Maternally expressed gene 3 regulates retinal neovascularization in retinopathy of prematurity

The mouse model of oxygen induced retinopathy is suitable for the study of various retinal neovascularization diseases,including retinopathy of prematurity.The maternally expressed gene 3(MEG3)has been demonstrated to have an inhibitory effect on diabetic retinopathy.In this study,we investigated the role of MEG3 overexpression in oxygen-induced retinopathy in mice.The results showed that MEG3 overexpression effectively inhibited the production of retinal neovascularization in oxygen-induced retinopathy mice.It acts by down-regulating the expression of phosphoinositide 3-kinase,serine/threonine kinase,and vascular endothelial growth factor and pro-inflammatory factors.MEG3 overexpression lentivirus has a future as a new method for the clinical treatment of retinopathy of prematurity.The animal experiments were approved by the Animal Ethics Committee of Shengjing Hospital of China Medical University,China(approval No.2016PS074K)on February 25,2016.

上调lncRNA MEG3对大鼠心肌细胞系缺氧/复氧损伤的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)对大鼠心肌H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)的保护作用及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路的关系。方法:将H9c2细胞分为Control组、H/R组、H/R+Ad-绿色荧光蛋白(GFP)组、H/R+Ad-MEG3组、H/R+Ad-MEG3+si-NC组及H/R+Ad-MEG3+si-Nrf2组。实时荧光定量逆转录酶聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测MEG3表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;蛋白质印迹(Western Blot)检测Nrf2/ARE通路相关蛋白表达。结果:与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、细胞中ROS水平及Nrf2、血红素氧化酶1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白水平均增高,而细胞活力、细胞中MEG3表达水平、SOD和CAT活性均降低(P<0.05)。MEG3过表达可部分逆转H/R对H9c2细胞和Nrf2/ARE通路蛋白的影响(P<0.05);敲低Nrf2可削弱MEG3过表达对H/R损伤的保护作用(P<0.05)。结论:MEG3过表达可抑制氧化应激和细胞凋亡减轻H/R心肌损伤,可能与激活Nrf2/ARE抗氧化信号有关。

长链非编码RNA-MEG3在人心脏微血管内皮细胞缺氧损伤中的作用

目的研究长链非编码RNA-MEG3在人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)缺氧损伤中的作用。方法将HCMEC分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组及缺氧/复氧联合MEG3敲减(H/R+siMEG3)组。荧光定量PCR检测MEG3及炎性因子的表达情况[白介素1β(IL-β)、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF-α)];CCK-8检测HCMEC细胞的增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western blotting检测PI3K/AKT/eNOS信号通路表达变化,ELISA检测一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、血管内皮生长因子(VEGF)和活性氧(ROS)表达水平。结果利用qPCR检测对照组及H/R组细胞MEG3表达,结果发现:H/R组MEG3相对表达倍数[(6.87±0.239)倍]较对照组MEG3表达倍数(1.00±0.026)倍显著升高(n=3,t=42.32,P<0.0001),提示MEG3可能在心脏微血管内皮细胞IRI中起到重要作用。H/R组细胞与对照组比较,细胞增殖活性显著减弱(P<0.01);而H/R+siMEG3组与H/R组比较,细胞增殖活性进步受到抑制(P<0.01)。H/R组较对照组PI3K、AKT及eNOS磷酸化水平显著减低,而H/R+siMEG3组细胞较H/R组磷酸化水平更低(P<0.05)。H/R组与对照组比较,NO、SOD及VEGF显著减低,而ROS水平升高(P<0.05);而H/R+siMEG3组与H/R组比较,NO、SOD及VEGF水平进步下降,ROS升高显著。利用qPCR检测各处理组细胞相关炎症基因表达,结果发现:H/R组较对照组基因表达显著升高(P<0.05);H/R+SiMEG3组较H/R组基因表达进一步升高(P<0.01)。结论长链非编码RNA-MEG3在心脏微血管内皮细胞H/R损伤过程中起到重要保护作用,靶向提升MEG3水平有望成为减缓心脏微血管IRI的潜在治疗靶点。

