大豆分离蛋白-葡聚糖糖基化产物作为乳化剂和活性物质载体的性能分析

研究大豆分离蛋白(soy protein isolate,SPI)-葡聚糖共价接枝物的制备及其乳化性质和作为姜黄素载体的性能。在95℃的"大分子拥挤"体系条件下,2种大分子通过美拉德反应进行共价接枝。根据糖基化产物在SPI等电点附近(p H 4.5)和中性(p H 6.5)条件下的溶解性将其分成2个组分,分别为MC45和MC65,并对其性能表征分析。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和分子质量测定分析显示,反应后生成大分子质量的接枝物。MC45制备的乳液在酸性环境中的粒度低于MC65,其平均粒径约为10μm,并且受离子浓度和温度的影响较小。与天然蛋白、SPI-葡聚糖混合物及MC45相比,荷载量、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率分析表明MC65组分具有更好的姜黄素运载性能,MC65组分制备的姜黄素纳米颗粒荷载量为30.21μg/mg,DPPH自由基清除率为18.33%,其粒径最大。

趋淋巴抗癌药丝裂霉素-右旋糖酐偶联物的合成及生物学性质的研究

利用右旋糖酐(T10 ～500) 局部注射后可选择性被网状上皮细胞或巨噬细胞通过胞饮作用摄取,而不会透过毛细血管壁进入血液,在体内很快被代谢,无毒无滞留的特性,将一定分子量的右旋糖酐(T77) 与抗肿瘤小分子药物丝裂霉素C(mitomycin C,MMC) 通过一个间隔基偶联成高分子靶向抗肿瘤药物:丝裂霉素右旋糖酐偶联物( MMCD) ,对偶联物的生物学性质进行研究,并将该偶联物用于口腔癌淋巴转移的实验性研究中,实验结果说明MMCD具有强的抗肿瘤活性。

大分子拥挤环境下大豆7S球蛋白糖基化研究

生命科学领域中的大分子拥挤环境作为反应介质进行Maillard反应制备大豆7S球蛋白-葡聚糖共价复合物。对液相体系中发生Maillard反应的各种影响因素进行系统研究,并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术证实大豆7S球蛋白和葡聚糖发生了共价结合,得出共价复合物制备的最优条件。结果表明:5%的7S球蛋白与15%的葡聚糖在pH7.0条件下,95℃反应6h后,形成了良好的大分子共价复合物。产物色泽良好,褐变程度较低,反应时间大大缩短。

大分子拥挤体系下葡聚糖对SPI的共价修饰

为探讨糖链对蛋白质的共价修饰作用,在大分子拥挤体系中通过Maillard反应制备了大豆分离蛋白(SPI)-葡聚糖共价复合物(SDC),通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、荧光光谱、凝胶渗透色谱、圆二色光谱等方法研究了葡聚糖共价键入后对SPI功能和构象的影响.结果表明,大豆分离蛋白和葡聚糖发生共价结合;Maillard反应的适宜条件为SPI/葡聚糖质量比1∶1,温度60℃、反应时间30 h;在大分子拥挤体系中,与未经Maillard反应的SPI/葡聚糖混合物相比,SDC表面的疏水基团减少,乳化活性较高;与SPI相比,SDC的热稳定性提高;糖链的键入使SPI的结构发生了变化,柔韧性有所增加,更有利于发挥其功能.

