基于叶绿体matK基因序列探讨10种石杉科石杉属植物的系统关系及分子鉴定

目的：利用叶绿体matK基因序列探讨10种石杉属植物的系统发育及分子鉴定。方法：分别从9种石杉属植物中提取总DNA，经扩增纯化后，用PCR产物直接测序。结果：对石杉属Huperzia Bernh．9个种的叶绿体matK基因进行了测序，序列长度为1589bp，并对10个种（亮叶石杉H.lucidula的matK基因序列从GenBank中下载）的marK序列进行比对，其中有35个系统发育信息位点及35个变异位点，以垂穗石松Lycopodiella cernua为外类群，利用MEGA 3．1软件计算种与种之间的遗传距离在1．59％～0．25％，并构建系统树，获得最简约树和邻接树。结论：小杉兰组和蛇足石杉组植物分别聚成一枝，构成姊妹群，其靴带支持率分别为98％和99％。长柄石杉与蛇足石杉分别聚在2个不同进化枝，二者间有19个碱基差异，遗传距离为1．21％。建议应将长柄石杉单独列为一个种。

水稻抗白叶枯病基因Xa23群体的MAS育种研究

将野生稻中发现的抗白叶枯病基因Xa23转入3个优良恢复系中,为培育新的抗白叶枯病品种奠定基础.采用分子标记辅助育种(MAS)和人工剪叶接种方法快速选育抗白叶枯病新品系.选取前期所得的材料进行P6菌接种鉴定,利用Xa23基因连锁的EST标记C189对接种所得的272份接种鉴定表现有抗性的材料进行标记检测,共得到含有Xa23基因的材料254份,研究发现所得到的材料已经基本稳定,可选取最优品系参加新品种的区试.

何首乌叶绿体matK基因序列分析(英文)

目的通过DNA序列变异,初步研究何首乌品种的亲缘关系及其与地理分布的相关性。方法采用PCR直接测序技术对来源于何首乌15个居群的17个样品的叶绿体matK基因进行测序分析研究。结果何首乌的matK基因长度均为1271bp,根据排序比较,何首乌17个样品间存在12个变异位点,用UPGMA(不加权的算术平均对群法)法构建的系统分支树将其分成四支。结论matK基因序列可变位点为何首乌品种的归并提供了分子依据,且品种的亲缘关系与地理分布呈良好的相关性。

适于核桃基因标记的DNA提取方法

为了对核桃 (JuglansregiaL .)特异性状的相关基因进行分子标记研究 ,采用CTAB法和改进的CTAB法 ,从叶片中提取核桃基因组DNA ,比较其分离效果。结果表明 ,常规的CTAB法不能有效去除多糖 ,而改进CTAB法不论老叶新叶都能有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染 ,获得的DNA纯度高 ,可进一步用于核桃分子生物学的操作。

分子标记技术及其在分离和克隆水稻基因中的应用

分子标记是近些年来发展起来的一种分子生物学技术 ,利用各种分子标记可以构建水稻高密度的分子遗传图谱 ,并进行基因定位和克隆。

潮霉素和PPT对水稻愈伤组织筛选效果的比较

分别以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt基因)和除草剂抗性基因(bar基因)作为筛选标记基因的载体和农杆菌组合转化水稻光温敏核不育系粳稻品种农垦58S和籼稻品种培矮64S,以两个筛选标记基因的相应筛选剂潮霉素(Hyg)和PPT(Basta)对水稻愈伤组织进行筛选研究,初步确定了不同筛选剂对不同水稻愈伤组织的筛选浓度,并比较了两个筛选标记基因的筛选效果.结果表明,不同水稻品种对筛选剂的浓度要求不一样,粳稻品种以Hyg50mg/L,PPT30mg/L较为适合;籼稻品种以Hyg50mg/L,PPT10mg/L较为适合.PPT(Basta)对粳稻品种农垦58S筛选有效,而对籼稻品种培矮64S来说则易产生假阳性.Hyg作为水稻愈伤组织的筛选剂比PPT(Basta)好.

