赖氨酰氧化酶LOXL2稳定性的理论计算研究

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾病密切相关。然而,关于LOXL2的稳定性目前鲜有报道,哪些位点对其稳定性有显著影响尚不清楚。本研究采用冷冻电镜和Alphafold2的数据,建立LOXL2的全长结构,通过分子动力学模拟得到其优化构象。再通过4种方法(mCSM,PremPS,DeepDDG和FoldX),计算所有位点的稳定性属性,筛选出对稳定性有显性影响的位点(定义为关键位点)。结果表明,95个关键位点对LOXL2的稳定性具有显著影响,在5个结构域上的分布数量依次为14、13、8、11和26,而结构域间的连接肽段上也有23个关键位点。在这些关键位点中,类型及数量分别为Leu(24个)、Val(20个)、Ile(12个)、Trp(11个)、Phe(11个)、Tyr(6个)、Cys(6个)、Met(4个)和Arg(1个)。其中大部分关键位点(88个)为疏水性质,这与蛋白质折叠的主要力量为疏水作用的情况是一致的,而Cys两两成对,构成二硫键,对LOXL2的结构及功能发挥重要作用。讨论中,我们将预测结果与实验值进行比较,并用自由能微扰方法,对部分关键位点进行比较,从多方面论证此项工作的可信度。此项研究,可为靶向LOXL2的疾病治疗研究,提供重要指导。

多组学分析LOXL2在肺腺癌诊断和预后评估中的作用

目的采用多数据库深入分析赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)在肺腺癌中的表达、基因组改变、预后和免疫浸润,以探讨其在肺腺癌诊断和预后评估中的作用。方法采用TIMER、UALCAN、GEPIA和Kaplan-Meier数据库分析LOXL2表达并进行生存分析。采用cBioPortal数据库分析LOXL2在肺腺癌患者中的基因组变化。采用TIMER分析LOXL2和免疫细胞浸润及免疫检查点的相关性。采用HPA数据库描述LOXL2在正常肺组织和肺腺癌组织的蛋白表达。结果LOXL2在肺腺癌中的mRNA和蛋白水平表达均高于正常组织。LOXL2的高表达与肺腺癌较晚的分期和较差的预后相关。LOXL2的基因改变率为6%。LOXL2与肺腺癌中的部分免疫细胞浸润和免疫检查点[程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)]密切相关。免疫组织化学实验表明LOXL2在肺腺癌中的蛋白表达高于正常肺组织。结论通过多组学数据挖掘表明,LOXL2在肺腺癌组织中呈高表达,且与免疫细胞浸润和患者预后不良相关,LOXL2可作为肺腺癌诊断和预后的新型生物标志物。

LOXL2、TGF-β、CTGF在结缔组织病合并间质性肺病患者使用环磷酰胺治疗前后的变化及临床意义

目的:观察血清赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase-like protein 2,LOXL2)、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在结缔组织病合并间质性肺病(connective tissue disease and interstitial lung disease,CTD-ILD)患者使用环磷酰胺治疗前后的变化及临床意义。方法:选择2021年3月-2022年5月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院风湿免疫科收治的CTD-ILD并使用环磷酰胺针静脉滴注治疗的患者30例,观察患者治疗前基线期及使用环磷酰胺治疗12周后及24周后的临床资料、影像学资料及实验室资料,分析血清LOXL2、TGF-β、CTGF在CTD-ILD患者使用环磷酰胺治疗前后的变化及临床意义。结果:CTD-ILD患者使用环磷酰胺治疗24周后血清ESR、IgM、IgA、IgG水平明显降低,肺功能指标TLC、FVC、FEV1/FVC、DLCO%明显改善(P<0.05);治疗12周后及24周后血清LOXL2、TGF-β、CTGF的水平明显降低,6-MWT明显改善。HRCT评分与CRP评分明显降低(P<0.05);治疗12周后及24周后C-反应蛋白及血气分析指标PaO_(2)与PaCO_(2)变化差异不大(P>0.05)。CTD-ILD患者血清中LOXL2水平与ESR、IgA、IgG呈正相关(P<0.05);LOXL2与TGF-β、CTGF呈正相关(P=0.001、0.003);TGF-β与CTGF呈正相关(P=0.025)。结论:环磷酰胺治疗可能通过抑制血清LOXL2的表达进一步抑制TGF-β信号通路进而影响CTGF的表达而有效地控制CTD-ILD患者的肺纤维化。

