巨噬细胞移动抑制因子和基质金属蛋白酶2在口腔癌生长和转移中的作用

目的研究口腔癌中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在肿瘤生长和转移中的作用及二者之间的关系。方法收集口腔癌标本42例、正常口腔粘膜10例,采用免疫组化的方法检测MMP-2和MIF的表达,并分析二者之间及其和肿瘤分期、淋巴结转移的关系。结果口腔癌中MMP-2和MIF的表达均较正常组织明显增加,口腔癌中MMP-2和MIF的高表达和肿瘤的临床分期及淋巴结转移有关,同时二者的高表达存在一定的一致性。结论在口腔癌中MMP-2和MIF参与了肿瘤的生长和转移,但MMP-2的调控机制还是需要进一步研究的课题。

Autocamtide 2-相关抑制肽对心肌成纤维细胞分泌细胞因子及基质金属蛋白酶表达的抑制研究

目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ抑制剂(autocamtide 2-相关抑制肽,AIP)在大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用及其分子机制。方法:培养新生1～3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(CON),血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,0.1 umol/L)组,AngⅡ(0.1μmol/L)+AIP(0.2μmol/L)组,AngⅡ(0.1μmol/L)+AIP(0.5μmol/L)组,AngⅡ(0.1μmol/L)+AIP组(1.0μmol/L);MTT法及细胞记数法分别测定心肌成纤维细胞增殖;ELISA法测定细胞因子(TGF-β_1,TNF-a);RTPCR检测基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)mRNA水平;免疫印记法检测MMP-2,9的蛋白表达。结果:AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)抑制AngⅡ引起的心肌成纤维细胞增殖,并呈剂量依赖;AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)抑制AngⅡ引起的细胞因子分泌,并呈剂量依赖AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)预防0.1μmol/LAngⅡ引起的MMP-2,9 mRNA及蛋白的表达增加。结论:AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)对AngⅡ诱导的心肌纤维化具有保护作用,其机制可能与AIP预防心肌成纤维细胞增殖、细胞因子分泌以及对基质金属蛋白酶的调节有关。

MIF和MMP-2在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在宫颈癌的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测68例宫颈癌组织、24例宫颈上皮内瘤病变(CIN)组织和21例正常宫颈组织(对照组)中MIF及MMP-2的表达,并对宫颈癌组织MIF与MMP-2表达进行相关性分析。结果宫颈癌组MIF和MMP-2阳性表达率显著高于CIN组和对照组;宫颈癌组不同临床分期、组织分化、有无淋巴结转移之间比较,MIF和MMP-2的阳性表达率均有显著性差异(P<0.05),且二者表达强度呈显著正相关(r=0.82,P<0.05)。结论 MIF和MMP-2过表达可能与宫颈癌的发生、发展有关,二者联合检测可作为评估宫颈癌恶性程度、判断预后及指导治疗的重要参考指标。

血清MMP-2、β2 MG及MIF指标在化脓性或病毒性脑膜炎患儿中的诊断效能

目的:探讨血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)、β微球蛋白(βMG)及巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在脑膜炎临床诊断和判断感染类型中的作用。方法:将GSE80496阵列用于差异化鉴定化脓性或病毒性脑膜炎的相关标志物,选取2017年5月—2019年1月我院儿童重症监护室收治的80例脑膜炎患儿作为研究对象,将诊断为化脓性脑膜炎和病毒性脑膜炎的患儿分别分为细菌性组和病毒性组,各40例。分别检测不同组患儿的血清MMP-2、βMG及MIF水平,比较两组患儿血清MMP-2、βMG、MIF水平异常率,以及急性期和恢复期的血清MMP-2、βMG及MIF水平,利用AUC值检验MMP-2、βMG及MIF的诊断性能。结果:细菌性组患儿MMP-2、βMG水平异常率显著高于病毒性组,而细菌性组患儿MIF水平异常率显著低于病毒性组(P<0.01)。组内比较结果显示,各组脑膜炎患儿血清MMP-2、βMG、MIF水平在恢复期较急性期均显著改善(P<0.05);组间比较结果显示,细菌性组患儿急性期和恢复期的血清MMP-2、βMG水平均显著高于病毒性组,而细菌性组患儿不同时期血清MIF水平均显著低于病毒性组(P<0.05)。细菌性组患儿的血清MMP-2、βMG水平和病毒性组患儿的血清MIF水平分别对化脓性脑膜炎和病毒性脑膜炎具有良好的诊断效能(AUC值>0.07)。结论:血清MMP-2、βMG及MIF水平在脑膜炎临床诊断和鉴别诊断中的效果较好,对指导脑膜炎患儿临床诊疗工作具有积极意义。