急性缺血性脑卒中患者血清长链非编码RNA母系表达基因3和Zeste同源物增强子-2表达与神经功能损伤的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)与Zeste同源物增强子-2(EZH2)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达水平及其与神经功能损伤之间的关系。方法选取延安市人民医院2021年1月至2022年11月收治的92例AIS患者为脑卒中组,92例健康体检者为对照组,根据NIHSS评分将脑卒中组患者分为致残性损伤组19例,非致残性损伤组73例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应、酶联免疫吸附法分别检测血清lncRNAMEG3、EZH2水平。采用Spearman相关分析法进行AIS患者血清lncRNAMEG3、EZH2表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分之间的相关性分析;采用多因素Logistic回归分析AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、EZH2水平对AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断价值。结果脑卒中组患者血清lncRNA MEG3、EZH2表达水平均高于对照组(t=11.817、11.542,P<0.05)。Spearman相关分析显示,AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.540、0.603,P<0.01)。致残性损伤组体质量指数、吸烟史占比、甘油三酯、总胆固醇、同型半胱氨酸、发病-到院时间(ODT)、lncRNAMEG3、EZH2水平均高于非致残性损伤组(t/χ2=2.103、5.050、9.121、5.585、2.276、5.448、4.638、4.682,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,甘油三酯、总胆固醇、lncRNA MEG3、EZH2以及ODT均是AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素(OR=4.853、4.277、2.674、3.052、3.901,P<0.05)。lncRNA MEG3、EZH2联合诊断AIS患者合并神经功能致残性损伤的曲线下面积(AUC)大于lncRNAMEG3以及EZH2单独诊断的AUC(Z=2.626、2.954,P<0.01),敏感度、特异度分别为94.74%、82.15%。结论AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平均上升,与AIS患者神经功能损伤程度均正相关,可用作AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断指标,且联合诊断效果更好。

长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠模型视网膜血管内皮细胞凋亡的影响。方法取SPF级雄性SD大鼠以及体外培养的人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC),均随机分为对照组、模型组、LncRNA MEG3过表达组、miR-145-5p agomir组、共转染(LncRNA MEG3过表达质粒+miR-145-5p agomir)组、共转染阴性对照(LncRNA MEG3空载质粒+miR-145-5p agomir阴性对照质粒)组,采用腹腔注射链脲佐菌素建立DR大鼠模型,25 mmol·L^(-1)葡萄糖诱导DR细胞模型。对照组大鼠腹腔注射柠檬酸缓冲液,对照组细胞以正常培养基培养,将大鼠与细胞均分组进行处理,以LncRNA MEG3质粒、miR-145-5p agomir转染处理后,通过伊文思蓝(EB)检测大鼠视网膜血管通透性;TUNEL染色检测大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡率;EdU染色与Hoechst 33258染色分别检测细胞增殖、凋亡情况;依照试剂盒测量大鼠房水中及HRMEC炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量;实时荧光定量PCR实验检测HRMEC及大鼠视网膜组织miR-145-5p表达;蛋白免疫印迹法检测HRMEC及大鼠视网膜组织凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)表达;双荧光素酶实验验证HRMEC中LncRNA MEG3对miR-145-5p的靶向调节作用。结果LncRNA MEG3过表达组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组大鼠玻璃体中EB含量、视网膜血管内皮细胞凋亡率及房水中IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LncRNA MEG3过表达组HRMEC增殖率均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组HRMEC增殖率均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05),HRMEC凋亡率及IL-6、IL-1β含量均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。LncRNA MEG3过表达组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均低于模型组、共转染组,Bcl-2表达均高于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);miR-145-5p agomir组HRMEC、大鼠视网膜组织miR-145-5p及Bax表达均高于模型组、共转染组,Bcl-2表达均低于模型组、共转染组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3过表达质粒组细胞相对荧光素酶活性(0.33±0.05)低于转染野生型miR-145-5p报告质粒+LncRNA MEG3空载质粒组(1.02±0.21),差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA MEG3可通过靶向下调miR-145-5p表达,抑制炎症反应,减轻DR大鼠视网膜血管内皮细胞凋亡,促使HRMEC DR细胞模型存活,改善DR大鼠视网膜血管屏障功能。