水稻抗稻瘿蚊遗传育种研究进展

稻瘿蚊是亚州稻区主要害虫之一 ,采用抗虫品种进行防治是最理想的办法 ,而抗稻瘿蚊品种的收集和鉴定、抗虫机制的研究、抗性的遗传分析和抗性基因的分子标记定位等方面研究对抗稻瘿蚊品种的选育和应用具有十分重要的意义 .本文就上述几方面的研究现状作一概述 。

对家蚕多星纹基因ms的SSR标记定位分析

对家蚕幼虫斑纹突变多星纹基因ms进行分子标记定位,有益于对多星纹性状的分子标记辅助选择和对该基因的定位克隆研究。利用家蚕雌性染色体在减数分裂过程中不发生交换的特点,采用幼虫斑纹为素斑(p)的家蚕品系C108,幼虫斑纹为多星纹(ms)的家蚕品系g02,组配正反交群体(g02×C108)F1♀×g02♂和g02♀×(g02×C108)F1♂,分别记作BC1F和BC1M,利用已经构建的家蚕SSR分子标记连锁图谱中第12连锁群上的18对SSR标记引物在亲本间进行多态性筛选。BC1F群体中的普通斑个体均表现出与(g02×C108)F1相同的杂合型带型;而所有多星纹个体的带型与亲本g02一致,为纯合型。结果筛选出S1206、S1208、S1210、C5553S3共4个与家蚕ms连锁的SSR标记。利用BC1M群体构建家蚕ms及其连锁的SSR标记遗传连锁图,连锁图的图距为34.5 cM,4个SSR标记及ms的排列次序为S1206—S1208—S1210—C5553S3—ms,ms位于34.5 cM处,与ms最近的标记为C5553S3,遗传距离为12.4 cM。依据该SSR标记遗传连锁图谱可对ms进一步精确定位。

应用GUS基因研究弗氏中华根瘤菌的结瘤及效果

应用GUS(葡萄糖苷酶 )基因标记技术将标记基因GUS导入受体菌S .fredii8855,标记菌株形成的根瘤可被GUS染色缓冲液染成蓝色 ,而土著菌形成的根瘤不能着色 .由此即可十分简便地确定土著菌的影响程度 .盆栽试验表明 ,S .fredii 8855的结瘤抗酸碱能力高于土著菌 ,能在土壤中较大范围内迁移 .当它的根瘤占有率不小于 43%时 ,接种能显著提高大豆产量 ,大豆产量与根瘤占有率呈正相关 (r=0 .98) ,而与总瘤数关系不大 (r=0 .1 3) .土壤N素显著抑制其结瘤 ,补加P能缓解这种抑制作用 .

甘蓝型油菜核不育材料育性基因的RAPD标记

通过BSA法,对甘蓝型油菜核不育材料S45A的育性基因进行分子标记,在980个随机引物中,找到了与可育基因连锁的2个RAPD标记UBC158-600、UBC187-600,其遗传图距分别为9.564cM(LOD,21.495)、17.700cM(LOD,13.244)。

牙鲆群体Idh-1基因座位杂合型个体选择性优势

利用淀粉凝胶水平电泳法分析了人工牙鲆种苗群体的异柠檬酸脱氢酶同工酶 (IDH) .对牙鲆材料分析得知 Idh- 1基因座位只存在 A、B两个等位基因 ,而且在 2 3个样品群中 ,有 19个样品群呈现 A、B这两个等位基因所决定的基因型的杂合型个体过剩现象 ,表现出杂合基因型的选择性优势 .设定这 19个呈杂合型过剩样品群的死亡率为零 ,即以杂合型 A/ B的成活率为 10 0 %来计算其纯合型的成活率 ,得到纯合型个体 A/ A和 B/ B的成活率分别为 6 9.2 %和 75 .2 % ;从个体的标准体长上看 ,在表现为杂合型个体过剩的 19个样品群中 ,15个样品群的杂合型个体 (A/ B)大于纯合型个体 (B/ B) .其结果反映了牙鲆人工养殖放流群体的 Idh- 1的基因型与成活率及生长存在相关性 .

