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哮喘小鼠气道上皮高表达mCLCA3及其与趋化因子和Th1/Th2细胞因子的关系 被引量:1
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作者 何丽 张惠兰 +2 位作者 赵建平 甄国华 张波 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期585-590,共6页
目的研究哮喘相关基因mCLCA3在哮喘小鼠模型气道的梯度变化及其与趋化因子和Th1/Th2细胞因子的关系。方法 30只SPF级BALB/c小鼠随机分为5组,每组6只(n=6):D(致敏而未激发),E(激发1 d),F(激发3d),G(激发5 d),H(激发7 d)。通过RT-PCR和免... 目的研究哮喘相关基因mCLCA3在哮喘小鼠模型气道的梯度变化及其与趋化因子和Th1/Th2细胞因子的关系。方法 30只SPF级BALB/c小鼠随机分为5组,每组6只(n=6):D(致敏而未激发),E(激发1 d),F(激发3d),G(激发5 d),H(激发7 d)。通过RT-PCR和免疫组织化学检测肺组织中mCLCA3表达。采用肺组织切片的苏木精-伊红染色炎性评分、肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞分类计数来评价肺部炎症细胞浸润情况。RT-PCR法检测肺组织IL-4和IFN-γ的mRNA。ELISA检测炎症局部不同趋化因子水平。结果 RT-PCR和免疫组化检测结果均表明激发后小鼠mCLCA3表达显著增加,且mCLCA3的增加具有激发时间依赖性。肺组织苏木精-伊红染色炎性评分及BALF中炎性细胞分类计数表明激发后小鼠炎症细胞浸润主要表现为嗜酸性粒细胞和淋巴细胞增加。随着激发次数的增多,肺组织中IL-4和IFN-γ水平均有不同程度升高,其中H组IL-4与其余各组差异均有统计学意义,而各组IFN-γ差异无统计学意义。ELISA结果显示随着激发次数的增加小鼠BALF CCL17、CCL22均有增加趋势,其中G、H组CCL17,H组CCL22较其余组差异有统计学意义。Pearson相关性分析表明:mCLCA3与BALF中CCL17(r=0.584,P<0.01)、CCL22(r=0.461,P<0.05)及E、F、G组CCL5(r=0.586,P<0.05)均呈正相关;mCLCA3与BALF中总炎症细胞(r=0.393,P<0.05)、嗜酸性粒细胞(r=0.529,P<0.01)正相关。结论哮喘小鼠气道上皮中增加的mCLCA3表达可能通过参与调节气道上皮细胞趋化因子的分泌而介导炎症局部炎症细胞的浸润,从而在气道炎症的发生发展中起作用。 展开更多
关键词 哮喘 气道上皮细胞 mclca3 气道炎症
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mCLCA3增强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及功能分析
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作者 吴庆田 侯霞 +4 位作者 任继秋 崔刚 李丽秋 杨景云 马淑霞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期236-238,共3页
目的建立mCLCA3真核细胞表达模型,并对其氯离子通道功能进行分析,为分析其分子本质提供新的理论依据。方法采用RT-PCR、脂质体转染法构建mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,通过免疫荧光对mCLCA3真核表达情况进行分析,利用FluoStar ... 目的建立mCLCA3真核细胞表达模型,并对其氯离子通道功能进行分析,为分析其分子本质提供新的理论依据。方法采用RT-PCR、脂质体转染法构建mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,通过免疫荧光对mCLCA3真核表达情况进行分析,利用FluoStar Optima荧光仪对mCLCA3的氯离子通道功能进行测定分析。结果构建真核表达模型能够稳定高表达mCLCA3及增强型绿色荧光蛋白,适用于离子通道功能分析。结论成功构建了mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,并通过功能分析证明mCLCA3可能不是氯离子通道。 展开更多
关键词 mclca3氯离子通道 真核表达系统 增强型绿色荧光蛋白
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Prokaryotic Expression,Purification,Antibody Production of a NH_2-Terminal Fragment of mCLCA3 Protein and Analysis of mClCA3 Protein Expression in Asthmatic Mouse Lung 被引量:1
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作者 HOU Xia WU Qing-tian +4 位作者 ZHANG Yu-ping ZHU Na LIU Yan-li FENG Xue-chao MA Tong-hui 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2007年第6期688-692,共5页
mCLCA3 is a member of calcium activated chloride channel(CACC) family that may play an important role in mucin packaging and secretion in asthmatic and cystic fibrosis lung. To study the protein structure and expres... mCLCA3 is a member of calcium activated chloride channel(CACC) family that may play an important role in mucin packaging and secretion in asthmatic and cystic fibrosis lung. To study the protein structure and expression of mCLCA3 in asthmatic mouse lung, an N-terminal 269 amino acid peptide of mCLCA3 was expressed