浙江北部农村孕妇麻疹抗体水平的调查

目的为了解浙江北部小于8月龄幼儿麻疹病例增多的原因,对孕龄妇女麻疹抗体水平进行调查。方法采集外周静脉血分离血清,采用ELISA法和中和实验方法分别检测麻疹IgG抗体和中和抗体的平均水平及阳性率。结果218名孕妇麻疹抗体IgG水平的阳性率为80.7%,与麻疹分离野毒株的中和抗体几何平均滴度为30.36±4.70,其中中和抗体<1∶2的阴性样本占16.51%,<1∶8者所占比例为19.27%,≥1∶16者所占比例为73.39%。结论孕妇人群中麻疹低滴度抗体会影响母传抗体的维持时间,这很可能和近年来麻疹爆发表现为成人和低月龄儿病例,尤其是未满8月龄婴幼儿病例增多有极大的关系。

麻疹疫苗预防犬瘟热的试验研究

为调查麻疹疫苗用于预防犬瘟热的可行性,选择同窝8只土种幼犬,按2～2.5人份/犬的剂量对A组幼犬（n=3）进行2次麻疹弱毒疫苗接种,应用微量中和试验测定免疫前及每次免疫后第7 d血清中的犬瘟热病毒（CDV）中和抗体效价,并转移加强免疫犬外周循环全血[（3.2～3.5）mL/犬]给未免疫B组犬（n=3）,3 d后用Vero细胞分离培养的第3代CDV昆明分离株,以2000个TCID50（相当于5600 PFU）/犬的剂量对上述2组犬和对照C组犬（n=2）进行肌肉注射或滴鼻攻毒。结果发现：不论是否接种麻疹弱毒疫苗,所有犬只均未产生可检测到的CDV中和抗体（效价低于1∶4）;攻毒后连续观察14 d,A组与B组均未出现犬瘟热临床症状,C组出现明显的犬瘟热症状但未死亡。以上结果表明：麻疹弱毒疫苗不能诱导犬产生CDV中和抗体,但可诱导产生有效的抗CDV感染的细胞免疫力。

Edmonston-Zargreb和沪191麻疹疫苗免疫婴儿的血清学研究

研究目的在于评价两种疫苗免疫婴儿的血清学效果和接种后的反应。所用两种疫苗的滴度均为3．5LogTCID50/0．1ml．婴儿被随机分人接种E-Z0．5ml、沪1910．2ml和沪1910．5ml各组，3个组中和抗体阳转率、＞200mlu／ml阳性率均无显著性差异（x2=0．189，0.886；P＞0005）；沪1910．5ml组血凝抑制抗体的阳转率、＞200mlu／ml阳性率均高于同剂量E-Z组（X2=561，5.4；P＜0.05）。免前未测到抗体者的中和抗体、血凝抑制抗体阳转率显著地高于免前测到抗体者（X2=7．09～36．907，P＜0．01～0．001）。沪191和E-Z麻疹疫苗接种后的皮疹率分别为47.8％和16.5％，差异十分显著。未观察到严重不良反应。

3种鸭源细小病毒的抗原相关性研究

为了明确番鸭细小病毒(MPV F株)、番鸭源鹅细小病毒(MD-GPV PT株)和鸭短喙型鹅细小病毒(SBDS-GPV M15株)的抗原相关性,本研究应用微量中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)测定了3种病毒分别与同源和异源血清的中和抗体和LPAI抗体效价,分析三者之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;MPV与MD-GPV和SBDS-GPV之间的中和抗体效价R值分别为0.01和0.02,LPAI抗体效价R值分别为0.03和0.04;MD-GPV和SBDSGPV中和抗体和LPAI抗体效价R值均为0.35。表明MPV与GPV(包括MD-GPV和SBDS-GPV)之间的抗原相关性较低;MD-GPV与SBDS-GPV抗原相关性较高,为同一血清型的不同亚型。研究结果为有效防控不同鸭源细小病毒感染提供了理论依据。

冻干麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗的研制

由麻疹病毒沪 191株和腮腺炎病毒 WM84株在 SPF鸡胚成纤维细胞上制备的单价病毒液 ,在特定的工艺流程中 ,按比例配制后加入适宜的保护剂 ,经冻干而制备成冻干麻疹流行性腮腺炎二联活疫苗。 6批冻干二联疫苗经自检和中国药品生物制品检定所检定 ,结果提示 :冻干疫苗的基础滴度与热稳定性等指标均符合 WHO规程和《中国生物制品规程》 (1995年版 )中对单价麻疹疫苗和单价腮腺炎疫苗的规程要求 ;冻干二联疫苗在 2～ 8℃保存 18个月的滴度稳定性与单价疫苗一致。

