RNA干扰沉默mdrl基因联合阿霉素对卵巢癌耐药细胞株SKOV_3/ADM增殖的抑制作用

目的:观察RNA干扰沉默mdrl基因后化疗药物对卵巢癌耐药细胞株SKOV3 /ADM增殖的影响。方法:RT -PCR检测靶向于mdrl基因的小发夹状RNA(pshRNA -mdrl)对SKOV3 /ADM细胞内mdr1mRNA表达的影响;采用MTT法及软琼脂克隆形成实验测定pshRNA -mdrl联合化疗药物阿霉素对SKOV3 /ADM的增殖抑制作用。结果:pshRNA -mdrl能抑制SKOV3 /ADM细胞mdr1mRNA的表达,pshRNA -mdr1联合阿霉素明显抑制SKOV3 /ADM细胞的增殖。结论:靶向于mdr1的pshRNA联合阿霉素能显著抑制SKOV3 /ADM的增殖。

多药抗药基因Mdrl探针的克隆及初步应用

多药抗药基因Ｍｄｒｌ的表达水平与细胞的耐药性直接相关，检测Ｍｄｒｌ的表达水平可预测化疗的效果以及预后，用分子原位杂交的方法可检测单个细胞中Ｍｄｒｌ的表达水平．用ＰＣＲ扩增方法获得了一段特异的ＤＮＡ片段，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列分析证明与文献报道一致，此探针可用于临床标本的分子杂交检测．

急性髓系白血病患者体外药敏试验和多药耐药基因mdrl的表达及其临床意义

多药耐药(MDR)是急性白血病化疗成功的主要障碍之一,其机理涉及诸多因素。建立能够体外准确预测化疗药物敏感性试验方法,在指导急性白血病治疗中具有重要意义。本文研究了42例急性白血病患者体外药敏检测(MTT法)和白血病细胞P-gp)抗原的表达与白血病化疗疗效的关系。结果显示:药敏试验与治疗疗效有相关性,临床总符合率82.9%,阳性符合率78.9％,阴性符合率86.9％。认为P-gp的表达是一个有效的化疗耐药指标,白血病缓解病人P-gp阳性率高于初诊病人,P-gp阳性表达的患者完全缓解率明显低于P-gp阴性患者。

卵巢癌p53、MDRl、GST－π基因的共表达与化疗疗效的相关性

目的：探讨卵巢癌组织p53、多药耐药基因(MDRl)、谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)共表达与化疗疗效间的相关性。方法：采用免疫组化二步法检测7l例术后有残余病灶的上皮性卵巢癌组织p53、MDRl、GST-π基因表达，并给予6-8个疗程以铂类为主的联合化疗，比较二者间的相关性。结果：卵巢癌中p53、MDRl、GST—π基因的阳性率分别为70．4％(50／71)、28．2％(20／71)、60．6％(43／71)，单一基因表达时，阳性组与阴性组与化疗疗效间无统计学意义(P>0．05)。而p53、MDRI、GST-π两者共表达时，阴性组对化疗的敏感性明显高于阳性组，差异有显著性(P<0．05)，三者共表达时，差异有极显著性(P=0．01)。结论：卵巢癌p53、MDRl、GST—π两个或三个相关基因共表达与化疗疗效间具有明显相关性，从而为临床预测化疗疗效及制定合理化疗方案提供实验依据。

肿瘤mdrl／p170与多药耐药性的关系及研究进展

化疗是治疗恶性肿瘤的常用方法，化疗失败的重要原因是肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性，其中以多药耐药性（Multidrug Resistance，MDR）最为常见，MDR的出现是当今肿瘤化疗的一大技术难题，本文就有关肿瘤多药耐药性的研究现状及其进展进行综述。

儿童急性白血病mdrl,bcl-x_L/bcl-XS和bcl-2/bax基因表达水平改变及其临床意义

目的 通过检测儿童急性白血病多药耐药基因及细胞凋亡调控基因表达水平的改变 ,分析不同类型白血病的主要耐药机制。 方法 采用RT PCR检测 75例儿童急性白血病骨髓细胞mdr1、Bcl 2、Bax、bcl xL 和Bcl xs基因的mRNA表达水平 ,同时分析化疗效果。结果 ANLL耐药组mdrl基因和bcl 2基因表达率明显升高。其中7/14例mdrl阳性表达的未缓解患者同时具有Bcl 2基因的表达 ;ALL耐药组中Bcl 2 /Bax和bcl xL/bcl XS的比值升高明显高于药物敏感组。结论 儿童ALL和ANLL存在不同的耐药机制。