熟地黄多糖调控lncRNA MEG3对碘乙酸钠致骨关节炎软骨细胞损伤的保护作用

目的探讨熟地黄多糖(RGP)调控长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)对碘乙酸钠(MIA)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响。方法培养大鼠软骨细胞,不同浓度MIA(0、1、2、4、8μmol/L)诱导建立软骨细胞损伤模型,并给予不同浓度RGP(50、100、200、400、800 mg/mL)处理筛选合适的实验浓度。实验分为正常组、MIA组、RGP组、RGP+si-NC组、RGP+si-MEG3组,Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞活力;Hoechst 33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中MEG3、金属蛋白酶13(MMP-13)、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)和蛋白聚糖(ACAN)mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、BAX、BCL-2、caspase3蛋白表达水平。结果MIA以剂量依赖性方式降低软骨细胞活力,诱导细胞凋亡,并降低MEG3和COL2A1 mRNA、ACAN mRNA水平,升高MMP-13 mRNA水平(P<0.05)。100、200、400、800 mg/mL RGP可升高软骨细胞活力及MEG3水平(P<0.05)。与正常组相比,MIA组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3蛋白水平升高(P<0.05);与MIA组相比,RGP组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2蛋白水平升高,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3蛋白水平降低(P<0.05);敲低MEG3可减弱RGP对MIA诱导的软骨细胞损伤的保护作用。结论RGP可促进软骨细胞ECM合成,并抑制细胞凋亡,减轻MIA诱导的软骨细胞损伤,其作用机制可能与上调MEG3表达,诱导PI3K/AKT通路活化有关。

LncRNA MEG3调控microRNA-181b-5p/TIMP3对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)调控微小RNA-181b-5p(microRNA-1816-5P,简称miR-181b-5p)/组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。方法收集2019年12月—2021年12月本院所收治的20例前列腺癌患者前列腺癌组织及其对应癌旁组织;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织MEG3、miR-181b-5p表达;将前列腺癌细胞(PC3细胞)随机分为对照组(未处理)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1-MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG)、pcDNA3.1-MEG3+miR-NC组(pcDNA3.1-MEG3与miR-NC共转染)、pcDNA3.1-MEG3+miR-181b-5p mimic组(pcDNA3.1-MEG3与miR-181b-5p mimic共转染);qRT-PCR检测细胞MEG3、miR-181b-5p表达;MTT实验、Transwell实验、划痕实验分别检测PC3细胞活力、侵袭及迁移能力;Western blot检测PC3细胞TIMP3、基质金属蛋白酶(MMP)9、MMP2蛋白表达;双荧光素酶实验检测MEG3、miR-181b-5p、TIMP3的靶向关系。结果与癌旁组织的表达相比,MEG3在前列腺癌组织(0.37±0.05 vs.1.00±0.04)及细胞(0.31±0.06 vs.1.00±0.01)中表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组miR-181b-5p表达(0.26±0.04 vs.1.00±0.02)、细胞存活率(53.60±5.22 vs.100.00±0.00)、侵袭细胞数(62.33±9.85 vs.162.34±21.30)、细胞迁移率(32.85±3.80 vs.75.22±5.96)、MMP9(0.61±0.08 vs.1.62±0.23)、MMP2(0.73±0.10 vs.1.20±0.16)表达显著降低,MEG3(2.31±0.36 vs.1.00±0.01)、TIMP3蛋白(1.32±0.24 vs.0.53±0.08)表达显著增加(P<0.05);miR-181b-5p过表达可逆转上述指标变化(P<0.05);miR-181b-5p与MEG3、TIMP3间均存在靶向关系。结论lncRNA MEG3过表达可通过抑制miR-181b-5p来促进TIMP3表达,从而抑制PC3细胞侵袭、迁移。

lncRNA MEG3调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路影响三阴性乳腺癌对紫杉醇的敏感性

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)调控含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family,Pyrin domain containing protein 3,NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)对紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响。方法:通过逐渐增加PTX剂量间歇作用的方法诱导TNBC耐药细胞MDA-MB-231/R,qRT-PCR检测lncRNA MEG3表达;将MDA-MB-231细胞分为对照组(未转染+PTX)、Vector组(空载体+PTX)、pcDNA3.1-MEG3组(pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX)、pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组(pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX+5μmol/L NLRP3抑制剂BAY11-7082),qRT-PCR检测转染后lncRNA MEG3表达;CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖情况;通过免疫荧光染色和扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察MDA-MB-231细胞焦亡情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞中NLRP3/caspase-1/GSDMD通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤质量。结果:与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/R细胞中lncRNA MEG3表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著增加,IC50、肿瘤质量显著降低(P<0.05);与pcDNA3.1-MEG3组相比,pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著降低,IC50、肿瘤质量显著增加(P<0.05)。结论:上调lncRNA MEG3表达可通过激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路,促进MDA-MB-231细胞焦亡,以此增加TNBC对PTX的敏感性。