酶联免疫吸附试验与中和抗体试验检测麻疹抗体比较研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和抗体试验(NT)在麻疹抗体检测中的应用价值。方法以NT为"金标准",同时用德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒检测364份麻疹抗体滴度,将两种方法测定的结果进行比较。结果 NT的阳性率为57.69%,几何平均滴度(GMT)为1∶5.48,ELISA的阳性率为42.86%,平均抗体活性值为48.57IU/L。定性结果发现,ELISA特异度为99.35%,其敏感度即阳性符合率为73.81%,且阳性符合率随着滴度增加呈现增高的趋势(z=-5.99,P<0.001)。Fisher精确概率法发现,滴度1∶2组、滴度1∶4组与其他各组阳性符合率差异均有统计学意义(P<0.05),滴度1∶8组与滴度≥1∶64组阳性符合率差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P>0.05)。定量结果发现,ELISA抗体活性值与NT滴度呈明显正相关,相关系数r=0.884,P<0.001。结论德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒在检测低滴度麻疹抗体时易出现假阴性,检测高滴度麻疹抗体时,两种方法敏感性接近;滴度临界值为1∶8～1∶16。该试剂可推荐用于健康人群麻疹抗体水平监测。

上海市虹口区15岁以上人群麻疹抗体水平监测与分析

目的了解上海市虹口区15岁以上人群麻疹抗体水平和麻疹发病情况,为制定成人麻疹免疫策略提供依据。方法定量ELISA法检测本区及外来15岁以上人群的麻疹抗体水平,与微量细胞中和法检测结果进行比较,并对1998～2007年本区和外来16岁以上人群麻疹发病资料进行分析。结果本区和外来15岁以上人群麻疹抗体平均阳性率分别为96.83%和98.21%,麻疹抗体GMT平均水平分别为1217.86和1553.73IU/ml,本区各年龄组抗体GMT水平15～19岁组最低,40岁以上组最高;外来各年龄组间抗体GMT水平差异无统计学意义,15～19岁组和30～39岁组麻疹抗体水平显著高于本区人群;ELISA法与微量细胞中和法检测结果呈正相关,回归方程有统计学意义,15岁以上人群中仅有83.5%达到麻疹抗体保护性水平;近10年来,本区与外来16岁以上人群中麻疹发病比例有逐年增高的趋势,本区发病比例显著高于外来人群。结论为消除麻疹,有必要制定成人麻疹免疫策略,其中本区成人麻疹防制策略较外来成人更为紧迫。

麻疹病毒中国株与日本株的H蛋白及抗原性比较

198 4年以来日本分离的本土麻疹野病毒为C1、D3、D5基因型 ,中国自 1993年以来流行的绝大多数麻疹野病毒为H1基因型。 2 0 0 0年在日本东京检测到 1株由中国输入的H1基因型麻疹野病毒。对该中国株H1基因型与日本株C1、D3、D5基因型的H蛋白及抗原性进行了比较 ,结果表明 :H1基因型H蛋白的分子量为 78kD ,与A、C1基因型相似 ;D3、D5基因型的H蛋白的分子量为 80～ 82kD ,一些D3基因型在 39℃与在 33℃、37℃生长一样好 ,但其它基因型在 39℃生长却减少到 33℃、37℃的 1/ 10 0或 1/ 10 0 0。实验证实 ,一些D3、H1基因型能从较低的中和抗体水平逃逸 ,证明最近流行的麻疹病毒有轻微的抗原改变。

麻疹中和试验对酶联免疫吸附试验的质量控制探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）检测麻疹IgG抗体的质量控制方法。方法2003年对3个年龄组的294份ELISA法检测麻疹IgG抗体后的血清，用中和试验加以证实。结果两种方法相关，但差异较大，相关系数0．423-0．684，阳性符合率64．76％～98．24％。结论排除两种试验方法本身敏感性的差异，麻疹ELISA—IgG试剂盒质量的稳定性、操作方法的精确性等问题值得关注，必须确保血清学检测方法标准化。