血清LPS、LOXL2与阵发性心房颤动患者射频导管消融术后复发的相关性

目的探讨血清脂多糖(LPS)、赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)与阵发性心房颤动(PAF)患者射频导管消融(RFCA)术后复发的相关性。方法选取2020年5月—2022年5月在内蒙古自治区人民医院急诊心血管内科行RFCA术的PAF患者197例(PAF组),同期医院体检健康者78例(健康对照组)。PAF组患者RFCA术后随访1年,根据是否复发分为复发亚组63例和未复发亚组134例。采用酶联免疫吸附法检测血清LPS、LOXL2水平;多因素Logistic回归分析PAF患者RFCA术后复发的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LPS、LOXL2水平对RFCA术后复发的预测价值。结果与健康对照组比较,PAF组血清LPS、LOXL2水平升高(Z=5.575、6.903,P均<0.001)。197例PAF患者RFCA术后1年复发率为31.98%(63/197)。与未复发亚组比较,复发亚组血清LPS、LOXL2水平升高(Z=6.431、6.543,P均<0.001)。病程较长、左心房内径(LAD)增加、LPS升高、LOXL2升高为PAF患者RFCA术后复发的独立危险因素[OR(95%CI)=2.335(1.450~3.761)、1.289(1.049~1.586)、1.025(1.014~1.035)、1.004(1.002~1.006)];血清LPS、LOXL2及二者联合预测的AUC为0.784、0.789、0.859,二者联合的AUC大于血清LPS、LOXL2水平单独预测的AUC(Z/P=2.549/0.011、3.000/0.003)。结论PAF患者血清LPS、LOXL2水平升高,是PAF患者RFCA术后复发的独立危险因素,血清LPS、LOXL2水平联合检测对PAF患者RFCA术后复发有较高的预测价值。

骨肉瘤患者癌组织中AHA1 mRNA和LOXL2 mRNA表达与侵袭转移基因mRNA表达的相关性及临床意义

目的研究骨肉瘤(osteosarcoma)患者癌组织中热休克蛋白90 ATP酶激活因子1(the activator of HSP90 ATPase-1,AHA1)和赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase like-2 protein,LOXL2)表达与侵袭转移基因mRNA表达的相关性及临床意义。方法选取2016年2月~2017年3月华北医疗健康集团峰峰总医院诊治的90例骨肉瘤患者为研究对象。应用实时荧光定量PCR检测组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA及侵袭转移基因Wnt家族成员9A(Wnt9a)mRNA,锌指E盒结合同源盒1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA,锌指E盒结合同源盒2(ZEB2)mRNA,N-钙黏素(N-cad)mRNA和波形蛋白(Vim)mRNA表达。采用Pearson相关分析,比较不同临床特征骨肉瘤患者AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达差异。Kaplan-Meier生存分析影响AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达对骨肉瘤患者预后的影响。单因素及多因素COX回归分析影响骨肉瘤患者预后的因素。结果骨肉瘤组织中AHA1 mRNA(3.16±0.59),LOXL2 mRNA(2.84±0.44)及侵袭转移基因Wnt9a mRNA(3.23±0.42),ZEB1 mRNA(2.73±0.39),ZEB2 mRNA(2.52±0.56),N-cad mRNA(2.71±0.65),Vim mRNA(2.81±0.73)表达均高于癌旁组织(1.10±0.21,0.95±0.18,0.79±0.15,0.64±0.11,0.98±0.19,0.68±0.14,0.72±0.15),差异具有统计学意义(t=31.206,37.716,51.903,48.931,24.706,28.964,26.605,均P<0.05)。骨肉瘤组织中AHA1 mRNA与LOXL2 mRNA表达呈显著正相关(r=0.712,P<0.05)。骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA与侵袭转移基因Wnt9a mRNA,ZEB1 mRNA,ZEB2 mRNA,N-cad mRNA,Vim mRNA表达呈显著正相关(r=0.504~0.720,均P<0.05)。Eneeking分期Ⅲ期、有软组织浸润和有肺转移骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达高于Eneeking分期Ⅰ~Ⅱ期、无软组织浸润和无肺转移患者,差异具有统计学意义(t=14.122~171.054,均P<0.05)。AHA1 mRNA高表达组和低表达组患者五年生存率分别为36.36%(16/44),78.26%(36/46)。AHA1 mRNA高表达组患者五年累积生存率明显低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=16.081,P<0.05)。LOXL2 mRNA高表达组和低表达组患者五年生存率分别为34.88%(15/43),78.72%(37/47)。LOXL2 mRNA高表达组患者五年累积生存率明显低于低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=15.880,P<0.05)。肺转移(OR=1.921,P<0.05),Eneeking分期Ⅲ期(OR=1.906,P<0.05),AHA1 mRNA高表达(OR=1.405,P<0.05),LOXL2 mRNA高表达(OR=1.733,P<0.05)是影响骨肉瘤患者不良生存预后的独立危险因素。结论骨肉瘤组织中AHA1 mRNA,LOXL2 mRNA表达升高,两者表达与侵袭转移基因表达有关,是影响骨肉瘤患者不良生存预后的独立危险因素。