干热法及大分子拥挤体系制备的共价复合物的物化性质

通过干热法和大分子拥挤体系分别制备大豆7S球蛋白-葡聚糖共价复合物,讨论不同反应体系制备的产物的物化性质差异.根据糖基化产物在7S等电点(p H=4.8)和中性条件(p H=6.5)下的溶解性将其分成两组分,对其接枝度、蛋白质二级结构、内置荧光和浊度进行分析.结果表明:在大分子拥挤环境下,7S在液相环境中发生了一定程度的水解,生成小分子的肽链,有利于多糖的共价接入;MC48(p H=4.8时制得,大分子拥挤体系)中主要是接枝程度较高的糖基化产物,MC65(p H=6.5时制得,大分子拥挤体系)中含有的糖基化产物接枝度较低,且程度不均匀;干热法制备得到的DH48(p H=4.8时制得)和DH65(p H=6.5时制得)接枝度较低,差异性不及大分子拥挤环境显著.SDSPAGE、圆二色光谱、内置荧光分析结果表明,大分子拥挤环境下制得的MC48和MC65物化性质差异显著,而干热法制得的DH48和DH65的物化性质差异不明显.

多糖的共价键合对7S球蛋白凝胶性能的影响

引入细胞学说中的大分子拥挤体系并在该体系通过Maillard反应制备了大豆7S球蛋白(β-conglycinin,7S)和葡聚糖(dextran,Dex)的共价复合物,利用转谷氨酰胺酶(transglutaminase,TGase)的交联作用制得蛋白-多糖共价复合物凝胶。对其流变学、质构特性及微结构进行分析。结果表明,在大分子拥挤环境下,7S-葡聚糖比例为2:1的共价复合物制得具有致密且孔洞分布均匀的凝胶网络结构。单纯的蛋白自聚集或者与多糖的共混状态时形成的凝胶弹性模量都较高,但蛋白过度的聚集并不能得到孔洞均匀的凝胶网络结构,共价复合物制备的凝胶中葡聚糖的共价键合作用抑制了TGase交联过程中蛋白质分子间发生过度的相互作用。形貌学观察表明,共价复合物制备的凝胶形成了网络孔径均匀且非常致密的凝胶网络结构。

HPMEC-ELSD法检测注射用丹参多酚酸中大分子物质

目的建立注射用丹参多酚酸(SAFI)中大分子物质(相对分子质量≥1.0×10^(4))的高效分子排阻色谱-蒸发光散射(HPMEC-ELSD)检测方法。方法采用超滤离心方法(截留相对分子质量为3000,转速为4000 r·min^(−1))对供试品溶液中的大分子物质进行分离富集。色谱条件为:检测器ELSD,Ultrahydrogel 500与Ultrahydrogel 250色谱柱串联,流动相0.02%甲酸水溶液,流动相体积流量0.6 mL·min^(−1),柱温35℃,进样量10μL,压缩空气体积流量2.5 L·min^(−1),漂移管温度105℃,不分离模式,增益1。结果该方法空白无干扰,专属性良好;精密度、重复性、加样回收率均良好;右旋糖酐在相对分子质量2700~36800线性良好,回归方程为Y=-0.2205 X+10.2470(R^(2)=0.9945);对照品溶液和供试品溶液50 h稳定性良好;不同流动相、流动相体积流量、柱温、压缩空气体积流量、漂移管温度等的耐用性良好。17批SAFI均未检出大分子物质。结论建立的HPMEC-ELSD方法简便、快捷,可用于SAFI中大分子物质的检测。

大分子葡萄糖酐血瘀证动物模型表征的偶氮蓝变化特征

目的探讨偶氮蓝与不同浓度大分子葡萄糖酐所致血瘀证动物模型血瘀程度表征变化规律的关系。方法用0.5%偶氮蓝配制的5%、10%、15%的大分子葡萄糖酐造模,观察偶氮蓝在大分子葡萄糖酐所致血瘀证模型动物耳廓、舌体呈现出的体表表征变化,检测耳廓、血浆中偶氮蓝含量。结果糖酐各组1h后耳廓及舌体出现不同程度蓝色瘀斑,且与大分子葡萄糖酐注射浓度呈正相关。同对照组大鼠相比,糖酐各组大鼠1h后耳廓偶氮蓝含量随大分子葡萄糖酐注射浓度的增加而增加,血浆偶氮蓝含量则随其注射浓度的增加而减少。结论大鼠尾静脉注射用0.5%偶氮蓝配制的不同浓度的大分子葡萄糖酐后能使血瘀证模型大鼠的血瘀程度在其耳和舌体等体表表征中较为直观地呈现出来,且大分子葡萄糖酐注射浓度不同所致血瘀证模型大鼠耳廓和血浆偶氮蓝含量变化与耳廓、舌体在同一时间出现的血瘀程度明显相关,说明偶氮蓝可以客观反映大分子葡萄糖酐所致血瘀证模型大鼠血瘀程度的表征变化。