过敏性哮喘患儿血清lncRNA MEG3表达与Th17/Treg平衡的关系

目的 探讨过敏性哮喘患儿外周血长链非编码核糖核酸母系表达的基因3(lncRNA MEG3)表达与辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)失衡的关系。方法 选择2018年1月至2022年1月西安交通大学第一附属医院(以下简称“我院”)收治的75例过敏性哮喘患儿为哮喘组,另选择我院儿童保健门诊的49名健康儿童为对照组。检测两组Th17细胞百分比、Treg细胞百分比、Th17/Treg比值,lncRNA MEG3表达、白细胞介素(IL)-17、IL-22、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)水平及第1秒用力呼气容积(FEV1),计算FEV1与用力肺活量比值(FEV1/FVC)、FEV1占预计值百分比(FEV1%pred)。分析lncRNA MEG3表达与Th17/Treg及其细胞因子、肺功能的相关性。结果 哮喘组lncRNA MEG3表达、Treg细胞百分比低于对照组,Th17细胞百分比、Th17/Treg高于对照组(P<0.05)。哮喘组IL-17、IL-22水平高于对照组,TGF-β、IL-10水平低于对照组(P<0.05)。哮喘组FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred低于对照组(P<0.05)。哮喘组患儿lncRNA MEG3表达与Treg细胞百分比、IL-10、TGF-β、FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred呈正相关(r=0.502、0.415、0.491、0.493、0.428、0.497,P<0.05),与Th17细胞百分比、Th17/Treg、IL-17、IL-22呈负相关(r=-0.501、-0.727、-0.631、-0.452,P<0.05)。结论 过敏性哮喘患者外周血lncRNA MEG3表达降低,且与Th17/Treg失衡及肺功能低下有关。

血清DNMT1和lncRNA MEG3表达水平与帕金森病的关联性研究

目的探讨血清DNA甲基转移酶1(DNMT1)、长链非编码RNA人类母系表达基因3(lncRNA MEG3)表达水平与帕金森病(PD)的关联性。方法招募2020年3月至2023年1月青海红十字医院神经内科收治的PD患者106例作为PD组,另选择同期健康体检者103名作为对照组。比较两组的临床资料,分析PD患者血清DNMT1、lncRNA MEG3表达水平与临床指标的相关性。采用多因素logistic回归分析影响PD发生的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清DNMT1、lncRNA MEG3水平对PD的诊断价值。结果PD组血清DNMT1水平高于对照组,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及lncRNA MEG3水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PD患者血清DNMT1水平与TC、TG、LDL-C水平呈负相关(P<0.05),与统一帕金森病评定量表(UPDRS)Ⅰ评分、UPDRSⅡ评分、UPDRSⅢ评分、Hoehn-Yahr(H-Y)分期呈正相关(P<0.05)。lncRNA MEG3水平与TC、TG、LDL-C水平呈正相关(P<0.05),与UPDRSⅠ评分、UPDRSⅡ评分、UPDRSⅢ评分、H-Y分期呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的血清DNMT1水平是促进PD发生的独立危险因素(P<0.05),较高的lncRNA MEG3水平是抑制PD发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清DNMT1、lncRNA MEG3水平具有诊断PD的应用价值(P<0.05),且联合两指标可进一步提高诊断效能[AUC(95%CI)=0.906(0.865~0.947)],灵敏度和特异度分别为80.21%和89.34%。结论PD患者血清DNMT1呈高表达,lncRNA MEG3呈低表达,二者联合检测有助于临床诊断PD。

