LHRH-A缓释剂促进雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精巢发育与排精的研究

研究了促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)不同处理方式对雄性赤点石斑鱼性类固醇激素分泌和精子生成及精子排放的影响。对照组在0、7d二次注射生理盐水(50μg·kg-1BW),注射组在0、7d二次注射LHRHA(50μg·kg-1BW),埋植组在0d埋植LHRHA缓释剂(100μg·kg-1BW)。结果表明,通过埋植LHRHA缓释剂,血清睾酮(T)和11-酮基睾酮(11-KT)水平快速增加,显示血清睾酮和11-酮基睾酮水平与赤点石斑鱼精子生成和精子排放有密切关系。组织学观察表明,在21d,对照组和注射组鱼精巢充满了精子细胞、精母细胞和精原细胞,而在同一时间,LHRHA埋植组鱼精巢含有大量精子,表明精子排放仍在进行。在40d期间采集精液总量为对照组<注射组<埋植组,差异显著。当注射组在处理14d后精液量逐渐回落到对照组水平时,埋植组仍然维持较高精液量水平。各组采集的精子的活力与采集的精液量呈正相关,而精子密度没有显著差异。数据显示,LHRHA缓释剂能显著增加赤点石斑鱼的精液量及延长精子排放时间而不改变精子的质量。

半胱胺盐酸盐和LHRH-A对黄鳍鲷IGF-Ⅰ基因表达和生长的影响

本文以黄鳍鲷 (Sparuslatus)为研究对象 ,利用GeneRaceTM 技术 ,从其肝组织中克隆出类胰岛素生长因子 (IGF Ⅰ )cDNA ,并应用半定量RT PCR方法研究了半胱胺盐酸盐 (Cysteaminehydrochloride)和LHRH A对其肝组织IGF Ⅰ基因表达的影响。黄鳍鲷IGF ⅠcDNA全长为 84 0bp ,编码 185aa多肽 ;序列分析表明 ,黄鳍鲷IGF Ⅰ基因编码的氨基酸序列与金鱼的同源性为 75 8% ,与牙鲆的同源性为 86 5 % ,与同属鲷科的黑鲷同源性高达 10 0 % ,证明鱼类类胰岛素生长因子是非常保守的 ,E区域分析结果表明黄鳍鲷IGF Ⅰ属Ea 4型。在饲料中投喂CSH、LHRH A等添加剂 ,实验组黄鳍鲷鱼种的相对生长率、垂体GH含量、肝脏IGF ⅠmRNA水平均显著高于对照组。以上结果提示 :CSH、LHRH A能促进黄鳍鲷生长激素的合成和IGF Ⅰ基因的表达 。

LHRH-A缓释剂对雌性赤点石斑鱼卵巢发育、性类固醇激素分泌及脑垂体GTH细胞超微结构的影响

取75尾网箱养殖的2～3龄雌性赤点石斑鱼,分为3组(高、低剂量组和对照组),各25尾。高剂量组埋植促黄体生成素释放激素类似物(LHRHA)缓释剂,剂量为300μg/kg体重,低剂量组为100μg/kg体重,对照组埋植不含LHRHA的药丸。分别在实验开始和埋植药丸后0、10、20、30、40天抽血,用放射免疫测定血清类固醇激素(E2、T);解剖鱼体测定相关指标,计算性腺成熟系数;取性腺和肝脏组织常规组织学切片并透射电镜观察。埋植后第10—30天,两种剂量处理组的排卵率均高于对照组,高剂量组显著高于低剂量组。在第10天性腺成熟系数高剂量组为1.055%,卵母细胞已有部分迅速发育到Ⅳ期末(核偏位);低剂量组相对缓慢。第20天性腺成熟系数高剂量组达1.858%,低剂量组为0.987%;处理组卵母细胞基本发育成熟。埋植后第10天,两处理组血清E2和T水平显著升高;第20天显著下降;此后E2保持在较低的水平,T显著低于对照组水平。超微结构的观察证实脑垂体GTH细胞在LHRHA缓释剂诱导性腺发育成熟和排卵过程中处于活跃的合成与分泌状态。LHRHA缓释剂能有效诱导赤点石斑鱼卵巢发育成熟和排卵,而性类固醇激素(E2、T)只与卵黄生成有关,与排卵无关。