mdrl的表达在非小细胞肺癌多耐药机制中的意义

目的探讨非小细胞肺癌的化疗耐药性和mdrl基因表达的关系,明确mdrl在非小细胞肺癌耐药中的作用。方法应用肿瘤细胞体外培养和MTT法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物(环磷酰胺、阿霉素、顺铂+氟尿嘧啶)敏感性测试,并用免疫组化方法进行mdrl表达的检测,并进行相关分析。结果化疗敏感性:53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂+氟尿嘧啶耐药。mdrl在91例中总的阳性表达率为58.2%。鳞癌和腺癌相比mdrl的表达差异无统计学意义(P>0.05),而且mdrl与耐药性均呈显著正相关(P<0.05),并且不同表达程度间差异也有统计学意义(P<0.05)。结论mdrl参与介导了非小细胞肺癌固有化疗耐药的机制。

bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。

X射线照射K562细胞后mdrl基因表达和白血病干细胞含量的变化

目的研究白血病K562细胞经X射线照射后耐药基因mdr1表达、白血病干细胞(LSC)含量和药物敏感性的变化,探讨白血病辐射耐受性与药物耐受性的相关性。方法以白血病K562细胞为模型,直线加速器X射线照射,采用实时荧光定量PCR技术检测mdr1 mRNA表达,流式细胞术检测LSC表面标志和P-糖蛋白(P-gp)表达,MTT法测定细胞的药物敏感性。结果白血病K562细胞系mdr1基因表达和LSC含量极低,经不同剂量的X射线照射后,K562细胞中LSC的含量显著增加,mdr1/P-gp表达增高,随时间延长而逐渐降低;对阿霉素的敏感性明显降低。结论X射线照射可提高白血病K562细胞群中LSC的比例和刺激mdr1/P-gp表达,继发性地降低其对常规化疗药物的敏感性。

THE RELATIONSHIP BETWEEN mdrl GENE EXPRESSION AND DRUG-RESISTANCE IN OVARIAN CARCINOMA

Objective.To investigate the relationship between mdrl gene expression and multidrug-resistance in o- varian carcinoma. Design. We established tumor-bearing mice model of ovarian carcinoma,compared the anticancer drug sensitivity of OC/mdr-cell and OC/mdr+ cell in vitro, investigated the effect of cyclosporin A on reversing the multidrug resistance both in vitro and in the tumor-bearing mice model,detected the mdrl gene expre- sion in human ovarian carcinoma specimens. Main outcome measures. Anticancer drug sensitivity of both OC/mdr-cell and OC/mdr+ cell is mea- sured by the methods of MTT assays. mdrl gene expression is detected by the methods of RT-PCR. Results. Using MTT assay,OC/mdr+ cell is 4. 1 - 15. 5 times more resistant to VP-16,VCR,DNR, and DOX than OC/mdr-cell in vitro.2 μg/ml cyclosporine A(CsA)reduced the resistance of OC/mdr+ cell to DOX,from 0. 324±0. 072μg/ml to 0. 088±0. 024μg/ml. To OC/mdr－cell,CsA did not significantly in－ crease its sensitivity to DOX．Tumor-bearing mice with positive mdrl gene expression showed non-respon- siveness to DOX chemotherapy. When combined with intraperitoneal injection of CsA, the growth rate of tumor cells decreased significantly (P<0. 01 ). Only 4 of 23(17. 39% )tumors from patients who had not received chemotherapy exhibited positive mdrl gene expreession, while 6 of 9 (66. 67%)treated patients showed positive mdrl gene expression (Fisher exact test: P<0. 05 ). After cytoreductive surgery and chemotherapy, 14 of 19 untreated patients with negative mdrl gene expression had partial or complete re- sponse, while in patients with positive mdrl gene expression, 8 of 10 showed poor prognosis(Fisher exact test: P<0. 05 ). Conclusion. The expression of mdrl gene is associated with previous chemotherapy. CsA can reverse the resistance of mdr+ cells to indr-associated drs both in vitro and in vivo’ For the patients with ovarian carcinoma., the percentage of nonresponsiveness to the chemotherapy was found to be significantly higher among patients with positive mdrl gene expression than those with negative mdrl gene expression. mdrl gene expression can be detected to predict the clinical prognosis of patients with ovarian carcinoma.