GUS基因标记法对慢生花生根瘤菌竞争结瘤和接种效果的研究

应用GUS基因标记技术,可简便、快速、准确、原位、直观地确定标记花生根瘤菌株形成的根瘤,从而方便地研究标记菌株与土著根瘤菌的竞争结瘤能力。无氮水培试验表明,标记菌株gusA4-5、gusA2-9分别与土著菌混和接种占瘤率为71.4%、77.0%。盆栽试验表明,接种供试菌株Spr4-5、Spr2-9占瘤率分别为57.9%、63.0%,比对照极显著增产52.5%、22.7%;接种Spr4-5比Spr2-9极显著增产24.2%。初步说明两个供试菌株的竞争结瘤力比土著根瘤菌强,菌株Spr2-9强于Spr4-5;Spr4-5比Spr2-9有效性高,是结瘤适量,竞争结瘤能力强的高效菌株。

eGFP标记肿瘤细胞小鼠模型的建立与应用

目的:以携带绿色荧光蛋白基因(eGFP)的重组逆转录病毒(RV)标记肿瘤细胞,建立小鼠体内长期、系统肿瘤细胞研究模型,并初步探讨其应用。方法:制备高滴度eGFP-RV,感染小鼠白血病P388细胞,有限稀释法获得eGFP+的单细胞克隆;在体外和DBA/2小鼠体内,分别以流式细胞术、荧光倒置显微镜、冰冻切片和普通病理切片、半固体集落培养和PCR等方法,观察小鼠体内eGFP标记肿瘤细胞的效率、定位和时效。结果:eGFP基因导入率达80.2%,经克隆筛选后eGFP+率>99.2%。P388-eGFP细胞体外传代3个月后eGFP+率为95.2%,体内序贯接种(56.3±1.25)d后eGFP+率为(93.3±0.50)%(n=3)。eGFP基因导入未影响P388细胞的体内外生物学特性。多聚甲醛灌注固定法和液氮速冻法可有效保存组织中的荧光,灌注固定法制备的标本适用于多种病理和组化染色观察;外周血、肝、脾、脑等脏器中eGFP+细胞的分布、增殖,可用流式细胞仪和荧光显微镜等动态、定量观察,并可通过外周血的荧光细胞变化动态观察肿瘤细胞对治疗的反应;无菌获得的eG-FP+细胞可用于体外培养或体内序贯移植;PCR等技术可提高微量肿瘤细胞检测的敏感性。结论:成功建立的模型可在体内外以多种方法长期、动态、敏感地追踪观察荧光标记的肿瘤细胞,可广泛应用于肿瘤和细胞组织工程等领域。

含发光酶基因的转座子质粒载体的改造及向根瘤菌HN01的转座

将从自杀性重组质粒pDB30上分离的3．6kb含卡那霉素抗性基因和发光酶基因（luxAB）的BglⅡ酶切片段，克隆到小Mr的高拷贝质粒pIJ2925上，构成新的质粒，pHNLX1011；然后将pHNLX1011经BglⅡ部分酶切，酶连在含蔗糖酶基因（sacB）的自杀性重组质粒载体pMH1701上，载体分别采用BglⅡ酶切和BamHⅠ酶切．连接转化后共得到4种重组质粒类型的菌株，它们具有不同发光活性；将它们分别与快生型大豆根瘤菌HN01进行三亲本杂交，发现它们的转座频率均较pDB30高．对经转座标记后的根瘤菌进行发光活性检测，只有pHNC3质粒所转座的根瘤菌浇具有较强发光活性．所得发光根瘤菌衍生菌株能在野大豆和栽培大豆黑农39根际形成正常根瘤，能用X光片记录下根瘤的发光活性．