Meg3在全反式视黄酸诱发小鼠腭裂中的作用

目的:探索母系印迹基因3(Meg3)在全反式视黄酸(atRA)诱发腭裂中的作用。方法:妊娠第10天(GD10),将90只孕鼠随机分为atRA组和对照组(每组45只),分别给予100 mg/kg atRA和等体积的玉米油灌胃。HE染色观察GD13、GD14、GD15胎鼠腭部发育情况,BrdU荧光染色观察GD13、GD14、GD15胎鼠腭突间充质细胞增殖情况。在GD14,荧光原位杂交和实时荧光定量PCR法检测两组胎鼠腭突间充质细胞中Meg3的定位和表达,蛋白印迹法检测Smad通路相关蛋白磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad2、Smad4和Smad7的表达,RNA结合蛋白免疫沉淀实验检测Meg3基因与Smad2蛋白结合情况。结果:Meg3基因主要定位于胎鼠腭突间充质细胞的细胞核。与对照组相比,在GD14,atRA组细胞中Meg3 mRNA表达量升高(P<0.001),p-Smad2和Smad4蛋白表达水平降低(P<0.05),而Smad7蛋白表达水平增加(P<0.001);两组细胞中Meg3基因均可与Smad2蛋白结合,Meg3 mRNA相对表达量atRA组大于对照组(P<0.001)。结论:atRA可能通过促进Meg3与Smad2的结合,影响TGF-β/Smad信号通路的激活,抑制胎鼠腭突间充质细胞的增殖,从而导致腭裂的发生。

褪黑素调控MEG3/miR-223/NLRP3轴对流感病毒感染小鼠模型肺损伤的影响

目的:探究褪黑素(MT)调控母体表达基因3(MEG3)/微小RNA-223(miR-223)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴对流感病毒感染小鼠模型肺损伤的保护情况。方法:50只小鼠按随机数字法分为对照组、模型组、MT低、中、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余各组以5×105 EID50剂量给予H7N9病毒悬浮液滴鼻,对照组给予等体积磷酸缓冲液滴鼻。造模后当天MT低、中、高剂量组分别腹腔注射15、30、60 mg/kg MT,对照组、模型组腹腔注射等体积生理盐水。末次给药24 h处死小鼠进行实验。所有小鼠检测肺指数;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态;ELISA检测肺组织中IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、IFN-β水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠肺组织中MEG3 mRNA、miR-223水平;蛋白免疫印迹检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)、pro-caspase-1蛋白水平。生物信息学预测和双荧光素酶实验检测MEG3与miR-223、miR-223与NLRP3的靶向关系。结果:病理结果显示模型组小鼠肺组织肺泡壁充血明显、腔内出现明显的炎症渗出及炎症细胞浸润明显;MT(低、中、高)剂量组随着MT剂量的升高,小鼠肺组织肺泡壁充血现象、腔内炎症渗出及炎症细胞浸润现象均得到改善。与对照组相比,模型组肺指数、肺组织中趋化因子、炎症因子、抗病毒因子、MEG3水平,NLRP3通路蛋白水平升高(P<0.05),miR-223水平降低(P<0.05);添加MT后抗病毒因子升高明显,其余指标均有所改善。miR-223与MEG3、NLRP3均存在靶向调控关系。结论:MT能够缓解H7N9流感病毒感染小鼠的肺损伤,可能与调控MEG3/miR-223/NLRP3轴缓解炎症有关。

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。

长链非编码RNA MEG3靶向Rac1抑制宫颈癌细胞增殖、迁移的实验研究

目的检测长链非编码RNA MEG3在宫颈癌细胞中的表达,检测MEG3表达对He La细胞增殖、迁移的影响及可能分子机制。方法采用荧光定量PCR(QPCR)检测正常宫颈上皮细胞Hcer Epic和宫颈癌细胞系C-33A、C4-1、Caski、Si Ha和He La中MEG3的表达; MEG3过表达质粒(MEG3)、阴性对照质粒(NC组)、MEG3+Rac1过表达质粒(MEG3+Rac1组)分别转染He La细胞,MTT法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测PCNA、E-cadenin、N-cadenin、Vimentin、Rac1蛋白表达。结果 QPCR结果显示,C-33A、C4-1、Caski、Si Ha和He La细胞中MEG3表达水平分别为0. 37±0. 044、0. 65±0. 075、0. 41±0. 071、0. 71±0. 053和0. 42±0. 081,均低于Hcer Epic细胞的1. 02±0. 064,差异具有统计学意义(P<0. 05)。MTT法结果显示MEG3组He La细胞增殖活力显著低于NC组; MEG3组的迁移细胞数为385±14,显著低于NC组的594±16(P<0. 05);与NC组比较,MEG3组PCNA、N-cadenin和Vimentin表达下调,E-cadenin表达上调。与MEG3组比较,MEG3+Rac1组显著上调Rac1蛋白表达,上调He La细胞增殖活力,增加迁移细胞数。结论 LncRNA MEG3可能通过靶向Rac1信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移。