宫颈癌患者血清S100A14和LOXL2的表达水平及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清S100钙离子结合蛋白A14(S100A14)和赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)的表达水平及临床意义。方法选取2019年9月至2021年6月该院治疗的84例宫颈癌患者(宫颈癌组)、90例宫颈上皮瘤变患者(宫颈上皮瘤变组)以及同期在该院健康体检的80例健康女性(健康对照组)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清S100A14和LOXL2的表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清S100A14和LOXL2诊断及鉴别诊断宫颈癌的价值,计算曲线下面积(AUC)。分析血清S100A14、LOXL2表达水平与宫颈癌临床病理特征的关系。结果宫颈癌组血清S100A14和LOXL2表达水平均高于宫颈上皮瘤变组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈上皮瘤变组血清S100A14和LOXL2表达水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清S100A14、LOXL2诊断宫颈癌的AUC分别为0.895和0.929,鉴别诊断宫颈癌的AUC分别为0.744和0.833。宫颈癌患者血清S100A14与LOXL2呈正相关(r=0.239,P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、高分化、肿瘤最大径≥4 cm、浸润深度≥1/2肌层、淋巴结转移宫颈癌患者的血清S100A14、LOXL2表达水平均高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、中低分化、肿瘤最大径<4 cm、浸润深度<1/2肌层、淋巴结未转移宫颈癌患者(P<0.05)。血清S100A14、LOXL2分别与宫颈癌TNM分期呈正相关(P<0.05)。结论血清S100A14和LOXL2对宫颈癌的早期诊断及病情评估有一定价值。

赖氨酰氧化酶样蛋白2在肝细胞癌发生发展中的作用研究进展

赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase-like 2,LOXL2)是赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)家族成员之一,可催化细胞外基质中胶原蛋白与弹性蛋白共价交联,在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中过表达可促进肝癌细胞生长、肿瘤侵袭及转移。近年来,越来越多的证据表明LOXL2在HCC的发生、发展中发挥着关键作用,较高水平的LOXL2是影响HCC患者预后的独立因素,提示其有作为治疗靶点的巨大潜力。

赖氨酰氧化酶样蛋白2对晚期胆道癌患者预后及化疗敏感度的预测价值

目的探讨赖氨酰氧化酶样蛋白2(Lysyl oxidase-like protein 2,LOXL2)对晚期胆道癌患者预后及化疗敏感度的预测价值。方法回顾性分析海军军医大学第三附属医院46例晚期胆道癌患者的临床资料。46例病例均采用了实时定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测患者癌组织和癌旁组织中LOXL2的mRNA表达,根据LOXL2的mRNA表达中位数将患者分为高表达组和低表达组,采用受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线分析LOXL2 mRNA在诊断晚期胆道癌化疗敏感性中的价值;采用生存曲线比较LOXL2 mRNA高表达组和低表达组患者生存率;采用Cox回归分析影响胆道癌患者生存的独立风险因素。结果与癌旁组织比较,晚期胆道癌患者癌组织中LOXL2 mRNA的表达增强(t=14.16,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示LOXL2 mRNA能够作为诊断晚期胆道癌化疗敏感性的指标(AUC=0.828,P=0.0001)。生存分析结果显示LOXL2 mRNA高表达组患者的总体生存率显著低于低表达组(P=0.032)。Cox回归分析结果显示,CEA、CA19-9以及LOXL2 mRNA水平是影响胆道癌患者化疗后生存的独立风险因素(P=0.005,P=0.041,P=0.012)。结论LOXL2 mRNA是影响患者生存的独立风险因素,且可以作为预测晚期胆道癌患者化疗预后的指标。

