PI3Kδ抑制剂CAL-101对淋巴瘤细胞系Raji和SUDHL-10的作用及其机制研究

目的:探讨PI3Kδ抑制剂CAL-101对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系SUDHL-10和Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的作用及其相关机制,为这类疾病的治疗提供新的思路。方法:用不同浓度的CAL-101处理Burkitt淋巴瘤细胞系Raji和弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系SUDHL-10,以MTT法检测CAL-101对两种细胞系的增殖抑制作用;以Annexin V/PI流式细胞术和DAPI染色法检测细胞的凋亡情况;迁移实验检测淋巴瘤细胞向淋巴瘤基质细胞系HK的迁移比例;Western blot法检测CAL-101处理后淋巴瘤细胞表达磷酸化ERK的变化;MTT法结合Calcu Syn software软件分析检测CAL-101是否可协同硼替佐米抑制淋巴瘤细胞的增殖。结果:5μmol/L及更高浓度的CAL-101对Raji细胞和SUDHL-10细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。5、10、15、20μmol/L CAL-101作用于Raji细胞48 h,细胞增殖抑制率分别为(29.17±1.23)%、(38.15±1.51)%、(46.46±1.78)%、(55.8±2.01)%,空白对照组为(1.15±0.02)%(P<0.05)。作用于SUDHL-10 48 h,细胞增殖抑制率也逐渐增加(P<0.05)。CAL-101可诱导淋巴瘤细胞的凋亡,10、20μmol/L CAL-101作用于Raji细胞24 h,Annexin V-FITC/PI双标法显示其凋亡率分别为(22.69±3.83)%和(49.96±7.36)%,均高于对照组(5.23±2.04)%(P<0.05);作用于SUDHL-10细胞同样得到相似的结果(P<0.05)。CAL-101可显著降低淋巴瘤细胞向基质细胞的迁移,且对Raji细胞和SUDHL-10细胞的迁移率的抑制作用也呈浓度依赖性,差异均具有统计学意义(P<0.05);Western blot检测发现CAL-101处理细胞后磷酸化ERK的表达明显降低;CAL-101与硼替佐具有协同作用,可显著抑制淋巴瘤细胞的增殖,CI<1。结论:PI3Kδ抑制剂CAL-101可抑制淋巴瘤细胞Raji和SUDHL-10的增殖,诱导凋亡,抑制其向淋巴瘤基质细胞的迁移,其机制可能通过阻断ERK信号途径而实现;CAL-101有望为侵袭性淋巴瘤的治疗带来希望。

夏枯草提取物对人淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及机制探讨

目的观察夏枯草提取物对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法Raji细胞分别加入不同浓度夏枯草提取物进行培养,MTT法检测Raji细胞增殖抑制率,倒置显微镜观察细胞学形态,琼脂糖凝胶电泳观察Raji细胞DNA凋亡情况;流式细胞仪检测Raji细胞凋亡率。结果不同浓度的夏枯草提取物对Raji细胞增殖有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为(18.01±0.92)μg/ml;随夏枯草提取物作用时间的延长Raji细胞DNA凋亡条带增宽变亮,细胞凋亡率升高。结论夏枯草提取物可抑制Raji细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

2-甲氧基雌二醇上调Bax/BCL-2比例诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

目的:研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)对淋巴瘤Raji细胞的作用及其作用机制。方法:用不同浓度2-ME2作用于淋巴瘤Raji细胞,CCK8法检测2-ME2对Raji细胞增殖的影响;流式细胞仪FITC/PI双标法检测细胞早期的凋亡;蛋白印迹法检测2-ME2对Raji细胞BCL-2、Bax、Caspase-3、C-myc蛋白表达的影响。结果:2-ME2对Raji细胞的增殖具有明显抑制作用,其抑制率随着药物浓度的增高而增加,随着药物作用时间的延长而显著增高(r=0.9215)。流式细胞仪FITC/PI双染色法结果显示,2.5μmol/L 2-ME2处理24 h组的细胞凋亡率为(33.79±1.63)%,而48 h组的凋亡率高达(51.90±2.72)%,对照组Raji细胞为(7.08±0.36)%。2.5μmol/L 2-ME2处理Raji细胞12 h后,蛋白印迹检测结果显示,Bax蛋白表达上调,BCL-2蛋白下调,而Caspase-3蛋白表达亦上调,C-myc蛋白表达下调,之间均具有时效性关系。结论:2-ME2对淋巴瘤Raji细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。其对淋巴瘤Raji细胞的作用机制可能与上调Bax/BCL-2比例,激活Caspase-3诱导癌细胞凋亡有关,下调C-myc蛋白表达也参与了凋亡过程。