心钠素在GABA调节下丘脑正中隆起LHRH释放的介导作用研究

已证明脑神经递质GABA可促进下丘脑正中隆起LHRH神经元末梢的释放功能,这一作用可能通过抑制某些抑制性神经递质或调质释放而实现。本研究旨在观察作为体内循环调节肽的心钠素在大鼠脑内的分布,对LHRH释放的影响及对GABA调节LHRH释放的中介作用。实验结果发现:(1)雄性大鼠不同脑区心钠素的含量不同,其中以下丘脑正中隆起组织含量最高;(2)不同浓度的心钠素(10^(-8)-10^(-6)mol/L)可显著抑制LHRH从下丘脑正中隆起释放,并呈现剂量反应关系。(3)GABA(10^(-6)mol/L组)可显著抑制心钠素的释放;GABA的这一抑制作用可被GABA受体拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)完全反转。上述结果提示心钠素参与调节下丘脑正中隆起(ME)LHRH神经元末梢的释放机能,它亦可能介导GABA对下丘脑正中隆起LHRH的调节作用。

TAT-LHRH-壳聚糖/siRNA纳米复合物与巨噬细胞的相互作用

目的评价反式转录激活因子短肽-促黄体生成激素释放激素(TAT-LHRH)修饰的低分子质量壳聚糖(LMWC)作为siRNA载体的生物安全性。方法利用琥珀亚酰胺基-3-2-硫代吡啶-丙酸酯(SPDP)共价连接TAT-LHRH双功能肽及LMWC(相对分子质量5 000~8 000;脱乙酰化程度90%),合成TAT-LHRH-壳聚糖(TLC)载体,并与未修饰的LMWC分别和非编码siRNA(序列5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTTACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′)混合,合成TLC/siRNA纳米复合物和LMWC/siRNA纳米复合物。利用凝胶阻滞及光散射实验观察纳米粒的表征,并通过酶联免疫吸附分析(ELISA)、流式细胞术及体内巨噬细胞吞噬实验分析纳米复合物诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7所引起的细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的变化,以及对人巨噬细胞吞噬活性的影响。结果与未进行任何修饰的壳聚糖相比,TLC具有更好的siRNA结合能力(N/P比分别为1∶2、1∶1、2∶1、5∶1和10∶1)。以不同N/P(10∶1、20∶1)与siRNA形成纳米复合体后,其粒径分布于90~150 nm,zeta电位稳定在+2.7^+19.3 m V。含200 nmol/L siRNA的TLC/siRNA纳米复合物在24 h内未引起上述细胞因子的明显释放。体内与体外的巨噬细胞吞噬实验证明,相比未修饰壳聚糖/siRNA复合物而言,TLC/siRNA纳米复合物被巨噬细胞摄入量更高,但两者均未对吞噬活性和细胞因子生成产生明显影响。结论 TLC无明显免疫毒性,是一种有应用前景的siRNA载体。

LHRH激发试验对性早熟女童GnRHa治疗的评估

目的：评价和监测促性腺激素释放激素类似物（GnRHa）治疗的有效性。方法30例经黄体生成素释放激素（LHRH）激发试验明确诊断的真性性早熟（CPP）女童，予GnRHa治疗6~24个月；治疗3个月及其后每6个月均行LHRH激发试验；比较LH峰值与临床发育受抑情况（包括发育分期、骨龄和生长速率）；评估LH峰值对GnRHa治疗的监测作用。结果共完成90次LHRH激发试验，仅7次有临床发育。治疗6个月后，30例女童的基础LH值为（0.48±0.20）IU/L，低于治疗前的（0.75±0.35）IU/L，差异有统计学意义（P=0.000）；基础LH值与LH峰值的相关系数为0.62（P=0.022）。LHRH激发试验LH峰值〈2 IU/L时，临床发育受抑情况最好（灵敏度85.7%，特异度100%）。结论基础LH值可用于评估CPP女童GnRHa治疗疗效。LHRH激发试验LH峰值〈2 IU/L可作为GnRHa治疗有效的指标。

