荧光定量RT-PCR检测mdr-1基因表达

目的 :建立荧光定量RT PCR检测肿瘤细胞mdr 1基因表达的方法 ,了解肺癌组织中mdr 1的表达水平。方法 :建立荧光定量RT PCR方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达水平 ,同时检测 45例初治肺部肿瘤病人组织标本。结果 :荧光定量RT PCR检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达 ,重复 10次实验所得结果平均分别为 (6 86± 0 6 5 )× 10 7拷贝 /μgRNA和 (8 49± 0 6 7)× 10 5拷贝 /μgRNA ,两者相差 80 8倍 ,变异系数分别为 9 5 %和 7 9%。 45例肺部肿瘤中 ,有 12例检出有mdr 1基因不同程度的表达。结论 :荧光定量RT PCR检测mdr 1基因表达方法 ,检测结果用绝对拷贝数来表示 ,定量准确可靠 ,并有利于标准的统一。有 1/4未经化疗的肺癌病人有一定水平mdr

RT-PCR法检测胃癌组织mdr-1基因的表达及临床意义

应用RT－PCR方法检测30例胃腺癌mdr-1基因的表达。结果发现术前化疗的胃腺癌中mdr－1表达阳性率为91％，明显高于术前非化疗组的阳性率（47％）（P＜0．O1）。在术前非化疗组中，中分化胃癌的阳性率高于低分化胃癌的阳性率（P＜0.05）。mdr－l基因的表达与胃癌转移的发生率无明确关系。临床检测胃癌mdr－l基因的表达，有助于选择术后化疗方案。

RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。

膈下逐瘀汤逆转裸鼠移植瘤MDR-1表达的实验

目的探讨膈下逐瘀汤对HCT-8/5-Fu裸鼠移植瘤多药耐药基因MDR-1表达的影响。方法 MTT法确认人结肠腺癌细胞HCT-8/5-Fu的耐药性及对其他化疗药VCR、VP-16、DDP的交叉耐药性后,将耐药细胞HCT-8/5-Fu接种于BABL/c无胸腺裸鼠右腋下,建立耐药性稳定的裸鼠移植瘤模型。移植瘤裸鼠模型随机分为四组:空白对照组(对照组)、5-Fu组、膈下逐瘀汤组(DSED组)、膈下逐瘀汤+5-Fu组(DSED+5-Fu组)。其中对照组予0.9%氯化钠溶液灌胃给药,其余组予腹腔注射5-Fu和(或)中药灌胃。连续给药14天后颈椎脱臼处死裸鼠。观察各组裸鼠移植瘤生长情况;RT-PCR法检测各瘤组织MDR-1 mRNA表达。结果膈下逐瘀汤+5-Fu组、膈下逐瘀汤组、5-Fu组对裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为54.9%、32.4%和7.0%(P<0.01)。RT-PCR结果显示膈下逐瘀汤+5-Fu组及膈下逐瘀汤组MDR-1 mRNA的表达量与对照组相比明显下降(P<0.01),5-Fu组与对照组相比MDR-1 mRNA表达量略有升高,但差异无统计学意义。结论膈下逐瘀汤对大肠癌多药耐药裸鼠移植瘤生长具有抑制作用,其机制可能与膈下逐瘀汤通过逆转耐药移植瘤多药耐药基因表达,增强肿瘤细胞对药物的敏感度。