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响

【目的】探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。【方法】5μmol/L的MG132处理Raji细胞24h,形态学观察细胞生长情况;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期;荧光定量RT-PCR检测UBE1基因mRNA表达,Westernblot检测UBE1蛋白表达。【结果】MG132处理组细胞生长缓慢,死亡及凋亡多见,细胞凋亡率(26.06±1.10)%较对照组(0.30±0.26)%上升(P<0.05),G2/M期细胞比率(33.2±1.2)%较对照组(12.5±1.1)%升高(P<0.05);MG132处理组UBE1mRNA表达量(0.35±0.05)较对照组(1.00±0.08)下降(P<0.05),抑制率为65%;UBE1蛋白表达量(0.93±0.07)较对照组(1.62±0.22)下调(P<0.05),蛋白表达率为(58±6)%。【结论】蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。

酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠对Raji淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响及机制探讨

为了探讨蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPase)通路在淋巴瘤细胞增殖与凋亡中的作用及机制,应用细胞培养结合MTT检测,光镜及电镜形态学观察,DNA凝胶电泳,流式细胞术和RT-PCR研究了特异的酪氨酸磷酸酶抑制剂正矾酸钠(Na_3VO_4)对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的影响。结果:MTT检测及CFU-Raji培养显示Na_3VO_4对Raji细胞呈浓度依赖性抑制作用;倒置显微镜下原位观察发现随Na_3VO_4浓度增加,细胞体积明显缩小,核固缩、核染色质核膜下聚集,呈典型凋亡小体状;细胞胞体出芽,核染色质凝聚、核碎裂,电镜观察出现典型凋亡细胞;膜联蛋白染色显示Na_3VO_4诱导Raji细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降,且在一定范围内呈浓度依赖性;DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;流式细胞术及RT-PCR示Na_3VO_4下调Bcl-2蛋白及mRNA的表达;细胞周期分析显示经Na_3VO_4处理的细胞出现G_2-M期阻滞、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)及mRNA的表达下调。结论:PTPase通路信号传导参与了Raji细胞增殖与凋亡过程的调节,加入其特异抑制剂Na_3VO_4可通过下调细胞周期蛋白B1的表达引起G_2-M期阻滞抑制增殖、下调Bcl-2的表达及降低线粒体跨膜电位诱导Raji细胞凋亡。

和厚朴酚提高人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究

目的:探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)作用前后人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化及其可能机制。方法:MTT法检测和厚朴酚对Raji细胞的增殖抑制作用。乳酸脱氢酶释放法检测HNK作用前后Raji细胞对NK细胞的杀伤敏感性。流式细胞仪检测HNK作用前后Raji细胞表面NKG2D配体(MICAB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子的表达以及细胞周期变化。结果:HNK对Raji细胞的生长具有明显抑制作用。HNK作用后,Raji细胞对NK细胞的杀伤敏感性较HNK作用前显著增强(P<0.05)。HNK作用后,Raji细胞表面MICAB、ULBP2、ULBP3表达显著升高(P<0.05),ULBP1和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05),同时,细胞周期检测显示Raji细胞被阻滞在G0/G1期。结论:HNK能提高Raji细胞NKG2D配体(MICAB、ULBP1、ULBP3)的表达,从而使Raji细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强,以达到杀伤肿瘤细胞的能力。

非霍奇金淋巴瘤Raji细胞照射前后microRNA的差异表达及其功能预测

目的寻找调控非霍奇金淋巴瘤放射敏感性的microRNA(miRNAs)。方法利用miRNAs芯片检测非霍奇金淋巴瘤细胞株Raji细胞照射前后miRNAs的表达差异。生物信息学分析这些差异表达的miRNAs的生物学功能。结果用集落形成实验检测Raji细胞的放射敏感性,发现临床常用的分割剂量2 Gy可以导致约50%的生长抑制。因此,给予Raji细胞2 Gy照射。照射后4小时提取RNA用miRNAs芯片进行分析。结果发现,以P<0.05为标准,20个miRNAs照射后有差异表达,其中10个上调,10个下调。实时定量PCR验证部分miRNAs的表达与芯片的结果一致。生物信息学分析表明,大部分差异表达的miRNAs参与细胞周期、凋亡、DNA损伤与修复相关的生物学功能和通路,可能调控Raji细胞的放射敏感性。结论非霍奇金淋巴瘤Raji细胞照射前后miRNAs出现差异表达。差异表达的miRNAs可能参与非霍奇金淋巴瘤放射敏感性的调控。

巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中相继顺序被激活

目的 研究巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中出现的先后顺序及其机制。方法用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察MDC荧光染色后,Raji细胞内自噬体的形成情况;Western blot检测细胞LC3Ⅰ/Ⅱ、 Beclin-1、Hsc70及Lamp-2a等蛋白的表达水平。结果在饥饿诱导的Raji细胞中,巨自噬与分子伴侣介导的自噬是相继顺序,而非同步被激活,巨自噬活性在饥饿诱导的最初几小时快速升高并达到峰值,然后随着饥饿时间的延长逐渐下降,而与巨自噬活性下降相伴随的是分子伴侣介导的自噬活性逐渐增加。结论肿瘤细胞在饥饿诱导的不同阶段通过不同的自噬方式应对压力刺激,巨自噬与分子伴侣介导的自噬之间此消彼长、协调补充的关系更有助于肿瘤细胞适应内外环境的变化,维持自身的生长与增殖。

bcl-2基因反义寡核苷酸增强放射线诱导Raji细胞凋亡的研究

目的研究bcl-2基因反义寡核苷酸作用淋巴瘤细胞株Raji后,放射线对细胞凋亡的影响。方法bcl-2基因反义寡核苷酸作用Raji细胞后,台盼蓝拒染法计数活细胞;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色和碘化丙啶染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用Raji细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,活细胞数分别与单用放射线组及无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P<0.05)。bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用于Raji细胞后显著抑制bcl-2蛋白表达,蛋白水平分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组比较,差异有显著性(P<0.05)。bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线同时作用于Raji细胞后,姬姆萨染色可见凋亡细胞,通过流式细胞仪检测的细胞凋亡率显著增加,分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组相比,具有显著性差异,P<0.05。结论bcl-2反义寡核苷酸能增强放射线诱导Raji细胞凋亡。

转染外源HCAP1基因对B淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖的作用

目的:HCAP1基因定位于人类染色体17p13．3,此区域在多种肿瘤组织呈杂合性缺失,本研究旨在探 讨HCAP1外源基因产物对B淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的作用。方法:应用脂质体介导法,将HCAP1基因转染Raji 细胞,经G418筛选、获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞,用台盼蓝活细胞计数、绘制生长曲线、软琼脂集落培养及 BrdU(5溴-2’脱氧尿嘧啶)标记法,观察HCAP1基因产物对Raji细胞增殖的作用。结果:与转染空载体的对照细胞 比较,稳定表达外源HCAP1基因的细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,细胞集落形成数明显减少,BrdU掺 人细胞比例降低。结论:外源HCAP1基因产物的过表达对Raji细胞的增殖有抑制作用。

人淋巴瘤Raji/DEX耐药细胞株的建立及其耐药机制

目的建立人淋巴瘤耐药细胞株Raji/地塞米松(DEX)并对其耐药机制进行探讨。方法分别采用噻唑蓝还原法(MTT)确定Raji细胞的半数抑制浓度(IC50)值,DEX浓度递增和持续作用的方法体外诱导Raji细胞的耐药性并检测其耐药指数,Western blot法检测人核转录因子p65(NF-κBp65)蛋白。结果历时3个月后建成的细胞株Raji/DEX增殖速度减慢,体积变小,且对DEX低度耐药,耐药指数为1.7(P<0.05);Raji/DEX的NF-κBp65蛋白表达显著高于Raji亲本细胞(P<0.05)。结论成功建立Raji/DEX耐药细胞株。NF-κBp65蛋白表达增强可能是淋巴瘤细胞产生获得性耐药的主要机制之一。

奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞生长抑制与凋亡的影响

目的观察奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞的生长抑制和凋亡作用。方法将浓度为0、6.25、12.5、25、50、100μg.mL-1的奥沙利铂与人Burkitt-Raji细胞分别作用24、36、48 h,用CCK-8法检测奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,用免疫组化的方法检测奥沙利铂对人Bur-kitt-Raji细胞ki-67蛋白、bax蛋白的影响。结果奥沙利铂对人Burkitt-Raji细胞有生长抑制、促凋亡作用,其对人Burkitt-Raji细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大,流式细胞仪分析显示奥沙利铂将人Bur-kitt-Raji细胞阻滞于G2/M期。奥沙利铂浓度为100μg.mL-1作用48 h,Raji细胞生长抑制率为(94.73±1.40)%,Raji细胞的早期凋亡率为(8.25±1.79)%、晚期凋亡和继发坏死率为(14.61±2.18)%。结论奥沙利铂能够抑制人Burkitt-Raji细胞的增殖,可诱导人Burkitt-Raji细胞发生一定的凋亡。