GABA 对大鼠下丘脑正中隆起 LHRH 释放调节的研究

本研究应用大鼠下丘脑正中隆起(ME),观察 γ-氨基丁酸(GABA)和去甲肾上腺素(NA)对下丘脑促黄体生成激素释放激素(LHRH)神经元末梢分泌作用的影响。结果发现:GABA(10^(-6)mol/L)可显著促进 ME 的 LHRH 和 NA 的释放,即 LHRH 释放量由27.3±2.5pg/100ul 增加至150.4±27.9pg/100μl;NA 释放量由50.9±4.2pg/100μl 增加至105.5±19.1pg/100ul,两者与对照组相比有显著差异(P<0.01)。GABA 这些作用可被受体拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)所翻转。当荷包牡丹碱和 GABA(10^(-6)mol/L)同时存在于 ME 的培灌液中,LHRH 的分泌量下降为18.2±1.9pg/100μl,而 NA 分泌量下降为43.9±3.4pg/100μl。在内源性 NA 被利血平耗竭时,LHRH 的释放量仅增加26.5%,而 GABA 能使正常大鼠 LHRH 释放量增加451.9%。本研究提示:GABA 可促进下丘脑 ME 释放 LHRH,这一作用可能通过 NA 中介。

LHRH-A对孕中期大鼠抗妊娠作用的研究

本文观察了[D-Ala^6,Pro^9-Ethylamide^(10)]-LHRH(LHRH-A)对孕中期大鼠的抗妊娠作用。结果显示:在孕9～11d sc 200μg/d LHRH-A,血浆孕酮水平自第二次给药后明显下降(P<0.05),给药大鼠均流产终止妊娠;LHRH-A的抗妊娠作用可被醋酸甲地孕酮所拮抗;LHRH-A对体外培养的假孕大鼠和孕d 9大鼠黄体细胞分泌孕酮有明显的直接抑制作用。

脉冲式LHRH给药在临床中的应用——治疗Kallman综合征一例报告

对一例Kallman综合征患者,用自动泵脉冲式给予LHRH治疗10个月。观察治疗中血清卵泡刺激毒(FSH),黄体生成素(LH),睾酮(T)变化。治疗三天后,FSH、LH即升高,但以后变化不明显。T在治疗第二个月后达正常人低限水平,治疗5个月后达正常人水平,但波动较大,且8个月后有下降趋势。本文对脉冲式给药的方法及效果进行了讨论。

野生鲇鱼生长激素分泌的季节变化及其神经内分泌调控

采用离体垂体碎片灌流孵育系统 ,将处于性腺退化期野生鲇鱼垂体切成约 1mm3 的碎片 ,用M 199冲洗之后放入灌流柱的两层Cytodex -Ⅲ微载体之间 (温度为 19± 1℃ )。每 5分钟收集一管灌流液 ,- 2 5℃贮存待测GH。采用鲤鱼GH放射免疫测定方法 (cGHRIA)测定鲇鱼垂体碎片灌流液以及血清和垂体中的GH含量。结果表明 :促黄体素释放激素类似物 [desGly10 (D Ala6)LHRHethylamide ,LHRH A]不能显著刺激离体垂体碎片基础GH分泌 ,注射LHRH A后不能显著提高血清基础GH水平 ;注射DA能显著提高鲇鱼血清基础GH水平 ,APO能以剂量依赖方式显著刺激垂体碎片基础GH分泌。雌、雄鲇鱼血清GH水平在 6月达到峰值 ,垂体GH水平在 3月和 7月份各出现一个峰值 ,各个季节雌鱼垂体和血清GH水平均显著高于雄鱼。鲇鱼血清和垂体GH水平与生殖周期有密切联系。