麻疹IgG抗体定量检测酶联免疫吸附试验试剂的比较和评价

目的对目前中国市场上已有的两种麻疹IgG抗体定量检测酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)试剂(德国Virion/Serion试剂和德国IBL试剂)进行比较和评价,筛选适用于2006年全国人群麻疹血清流行病学调查的试剂。方法以蚀斑减少中和试验(Plague Reduction Neutralization Test,PRNT)的检测结果为"金标准",分别用两种ELISA试剂检测52份麻疹IgG抗体组合血清,然后对试剂的定性和定量能力进行全面分析和评价。结果两种ELISA试剂均能正确的将13份PRNT结果为阴性的血清判定为阴性,特异度均为100%。两种试剂中,Virion/Serion试剂的敏感度为94.9%,与PRNT结果的相关性Kappa值为0.902,相关系数为0.878(P<0.01);IBL试剂敏感性为58.8%,与PRNT结果的相关性Kappa值为0.441,相关性系数为0.850(P<0.01)。结论Virion/Serion试剂的特异性、敏感性较好,有单孔IgG抗体定量能力,价格适中,适于在自动化工作平台工作站中开展大规模血清样本的检测。

空斑减少中和试验与血凝抑制试验测定血清抗麻疹病毒抗体的比较

为了对比空斑减少中和试验与血凝抑制试验在评价人血清抗麻疹病毒抗体测定结果时的异同,对328名3～6月龄儿童接种沪191麻疹疫苗前后的血清样本用以上两种方法进行了测定。结果表明,在测定免前血清抗麻疹病毒抗体时,空斑减少中和试验比血凝抑制试验灵敏,在测定免后血清抗麻疹病毒抗体时,两种方法测定结果无显著性差异。空斑减少中和试验能测出婴儿血清中存在的极少量的母传抗体,在考核母传抗体对麻疹疫苗免疫效果的影响时,应考虑选用。

实时细胞监测技术的人肠道病毒71型感染性检测方法研究

开展基于微电子传感器技术的实时细胞监测技术(Real-time Cell Assay,RTCA)在人肠道病毒71型(HEV71)病毒诱导的细胞病变检测方法中的应用价值研究。动态观察RD细胞不同阶段的生长指数,选择合适的细胞浓度开展HEV71病毒感染力和血清中HEV71中和抗体效价测定。同时应用传统的微量试验作为方法学的比较和结果验证。细胞阻抗通过软件转换成细胞指数CI值和可视的动态变化曲线显示,在96电子孔板上,当RD细胞浓度为1.5×104个/孔时能满足HEV71病毒感染性检测的观察天数大于5d的要求。与传统显微镜观察细胞CPE的方法比较,两种方法在接种病毒后的132h(约5.5d)产生病毒致细胞病变的终点判断结果一致。在中和抗体试验中,三份感染HEV71病毒的人血清中和抗体效价CI值结果和传统的96孔微量板镜检法结果相符。实时细胞监测技术可以提示研究者,即使是终点判断结果为相同的中和抗体滴度的血清,其所含病毒诱导的细胞病变出现时间也可能有所不同。实时细胞监测技术用于HEV71病毒感染力和血清中和抗体效价检测与传统的微量板法检测相比可以节省劳力,消除人为判断的误差,可以作为传统检测方法的补充手段之一,也可以动态观察细胞病变的发生和发展,为进一步深入研究病毒感染力强弱或血清抗体消长提供更为科学的数据。

荧光定量聚合酶链反应用于非脊髓灰质炎肠道病毒定性方法的评估

目的在河北省脊灰实验室应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV)进行定性。方法采用荧光定量PCR法对既往河北省脊灰实验室分离到NPEV进行检测,并将检测结果与中和实验鉴定结果和新流程方法检测结果进行比较分析。结果 75株用中和实验方法定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为98.7%(74/75),33株用新检测流程定性的NPEV与荧光定量PCR方法检测的符合率为81.8%。结论荧光定量PCR用于NPEV进行定性的检测方法是可行的。

疫苗检定用麻疹病毒抗血清的制备

目的制备麻疹病毒抗血清,用于含麻疹病毒成分的联合减毒活疫苗的检定。方法制备麻疹病毒Edm-3株病毒收获液,加入弗氏佐剂,对家兔和豚鼠分别经皮下多点或腹腔途径免疫3针,采血制备抗血清,经除菌过滤和补体灭活后,对抗血清进行中和效价、中和能力、细胞毒性及特异性检测。结果用4种免疫方式制备的抗血清中和效价均高于1∶320,其中豚鼠背部皮下组中和效价为最高,达到1∶2 459;将豚鼠背部皮下组抗血清稀释至1∶320,能够完全中和每毫升2 000半数细胞培养物感染量的麻疹病毒,同时对Vero细胞、RK-13细胞、MRC-5细胞无细胞毒性,且不可中和腮腺炎病毒、风疹病毒和水痘病毒。结论采用Edm-3株麻疹病毒收获液,通过背部皮下多点方式免疫豚鼠可制备具有较高中和效价的麻疹抗血清,可用于疫苗检定。