二烯丙基二硫对Raji细胞化疗增敏的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对长春新碱(VCR)作用于人淋巴瘤Raji细胞化疗增敏的作用及机制。方法DADS(0.625μg/ml、1.25μg/ml)及VCR(6.25,12.5,25.0μg/ml)单用及联合应用作用于Raji细胞,采用CCK-8(cellcounting kit)法检测各自的抑制率,应用金氏公式求q值,评价联合用药效果;DADS(0.625μg/ml)、VCR(6.25,12.5,25.0μg/ml)及联合应用作用于Raji细胞,采用流失细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测细胞Bax及Bcl-2的表达情况。结果无毒剂量的DADS(0.625μg/ml、1.25μg/ml)分别与VCR联合应用,可提高VCR对Raji细胞增殖抑制率。DADS(0.625μg/ml)提高VCR(6.25,12.5,25.0μg/ml)诱导Raji细胞凋亡率(P<0.05)。联合组Raji细胞Bcl-2蛋白表达水平比VCR单药组低(P<0.05);Bax蛋白表达水平在联合组Raji细胞VCR单药组高(P<0.05)。结论DADS能增强VCR对Raji细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用;可能机制与其下调Bcl-2蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关。

加味四君子汤诱导Raji细胞凋亡实验研究

目的研究加味四君子汤体外诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡及其作用机制。方法不同浓度的加味四君子汤作用于Raji细胞,MTT比色法分析细胞增殖情况,荧光染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测Bax、Bcl-2 m RNA的表达。结果 1加味四君子汤对Raji细胞的增殖有较强的抑制作用;2显微镜下可见明显的细胞凋亡;3流式分析显示加味四君子汤作用Raji细胞72 h后可显著诱导细胞凋亡;4 RT-PCR显示,Bcl-2 m RNA的表达随着药物浓度增加而下降,而Bax m RNA表达增加。结论加味四君子汤能有效地诱导Raji细胞凋亡,抑制细胞增殖,其机制可能与Bax基因表达增加及Bcl-2基因表达降低有关。

亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞,用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率;用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化;以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明:相比于单用亚砷酸和硼替佐米,以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后,细胞生长受明显抑制(p<0.01),细胞凋亡比例增加(p=0.001),但细胞周期未见明显阻滞;在蛋白水平,细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加,而BCL-2和JNK2表达量下降。结论:小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡,并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF-κB和JNK2通路实现的。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨青蒿琥酯对淋巴瘤Raji细胞生长及凋亡的影响

目的:基于Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路探究青蒿琥酯(Art)对淋巴瘤Raji细胞生长及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:取对数期淋巴瘤Raji细胞,随机分为对照组、Art组、Colivelin组、Art+Colivelin组。对照组细胞常规培养,Art组细胞培养基内加入Art(400μg/mL),Colivelin组细胞培养基内加入Colivelin(0.5μmol/L),Art+Colivelin组细胞培养基内加入Art(400μg/mL)和Colivelin(0.5μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量;免疫印迹法检测细胞pJAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白相对表达量。结果:Art组细胞24、48、72h吸光度值,TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量,以及JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3均低于对照组(P<0.05);Art组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);Colivelin组细胞24、48、72 h吸光度值,TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量,以及JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3均高于对照组(P<0.05);Colivelin组细胞凋亡率低于对照组(P<0.05);Art+Colivelin组细胞24、48、72h吸光度值,TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量,以及JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3均高于Art组(P<0.05);Art+Colivelin组细胞凋亡率低于Art组(P<0.05);Art+Colivelin组24、48、72 h吸光度值,TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量,以及JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3均低于Colivelin组(P<0.05);Art+Colivelin组细胞凋亡率高于Colivelin组(P<0.05)。结论:Art可抑制淋巴瘤Raji细胞增殖及炎症反应,并能促进其凋亡,作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

CHFR基因和PARP-1基因对裸鼠Raji淋巴瘤细胞增殖和凋亡调控的研究

目的CHFR基因是一种抑癌基因,低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖,PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控,本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因,观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响,探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因,及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因,测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量;采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量;应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态;分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达,降低PARP-1基因mRNA的表达;在体内环境中,5-Aza-dC能够促进移植瘤Raji细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果与shRNA-CHFR组结果相反,与shRNA-PARP-1组结果一致。而且实验中可见5-Aza-dC组的裸鼠移植瘤的CHFR基因发生去甲基化。结论CHFR基因低表达促进肿瘤细胞增殖,PARP-1基因低表达促进肿瘤细胞凋亡,而5-Aza-dC可以去甲基化抑制肿瘤细胞增殖。