选择性COX-2抑制剂塞来昔布抑制B细胞淋巴瘤细胞株MDR-1及Bcl-2的mRNA表达并增强表柔比星的抗肿瘤作用

背景与目的:部分非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)具有高表达环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的特征,而后者与P-糖蛋白及Bcl-2表达相关,可能导致NHL对化疗耐药。本研究旨在探讨B细胞淋巴瘤细胞株中COX-2的表达以及选择性COX-2抑制剂塞来昔布增强淋巴瘤细胞对表柔比星抗肿瘤效应的敏感性及其可能机制。方法:用荧光定量PCR(q RT-PCR)及蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测Raji、Jeko-1和Namalwa等淋巴瘤细胞株以及正常人外周血B细胞的COX-2表达;以梯度浓度的塞来昔布作用于淋巴瘤细胞株,CCK-8方法检测细胞增殖的抑制程度,q RT-PCR检测各细胞株MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA表达的变化;表柔比星单独或联合不同浓度的塞来昔布处理Raji细胞株72 h后,CCK-8方法分析塞来昔布对表柔比星的增敏作用。结果:各淋巴瘤细胞株及正常对照外周血B细胞均不表达COX-2。塞来昔布单药即可对各淋巴瘤细胞株产生程度不同的抗增殖效应;随着塞来昔布作用浓度的增加,除Jeko-1细胞不表达MDR-1外,其余细胞株MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA表达水平逐渐下降;塞来昔布明显增强表柔比星对Raji细胞的抗肿瘤活性,两者之间具有协同作用。结论:选择性COX-2抑制剂塞来昔布下调B细胞淋巴瘤细胞株的MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA水平,并且增强表柔比星对淋巴瘤细胞的抗肿瘤效应。

急性白血病患者bcl-2和bax基因表达的临床意义及其与mdr-1基因表达的关系

细胞凋亡受抑作为肿瘤细胞的耐药机制 ,是急性白血病 (AL)预后不良的原因之一。bcl 2家族是目前最受重视的调控细胞凋亡的基因家族 ,本研究为探讨bcl 2和bax基因在急性白血病表达的意义 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法测定 70例初治AL患者及 2 0例正常人的bcl 2 ,bax ,mdr 1基因mRNA水平的表达 ,用流式细胞术检测其蛋白表达。结果表明 ,bcl 2和bax基因在AL患者广泛表达 ,bcl 2mRNA平均表达水平明显高于正常对照 (1.4 6vs 0 .71,P <0 .0 5 )。bcl 2和bax基因表达及bax bcl 2比值与AL患者的年龄、性别、血小板计数、血红蛋白水平、骨髓原始细胞百分率、FAB分型和S +G2 M %均未发现相关。Bcl 2蛋白表达 (34.6 %vs 6 9.2 %,P <0 .0 5 ) ,bax bcl 2mRNA比值 (37.1%vs 82 .9%,P <0 .0 1)决定AL对化疗的敏感性 ,与ALCR率密切相关。bax bcl 2mRNA比值还是影响总生存期的因素。bcl 2与bax基因表达和mdr 1表达两者无相关关系。

抗肿瘤药物体外诱导新鲜癌组织及其外周血淋巴细胞mdr-1基因表达的相关性研究

目的 :通过对恶性肿瘤患者的癌组织细胞及其外周血淋巴细胞进行抗肿瘤药物的体外诱导 ,用RT PCR法检测其mdr 1基因表达状况 ,从而找出两者之间的相关性 ,从基因水平解决非手术癌患者化疗用药个体化。方法 :在采集手术标本的同时抽取该患者外周血 ,用 8种抗肿瘤药物进行体外诱导 ,RT PCR法检测 32例恶性肿瘤患者癌组织细胞及其外周血淋巴细胞的mdr 1基因表达状况。利用SAS软件计算两者之间的相关关系。结果 :32例恶性肿瘤患者的新鲜癌组织细胞与其外周血淋巴细胞的抗肿瘤药物体外诱导mdr 1基因表达呈正相关关系。结论 :对于失去手术机会或病灶很小不能取材的患者可以用外周血淋巴细胞替代癌细胞做RT PCR体外药敏检测。

多药耐药基因mdr-1在肝门部胆管癌组织中的表达及其意义

目的 :检测肝门部胆管癌新鲜组织中多药耐药基因 (mdr - 1)mRNA表达 ,探讨其与肝门部胆管癌临床病理间的关系。方法 :应用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)对 2 6例术前未作治疗的肝门部胆管癌 ,12例正常胆管组织的mdr 1mRNA表达进行了检测 ,并与癌组织的分化程度、病理类型、部位、浸润转移作对比研究。结果 :2 6例肝门部胆管癌组织中mdr 1mRNA阳性表达率为 6 5 4% (17/ 2 6 ) ,正常胆管组织表达率为 8 3% (1/ 12 ) ,二者差异有显著性 (P <0 0 1)。mdr 1mRNA阳性表达与肝门部胆管癌的分化程度、发生部位、病理类型、浸润转移无关 (P >0 0 5 )。结论 :肝门部胆管癌组织中mdr 1mRNA的高表达可作为肝门部胆管癌化疗耐药的指标。