in E. coli, purified to homogeneity and rabbit polyclonal antibodies against this peptide were generated. Immunohistochemistry of asthmatic mouse lung using the antibody indicated exclusive mCLCA3 expression in mucin granules of goblet cells in airway surface and lumen, Immunoblot analysis of lavage fluid from asthmatic mouse lung revealed a single 90 kDa protein form of mClCA3. The results demonstrate that the 90 kDa N-terminal peptide, neither the flail-length protein nor the reported N-terminal 35 kDa cleaved form of mClCA3 is the major functional form involved in the packaging and exocytosis of mucin granules in asthmatic goblet cells. 展开更多
关键词 mclca3 Prokaryotic expression PURIFICATION Antibody production ASTHMA
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Overexpression of mclca3 in airway epithelium of asthmatic murine models with airway inflammation 被引量:3
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作者 ZHANG Hui-lan HE Li 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2010年第12期1603-1606,共4页
Asthma is a worldwide prevalent disease that is a .considerable health burden in many countries. In recent years, the airway epithelium is increasingly recognized as a central contributor to the pathogenesis of asthma... Asthma is a worldwide prevalent disease that is a .considerable health burden in many countries. In recent years, the airway epithelium is increasingly recognized as a central contributor to the pathogenesis of asthma. One of the most highly induced genes in epithelial ceils in experimental allergic airway disease is the third murine calcium-activated chloride channel homologue (mclca3, alias gob-5). Its human homology protein is hCLCA, which has been identified as clinically relevant molecules in diseases with secretory dysfunctions including asthma and cystic fibrosis. 展开更多
关键词 ASTHMA airway epithelial cell mclca3 INFLAMMATION
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蛇床子素预处理对卵清蛋白诱导的小鼠哮喘气道炎症及黏液高分泌的调控作用 被引量:6
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作者 屈朔瑶 欧阳海峰 +4 位作者 赵峰 吴运福 陈洁 吴朔 宋立强 《中华肺部疾病杂志(电子版)》 CAS 2013年第5期31-33,共3页
目的探讨蛇床子素(Ost)预处理对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症、黏液高分泌的防治作用及其机制。方法将40只Balb/c小鼠随机分为4组:生理盐水(PS)对照组、哮喘模型组、Ost处理组1(10 mg/kg)、Ost处理组2(40 mg/kg)。利用OVA构建... 目的探讨蛇床子素(Ost)预处理对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症、黏液高分泌的防治作用及其机制。方法将40只Balb/c小鼠随机分为4组:生理盐水(PS)对照组、哮喘模型组、Ost处理组1(10 mg/kg)、Ost处理组2(40 mg/kg)。利用OVA构建哮喘小鼠模型。末次激发48 h后,处死各组小鼠,取肺组织及肺泡灌洗液,利用HE,AB-PAS染色法观察肺组织炎性病变及黏液分泌状况,利用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中Th1/2细胞因子表达水平。Real-time-PCR检测各组小鼠肺组织中mCLCA3以及MUC5AC的表达水平。结果哮喘组小鼠肺组织炎症及气道内黏液分泌水平较对照组明显增高,Ost可有效减低OVA所致的气道炎症以及气道黏液分泌;Ost组小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸性粒细胞数明显降低;Ost对白介素-4(IL-4)、Eotaxin具有明显的抑制作用,同时对干扰素-(IFN-γ)具有提升作用。此外,Ost抑制肺组织中mCLCA3及MUC5AC mRNA的表达。结论 Ost预处理对OVA诱导的小鼠哮喘气道具有保护作用,其机制可能是通过下调mCLCA3 mRNA进而抑制MUC5AC表达,减弱哮喘气道黏液分泌的作用。 展开更多
关键词 支气管哮喘 气道炎症 蛇床子素 白介素-4 mCLCA
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