miR-15a/miR-16-1增强Raji细胞对阿糖胞苷的敏感性

目的探讨miR-15a和miR-16-1寡核苷酸能否增强Raji细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的敏感性。方法将化学合成的miR-15a和miR-16-1寡核苷酸利用脂质体2000转染入Raji细胞后,联合Ara-C,CCK8法检测Ara-C的IC50值变化;锥虫蓝细胞计数法检测细胞增殖活性;Hoechst染色观察细胞的凋亡形态;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法测凋亡率。结果miR-15a和miR-16-1寡核苷酸转染Raji细胞后,再加入Ara-C,24h Ara-C的IC50值分别为10.41和10.86,明显低于单用Ara-C组(15.43)和随机序列联用Ara-C组(14.92,P<0.05)。锥虫蓝拒染法结果显示,转染后各时间点miR-15a/miR-16-1+Ara-C组较单用miR-15a/miR-16-1组、单用Ara-C组及随机序列+Ara-C组明显抑制了Raji细胞的生长,Hoechst染色可见大量凋亡细胞;流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法检测显示,miR-15a+Ara-C组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为20.93%和25.27%,miR-16-1+Ara-C组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为20.69%和23.13%,均明显高于miR-15a组、miR-16-1组、Ara-C组及随机序列+Ara-C组(P<0.05),后四者的早期凋亡率分别为6.99%、4.73%、10.88%和14.39%,晚期凋亡率分别为10.08%、10.64%、11.83%和11.93%。结论miR-15a和miR-16-1寡核苷酸可增强Raji细胞对Ara-C的敏感性。

达沙替尼联合干扰素对Raji细胞增殖的作用及机制

目的探讨达沙替尼联合干扰素对Raji细胞增殖的作用及其机制。方法取人伯基特淋巴瘤(BL)细胞Raji培养至对数生长期,采用0.1、0.5、1.0、5.0、10.0及15.0μmol/L达沙替尼分别作用12、24及48 h,采用细胞增殖检测(CCK8)法计算各浓度组不同时间的细胞抑制率和半抑制浓度(IC 50)选择后续实验合适的达沙替尼浓度及作用时间;将对数生长期的Raji细胞孵育24 h分为空白对照组(不加达沙替尼和干扰素)、单用组(5.0、10.0及15.0μmol/L达沙替尼)及联用组(5.0、10.0及15.0μmol/L达沙替尼分别联合5×106 U/L干扰素),采用CCK8法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞仪、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法及Western blot法检测各组Raji细胞的细胞周期、EB病毒(EBV)限制性内切酶I Z左片段1(BZLF 1)和EBV限制性内切酶I R左片段1(BRLF 1)mRNA表达、Z反式激活因子(ZTA)和R反式激活因子(RTA)蛋白的表达。结果单用组和联用组Raji细胞的增殖均受抑制并呈浓度依赖性(P<0.05),且联用组被抑制程度较单用组强(P<0.05);随着达沙替尼浓度增大,单用组和联用组Raji细胞的S期细胞比例减少(P<0.05)、G2/M期细胞比例增多(P<0.05),且联用组S期细胞减少、G2/M期细胞增多的程度均较单用组强(P<0.05);随着达沙替尼浓度增大,单用组和联用组均能上调Raji细胞的BZLF 1、BRLF 1 mRNA表达(P<0.05),且联用组上调作用强于单用组(P<0.05);空白对照组Raji细胞中ZTA和RTA蛋白无表达,单用组和联用组Raji细胞中ZTA和RTA蛋白表达随着达沙替尼浓度的增加而增加(P<0.05),且联用组蛋白表达的增加程度强于单用组(P<0.05)。结论达沙替尼能抑制Raji细胞增殖,且与干扰素联用后效果明显增强,其机制可能与达沙替尼联合干扰素上调Raji细胞中BZLF 1、BRLF 1 mRNA和ZTA、RTA蛋白的表达从而使EB病毒进入裂解期有关。

硼替佐米诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

本研究探讨硼替佐米对Burkitt淋巴瘤Raji细胞是否具有凋亡诱导作用及其机制。以硼替佐米处理Raji细胞,观察细胞增殖抑制作用的时间效应和剂量效应,在光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态变化,用流式细胞术检测药物孵育前后细胞凋亡率(AP),用RT-PCR法检测药物孵育前后NF-κB和p53基因的表达水平。结果表明,在一定剂量和时间范围内硼替佐米能抑制Raji细胞生长;硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡并显示时间和剂量效应;在硼替佐米诱导Raji细胞凋亡过程中,NF-κB及p53基因的表达水平下调。结论:硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡,NF-κB基因和p53基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞凋亡的调控。