2种人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的生物学特性比较研究

目的:建立人卵巢癌裸鼠腹腔及皮下移植瘤模型,比较2种模型的生物学特性。方法:采用细胞悬液注射法将人上皮性卵巢癌细胞A2780/DDP注射于裸鼠皮下或腹腔,建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察模型动物肿瘤的生长规律及组织学特性,流式细胞术分析细胞周期分布,免疫组化检测促黄体激素释放激素受体(Luteinzing-hormone releasing hormone receptor,LHRH-R)表达情况。结果:裸鼠腹腔及皮下移植瘤模型的成瘤率均为100%,2组荷瘤鼠中位生存时间分别为(30.000±1.095)d和(41.000±0.894)d,2组移植瘤细胞周期分布与原代细胞周期分布相仿,且2种模型的组织形态学和超微结构相似,免疫组化显示均表达LHRH-R。结论:人卵巢癌细胞株A2780/DDP裸鼠皮下和腹腔移植瘤模型易于建立,腹腔移植瘤模型能更好地模拟人卵巢癌腹腔播散的生物学行为,是研究卵巢癌治疗较理想的动物模型。

甲酸铵催化转移氢化还原肽链中的芳香硝基——对氨基苯丙氨酸的间接引入

研究了用甲酸铵催化转移氢化法(AF-CTH)对不同类型肽中的芳香硝基的还原行为,这些肽类化合物包括促黑激素(MSH:四肽)、促黄体素释放激素(LHRH:十肽)和强腓肽(十七肽)的类似物.用HPLC对还原过程进行了跟踪监测,结果显示,除含对氯苯丙氨酸残基的LHRH类似物因发生脱氯副反应不适合用AF-CTH还原外,其余序列还原过程中均无明显副反应发生,硝基几乎定量地转化成为相应的氨基,实现了对氨基苯丙氨酸向肽链的间接引入.另外发现,硝基还原所需的时间与肽链长度有关,肽链越长,还原所需时间越长,但与其在序列中的位置关系不明显.

促性腺激素释放激素主动免疫公鸡的研究

将１３日龄的石歧杂公鸡分成６组，第１组于７８日龄进行人工阉割，第２、３、４、５组分别以促性腺激素（ＬＨＲＨ）－ＢＳＡ偶联物作抗原加佛氏佐剂乳化后按不同程序免疫公鸡，第６组单以ＢＳＡ免疫作对照。结果表明：与ＢＳＡ免疫组相比，第４、５组及阉鸡组血清睾酮水平均发生显著下降，各免疫去势组公鸡睾丸、鸡冠及肉垂都有不同程度的萎缩，睾丸曲细精管发育不良或受到抑制，６０日龄免疫去势效果明显比２０及４０日龄免疫的差，以相同的抗原量两次免疫去势效果优于一次免疫效果，其中以ＬＨＲＨ－ＢＳＡ加佛氏佐剂分别于２０及４０日龄各免疫一次可获得较好的去势效果。

阉割和睾丸酮替代对雄性老年大鼠下丘脑和血浆促黄体生成素释放激素水平的影响

应用放射免疫分析(RIA)技术比较了年青(2—3月龄)和老年(24—26月龄)雄性大鼠下丘脑和血浆促黄体生成素释放激素(LHRH)水平及其在睾丸切除(ORDX)和睾丸酮(T)替代下LHRH水平的变化。老年大鼠血浆T水平明显降低,下丘脑LHRH含量亦呈明显下降趋势,但血浆LHRH水平与年青大鼠十分接近。在ORDX和T替代下,两组动物血浆T水平没有明显差别,但老年大鼠下丘脑和血浆LHRH的变化率却不同程度地低于年青大鼠。上述结果提示,老年雄性大鼠下丘脑LHRH神经元系统的负反馈能力明显削弱,这也许是下丘脑-垂体-睾丸轴呈增龄性衰变的重要原因之一。