托芬那酸通过下调LOXL2表达抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭

目的:观察托芬那酸(TA)对人胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:用不同剂量的TA(0、3、6、12、24、48、96μmol/L)处理SGC-7901细胞24 h或48 h,CCK-8法检测细胞活力,脂质体介导shRNA转染靶向沉默LOXL2基因,Transwell检测侵袭细胞数,RT-PCR检测LOXL2的mRNA水平,Western blot检测SP1、LOXL2、Snail、E-cad、MMP9蛋白水平。结果:TA可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞活力(P<0.05),24 h和48 h的IC50分别为78.06μmol/L和50.72μmol/L;与对照组相比,0、3、6和12μmol/L TA作用24 h后,SGC-7901细胞侵袭数显著减少(P<0.05),Snail、MMP9、SP1和LOXL2蛋白水平均显著降低(P<0.05),E-cad蛋白水平显著升高(P<0.05),LOXL2的mRNA水平显著降低(P<0.05),且呈现剂量依赖性;敲除LOXL2基因可抑制SGC-7901细胞侵袭(P<0.05),下调Snail和MMP9(P<0.05)、上调E-cad蛋白水平(P<0.05)。结论:TA可能通过下调SP1和LOXL2蛋白表达,进而下调Snail和MMP9、上调E-cad蛋白水平,最终抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭。

赖氨酰氧化酶样蛋白2在头颈部鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨赖氨酰氧化酶样蛋白2(lysyl oxidase-like 2,LOXL2)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达及与肿瘤转移、预后间的关系。方法:免疫组化检测LOXL2在157例HNSCC患者中的蛋白表达情况,并分析其表达与临床病理特征、转移时间(time to metastasis,TTM)及总生存时间(overall survival,OS)的关系。结果:LOXL2阳性表达患者中位TTM为27.3个月,5年OS为26.1%;而LOXL2阴性表达患者中位TTM为38.6个月,5年OS为47.8%。LOXL2的表达增加与HNSCC中淋巴转移呈正相关(P<0.05)。结论:HNSCC组织中LOXL2高表达患者更容易发生早期转移,预后更差。LOXL2可能成为一种新的判断头颈部鳞状细胞癌恶性程度和预后的分子标志。

LOX在乳腺癌中的表达及与MMP-2、MMP-9相关性的实验研究

目的探讨赖氨酰氧化酶(LOX)在不同侵袭、转移潜能的乳腺癌细胞株的表达及LOX与MMP-2、MMP-9的关系。方法以RT-PCR检测LOX mRNA在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7的表达水平。40只裸鼠随机分为2组,每组裸鼠的乳腺脂肪垫内分别接种上述不同的细胞,建立人乳腺癌原位移植瘤模型。6周后测定肿瘤体积,SP免疫组织化学法检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9的表达情况,并对数据进行统计学处理。结果高侵袭、转移潜能的乳腺癌细胞株MDA-MB-231中LOXmRNA表达量显著高于低侵袭、转移潜能的乳腺癌细胞株MCF-7(P<0.01);裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,至6周时MDA-MB-231组肿瘤体积为(758.84±241.08)mm3,MCF-7组为(210.36±101.06)mm3,差异有统计学意义(P<0.01)。LOX与MMP-2、MMP-9的表达呈正相关(P<0.01)。结论乳腺癌细胞高侵袭、转移的潜能可能与LOX、MMP-2、MMP-9的高表达及其相互之间协同作用相关。

低氧对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察低氧对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将体外培养的人喉鳞癌细胞分为常氧组、低氧组。流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot法分别检测各组细胞低氧诱导因子α(HIF-1α)、赖氨酰氧化酶(LOX)mRNA及蛋白。结果常氧组细胞凋亡率13.86%±0.12%、低氧组5.13%±0.67%,P<0.05。与常氧组比较,低氧组细胞中HIF-1α、LOX蛋白及其mRNA表达增加(P均<0.05),且二者表达呈正相关(r均为0.862,P均<0.05)。结论低氧可抑制Hep-2细胞凋亡,该作用可能与其上调细胞中HIF-1α、LOX表达有关。