胆囊癌与mdrl基因的临床相关性研究

目的 研究多药耐药基因mdr1编码P 糖蛋白 (Pgp)和mRNA在原发性胆囊癌组织中的表达 ,分析其临床意义。方法 采用S P免疫组织化学方法和原位多聚酶链反应 (PCR)对 53例未化疗原发性胆囊癌和 1 2例胆囊炎存档石蜡包埋切片组织中Pgp、mdrlmRNA的表达进行检测。结果 53例胆囊癌、1 2例胆囊炎组织中Pgp和mdrlmRNA阳性表达率分别为 60 .38%、71 .69%和 2 5 .0 0 %、33 .33 %。两组mdrl基因表达差异有显著性 (P <0 .0 5)。胆囊癌组织中的Pgp和mdrlmRNA阳性率在胆囊癌Nevin分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中为 69.44%和 83 .33 % ,Ⅳ、Ⅴ期为41 .1 8%和 47.0 6 % ;高、中分化为 69.2 3 %和 79.49% ,低、未分化为 35 .71 %和 50 .0 0 %。胆囊癌Nevin分期Ⅰ～Ⅲ和高中分化mdrl基因表达明显高于Nevin分期Ⅳ、Ⅴ及低未分化胆囊癌组织 (P<0 .0 5)。结论 胆囊癌多药耐药性与其内源性耐药密切相关 ,检测mdrl基因为逆转耐药提供依据。mdrl基因表达与胆囊癌部分生物学特性相关 ,mdrl基因可能参与癌肿的发生 。

槲皮素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药的研究

目的 探讨槲皮素逆转白血病细胞多药耐药在膜转运蛋白方面的机制。方法 通过MTT体外药敏法证明槲皮素对柔红霉素的增敏作用并确定逆转的浓度范围 ,作用于K5 6 2 /ADM耐药株及相应敏感株K5 6 2 /S ,运用逆转录多聚酶链式反应(RT PCR)和流式细胞术检测多药耐药基因 (Mdr1)及其膜蛋白产物P 170糖蛋白 (P gp)的表达情况 ,在激光共聚焦显微镜观察柔红霉素在亚细胞水平的分布变化。结果 2 0～ 4 0 μmol/L终浓度槲皮素在体外能明显提高柔红霉素对K5 6 2 /ADM耐药株的敏感性 ,并能下调Mdr1基因及其膜蛋白产物P gp的表达 ,恢复柔红霉素在亚细胞水平的异常分布 ,回归其作用靶点———细胞核 ,从而逆转多药耐药 ,且有效浓度范围的药物对细胞本身无毒性作用。

MDR1 C3435T基因多态性对环孢素体内代谢影响的荟萃分析

目的通过荟萃分析进一步观察MDR1 C3435T基因多态性对于环孢素体内代谢的影响。方法通过Pubmed搜索C3435T基因多态性对于环孢素体内代谢影响的相关文献,提取AUC0-4,AUC0-12,AUC0-inf,Cmax,CL/F,和C0等药物动力学参数,使用STATA 9.1软件进行荟萃分析。结果共有14篇参考文献,包括1036名受试者符合本次荟萃分析的入选条件,荟萃分析显示在C3435T野生型杂合子(CC)中,AUC0-12低于其他基因型的受试者。在白种人中,C3435T野生型杂合子(CC)携带者的C0低于其他基因型的白种受试者。其他药物动力学参数在C3435T各基因型之间未见显著差异。结论本荟萃分析没有发现MDR1 C3435T基因多态性对于环孢素体内代谢有较大的影响,但是观察指标的选择是观察结果差异的原因之一;MDR1 C3435T表型和基因型的相关性可能存在种族差异。

姜黄素对耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转作用研究

目的:研究姜黄素对慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM中多药耐药基因mdrl表达的下调作用。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测各处理组K562/ADM细胞株中mdr1基因表达;利用MTT试验检测姜黄素处理后K562/ADM细胞株对阿霉素敏感性的改变。结果:姜黄素抑制了K562/ADM细胞株中多药耐药基因mdr1的表达,姜黄素明显增加K562/ADM细胞株对阿霉素的敏感性。结论:姜黄素通过抑制P-gp的药物外排作用有效逆转K562/ADM细胞株的多药耐药性。

超剂量化疗治疗mdr1基因转染骨髓移植的VX2肝癌兔疗效和毒副作用研究

目的:mdr1基因转染的骨髓造血细胞自体移植后,观察VX2肝癌兔超剂量化疗中mdr1基因的骨髓保护及肿瘤治疗作用;并观测超剂量化疗对心脏的毒副作用。方法:mdr1基因转入兔骨髓单个核细胞并自体移植;阿霉素化疗,观测外周血白细胞数、VX2肝肿瘤的生长及转移、心脏结构和功能变化,评价mdr1基因对受体骨髓的保护作用、超剂量化疗对肿瘤的治疗作用及对心脏的毒副作用。结果:通过转染的自体骨髓移植将mdr1基因导入受体骨髓;超剂量阿霉素化疗后,实验组荷瘤兔外周血白细胞可维持在(4.26±1.03)×109/L,肿瘤能被有效杀灭,荷瘤动物的生存时间明显高于对照组(P<0.05);同时也观察到超剂量化疗对心脏的严重损害。结论:mdr1基因能明显提高骨髓对化疗的耐受性;超剂量化疗能有效杀灭肿瘤,同时也对非造血系统脏器造成严重损害。