靶向淋巴系统造影剂的制备及其动物实验

采用两种方法,一种方法是以右旋糖酐(Dextran)和DTPA的二酐为原料,DMAP为催化剂,另一种是以右旋糖酐和DTPA为原料,采用DMAP及EDC.HCl为联合催化剂,合成造影剂Dextran-DTPA-Gd.通过比较产物的水溶性及Gd含量确定了最佳制备条件,得到了钆含量为16.1%、水溶性好的高分子造影剂;通过FTIR、粒度分析表征了Dextran-DTPA-Gd的结构及其分子粒径大小(分布范围为100～150nm,平均值为130nm);动物实验中,以钆喷酸葡胺注射液(Magnevist)为阳性对照,通过对比家兔腿部磁共振成像图,绘制腿部淋巴系统信号增强率-时间曲线,证明Dextran-DTPA-Gd具有更高的信号增强效果(最高值为314%)及淋巴系统选择性的特点,为其进一步应用奠定了基础.

大分子拥挤环境下多糖对蛋白肽的修饰研究

采用胃蛋白酶适度水解大豆分离蛋白得到蛋白肽,在大分子拥挤环境下通过Maillard反应制备蛋白肽-葡聚糖共价复合物(Hydrolated Soy Protein Isolated-Dextran Conjugates,HDC),采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术证实大豆7S球蛋白和葡聚糖发生了共价结合,并通过乳化剪切机、荧光分光光度计、差示扫描量热仪和粒度分布仪等对其接枝度、溶解性、热稳定性、抗氧化性和乳化性能进行系统分析。结果表明:大分子拥挤环境下大豆水解蛋白肽-葡聚糖60℃反应4 h就可以形成较高接枝度的共价复合物,溶解性较大豆分离蛋白(Soybean protein isolated,SPI)和大豆分离蛋白-葡聚糖(Soybean Protein Isolated-Dextran Conjugates,SDC)有所提高,热稳定性好,HDC的自由基清除率明显高于大豆水解蛋白和它与葡聚糖的混合物,达到66.39%,且羟自由基清除率高于维生素C,HDC的乳液粒径最小并具有优越的乳化稳定性。

丹红注射液大分子物质筛查方法研究

目的：采用高效分子排阻色谱法（HPSEC法）对丹红注射液中大分子物质进行筛查。方法：采用HPSEC-RID技术,色谱柱为Shodex OHPak SB-803HQ凝胶色谱柱（6.8 mm×300 mm,10μm）,以0.71%硫酸钠水溶液（内含0.02%叠氮钠）为流动相,系列分子量右旋糖酐标准品为对照,对丹红注射液及其中间体中多糖类大分子物质进行筛查;再采用HPSEC-UV技术,色谱柱为TSK-GEL G2000 SWXL凝胶柱（7.8 mm×300 mm,10μm）,以乙腈-水-三氟乙酸（45∶55∶0.05）为流动相,核糖核酸酶A、人胰岛素、胸腺肽α_1为对照,在214 nm波长处对丹红注射液及其中间体中蛋白质类大分子物质进行筛查。结果：丹红注射液未检出大分子物质,中间体检出相对分子质量在4 500~9 000的大分子糖类物,说明经过生产过程的逐步除杂,大分子物质在丹红注射液成品中已完全去除。结论：该方法对丹红注射液质量控制具有重要意义,对其他注射液中大分子杂质的检查亦有借鉴作用。