E47和LOXL2表达下调对食管鳞癌Eca-109细胞迁移和凋亡的影响研究

目的探讨核转录因子E47和赖氨酰氧化酶样蛋白-2(LOXL2)基因表达下调后对食管鳞癌细胞株Eca109迁移、凋亡的影响及其机制。方法采用RNAi技术沉默E47和LOXL2基因作为实验组,同时设立空白对照组和阴性对照组。采用实时荧光定量PCR及Western blot检测各组细胞中E47、LOXL2基因mRNA和蛋白表达水平,通过流式细胞术和Transwell检测细胞凋亡和迁移变化,采用免疫共沉淀技术检测E47和LOXL2蛋白相互作用。结果与空白对照组和阴性对照组比较,E47、LOXL2 mRNA和蛋白表达水平下调;流式细胞术和Transwell实验结果显示,E47和LOXL2干扰后Eca109细胞的凋亡率增高(P<0.01),细胞迁移数目降低(P<0.01)。免疫共沉淀结果显示E47和LOXL2蛋白存在相互作用。结论E47和LOXL2表达下调可以抑制Eca109细胞迁移,并诱导细胞凋亡,E47和LOXL2蛋白相互作用可能促进食管癌细胞的恶性增殖和侵袭。

LOX基因降表达对人阴道壁成纤维细胞中ELN及MMP-2基因表达的影响

目的研究赖氨酰氧化酶(LOX)基因对人阴道壁成纤维细胞中弹性蛋白(ELN)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因mRNA表达的影响。方法将原代培养的人阴道壁成纤维细胞分成3个组(LOX基因降表达组、阴性对照组、空白对照组),分别用LOX-sh RNA重组慢病毒、阴性对照慢病毒转染前2个组细胞,计算转染效率。流式细胞仪分选慢病毒感染后带绿色荧光的人阴道壁成纤维细胞,传代后收集部分细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测3个组成纤维细胞中LOX、ELN、MMP-2的mRNA表达水平。结果 LOX-sh RNA慢病毒转染人阴道壁成纤维细胞共8例(绝经前4例,绝经后4例)。LOX基因降表达组成纤维细胞胞体变小,生长变慢,贴壁性降低,LOX mRNA的表达水平较阴性对照组和空白对照组显著下降(P<0.05)。LOX基因降表达组ELN mRNA表达较对照组明显降低,而MMP-2 mRNA表达较对照组明显升高。阴性对照组和空白对照组的LOX mRNA、ELN mRNA、MMP-2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LOX基因降表达后人阴道壁成纤维细胞ELN mRNA表达显著降低,MMP-2 mRNA表达显著增高,提示LOX通过调节ELN和MMP-2的表达参与盆腔脏器脱垂(POP)的发生。

赖氨酰氧化酶样蛋白2在卵巢上皮性癌组织中表达及意义

目的探讨赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)在卵巢上皮性癌组织中表达及意义。方法选取2011-02~2013-02在我院择期行手术治疗的71例卵巢癌患者组织标本,同期,选取因卵巢良性肿瘤行手术治疗的正常卵巢组织35例作为对照组,免疫组化法检测卵巢癌患者和对照组组织标本中LOXL2蛋白表达,所有患者术后随访,末次随访日期2018年2月28日,失访3例,生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-Rank法,多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果卵巢癌组织中LOXL2蛋白阳性表达率为78. 87%,对照组组织中则为28. 57%,差异有统计学意义(χ~2=25. 246,P <0. 001);卵巢癌组织中LOXL2蛋白表达在不同FIGO分期、不同分化程度、有无淋巴结转移和有无腹水间差异有统计学意义(P <0. 05); Kaplan-Meier生存分析结果显示,LOXL2蛋白阳性表达组患者平均生存时间(41. 42±4. 56)个月,而阴性表达组则为(72. 56±5. 99)个月,Log-Rank检验差异有统计学意义(χ~2=6. 945,P=0. 008); Cox比例风险回归模型结果显示,FIGO分期、淋巴结转移和LOXL2蛋白表达是影响卵巢癌患者预后的风险因素(P <0. 05)。结论卵巢癌组织中LOXL2蛋白表达升高,可作为评估患者预后的潜在指标。

系统性硬化症和混合性结缔组织病活动期血清中LOXL-2的比较

目的比较赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL-2)在系统性硬化症(SSc)和混合性结缔组织病(MCTD)活动期患者血清中的表达情况。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测20例SSc和20例MCTD患者中LOXL-2的浓度,进行统计分析。结果在活动期MCTD和SSc患者血清中LOXL-2的蛋白表达量高于对照组(均P<0.05),且在SSc患者中LOXL-2浓度与患者皮肤病变评分(mRSS)呈正相关(r=0.982 P=0.001)。结论 LOXL-2在SSc和MCTD活动期患者的血清中高表达,可能与LOXL-2促进组织纤维化及血管炎的发生相关。

