志贺菌主动外排泵acrAB-tolC及调控基因marOR突变与耐药的关系

目的:研究志贺菌的耐药状况,检测临床分离志贺菌主动外排泵acrAB-tolC基因及调控基因marOR的突变情况,并探讨其与耐药性的关系。方法:对159株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明6种药物的药敏试验和有机溶剂耐受试验,对其acrAB-tolC基因和marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析。结果:159株临床分离的志贺菌属细菌筛选出4株敏感株、18株耐单药株和137株耐多药株,耐多药率为86.2%(137/159);159株中有122株对有机溶剂耐受,耐受率为76.7%(122/159);159株均扩增出acrAB-tolC基因和marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析,155株耐药菌株中,marOR基因的突变率为17.4%,acrA基因的突变率为5.8%,acrB基因的突变率为3.9%,tolC基因的突变率为2.6%;4株敏感株未发现marOR、acrA、acrB和tolC基因突变。结论:临床分离的志贺菌耐多药率和有机溶剂耐受率均较高,且存在较高的marOR基因突变率。

志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与耐药的关系

目的 探讨临床分离志贺菌调控基因marOR的突变对细菌耐药性的影响.方法 利用重叠延伸PCR扩增4个碱基缺失的marOR基因,与T载体连接后转入DH5α,得到4个碱基缺失的marOR基因克隆株 4个碱基缺失联合3个点突变的marOR基因克隆株是扩增具有该突变菌株的marOR基因,然后与T载体连接后转入DH5α所得 通过凝胶电泳图谱和核酸序列分析证实克隆成功与否 检测DH5α、转入T载体后的DH5α[DH5α（T）]、完整marOR基因克隆株[DH5α（marOR）]、4个碱基缺失的marOR基因克隆株[DH5α（marOR-ACTT）]及4个碱基缺失联合3个点突变的marOR基因克隆株[DH5α（marOR-CATT＋3m）]对多种抗生素的耐药性,并进行比较.结果 按抑菌环直径相差5 mm以上为抗生素耐药性有差别：与DH5α（T）比较,DH5α（marOR-ACTT）对链霉素、妥布霉素、先锋V、头孢氨苄的耐药性增加,DH5α（marOR-ACTT＋3m）对链霉素和四环素的耐药性增加 与DH5α（marOR）比较,DH5α（marOR-ACTT）和DH5α（marOR-ACTT＋3m）对链霉素、四环素、氯霉素、先锋V、左氟沙星、环丙沙星和氟哌酸的耐药性增加 DH5o（marOR-CATT）与DH5α（marOR-CATT＋3m）相比对除甲氧苄啶外的试验所用抗生素的抑菌环直径无明显差异.结论 marOR基因第1376～1379处的4个碱基缺失,使志贺菌对部分抗生素的耐药性增加 marOR基因第1411、1417、1435处的点突变对志贺菌的耐药性的影响较小.

志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与泵表达水平的关系

目的了解临床分离志贺菌调控基因marOR的突变情况，并探讨其与主动外排泵表达水平的关系。方法对100株临床分离志贺菌和本实验室筛选的敏感菌及标准株的marOR基因进行聚合酶链反应（PCR），对扩增产物进行限制性内切酶酶切与单链构象多态性（SSCP）分析，对marOR基因突变株进行测序，利用RT-PCR测定其泵基因acrA、acrB和tolC的表达水平，并对其进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、庆大霉素、诺氟沙星、复方新诺明等6种药物的药敏试验。结果100株临床分离志贺菌、敏感株及标准株均扩增出marOR基因，未发现该基因缺失株；SSCP分析发现marOR基因的突变率为23％；随机选择11株marOR基因突变株和1株敏感株及标准株进行测序，其中有9株存在4个碱基的缺失和3个位点的碱基突变，RT-PCR分析表明11株marOR基因突变株的acrAB—tolC主动外排泵表达水平高于敏感株和标准株，且该11株均为多重耐药株。结论在该实验中志贺菌marOR基因突变率较高，其突变株的acrAB—tolC主动外排泵基因高表达，可能增加耐多药性。

志贺菌敏感株诱导耐药与marOR基因突变关系

目的对志贺菌敏感株进行诱导使其耐多药,研究其诱导耐药前后marOR基因的差异。方法用4类抗生素的次抑菌浓度对临床分离鉴定的志贺菌敏感株进行诱导耐多药试验。对志贺菌敏感株及诱导耐多药株的marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,测序比较其诱导耐药前后marOR基因序列的差异。结果成功获得志贺菌诱导耐多药株,命名为YD株;其最小抑菌浓度(MIC)分别为初始菌株的6～8倍;该诱导耐药株对庆大霉素、诺氟沙星、磺胺甲基异恶唑、头孢噻吩等均耐药;测序结果发现诱导耐药株marOR基因YD株有6个位点出现突变,其中5个为同义突变,1个为错义突变(1630位点A→G,赖氨酸→精氨酸)。结论 marOR基因的突变可能是志贺菌诱导耐药的调控机制之一。