蛇床子素抑制膀胱癌细胞生长和侵袭的机制

目的:探讨蛇床子素对表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase,EGFRTPK)、基质金属蛋白酶(matrix-metalloproteinase-2,MMP-2)和氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)的抑制作用,并阐明蛇床子素抑制膀胱癌T24细胞生长和侵袭的机制。方法:利用分光光度法研究蛇床子素对T24细胞EGFR-TPK,APN,MMP-2和caspase-3活性的影响,利用MTT法测定蛇床子素对膀胱癌T24细胞和人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1生长的抑制作用,采用Transwell小室法分析蛇床子素对膀胱癌T24细胞转移能力;Western印迹检测培养液中加入蛇床子素后,人膀胱癌细胞株T24中COX-2,VEGF及β-actin的表达;采用非放射性NF-κB凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)试剂盒测定T24细胞中NF-κB活性。结果:蛇床子素对EGFR-TPK,APN和MMP-2的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(45.33±3.98),(28.21±3.23)和(8.11±0.54)μmol/L;随着蛇床子素浓度的增加,膀胱癌T24细胞生长抑制率不断增高,与空白对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);但SV-HUC-1细胞的生长并未受到明显的抑制;与空白对照组比较,蛇床子素组穿膜细胞的数减少(P<0.05);膀胱癌T24细胞中凋亡蛋白caspase-3活性显著增强(P<0.05);蛇床子素能够下调NF-κB,COX-2及VEGF的表达。结论:低毒性的蛇床子素可能通过降低EGFR-TPK,APN和MMP-2活性和NF-κB,COX-2及VEGF的表达,激活caspase-3活性的方式,对膀胱肿瘤细胞的侵袭、增殖和血管生成产生抑制作用。

p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制

目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白(Golgi-vesicular transport protein)p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响及其机制。方法采用脂质体法将质粒pGPU6/GFP/Neo/p115(p115 shRNA)和阴性对照质粒(shNC)分别转染至BGC-823细胞中,并设空白对照组。转染后48 h,采用RT-PCR、Westernblot和细胞免疫荧光法检测各组细胞中p115基因及蛋白表达的变化,及其对巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metallopro-teinase-2,MMP-2)、MMP-9基因和蛋白表达的调节;细胞划痕及Transwell小室试验检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果p115 shRNA组细胞中p115、MIF、MMP-2、MMP-9在基因和蛋白水平的表达均较shNC组和空白对照组明显下降(P<0.01);p115shRNA组细胞的划痕愈合能力明显低于两个对照组(P<0.01);p115 shRNA组的穿膜细胞数明显低于两个对照组(P<0.01)。结论在BGC-823细胞中,抑制P115的表达后,可能通过下调MIF、MMP-2、MMP-9的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭运动。

巨噬细胞移动抑制因子和基质金属蛋白酶2在胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）在胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法收集南华大学附属第一医院神经外科2009—2013年收集的经病理检查证实的胶质瘤石蜡标本64份作为胶质瘤组,另选取同期因脑创伤行颅内减压去除的脑组织标本36份作为对照组,采用免疫组化SP法检测两组MIF及MMP-2的表达情况,并分析胶质瘤组织中MIF与MMP-2表达的相关性。结果胶质瘤组MIF、MMP-2阳性表达率高于对照组（P〈0.01）。不同性别、年龄胶质瘤患者MIF、MMP-2阳性表达率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,但胶质瘤组织学Ⅲ～Ⅳ级者MIF、MMP-2阳性表达率高于Ⅰ～Ⅱ级者（P〈0.05）。胶质瘤组织中MIF与MMP-2表达呈正相关（r=0.76,P〈0.05）。结论 MIF和MMP-2过表达可能在胶质瘤的发生发展中起重要作用,并与胶质瘤的恶性程度密切相关。

