期刊导航
期刊开放获取
河南省图书馆
退出
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
3
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式:
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用
被引量:
12
1
作者
黄桢钧
刘彬
+1 位作者
刘本荣
刘少军
《贵阳医学院学报》
CAS
2015年第10期1029-1032,共4页
目的:探讨双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)体系在细胞自噬中的作用。方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-II/LC3-...
目的:探讨双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)体系在细胞自噬中的作用。方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-II/LC3-I比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-e GFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200 nmol/L)处理3 h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化。结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-II蛋白和LC3-II/LC3-I比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-e GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加。结论:双荧光mRFP-e GFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法。
展开更多
关键词
雷帕霉素
自噬
人胚肾细胞
LC3
单荧光GFP-LC3质粒
双荧光mRFP-e
GFP-LC3
下载PDF
职称材料
饥饿诱导人胚肾细胞自噬模型的构建
被引量:
2
2
作者
黄桢钧
刘慰华
+1 位作者
钟赟
刘少军
《新医学》
2015年第4期221-224,共4页
目的探讨饥饿诱导的人胚肾细胞(HEK293)自噬模型的构建。方法采用Earle's平衡盐溶液(EBSS)分别处理HEK293细胞0、1、2、4、8 h,显微镜下观察细胞形态变化,蛋白免疫印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62的表达;双荧光...
目的探讨饥饿诱导的人胚肾细胞(HEK293)自噬模型的构建。方法采用Earle's平衡盐溶液(EBSS)分别处理HEK293细胞0、1、2、4、8 h,显微镜下观察细胞形态变化,蛋白免疫印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62的表达;双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)质粒转染HEK293细胞24 h后,荧光显微镜观察EBSS饥饿条件下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的变化。结果饥饿处理后,HEK293细胞皱缩、变小变圆,蛋白免疫印迹法可检测到LC3的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加;荧光显微镜可观察到细胞内红色和绿色LC3荧光亮点均增加。结论饥饿可成功诱导HEK293细胞自噬,表现为LC3蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加,以及荧光显微镜下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的增加。
展开更多
关键词
饥饿
自噬
自噬微管相关蛋白轻链3
P62
双荧光检测
下载PDF
职称材料
基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用
3
作者
马占兵
党洁
+2 位作者
杨继辉
霍正浩
徐广贤
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期88-95,共8页
目的:构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264. 7稳转株观察自噬流变化。方法:应用基...
目的:构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264. 7稳转株观察自噬流变化。方法:应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因,将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中,重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后,包装慢病毒,转染Raw264. 7细胞,并利用流式分选术获取稳转株,经氯喹抑制自噬模型及Western blot鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果:成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒,包被慢病毒并获得Raw264. 7稳定细胞系(Raw264. 7-PCDHDuo),可稳定表达双荧光蛋白,经3mmol/L氯喹作用6h后,能够稳定准确指示自噬流变化。结论:成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统,为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。
展开更多
关键词
自噬流
载体构建
慢病毒
mrfp-egfp
-LC3
原文传递
题名
双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用
被引量:
12
1
作者
黄桢钧
刘彬
刘本荣
刘少军
机构
广州心血管疾病研究所广州医科大学附属第二医院心内科
出处
《贵阳医学院学报》
CAS
2015年第10期1029-1032,共4页
基金
国家自然科学基金青年项目(81300151)
文摘
目的:探讨双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)体系在细胞自噬中的作用。方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-II/LC3-I比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-e GFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200 nmol/L)处理3 h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化。结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-II蛋白和LC3-II/LC3-I比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-e GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加。结论:双荧光mRFP-e GFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法。
关键词
雷帕霉素
自噬
人胚肾细胞
LC3
单荧光GFP-LC3质粒
双荧光mRFP-e
GFP-LC3
Keywords
rapamycin
autophagy
human embryonic kidney cells
LC3
mono-fluorescence GFP-LC3 plasmid
dual-fluorescence
mrfp-egfp
-LC3
分类号
R34-33 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
饥饿诱导人胚肾细胞自噬模型的构建
被引量:
2
2
作者
黄桢钧
刘慰华
钟赟
刘少军
机构
广州心血管疾病研究所 广州医科大学附属第二医院心内科
出处
《新医学》
2015年第4期221-224,共4页
文摘
目的探讨饥饿诱导的人胚肾细胞(HEK293)自噬模型的构建。方法采用Earle's平衡盐溶液(EBSS)分别处理HEK293细胞0、1、2、4、8 h,显微镜下观察细胞形态变化,蛋白免疫印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62的表达;双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)质粒转染HEK293细胞24 h后,荧光显微镜观察EBSS饥饿条件下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的变化。结果饥饿处理后,HEK293细胞皱缩、变小变圆,蛋白免疫印迹法可检测到LC3的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加;荧光显微镜可观察到细胞内红色和绿色LC3荧光亮点均增加。结论饥饿可成功诱导HEK293细胞自噬,表现为LC3蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加,以及荧光显微镜下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的增加。
关键词
饥饿
自噬
自噬微管相关蛋白轻链3
P62
双荧光检测
Keywords
Satarvation
Autophagy
LC3
p62
mrfp-egfp
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
下载PDF
职称材料
题名
基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用
3
作者
马占兵
党洁
杨继辉
霍正浩
徐广贤
机构
宁夏医科大学基础医学院医学遗传系与细胞生物学系
宁夏回族自治区生育力保持教育部重点实验室
宁夏医科大学科技中心
宁夏医科大学临床医学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期88-95,共8页
基金
宁夏回族自治区自然科学基金面上项目(2018AAC03088)
宁夏科技创新领军人才项目(KJT2015020)资助项目
文摘
目的:构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264. 7稳转株观察自噬流变化。方法:应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因,将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中,重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后,包装慢病毒,转染Raw264. 7细胞,并利用流式分选术获取稳转株,经氯喹抑制自噬模型及Western blot鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果:成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒,包被慢病毒并获得Raw264. 7稳定细胞系(Raw264. 7-PCDHDuo),可稳定表达双荧光蛋白,经3mmol/L氯喹作用6h后,能够稳定准确指示自噬流变化。结论:成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统,为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。
关键词
自噬流
载体构建
慢病毒
mrfp-egfp
-LC3
Keywords
Autophagic flux
Vector construction
Lentivirus
mrfp-egfp
-LC3
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用
黄桢钧
刘彬
刘本荣
刘少军
《贵阳医学院学报》
CAS
2015
12
下载PDF
职称材料
2
饥饿诱导人胚肾细胞自噬模型的构建
黄桢钧
刘慰华
钟赟
刘少军
《新医学》
2015
2
下载PDF
职称材料
3
基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用
马占兵
党洁
杨继辉
霍正浩
徐广贤
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
原文传递
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部