慢病毒载体介导RNA干扰LOX表达对人阴道壁成纤维细胞弹性蛋白、基质金属蛋白酶2表达的影响

目的探讨人阴道壁成纤维细胞中赖氨酸氧化酶(lysine oxidase,LOX)的表达在盆腔器官脱垂发生中的可能机制。方法选取绝经前、后无症状对照组的阴道前壁组织,用酶消化+组织块培养法分离培养成纤维细胞,细胞免疫荧光法对细胞进行鉴定。针对LOX基因,设计并构建4个慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),分别转染HEK-293T细胞,Real-Time PCR检测LOX的表达情况,筛选出其中1个干扰效率最高的LOX-RNAi-LV,将其包装成慢病毒并测定效价,将慢病毒感染人阴道壁细胞,Real-Time PCR检测细胞中弹性蛋白和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA表达水平。结果培养出绝经前、后无症状对照组的阴道前壁成纤维细胞各4例,成功筛选出了具有较高干扰效率的LOX-RNAi-LV并成功包装入慢病毒,感染慢病毒的人阴道前壁成纤维细胞,弹性蛋白表达均降低,MMP-2表达均增高,差异有统计学意义。结论 LOX-RNAi-LV慢病毒感染后的人成纤维细胞弹性蛋白表达降低,MMP-2表达增高,因此推测LOX对弹性蛋白和基质金属蛋白酶2的表达有调节作用。

抑制赖氨酰氧化酶后关节炎大鼠脾脏和胸腺中MMP-2和MMP-9的变化

目的观察用β-氨基丙腈(β-Aminopropionitrile,BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)后,关节炎模型大鼠脾脏和胸腺中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2和MMP-9的变化。方法 30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,在模型组大鼠的背部、尾部和足底等处皮内注射由完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)乳化的牛Ⅱ型胶原(collagenⅡ,CⅡ),建立大鼠关节炎模型;干预组在建立关节炎模型的同时腹腔注射100mg·(kg·d)-1的1BAPN,共40d;对照组注射生理盐水。HE染色观察脾脏和胸腺的形态学改变;免疫组化法分别检测脾脏、胸腺中MMP-2和MMP-9的含量。结果模型组和干预组胸腺皮质、脾脏白髓可见细胞数增多;模型组和干预组大鼠脾脏、胸腺中MMP-2和MMP-9的表达量均高于对照组(P<0.05);干预组大鼠脾脏、胸腺中MMP-2和MMP-9的表达量均低于模型组(P<0.05)。结论关节炎大鼠的脾脏、胸腺中MMP-2和MMP-9高表达,抑制LOX活性可下调MMP-2和MMP-9的表达,提示LOX有望作为治疗关节炎的靶点。

LOXL2与心血管疾病关系的研究进展

赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)是赖氨酰氧化酶家族的一员,具有促进胶原蛋白和弹性蛋白交联,维持细胞外基质稳定性的作用。LOXL2参与心血管系统的纤维化过程,可诱发心力衰竭、心房颤动、高血压等心血管疾病。敲除LOXL2基因或使用LOXL2抑制剂可以改善心功能和降低血压。

黑色素瘤缺乏因子2和赖氨酰氧化酶在结直肠癌组织中的表达及与预后的关系

目的:探讨结直肠癌组织中黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和赖氨酰氧化酶(LOX)表达与临床病理参数及预后的关系。方法:对2010年10月—2014年2月收治的98例结直肠癌患者进行研究,检测结直肠癌组织及癌旁组织中AIM2和LOX的表达,分析AIM2和LOX表达与临床病理参数的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析不同AIM2、LOX表达患者总生存率的差异,Cox比例风险回归模型分析结直肠癌患者预后的影响因素。结果:与癌旁组织相比,结直肠癌组织中AIM2表达下调,而LOX表达上调(P<0.05)。AIM2表达与TNM分期和肿瘤分化程度相关(P<0.05),而LOX表达与肿瘤浸润深度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。AIM2阳性患者的生存率明显高于AIM2阴性患者(P<0.05),而LOX阳性患者的生存率明显低于LOX阴性患者(P<0.05)。Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期、AIM2和LOX表达是结直肠癌患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论:结直肠癌组织中AIM2表达下调而LOX表达上调,并与结直肠癌的进展和患者的预后有关,检测AIM2、LOX有助于患者的预后评估。