炎症牙龈中环孢素A对基质金属蛋白酶表达的影响

目的:探讨牙龈炎症条件下环孢素A(cyclosporine A,CsA)对亲环素A(cyclophilin A,CyPA)、MMPs及p-ERK1/2、p-IκB表达的影响及意义。方法:24只8w雄性C57BL/6j小鼠适应性饲养lw后随机分成4组:对照组,结扎组,CsA组,结扎+CsA组,每组6只小鼠。结扎+CsA组:用5. 0无菌医用缝合丝线结扎左、右上颌第一磨牙牙颈部,7d后,腹腔内每日注射1次CsA (50mg/kg/d),共21d;结扎组:结扎方法同结扎+CsA组,7d后腹腔内每日注射1次等量0. 9%NaCL溶液,共21d;CsA组:实验开始第8d,腹腔内每日注射1次CsA (50mg/kg/d),共21d;对照组:不作任何处理,饲养条件同前3组。用HE染色检测牙龈组织增生情况,免疫组化实验检测牙龈组织中的CyPA的表达,用Western Blot检测牙龈组织中的Pro-MMP-2,-9、MMP-2,-9表达以及p-ERK1/2与ERK1/2、p-IκB与IκB的比值。结果:H E染色结果显示对照组中的组织结构完整;结扎组中牙齿的邻接区和根尖区炎症浸润,结扎+CsA组的骨损伤少于结扎组,结扎+CsA组相较于其他3组牙龈增生最明显。免疫组化结果显示结扎组CyPA表达最高,CsA组低于对照组,而结扎+CsA组则略高于对照和组和CsA组。Western Blot的结果显示结扎组Pro-MMP-9、MMP-9、Pro-MMP-2、MMP-2表达最高,其次为结扎+CsA组;结扎组的p-ERK1/2/ERK1/2及p-IκB/IkB比值最高,其他3组中,结扎+CsA组的p-ERK1/2/ERK1/2及p-IkB/IkB比值均高于对照组和CsA组。结论:在牙龈炎症条件下,CsA及炎症因子促进细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)合成增加;CsA抑制了MMPs的表达,导致ECM降解减少,并且CsA是通过阻断CyPA与CD147的相互作用,影响ERK及IkB的磷酸化,导致MMPs的表达减少和活性降低。

益气补肾方对胃癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨益气补肾方对胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响。方法将胃癌SGC-7901细胞接种于RP-MI-1640培养液中,益气补肾方水溶液配制成1、2、4、8、16、32、64mg/ml7个终浓度,设肿瘤细胞为空白对照组,在96孔板内每个剂量6个平行孔,重复3次,37℃、5%CO2培养箱孵育48h。采用MTT法检测不同浓度益气补肾方对SGC-7901细胞增殖的抑制率;采用RT-PCR法检测其对SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)的基因表达活性的影响。结果不同浓度的益气补肾方对SGC-7901细胞都有一定的抑制作用,以16mg/ml和32mg/ml浓度抑瘤作用较好,抑制率分别为53.17%和56.47%;MMP-2 mRNA在32mg/ml组同空白对照比较,差异有统计学意义(P<0.05),并且16mg/ml组也能下调MMP-2 mRNA的表达,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气补肾方能明显抑制胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力,且以32mg/ml浓度最好。

巨噬细胞移动抑制因子在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤组织中的表达及作用

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化及与脑水肿的关系。方法将144只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组、抗MIF中和抗体干预组,于缺氧缺血模型制成后1 h、6 h、12 h、24 h、3d、7 d处死,用免疫组化方法检测脑缺血侧皮质区MIF、MMP-9的表达,Western blot法检测pERK1/2蛋白相对表达量,干湿法测定脑含水量。结果与假手术组相比,缺氧缺血组MIF在缺氧缺血后1 h表达增加,24 h达高峰(P<0.05);MMP-9在缺氧缺血后6 h表达增加,24 h达高峰(P<0.05);pERK1/2在缺氧缺血后1 h表达迅速升高,6 h迅速降低,12 h又开始增加,24 h达第2次高峰(P<0.05);脑含水量在缺氧缺血后6 h开始增加,3 d达高峰(P<0.05)。抗MIF中和抗体干预组MIF、pERK1/2、MMP-9表达及脑含水量较缺氧缺血组均下降(P<0.05)。结论缺氧缺血新生大鼠脑组织MIF表达升高,可能通过激活ERK1/2途径诱导MMP-9表达升高,进而引起脑水肿的发生。