长链非编码RNA MEG3在胃癌中的表达及其与预后的关系

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)在胃癌组织中的表达及其与预后的关系,并进一步探讨MEG3与凋亡相关蛋白P53、鼠双微基因2(murine double minute 2,MDM2)的相关性。方法:收集2012年9月至2013年6月青岛大学附属青岛市市立医院55例行手术治疗的胃癌切除标本(包括癌组织及对应的远端正常组织),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测胃癌组织中MEG3的表达,并分析其与临床病理参数的关系;应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测胃癌中P53、MDM2蛋白的表达水平,并分析其与MEG3的相关性。结果:lnc RNA MEG3在胃癌组织的相对表达水平(7.98±0.19)低于所对应的正常组织(9.47±0.18,P<0.05);在胃癌组织(r=-0.627,P<0.001)及远端正常组织(r=-0.807,P<0.001)中,P53与MDM2的表达呈负相关;P53与MEG3的表达呈正相关(r=0.591,P<0.05),MDM2与MEG3的表达呈负相关(r=-0.346,P<0.05);MEG3高表达者较低表达者中位生存期明显延长。结论:MEG3在胃癌发生发展过程中起抑癌基因的作用;MEG3与P53、MDM2在胃癌发生发展的生物学机制上有重要联系;检测MEG3的表达水平对胃癌预后有潜在价值。

MEG3和腺苷对HepG2细胞自噬和增殖的影响

目的:研究母系表达基因3(MEG3)过表达和腺苷对人肝细胞癌HepG2细胞自噬和增殖的影响,并探讨MEG3和腺苷影响HepG2细胞自噬的可能机制和抑制细胞增殖的效果。方法:常规培养HepG2细胞,分为对照组、MEG3组(MEG3慢病毒转染)、腺苷组(1 mmol/L腺苷处理)和MEG3+腺苷组(腺苷组中加入MEG3慢病毒转染)。Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量,CCK-8法观察细胞的活力,细胞计数仪检测活细胞数量。结果:与对照组比较,MEG3组和腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,mTOR表达增加,HepG2细胞的活力降低(P<0.05),自噬体减少。与MEG3组和腺苷组比较,MEG3+腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值进一步降低,mTOR表达进一步增加,HepG2细胞的活力进一步降低,自噬体减少更加显著(P<0.05或P<0.01)。MEG3组和腺苷组中HepG2活细胞数在24～72 h较对照组均明显降低(P<0.01),在MEG3+腺苷组中降低更为明显(P<0.01)。结论:MEG3过表达和低浓度腺苷可激活mTOR通路,抑制HepG2细胞自噬和增殖。MEG3增强了腺苷对HepG2细胞的作用。

lncRNA MEG3和lncRNA GAS5在多发性骨髓瘤血清中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)和生长特异抑制物5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)在多发性骨髓瘤患者血清中的表达及其与预后的关系。方法选取本院2014年1月至2016年1月收治的87例多发性骨髓瘤患者为研究对象,同时选取54名健康志愿者为对照。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测lncRNA MEG3、lncRNA GAS5的表达水平,分析其与多发性骨髓瘤患者临床及预后的关系。结果多发性骨髓瘤患者血清中lncRNA MEG3和lncRNA GAS5的表达水平均低于对照组(5.92±0.87 vs 9.13±1.26,t=17.882,P<0.001;4.27±0.51 vs 8.26±1.04,t=30.417,P<0.001)。两者表达水平与患者年龄、D-S分期、恶性浆细胞数量、β2-MG水平和血红蛋白含量有关(P<0.05)。MEG3低表达组和GAS5低表达组的3年总生存率均低于MEG3高表达组和GAS5高表达组(32.56% vs 56.82%,χ2=5.617,P=0.018;32.43% vs 52.00%,χ2=5.389,P=0.020)。lncRNA MEG3、lncRNA GAS5低表达与多发性骨髓瘤患者不良预后有关(HR=3.503,95%CI:1.517~8.091;HR=3.319,95%CI:1.438~7.661)。结论 lncRNA MEG3和lncRNA GAS5在多发性骨髓瘤患者血清中呈低表达,且与患者不良预后有关。