初发及复发转移大肠癌组织与外周血MDR-1基因表达相关性研究

目的 探讨初发及复发转移大肠癌组织与外周血MDR 1基因表达的相关性。方法 采用RT PCR方法分别检测了 5 6例初发大肠癌组织及外周血和 4 0例术后化疗的复发转移大肠癌病灶组织及外周血的MDR 1表达情况。结果 无论是组织中 ,还是外周血中经过化疗的大肠癌患者MDR 1的阳性表达率均明显高于初发大肠癌患者 ,统计学上有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 可以用外周血代替癌组织来检测MDR

Fas和mdr-1在急性白血病的表达及其相关性研究

本研究应用流式细胞仪 (FCM)直接免疫荧光法和半定量RT PCR方法分别测定 5 9例初发急性白血病(AL)患者治疗前及完全缓解 (completeremission ,CR)后骨髓Fas和mdr 1mRNA表达情况 ,旨在探讨Fas和mdr 1在AL的表达及二者在多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)中的相关性。结果显示 :Fas在初发AML阳性表达率比ALL高 ,两表达率间有差异 (P <0 .0 5 ) ,mdr 1在AML和ALL阳性表达率间无差异 (P >0 .0 5 ) ,Fas+ 与mdr 1+ 有负相关性 (r =- 0 .2 82 ,P <0 .0 5 ) ;经单因素及多因素COX分析 ,Fas和mdr 1独立于其他参数 ,更具判断预后价值 ;在Fas+ 与Fas-的AML和AL ,CR率均有显著性差异 (P <0 .0 1) ,在mdr 1+ 、mdr 1-的AML和AL中的CR率有显著性差异 (P <0 .0 1) ;经Logrank检验 ,Fas+ 与Fas-组CR率及中数缓解时间有显著性差异 (χ2 =7.35 ,P =0 .0 0 6 7) ,mdr 1+ 与mdr 1-组CR率及中数缓解时间有显著性差异 (χ2 =10 .71,P =0 .0 0 11)。结论 :Fas、mdr 1与疗效高度相关 ;Fas阳性表达可能是AL预后良好因素 ;mdr 1为疗效差、预后不良的重要因素。

逆转录病毒载体介导的人多药耐药基因(mdr-1)导入小鼠造血细胞的实验研究

本文利用逆转录病毒介导的基因转移方法，将人多药耐药基因ｍｄｒ－１导入小鼠造血细胞，并对转基因造血细胞的耐药性及移植特性进行了初步研究。含人ｍｄｒ－１ｃＤＮＡ的重组逆转录病毒载体质粒，经脂质体介导的基因转移方法导入包装细胞ＰＡ３１７，再经秋水仙素筛选。获得产逆转录病毒的包装细胞，其病毒滴度可达１．２×１０５ｃｆｕ／ｍｌ。在含小鼠骨髓贴壁细胞层的长期培养体系中，利用逆转录病毒上清对造血细胞进行转染。通过抗性ＣＦＵ－ＣＭ检测，其基因转移效率可达７．０％。将转基因造血细胞移植经照射预处理的小鼠，可重建受体小鼠造血功能。小鼠造血重建后４个月，其骨髓造血细胞与外周血细胞可检测到人ｍｄｒ－１ｃＤＮＡ。