不同剂量促性腺激素释放激素类似物对性早熟女童下丘脑-垂体-性腺轴的影响

目的:观察不同剂量促性腺激素释放激素类似物(Gn RHa)缓释剂对特发性中枢性性早熟(ICPP)或快速进展型早发育(EFP)女童下丘脑-垂体-性腺轴(HPGA)的影响。方法:26例ICPP和10例EFP女童预先给予Gn RHa(曲普瑞林或亮丙瑞林)每次100μg/kg,最大剂量3.75 mg皮下注射,每4周一次,治疗12周(给药3次)后按体质量分为低剂量组(体质量<30 kg)20例和高剂量组(体质量≥30 kg)16例。低剂量组Gn RHa剂量改为每次1.88 mg,高剂量组Gn RHa剂量改为每次80μg/kg,最大剂量3.75 mg,两组均根据LHRH激发试验LH峰值及临床受抑制情况调整剂量,每4周给药一次。随访1年,于治疗前及治疗后3、6、12个月复查LHRH激发试验,并观察发育抑制情况。结果:两组治疗前LH基值及峰值比较差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量组治疗3个月后LH峰值均<2 IU/L,治疗6个月后有2例LH峰值>2 IU/L(及时调整剂量),治疗12个月后LH峰值均<2 IU/L;高剂量组治疗3个月后2例LH峰值>2 IU/L,予最大剂量3.75 mg治疗,仍有1例在治疗后6、12个月复查时LH峰值>2 IU/L,发育未完全抑制;两组其他女孩均表现为乳房肿块消退,骨龄增长受抑,生长速率降至发育前水平。结论:按患儿体质量应用不同剂量的Gn RHa治疗ICPP或EFP女童,均能有效抑制HPGA,提高患儿预测终身高。但在实际治疗过程中,需遵循个体化用药原则调整剂量。

促性腺激素释放激素类似物在妇科恶性肿瘤中的应用

根据作用机制不同,促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)可分为两类:激动剂和拮抗剂。研究证实,约80%的卵巢癌以及子宫内膜癌能够表达GnRH及其受体,GnRH-A通过间接抑制下丘脑-垂体-性腺轴或通过自分泌及旁分泌直接抑制肿瘤细胞的增殖。GnRH-A曾被用于治疗晚期或复发的子宫内膜癌和卵巢癌,但疗效不明显。而目前研究的热点是将GnRH-A用于保留早期子宫内膜癌患者的生育功能以及保护肿瘤化疗患者的卵巢功能。GnRH-A还可用于妇科恶性肿瘤的靶向治疗。

载紫杉醇靶向卵巢癌的纳米级脂质微泡的制备及其特性研究

目的:制备纳米级的载紫杉醇促黄体激素释放激素(luteinising-hormone releasing hormone,LHRH)靶向脂质微泡超声造影剂并评价其理化特性。方法:通过旋转蒸发法、机械震荡法及生物素-亲和素法制备LHRH靶向脂质微泡。Malvern检测仪检测其粒径及表面电位,超声下观察其体外显影情况,高效液相色谱法检测紫杉醇的载药量及包封率,流式细胞仪检测二抗分别与靶向微泡、非靶向微泡的结合率。结果:靶向脂质微泡外观圆整,分布均匀,在室温下保存14 d后,微泡的一般特性与制备初比较,差异无统计学意义(P>0.05)。靶向微泡及非靶向微泡与二抗的结合率分别为(97.76±2.18)%、(6.48±0.71)%,二者比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功制备纳米级载紫杉醇靶向脂质微泡,此微泡粒径较小,稳定性较高,且LHRH的靶连接率较高。

LHRH-PE40对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用

目的 研究促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素(Luteinizing hormone releasing hormone-Pseudomonas aeru-gionosa exotoxin 40,LHRH-PE40)对黑色素瘤A375细胞的诱导凋亡作用。方法用LHRH-PE40处理A375细胞,透射电镜观察细胞结构的改变;DNA ladder和流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果经LHRH-PE40作用后,透射电镜观察可见A375细胞核聚集于一侧;DNA ladder检测发现,A375细胞的DNA电泳图像呈梯形条带;流式细胞术检测结果显示,A375细胞出现明显的二倍体峰,细胞周期也发生了相应的改变。结论 LHRH-PE40对A375细胞的细胞毒性作用可以有效诱导A375细胞凋亡。