参芪固本方治疗脾虚荷Lewis肺癌小鼠的实验研究

【目的】探讨参芪固本方对脾虚荷Lewis肺癌模型小鼠的治疗作用及机制。【方法】将72只小鼠随机分为4组,每组18只,分别为荷瘤模型组(A组)、脾虚荷瘤模型组(B组)、脾虚荷瘤化疗组(C组)、脾虚荷瘤中药组(D组),其中B、C、D组均以大黄煎液(30 g/kg)灌胃7 d复制脾虚模型,然后各组小鼠右侧腋窝皮下接种传代小鼠Lewis肺癌细胞混悬液(5×106/mL)0.2 mL。接种后第2天A、B组每日以生理盐水灌胃,C组以顺铂(DDP)每日腹腔注射1次(剂量为1 mg/kg),同时每日以生理盐水灌胃,D组每日以参芪固本方药液灌胃,剂量为43.83 g/kg,均连续10 d。检测模型小鼠瘤体质量,去瘤体质量,免疫器官脾、胸腺质量,并采用放射免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平。【结果】B组瘤体质量最重,与其他组比较差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。去瘤体质量比较,D组略高于其他组,但差异无显著性意义(P>0.05)。B、C组较A组胸腺质量减轻(P<0.01)。C、D组均可升高血清TNF-α水平(与A、B组比较,P<0.05或P<0.01),D组可显著性降低IL-6水平(与A、B组比较,P<0.01)。【结论】参芪固本方的抑瘤作用可能与其能升高血清TNF-α水平,降低IL-6水平,提高免疫功能有关。

平喘固金颗粒对COPD肺脾肾三虚模型大鼠的实验研究

目的探讨平喘固金颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺脾肾三虚证模型大鼠肺功能、肺表面活性物质SP-A、IL-8、肺泡灌洗液Ⅰ、Ⅲ型胶原、右心室肥厚指标及肺组织病理变化的影响。方法 60只SD健康大鼠随机分为空白对照组,模型组,金水宝胶囊组,平喘固金颗粒大、中、小剂量组(10.0、5.0、2.5g/kg),用气管内滴入脂多糖及烟熏,并配合番泻叶泻下法、背部注射醋酸氢化可的松,建立肺脾肾三虚证COPD大鼠模型,测定各组大鼠肺功能、肺表面活性物质SP-A、IL-8、肺泡灌洗液Ⅰ、Ⅲ型胶原、右心室肥厚指标,HE染色观察大鼠肺组织病理变化。结果平喘固金颗粒大剂量组FVC、FEV0.3、FEV0.3/FVC、PEF与模型组比较显著增加(P<0.05);平喘固金颗粒大剂量组显著降低IL-8和Ⅲ型胶原含量,升高SP-A含量,对Ⅰ型胶原无明显影响(P<0.05);平喘固金颗粒大剂量组能显著降低大鼠右心室肥厚指标(P<0.05);模型组大鼠支气管肺组织HE染色结果符合COPD病理改变,与模型组比较,平喘固金颗粒中剂量组炎症吸收良好。结论平喘固金颗粒可明显改善肺脾肾三虚型COPD大鼠肺功能;显著降低IL-8和Ⅲ型胶原含量;升高SP-A含量;显著降低大鼠右心肥厚指标;减轻肺组织病理学改变。

健脾疏肺食疗方对肺脾两虚证支气管哮喘模型大鼠白细胞介素4和干扰素γ的影响

目的观察健脾疏肺食疗方对肺脾两虚证支气管哮喘(以下简称哮喘)大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)含量的影响。方法将40只大鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型组、氨茶碱组、食疗组,每组各10只。除正常对照组外,模型组、氨茶碱组及食疗组大鼠以香烟喷雾、番泻叶浸液灌胃及卵清白蛋白磷酸缓冲液雾化吸入致肺脾两虚证哮喘模型。从造模开始第2 d,正常对照组、模型组及氨茶碱组大鼠予0.9%氯化钠注射液2 m L灌胃,其中在造模第21 d氨茶碱组将0.9%氯化钠注射液更换为氨茶碱液2 m L(生药含量为4.06 mg)持续灌胃。食疗组在造模开始第2 d予健脾疏肺食疗方药液2 m L(生药含量为2.87 g)持续灌胃。以上各组均持续灌胃至造模第30 d。比较4组大鼠实验第1 d及灌胃结束时体质量的差值,检测比较BALF中IL-4和IFN-γ含量。结果与正常对照组比较,模型组、氨茶碱组及食疗组大鼠体质量差值较小(P<0.05),大鼠体质量增加幅度有所降低;与模型组比较,氨茶碱组及食疗组大鼠体质量差值增加(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组、氨茶碱组及食疗组大鼠BALF中的IL-4含量均升高(P<0.05),IFN-γ含量均降低(P<0.05);与模型组比较,氨茶碱组及食疗组IL-4含量均降低(P<0.05),IFN-γ含量均升高(P<0.05)。结论健脾疏肺食疗方能借助调节细胞因子IFN-γ以及IL-4的含量,抑制或阻断哮喘的早期发病过程,抗气道变态反应性炎症及免疫调节作用可能是其防治哮喘的机制之一。