人肿瘤坏死因子-α基因转导绒癌耐药细胞系体外耐药逆转的研究

目的 将人肿瘤坏死因子 alpha(hTNF α)基因导入已建立的绒癌耐药细胞系 ,观察hTNF α基因转导后对绒癌细胞耐药性逆转的体外作用。方法 通过阳离子脂质体将hTNF α基因转导绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hTNF α片段的单细胞克隆 ,用RT PCR方法和细胞免疫组织化学方法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞中MDR1mRNA和MDR1蛋白 (P gp)表达水平的改变。采用四甲基偶氮唑蓝比色法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞对足叶乙甙 (VP 16 )的耐药指数。结果 转导hTNF α基因后 ,绒癌耐药细胞中检测出hTNF αmRNA表达 ,转导hTNF α基因在mRNA水平能一定程度的逆转绒癌耐药细胞的MDR1,而在P gp蛋白水平几乎能完全逆转绒癌耐药细胞的MDR1。转导hTNF α基因的细胞的耐药指数明显降低。结论 hTNF α基因转导后 ,可通过调节MDR1的表达 。

小檗胺逆转MCF7/ADR细胞耐药性及其机制探讨

目的 探讨钙调素拮抗剂小檗胺 (BBM)逆转多药耐药的可能性及其机制。 方法 乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素 (ADR)MCF7 ADR细胞与ADR及不同浓度BBM共培养 ,经四唑盐 (MTT)比色法计算半数抑制浓度 (IC50 )、耐药倍数和增敏倍数 ;流式细胞仪检测细胞内ADR相对含量和P糖蛋白 (P gp)表达水平 ;半定量RT PCR检测mdr1基因mRNA表达。 结果 ADR对MCF7和MCF7 ADR的IC50 分别为 (0 98± 0 0 6 ) μmol L和 (10 1 2 0±5 72 ) μmol L ;MCF7 ADR对ADR的耐药倍数为 10 3。MCF7 ADR细胞 5 μmol L、10 μmol L和 2 0 μmol LBBM时对ADR呈剂量依赖性增敏作用 ,增敏倍数分别为 2 76、5 88和 2 8 2 6倍 (均P值 <0 0 1)。用 10 μmol 或 2 0 μmol LBBM处理MCF7 ADR细胞 2h ,细胞内的ADR相对含量增加 2 4 9和 2 81倍 (P <0 0 1) ;处理 72h使P gp表达分别下降10 0 9%和 6 2 82 % (均P值 <0 0 1) ,且mdr1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。 结论 BBM提高耐药细胞MCF7 ADR胞内的ADR浓度 ,下调mdr1基因及P gp的表达 ,使其对ADR的敏感性显著增高。

ASODN逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因mdr1的体内实验研究

目的 在体外实验研究的基础上进一步观察反义硫代磷酸酯寡核苷酸 (ASODN)在裸鼠体内逆转耐药肝癌细胞SMMC 772 1/ADM多药耐药基因mdr1的作用。方法 取体外培养的耐药肝癌细胞 (1× 10 7个 /0 .2ml)注射于裸小鼠腋部皮下 ,建立耐药肝癌模型 ,而后将成模裸鼠分成 4组 ,每组各 5只。ASODN组在裸鼠肿瘤局部注射浓度为 3μmol/L的ASODN 5 0 μl和脂质体Lipofectamine 5 0 μl,并在腹腔内注射阿霉素 (ADM ,每天 10mg/m2 ) ;正义链组 (SODN组 )与ASODN组的方法、剂量相同 ;对照 1组、对照 2组分别在裸鼠局部注射Lipofectamine 5 0 μl和生理盐水 2 0 0 μl,同时腹腔注射ADM (每天 10mg/m2 )。寡核苷酸于观察的两周内每周前 3d注射 ;ADM于每周的第 2～ 4天使用。Lipofectamine和生理盐水使用时间与寡核苷酸相同。结果 随着时间的推移 ,4组裸鼠的肿瘤体积逐渐增大 ,且于第 5天开始变化明显 ,此后各时相之肿瘤体积与前一时相比较 ,差异均有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;ASODN组的肿瘤体积在第 5天后明显小于其他 3组 (P<0 .0 5 ) ;而对照 1组、对照 2组及SODN组各时相的肿瘤体积差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。该实验结果提示 ,SODN及脂质体对裸鼠肿瘤的生长无明显影响 。