新辅助化疗或放疗对乳腺癌组织乳腺癌特异性基因1表达水平变化研究

目的检测乳腺癌特异性基因1（BCSG1）在放、化疗前后乳腺癌组织中mRNA的表达差异，并以此来探讨BCSG1在乳腺癌治疗中的意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应检测40例化疗前后的乳腺癌组织以及30例放疗前后乳腺癌组织的BCSG1 mRNA表达。结果化疗组40例乳腺癌组织中有33例表达BCSG1，放疗组30例乳腺癌组织有26例BCSG1 mRNA表达，并且放疗前后和化疗前后BCSG1表达比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论放疗以及化疗对乳腺癌的BCSG1 mRNA表达水平有明显的影响，BC—SG1可以作为乳腺癌治疗疗效评价指标之一。

快速导入小麦多个优质HMW-GS基因方法和效果的研究

采用回交转育、特异性PCR分子标记辅助选育与蛋白质电泳筛选,结合温室和大田种植,将Soissons携带的多个优质HMW-GS基因导入高产小麦品系1718。特异性PCR检测BC1、BC2、BC3和BC3F1代随机群体的Dx5基因分布符合1对等位基因的遗传分离比例1:1;从BC2代到BC3F2代,结合HMW-GSDx5基因分子标记辅助选育和其它农艺性状常规选择,筛选出携带优质HMW-GSDx5基因、又与轮回亲本农艺性状相似的单株后,进行回交或者自交;在BC3F2代中已获得携带优质HMW-GSDx5基因、农艺性状稳定、且又与轮回亲本相似的株系1718-4;在BC3F2后代中,蛋白质电泳筛选出携带1、7+8、5+10亚基的单株1718-4-6和1718-4-10。两新品系1718-4-6和1718-4-10保留了轮回亲本高产特性,且品质性状明显提高。在聚合多种优质HMW-GS基因和改良高产小麦品系品质育种中,回交转育、HMW-GS基因分子标记辅助选育与高代蛋白质电泳筛选相结合是一种定向、快速、有效的育种途径。

非荧光标记基因芯片法检测转基因成分的研究

开发了一种可同时检测四种转基因作物的高灵敏度非荧光标记(生物素标记)基因芯片方法。应用该方法检测了4种含一定浓度转基因产品(包括转基因大豆Roundup Ready、转基因玉米MON810、Bt11和转基因油菜RT73)的有证标准物质,并做了检测灵敏度试验。结果表明,该技术可同时有效检测这4种转基因产品中的11个目标基因,检测低限可达0.1%以下,在现有转基因产品检测方法(包括荧光标记基因芯片)中达到或超过最低水平,但其检测成本远低于荧光标记基因芯片法。

以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法

采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时（A方法）,50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进行卡那霉素滴注筛选时（常规方法,B方法）,80～100 mg/L的卡那霉素能较好地抑制非转化小麦幼苗的正常生长。相对于B方法的常规筛选方法,A方法具有材料对卡那霉素敏感性高、筛选周期短而且筛选结果可靠性高等优点,是一种高效的以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦的筛选方法。

大麦雄性不育性的遗传和基因定位

用大麦7条染色体标记性状的材料作父本,与自然突变雄性不育株90-0713和90-0732配置14个杂交组合。通过F_1和F_2代的性状表现研究雄性不育性的遗传和基因定位。各组合的F_1代均可育,F_2代的可育株和不育株的分离符合3:1的比例,表明雄性不育性受隐性单基因控制。90-0713的雄性不育基因位于第1条染色体上与红茎基因(Rs)连锁遗传,其交换率为14.46±1.88％,而90-0732的雄性不育基因则位于第3条染色体上与黄条纹叶基因(yst)连锁遗传,其交换率为30.58±4.19％。

应用luxAB基因和gusA基因标记大豆根瘤菌的效果

应用发光酶基因ｌｕｘＡＢ和β－葡萄糖苷酶基因ｇｕｓＡ分别对快生型大豆根瘤菌ＨＮ０１进行了标记，研究了这两种标记系统的检测方法和检测效果，并对这两种标记系统在大豆根瘤菌中的应用进行了分析比较。