麂属(Muntiacus)动物MDR-1基因序列分析及其分子进化关系

对麂属（Muntiacus）中的3种动物:赤麂（M.muntjak）（2n=6 ,7 ）小麂（M.reevesi）（2n=46）,黑麂（M.crinifrons）（2n=8 ,9 ）MDR-1基因（multidrug resistance,多药耐药基因）726bP左右的片段进行了序列分析,并根据序列信息建立分子系统树,同时探讨了这3种动物的起源、分类地位及进化关系。

化疗对食管癌组织中mdr-1基因表达的影响及其意义

目的研究ｍｄｒ１基因过度表达与肿瘤化疗疗效的相关性，进一步研究食管癌组织ｍｄｒ１基因的表达与食管癌多药耐药及相关因素的关系。方法３０例未作治疗的食管癌患者，均行术前计划化疗，化疗前食管镜下取癌及癌旁活组织。术前化疗方案：丝裂霉素（ＭＭＣ）４～６ｍｇ／ｍ２静脉注射，第１、８、１５天；顺铂（ＤＤＰ）２０～３０ｍｇ／ｍ２静脉点滴，第２、３、４天；平阳霉素（ＰＹＭ）６ｍｇ／ｍ２肌肉注射，第１、３、８、１１、１６、１８天。２１天为一周期，２周期为一疗程，休息２周后手术。将切除标本及化疗前食管镜活检取材组织作匀浆，抽提总ＲＮＡ后用反转录多聚酶链反应技术（ＲＴＰＣＲ）检测ｍｄｒ１的表达，与化疗疗效及癌旁组织ｍｄｒ１之表达作对比。结果癌组织ｍｄｒ１的表达高于癌旁组织中ｍｄｒ１的表达（３３％与１０％，Ｐ＜００５）；化疗后癌组织中ｍｄｒ１的表达高于化疗前（３３％与８３％，Ｐ＜００５），而癌旁组织中ｍｄｒ１的表达则无差异（１０％与１０％，Ｐ＞００５）；化疗前癌组织ｍｄｒ１阳性表达者化疗疗效差于化疗前癌组织ｍｄｒ１阴性表达者（１０％与４５％，Ｐ＜００５）。结论食管癌存在先天性ＭＤＲ，癌组织ｍｄｒ１阳?

大肠癌患者手术前后和复发转移不同时期外周血MDR-1基因表达的研究

目的探讨大肠癌患者术前、术后和复发转移时外周血MDR-1mRNA的表达及其意义。方法选取2009年7月至2010年5月福建省立医院收治的术前(n=30)、术后(n=33)和复发转移(n=28)大肠癌患者,采用实时荧光定量PCR法分别检测不同时间点患者的外周血MDR-1 mRNA并进行比较。结果 MDR-1基因和内参β-actin基因扩增良好,扩增效率分别为92.8%和105.7%。实时定量PCR检测显示MDR-1基因扩增产物具有高度特异性。大肠癌术前患者外周血中MDR-1mRNA相对表达量为0.565±0.069,术后患者为0.271±0.051,差异有统计学意义(P<0.05);复发转移大肠癌患者MDR-1mRNA相对表达量为1.458±0.254,明显高于在术前及术后大肠癌患者中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大肠癌患者外周血MDR-1 mRNA表达水平在不同时间点存在差异,不同时间点检测外周血MDR-1 mRNA表达对制定临床治疗策略有指导意义。

三苯氧胺和雌激素对MCF-7乳癌细胞内耐药基因mdr-1mRNA的影响

目的 观察三苯氧胺（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ， ＴＡＭ）及雌激素（Ｅ２）对乳腺癌ＭＣＦ－７细胞株耐药基因ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ水平的影响；方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ法观察ＴＡＭ及Ｅ２在不同时间、浓度作用下细胞内ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ水平的变化；结果ＴＡＭ可以使ＭＣＦ－７细胞内ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ水平降低，而Ｅ２则相反。且以上变化表现出剂量、时间依赖关系。结论ＴＡＭ通过降低ｍｄｒ－１ｍＲＮＡ水平，使肿瘤细胞的耐药性降低，有利于抗肿瘤药物更好的发挥作用。

