参杖颗粒含药血清对HSC增殖及α-SMA表达的抑制效应

目的:研究参杖颗粒对α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达的影响,探讨该方影响肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)迁移和增殖的调节机制.方法:将HSC分别培养于不同浓度的参杖颗粒含药血清中,采用Western blot测定α-SMA的表达量;RT-PCR检测α-SMA mRNA表达量;流式细胞仪检测不同浓度的含药血清对HSC周期的影响;细胞划痕实验检测不同浓度的含药血清对HSC迁移的影响.结果:Western blot实验结果显示10倍浓度的参杖颗粒含药血清对HSC的α-SMA的表达有明显减少;同时RT-PCR结果显示α-SMA的mRNA水平在10倍浓度血清处理的HSC中最低;细胞周期检测结果显示细胞明显被阻滞于G2期,以10倍浓度组抑制增殖效果最明显;划痕实验显示10倍浓度血清处理的HSC迁移能力明显被抑制.结论:参杖颗粒对HSC的α-SMA的表达有明显抑制作用,并明显阻止HSC的迁移和增殖.

转化生长因子-β1对人Tenon囊成纤维细胞表型转化的作用

目的探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）对人Tenon囊成纤维细胞（human subconjunctival Tenon’s capsule fibroblast，HTCF）表型转化的作用。方法人白内障手术中取结膜下Tenon囊组织块培养成纤维细胞。用第5～9代细胞，以不同浓度TGF-β1（0μg·L^-1，2μg·L^-1，5μg·L^-1。，10μg·L^-1，20μg·L^-1）、不同时间（24h、48h、72h）诱导成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞。用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型。结果体外用TGF-β1诱导HTCF，在0～10μg·L^-1，TGF-β1呈剂量依赖性增加平滑肌肌动蛋白在蛋白水平的表达，至20μg·L^-1时表达迅速下降；10μg·L^-1 TGF-β1诱导48h后其平滑肌肌动蛋白的表达与24h、72h相比，差异有显著性（P〈0．01，n=6）。结论一定浓度和剂量的TGF-β1能显著诱导HTCF表型转化为肌成纤维细胞，在人Tenon囊组织局部组织损伤修复及瘢痕形成中具有重要作用。

The role of Rho/Rho-kinase pathway and the neuroprotective effects of fasudil in chronic cerebral ischemia

The Rho/Rho-kinase signaling pathway plays an important role in cerebral ischemia/reperfusion injury. However, very few studies have examined in detail the changes in the Rho/Rho-kinase signaling pathway in chronic cerebral ischemia. In this study, rat models of chronic cerebral ischemia were established by permanent bilateral common carotid artery occlusion and intra- gastrically administered 9 mg/kg fasudil, a powerful ROCK inhibitor, for 9 weeks. Morris water maze results showed that cognitive impairment progressively worsened as the cerebral ischemia proceeded. Immunohistochemistry, semi-quantitative RT-PCR and western blot analysis showed that the expression levels of Rho-kinase, its substrate myosin-binding subunit, and its relat- ed protein alpha smooth muscle actin, significantly increased after chronic cerebral ischemia. TUNEL staining showed that chronic cerebral ischemia could lead to an increase in neuronal apoptosis, as well as the expression level of caspase-3 in the frontal cortex of rats subjected to chronic cerebral ischemia. Fasudil treatment alleviated the cognitive impairment in rats with chronic cerebral ischemia, and decreased the expression level of Rho-kinase, myosin-binding subunit and alpha smooth muscle actin. Furthermore, fasudil could regulate cerebral injury by reducing cell apoptosis and decreasing caspase-3 expression in the frontal cortex. These findings demonstrate that fasudil can protect against cognitive impairment induced by chronic cerebral ischemia via the Rho/Rho-kinase signaling pathway and anti-apoptosis mechanism.

