01);细胞核固缩、细胞质凝聚及细胞凋亡率显著增加(P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))Caspase-3 mRNA表达明显升高(P<0.05);对叶百部总生物碱组Bax mRNA表达显著升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达显著降低(P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))EGFR mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))Caspase-3、p-JNK蛋白表达显著上调(P<0.01);对叶百部总生物碱组Bax、p-p38 MAPK蛋白表达显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.01);对叶百部总生物碱组(100、150、200、250 mg·L^(-1))EGFR、p-Akt蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:对叶百部总生物碱可抑制人非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖,并能诱导其凋亡,其机制可能与抑制EGFR蛋白的表达和Akt蛋白的磷酸化及激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。

蛇床子素联合顺铂对人肺癌细胞的杀伤效应及机制

目的探讨蛇床子素联合顺铂对人肺癌细胞NCI-H460的杀伤效应及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测蛇床子素(50、100、200μmol/L)、顺铂(1.5、3.0、6.0μmol/L)及两者联合(50μmol/L蛇床子素+1.5μmol/L顺铂)对NCI-H460细胞增殖的影响。采用膜联蛋白(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)染色法、二氢乙啶(DHE)染色法检测蛇床子素(50μmol/L)、顺铂(1.5μmol/L)及两者联合(50μmol/L蛇床子素+1.5μmol/L顺铂)对NCI-H460细胞凋亡及活性氧簇(ROS)的影响。用ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行预处理,然后检测蛇床子素(50μmol/L)、顺铂(1.5μmol/L)及两者联合(50μmol/L蛇床子素+1.5μmol/L顺铂)对NCIH460细胞的凋亡诱导能力。以未加药物的NCI-H460细胞作为对照组。结果蛇床子素和顺铂均呈剂量依赖性地抑制NCI-H460细胞的增殖。50μmol/L蛇床子素联合1.5μmol/L顺铂可明显抑制NCI-H460细胞的增殖并诱导其发生凋亡。与蛇床子素及顺铂单独作用比较,二者联合作用后ROS阳性细胞明显增加(P<0.05)。与对照组(未用NAC预处理)比较,用NAC预处理过的NCI-H460细胞在用蛇床子素联合顺铂作用后产生的ROS明显降低(P<0.05),且凋亡率和对细胞增殖的抑制作用也同样明显降低(P<0.05)。结论蛇床子素联合顺铂可通过诱导ROS的产生,引起人肺癌细胞NCI-H460发生凋亡。

石蒜碱对人肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨石蒜碱对人肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响。方法人肺癌NCI-H460细胞株于DMEM培养基进行培养,采用1.25、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L的石蒜碱对其进行处理,并以0.9%NaCl溶液为对照组。倒置显微镜下观察NCI-H460细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2、Bax、Caspase-2、Caspase-3的蛋白表达水平。结果经石蒜碱处理后,NCI-H460细胞外形不规则、细胞皱缩、大小不一致,且细胞破碎程度随给药剂量增加而上升,细胞数量有减少趋势。石蒜碱处理24 h、48 h后,NCI-H460细胞增殖活性显著降低,且下降趋势呈剂量与时间依赖性。石蒜碱处理24 h后,NCI-H460细胞凋亡率显著增高,NCI-H460细胞p53、Bax、Caspase-2、Caspase-3蛋白表达水平显著上调,而Bcl-2表达水平显著下调。结论石蒜碱抑制NCI-H460细胞增殖,促进凋亡,且呈时间与剂量依赖性,与调控凋亡相关蛋白有关。

灵芝醇提取物的抗肿瘤活性研究

目的 探究灵芝醇提取物在体内外的抗肿瘤活性。方法 用灵芝醇提取物处理6种人肿瘤细胞系（表皮癌A431、胃癌BGC823、直肠癌Caco2、卵巢癌ES-2、肺癌NCI-H460、结肠癌SW620）,观察细胞的生长形态、绘制生长曲线、进行MTT实验及平板集落形成实验。分别ig给予胃癌BGC823裸鼠50、100、150 mg·kg^（-1）灵芝乙醇提取物,计算瘤体积、抑瘤率及脏器系数。结果 体外实验中,灵芝提取物对表皮癌A431、胃癌BGC823、直肠癌Caco2、卵巢癌ES-2、肺癌NCI-H460、结肠癌SW620细胞的半数抑制浓度分别85.86、193.43、51.32、168.72、82.61、212.98μg·m L^（-1）。体内实验中,灵芝提取物50、100、150 mg·kg^（-1）的抑瘤率分别为32.6%、43.5%、47.2%。结论 灵芝提取物抑制表皮癌A431、直肠癌Caco2、肺癌NCI-H460细胞的增殖作用较强,且浓度大于40μg·mL^（-1）时,抑制增殖的作用较明显,体外还能抑制胃癌BGC823的生长。