长链非编码RNA MEG3在消化道肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类能在多种生物学过程中发挥调控作用的大分子ncRNA,主要从遗传调控、转录调控及转录后调控三个层面调控基因分子的表达,进而参与到炎症、凋亡、肿瘤等多种病理、生理过程中。母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)是一种由母系印记基因编码的lncRNA,对其功能的研究表明,MEG3在消化道肿瘤的发生、发展中发挥着重要的抑癌作用。本文就近几年对MEG3在胃癌、胆囊癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌等消化道肿瘤中的研究进展作一概述。

MEG3-miR-455-PI3K/Akt信号通路对大脑中动脉闭塞小鼠模型缺氧损伤神经干细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)靶向微小RNA-455(miR-455)调控磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对小鼠脑梗死缺氧神经干细胞(NSCs)损伤模型细胞增殖、凋亡、分化及氧化应激水平的影响。方法构建大脑中动脉闭塞(MCAO)小鼠模型,取18只SPF大鼠随机分为假手术组、MCAO组,每组9只。原代分离与培养NSCs,建立NSCs缺氧损伤模型。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测母系表达基因3(MEG3)、miR-455的表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;使用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。用双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-455的靶向关系。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)、磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、PI3K、Akt蛋白表达量。结果与假手术组比较,MCAO组MEG3表达水平明显升高(P<0.05),miR-455表达水平明显降低(P<0.05);与对照组比较,模型组MEG3、p21、Bax表达水平明显升高(P<0.05),miR-455、CyclinD1、Bcl-2、GFAP、β-tubulin-Ⅲ表达水平明显降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活性明显降低(P<0.05),48 h、72 h细胞增殖活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及MDA活性明显升高(P<0.05);抑制MEG3表达后,细胞活力明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2、GFAP、β-tubulin-Ⅲ表达及SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),p21、Bax表达水平明显降低(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实MEG3与miR-455存在靶向关系。结论LncRNA MEG3靶向miR-455及抑制PI3K/Akt信号通路激活进而抑制缺氧诱导的NSCs增殖、分化,诱导细胞凋亡及促进氧化应激。

类风湿关节炎患者血清LncRNA MEG3、miR-141水平变化及意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)母系表达基因3(MEG3)、微小RNA-141(miR-141)水平变化及临床意义。方法选取211例RA患者,根据病情分为活动期组(n=109)和缓解期组(n=102),另选取同期72例体检健康者为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测LncRNAMEG3、miR-141;采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-α、IL-6、MMP-3。比较三组血清LncRNAMEG3、miR-141、MMP-3、TNF-α、IL-6水平,Pearson相关性分析RA患者血清LncRNAMEG3、miR-141与MMP-3、TNF-α、IL-6水平的相关性,多因素Logistic回归分析RA发生的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNAMEG3、miR-141水平对RA的诊断价值。结果对照组、缓解期组、活动期组血清LncRNAMEG3水平逐渐降低,miR-141、MMP-3、TNF-α、IL-6水平逐渐提升(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,RA患者血清LncRNAMEG3与miR-141、MMP-3、TNF-α、IL-6水平呈负相关(r分别为-0.478、-0.374、-0.370、-0.541,P均<0.05),miR-141与MMP-3、TNF-α、IL-6水平呈正相关(r分别为0.387、0.356、0.368,P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,高血清MMP-3、TNF-α、IL-6、miR-141水平为RA发生的独立危险因素,高LncRNAMEG3水平为独立保护因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,LncRNA MEG3+miR-141诊断RA的曲线下面积大于LncRNAMEG3、miR-141单独诊断(P均<0.05)。结论RA患者血清LncRNAMEG3水平降低,miR-141水平升高,二者联合检测有助于评估RA发生和病情发展。