银杏叶提取物对TGF-β_1诱导的人Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响及其机制的初步探讨

目的:观察银杏叶提取物(GBE)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon's囊成纤维细胞(HTCFs)增殖的影响及可能机制。方法:体外培养HTCFs及鉴定;MTT法检测不同浓度的GBE(25、50、100、200mg/L)对TGF-β1(2ng/mL)诱导的HTCFs增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达的情况。RT-PCR检测细胞结缔组织生长因子mRNA(CTGF mRNA)的表达。结果:TGF-β1可显著促进HTCFs的增殖,促进细胞由G0/G1期进入S期,上调α-SMA、CTGF在蛋白和mRNA水平的表达;GBE能够抑制TGF-β1的上述作用。结论:GBE具有抑制TGF-β1诱导的人Tenon's囊成纤维细胞增殖的作用,其机制可能是阻止细胞进入S期,下调α-SMA及CTGF的表达。

高糖通过蛋白激酶C改变肾小球系膜细胞的间隙连接与细胞表型

目的观察高糖环境下，蛋白激酶C（PKC）活性的变化对肾小球系膜细胞间隙连接与细胞表型的影响。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为低糖组、高糖组、高糖＋PKC抑制剂十字孢碱（SP）组，测定细胞间隙连接蛋白-43（connexin 43）、α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）的表达。结果①与低糖组相比，高糖组细胞PKC活性、mSMA mRNA表达增高，connexin 43 mRNA表达下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；②与高糖组相比，高糖＋SP组细胞PKC活性、α—SMA mRNA表达下降，connexin 43 mRNA表达增高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高糖通过PKC改变肾小球系膜细胞的间隙连接与细胞表型。

原肌球蛋白1在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞中的动态表达及其意义

目的观察原肌球蛋白1（TPMl）在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞（HSC）中的动态表达。方法将SD大鼠随机分为正常对照组（6只）和模型组（24只）。二甲基亚硝胺腹腔注射建立大鼠肝纤维化模型，于第2、4、6、8周（每组各6只）门静脉采血及取肝组织标本；HSC-T6细胞设对照组及刺激组，刺激组以5ng／ml转化生长因子βl（TGFβ1）作用48h。苏木素－伊红和Masson染色观察肝组织病理变化，RT-PCR、免疫组织化学和Westemblot检测组织与细胞中TPMl，TGFβ1及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA和蛋白的表达，以及TPMl在肝组织中的定位。两样本均数比较采用独立样本t检验；相关性采用Pearson直线相关分析。结果成功建立肝纤维化模型，TPMl在正常肝组织中低表达于汇管区血管内皮上，在模型组TPMl强表达于增生的肝纤维间隔，TPMl及α－SMA的mRNA及蛋白的表达在肝纤维化过程中均逐渐升高，6周时高于其他各组，8周时下降，与对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）；TGFβ1先升高，4周时高于其他各组，6周时下降（P〈0．05）；相关性分析表明TPMl与α－SMA和TGFβ1的表达均呈正相关（rs=0．688和rs=0．692，P〈0．01）；HSC－T6细胞中，TGFβ1刺激组TPMl及α－SMA的mRNA表达均升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论TPMl参与了肝纤维化的发生和发展过程，有望成为肝纤维化诊断与治疗的新靶点。

雷公藤甲素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制肺泡上皮细胞间质转分化的机制

目的:探讨雷公藤甲素(TPL)基于核转录因子κB(NF-κB)/Twist1信号通路对抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化的作用机制。方法:40只SPF级昆明小鼠随机分为对照组,模型组,TPL低、高剂量组,每组10只。气管注射博来霉素诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。分别采用qPCR和(或)Western blot法检测肺组织和细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达。结果:HE染色示TPL低、高剂量组成纤维细胞减少,增殖减弱,肺泡炎症细胞浸润程度以及肺纤维化病变程度均显著降低。与对照组比较,模型组肺组织ZO-1和E-cadherin的表达显著降低,α-SMA和vimentin的表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,TPL高、低剂量组肺组织ZO-1和E-cadherin的表达显著升高,α-SMA和vimentin的表达显著降低(P<0.05);与TPL低剂量组比较,TPL高剂量组肺组织ZO-1和E-cadherin的表达显著升高,α-SMA和vimentin的表达显著降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组肺组织p-IκBα、p-p65、NF-κB p65和Twist 1的表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,TPL高、低剂量组肺组织p-IκBα、p-p65、NF-κB p65和Twist 1的表达显著降低(P<0.05),与TPL低剂量组比较,TPL高剂量组肺组织p-IκBα、p-p65、NF-κB p65和Twist 1的表达显著降低(P<0.05)。结论:TPL能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。