慢性阻塞性肺疾病肺脾气虚证大鼠模型的建立及评价

目的:建立并评价慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺脾气虚病证结合模型。方法:采用“香烟烟熏法+脂多糖(LPS)气管滴注联合番泻叶浸液灌胃”构建COPD肺脾气虚证大鼠模型。将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、番泻叶低、中、高剂量病证结合模型组,共5组。除空白组外各组均每日烟熏,并于第1天、第14天气管内滴注LPS。番泻叶低、中、高剂量病证结合模型组在造模第28天予4℃不同剂量番泻叶浸液(5、10、20 g·kg^(-1))灌胃3周,造模共49 d。采集宏观指标:一般情况(体质量、摄食量、粪便含水量、肛温)及行为学指标(抓力测试、鼠尾悬挂实验)。测定肺功能,肺组织病理,血清D-木糖、淀粉酶、胃泌素含量,肺泡灌洗液白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平,外周血T淋巴细胞亚群(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平,计算胸腺指数、脾指数。结果:一般情况方面,番泻叶高剂量组大鼠死亡2只。与空白组比较,番泻叶中、高剂量组体质量、摄食量均显著降低(P<0.01),粪便含水量显著升高(P<0.01),番泻叶高剂量组肛温较空白组显著降低(P<0.01)。行为学指标方面,与空白组比较,各造模组大鼠抓力均显著降低(P<0.01);番泻叶中、高剂量组静止不动时间明显增加(P<0.05,P<0.01)。肺功能方面,与空白组比较,各造模组大鼠第0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)、FEV0.3/用力肺活量(FVC)均显著降低(P<0.01)。肺组织苏木素-伊红(HE)染色可见各造模组大鼠支气管壁增厚,杯状细胞增生,部分肺泡融合呈肺气肿改变。胃肠功能指标方面,与空白组比较,番泻叶中、高剂量组D-木糖、胃泌素、α-淀粉酶水平均显著降低(P<0.01)。免疫炎症指标方面,与空白组比较,番泻叶中、高剂量组脾、胸腺指数均显著减小(P<0.01),各造模组大鼠外周血CD4^(+)水平均显著降低(P<0.01),CD4^(+)/CD8^(+)明显下降(P<0.05,P<0.01),肺泡灌洗液IL-1β、IL-6显著升高(P<0.01)。结论:利用香烟烟熏加LPS气管滴注同时联合番泻叶灌胃能够成功建立COPD肺脾气虚病证结合模型。结合宏观及微观评价,推荐番泻叶浸液剂量10 g·kg^(-1)(番泻叶中剂量组)作为COPD肺脾气虚病证结合模型造模灌胃浓度。

基于16S rRNA测序分析肺脾两虚型慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肠道菌群的特点

目的基于16S rRNA基因测序技术分析肺脾两虚型慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肠道菌群的特点。方法Wistar大鼠30只,随机分为空白对照组、模型组,每组各15只。模型组以烟熏法+冰冷番泻叶浸液灌胃法建立肺脾两虚型COPD模型,造模后收集两组大鼠粪便,行肠道菌群16S rRNA测序,分析肠道菌群结构、多样性和丰度变化。结果基于操作分类单位(OTU)的韦恩图结果显示,模型组较空白对照组的OTU数量下降;菌群结构分析显示,空白对照组以厚壁菌门为主,模型组以拟杆菌门为主;属水平上空白对照组以厚壁菌门中的乳杆菌数量最多,模型组拟杆菌数量最多,乳杆菌数量较空白对照组下降。主坐标分析(PCoA)分析表明两组在菌群组成上存在差异,在门水平上,与空白对照组比较,模型组放线菌门下降,变形菌门和脱硫菌门上升;在属水平上,与空白对照组比较,模型组拟杆菌属、罗姆布茨菌属、毛螺杆菌属及副拟杆菌属上升,普雷沃氏菌属、梭菌属、布氏菌属和瘤胃球菌下降。菌群扩增子α多样性分析显示,模型组香农(shannon)指数和丰富度实际观测值(sobs)指数均低于空白对照组。结论肺脾两虚型COPD模型大鼠较正常大鼠发生了菌群结构和相对丰度、菌群多样性的改变。

参苓白术散对COPD大鼠下丘脑及胃组织Ghrelin,Obestatin的影响

目的：观察参苓白术散干预对肺脾两虚型慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠生长激素释放肽（Ghrelin）,肥胖抑制素（Obestatin）蛋白表达的影响,基于Ghrelin/Obestatin信号调节通路从分子水平探讨培土生金法治疗COPD的作用机制和科学内涵。方法：60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、肺脾两虚模型组、参苓白术散组（根据药物干预时间不同,分为28,35,42 d组）,每组12只。采用病证结合造模法复制肺脾两虚型COPD大鼠,空白组大鼠吸入空气＋气管内注射等量生理盐水＋灌服等量生理盐水;模型组及参苓白术散组采用烟熏＋气管内滴注脂多糖＋灌服冰冷番泻叶浸液建立肺脾两虚型COPD大鼠模型;参苓白术散组给予参苓白术散灌胃,分别于药物干预第28,35,42天处死大鼠,利用免疫组化法及蛋白免疫印迹法测定大鼠下丘脑组织及胃组织中Ghrelin,Obestatin蛋白表达变化。结果：与空白组比较,肺脾两虚模型组大鼠下丘脑及胃组织中Ghrelin,Obestatin蛋白表达及积分吸光度均显著降低（P〈0.01）;与肺脾两虚模型组比较,参苓白术散组（28,35,42天）大鼠胃、下丘脑组织Ghrelin,Obestatin蛋白表达及积分吸光度均有不同程度升高（P〈0.05）。结论：参苓白术散可调节肺脾两虚型COPD模型大鼠能量代谢,改善其营养不良状况,其机制可能通过调节Ghrelin,Obestatin动态平衡从而维持机体能量稳态来实现。