食管癌、癌旁和淋巴结组织中mdr-1、mrp表达及其预后关系

目的 探讨食管癌、癌旁及淋巴结组织中多药耐药基因 (mdr 1)和多药耐药相关蛋白基因 (mrp)表达的相互关系及其对患者预后的影响。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测了 5 1例食管癌、癌旁及 49枚手术切除淋巴结组织的mdr 1和mrp基因表达。结果 食管癌组织中mdr 1、mrp和两基因共表达的阳性率与癌旁组织比较具有显著性差异 (P <0 0 1) ;转移淋巴结组织 (N1 2 )高于非转移淋巴结 (N0 ) (P <0 0 1) ;而癌组织mdr 1、mrp阴性的转移和非转移淋巴结组织未发现mdr 1和mrp基因表达。随访发现 ,食管癌组织mdr 1和 (或 )mrp阳性患者的一、二、三年生存率 (72 4%、42 1%和 14 3% )低于mdr 1、mrp阴性者(88 9% ,6 3 6 %和 6 0 % )。结论 检测癌组织及其淋巴结中的mdr 1、mrp基因表达可能对指导食管癌的术后化疗。

mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的探讨mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导肝移植术后免疫耐受的可行性及其可能机制。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠20只为异基因肝移植受体,随机分为mdr-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组(A组)和单纯肝移植组(B组)。雌性Wistar大鼠10只为同基因肝移植受体(C组)。比较A、B两组大鼠肝移植术后1周生存率、生存状况、生存时间,以及移植肝脏的病理变化。结果 C组大鼠生存时间均达60 d以上,A组为(31.2±4.9)d,明显高于B组[(12.1±4.7)d],差异有统计学意义(P<0.05)。B组病理组织切片可见中、重度急性排斥反应,肝内单核细胞浸润较为明显,主要集中在汇管区;A组移植肝内组织损伤程度明显减轻;C组基本无排斥反应,接近正常肝组织。结论 mdr-1基因骨髓造血干细胞可明显减轻大鼠肝移植后免疫排斥反应。

人肺癌组织中Ki67核抗原、p53和MDR-1基因表达的临床病理特征观察

目的:观察65例肺癌组织中Ki67的细胞增殖状态和p53表达与肺癌组织生物学特征,探讨多药耐药基因MDR-1变化在肺癌治疗中的意义和价值。方法:应用免疫组化方法观察65例肺癌组织标本中Ki67、p53表达和MDR-1变化水平。结果:(1)在43例鳞癌组织中Ki67阳性表达均值为(47.91±23.22)%,腺癌为(34.8±19.44)%,癌细胞高分化组Ki67阳性表达均值低于中、低癌细胞分化组。在不同TNM分期组Ki67阳性表达均值没有明显差异。(2)43例鳞癌中有35例p53表达阳性(81.4%),在22例腺癌中有13例(59.1%)p53表达阳性。癌细胞高分化组p53有较高的阳性表达。不同TNM分期p53表达阳性率没有明显差异。(3)TNM分期Ⅲ期MDR-1阳性表达率比Ⅰ和Ⅱ期低,但在不同癌细胞分类组和不同癌细胞分化组间MDR-1阳性表达率无明显差异。结论:Ki67、p53和MDR-1基因免疫组化研究对临床肺癌诊断和预后判断可提供有效的细胞增殖标记和细胞分子学信息。

mdr-1和bcl-2基因在K562/ADM多药耐药细胞中的共表达

为探讨肿瘤细胞多药耐药(MDR)形成的分子机理,本文观察了mdr-1、bcl-2和bax基因及其编码蛋白在人红白血病细胞株K562/ADM中的可能共表达。结果显示,在K562/ADM细胞中,在以mdr-1及P-gp过度表达为 特征的MDR形成时,其bcl-2及产物Bcl-2也过度表达,其中Bcl-2的表达阳性率约为相应敏感株K562的11倍;而Bax在二种细胞中均呈阳性表达,但无显著差异(P>0.05),提示bcl-2基因在mRNA和蛋白水平上的过度表达可能是K562/ADM细胞MDR形成时细胞凋亡耐受的分子基础。