耐喹诺酮类大肠埃希菌耐药机制的研究

目的探讨耐喹诺酮类大肠埃希菌的耐药机制。方法收集天津市第一中心医院2004年3月-2005年10月临床分离的大肠埃希菌,并随机选取40株作为研究对象,通过K-B药片试纸法和微量稀释法测40株目的菌株的耐药性;PCR扩增耐药株的gyrA QRDR区和parC基因,进行PCR-SSCP分析;同时,PCR扩增marOR基因,在耐药株中随机选取进行测序,检测marOR基因突变情况。结果37株对耐喹诺酮类菌株均出现了gyrA基因突变,除常见氨基酸改变外,还发现Asp87→Asn、Ala84→Pro;36株耐喹诺酮菌株发生了parC基因突变,只对萘啶酸耐药,对环丙沙星中介、氧氟沙星、加替沙星敏感的ECO24未出现parC基因突变;只对氟喹诺酮类耐药的ECO11未出现marOR区突变;存在多重耐药的ECO5 marOR区发现6处突变,且1 879 bp处的突变改变了marOR的终止密码子。结论gyrA和parC基因突变引起大肠埃希菌产生耐药,gyrA基因突变是产生对氟喹诺酮类耐药的主要原因,parC基因突变可引起菌株对氟喹诺酮类药物的高水平耐药,marOR的多位点突变在多重耐药机制中有一定的作用。

志贺菌临床分离株耐多药与调控基因突变关系

目的研究志贺菌的耐多药性及其耐多药调控基因acrR、marOR的变异性。方法对56株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、环丙沙星、诺氟沙星等5种药物的药敏试验,对其acrR、marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,TaqI限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析。结果筛选出35株耐多药株与11株敏感野生株。56株临床分离的志贺菌属细菌的耐多药率为62.5%;35株耐多药株与11株敏感野生株均扩增出acrR、marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析发现,acrR基因突变率为6.52%,marOR基因突变率为10.87%,11株敏感野生株均未检出以上2种基因突变。结论志贺菌耐多药率较高,acrR、marOR基因突变可能是其耐多药的调控机制之一。

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。

非靶位基因突变及外膜通透性的改变对大肠杆菌喹诺酮耐药和多重耐药的影响

目的 :探讨非靶位基因突变及外膜通透性改变对大肠杆菌喹诺酮类耐药和多重耐药的影响。方法 :PCR扩增大肠杆菌marOR区并进行DNA测序分析 ,提取外膜蛋白进行组成型分析。结果 :在R4 1 0菌株中 ,存在两处新位点的突变 :1 870 (T→C ,Val→Ala)和 1 879(A→C ,terminator→Ser)。 3株对喹诺酮类药物高耐且同时多耐的菌株均存在OmpF缺失。结论 :多重耐药基因marOR区内的突变可能导致MarA表达增加和外膜蛋白组成型改变(OmpF缺失 ) 。

原子吸收法测定荠菜和苦菜中微量元素

用灰化法处理样品,配制混合标准系列溶液,采用原子吸收法测定了野生荠菜和苦菜中12种微量元素,方法简便、准确.分析比较了营养和有毒元素含量,对Pb,Cd含量超标原因进行了探讨.

黄河三角洲2种菊科植物提取物及其复配的抑菌活性

[目的]明确2种菊科植物的抑菌活性。[方法]以干苦菜、黄花蒿作为供试材料,大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌作为供试细菌,采用滤纸片法通过抑菌圈的大小研究干苦菜、黄花蒿及其复配提取液的抑菌活性。[结果]在供试浓度为0.1 g/m L时,2种植物的提取液及2种植物的复配混合液对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,并且每1种植物提取液对至少1种菌的抑菌率大于70%,其中黄花蒿提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌率大于80%,苦菜提取液对大肠杆菌的抑菌率大于85%,苦菜与黄花蒿提取液的复配混合液对大肠杆菌的抑菌率约为100%。[结论]苦菜、黄花蒿有较好的抑菌活性,可进一步研究开发。

志贺菌临床分离多重耐药株mar基因突变研究

目的研究志贺菌mar基因突变与其多重耐药的关系。方法对54株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄西林、环丙沙星、诺氟沙星等5种药物的药敏试验和有机溶剂耐受实验（OST），对其mar基因的marOR区进行聚合酶链反应一单链构象多态性分析（PCR-SSCP）及核酸序列分析。结果筛选出35株多重耐药株，多重耐药率为64．8％。54株志贺菌株中有38株对有机溶剂耐受，其中有33株为多重耐药株，3株为单耐药株，仅有2株为敏感野生株。54株志贺菌临床分离株均扩增出mar基因，未发现该基因缺失株，SSCP分析发现，35株多重耐药株中marOR基因突变率为14．29％。核酸测序分析发现志贺菌多重耐药株marO区基因1376～1379处4个碱基缺失，导致其后编码氨基酸出现移码突变，而标准株S51250和敏感野生株不存在该移码突变；marR区基因存在10处点突变，第1752碱基（G→A，Gly→Ser）和第1854碱基（T→C，Tyr→His）两处点突变导致编码氨基酸改变，但该突变也同时存在于标准株和敏感野生株中，余者均为无义突变，且有些核苷酸改变也发生于敏感野生株或同时存在于多株菌株中。结论marO区基因突变可能是志贺菌多重耐药的调控机制之一。