甘草甜素对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的:探究甘草甜素(Gly)对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养正常人喉黏膜上皮细胞和喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白印迹实验检测微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)mRNA和蛋白表达水平。将喉癌Hep-2细胞分为对照组、Gly低浓度组、Gly中浓度组、Gly高浓度组、Gly高浓度+空载质粒组、Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组。各组给予相应浓度的Gly干预或转染对应质粒培养48 h。Transwell实验和划痕实验分别检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。RT-qPCR法和蛋白印迹实验检测各组Hep-2细胞miR-205-5p、SIRT3 mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-205-5p与SIRT3的靶向关系。结果:与人喉黏膜上皮细胞比较,喉癌Hep-2细胞miR-205-5p水平降低,SIRT3 mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05)。与对照组比较,Gly低、中、高浓度组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平依次降低,miR-205-5p水平依次升高(均P<0.05)。与Gly高浓度组和Gly高浓度+空载质粒组比较,Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平升高,miR-205-5p水平降低(均P<0.05)。miR-205-5p可靶向调控SIRT3表达。结论:Gly能够抑制Hep-2细胞侵袭和迁移,其机制可能与上调miR-205-5p表达,进而靶向下调SIRT3表达有关。

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

目的探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine,BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ROS(mtROS);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率(P<0.05),并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平(P<0.05)。过表达NRAV或740Y-P处理可逆转BE对RSV感染HEp-2细胞的改善作用。结论BE能够减轻RSV感染所致HEp-2细胞损伤,其机制可能与BE下调NRAV和PI3K/AKT通路,诱导线粒体自噬,进而减轻线粒体损伤和炎症反应有关。

不同残差网络模型的HEp-2细胞荧光图像分类比较

对人的喉癌上皮细胞(HEp-2)进行准确的荧光细胞图像分类,对识别、诊断以及后续治疗起着关键的作用,同时用HEp-2细胞鉴定抗核抗体(ANA)也是判别自身免疫病的常用方法之一。以计算机视觉为基础的HEp-2细胞分类和抗核抗体分析,有助于降低专家的工作量,加强疾病检测技术的准确性和快速性。文章提出了基于深层次残差网络的HEp-2细胞分类研究,并利用不同残差模型进行实验和比较。实验表明,该方法可有效地对HEp-2细胞进行分类。

白莪星注射液诱导Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的 观察自拟白莪星注射液诱导癌细胞系Hep - 2细胞凋亡的抑制Hep - 2细胞体外生长的效应 ,为临床应用与新药开发奠定实验基础。方法 将原液稀释为 10倍、10 0倍、10 0 0倍、1× 10 4倍、1× 10 5倍、1× 10 6倍 ,加入Hep - 2细胞培养 ,MTT法检测细胞生长情况 ,TUNEL法标记细胞流式细胞仪测定凋亡率。结果 稀释 10 0倍、10 0 0倍和 1× 10 4倍的白莪星注射液在第 3天和第 5天抑制Hep - 2细胞生长 ;稀释 10 0倍和 10 0 0倍的白莪星注射液可以促进Hep - 2细胞的凋亡 (P<0 0 5 )。结论 白莪星注射液具有明显抑制体外培养喉癌细胞系Hep - 2细胞生长增殖的作用 ,其作用机制可能与白莪星注射液能诱导喉癌细胞系Hep - 2细胞发生显著凋亡的作用有关。

迟缓爱德华氏菌对HEp-2细胞的侵袭特性

用细胞裂解计数法及超薄切片电镜观察法分析了迟缓爱德华氏菌侵袭HEp—2细胞的基本特性。在15株来源各异的迟缓爱德华氏菌中，有6株细菌具有对HEp—2细胞的侵袭能力。细菌侵入细胞后，主要位于空泡内。侵入细胞内的迟缓爱德华氏菌不仅可在细胞内增殖，而且可从细胞内释放出来。用细胞松弛素破坏微丝后可抑制其侵袭作用，而且表现出剂量依赖关系，而用秋水仙素破坏微管后不影响其侵袭力。这表明在迟缓爱德华氏菌对HEp—2细胞的侵袭过程中，细胞骨架中有微丝的参与，未发现微管的参与。

miR-135a通过下调SOX2抑制喉癌Hep-2细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

目的:探讨敲降miR-135a对人喉癌上皮Hep-2细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法:收集2018年1月至2018年6月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2细胞中miR-135a的表达水平。miR-135 inhibitor转染喉癌Hep-2细胞后,采用CCK-8检测Hep-2细胞活性,集落形成实验检测Hep-2细胞集落形成能力,Transwell实验检测Hep-2细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor的Hep-2细胞,CCK-8实验检测Hep-2细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测Hep-2细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor质粒、对照pcDNA空载体(SOX2-Con)质粒、pcDNA-SOX2(SOX2-OE)质粒共转染Hep-2细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果:与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高(P<0.01);与正常NHP细胞比较,miR-135a在Hep-2细胞中表达水平明显上调(P<0.01);转染miR-135a inhibitor导致Hep-2细胞中miR-135a表达水平明显降低(P<0.01)。敲降miR-135a明显降低Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2表达(均P<0.01);明显增强细胞对奥沙利铂敏感性(P<0.01);与miR-135a inhibitor+SOX2-Con组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加(均P<0.01);同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞存活率显著升高(P<0.01)。结论:敲降miR-135a可能通过下调转录因子SOX2的表达抑制Hep-2细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。

硒化麒麟菜多糖抑制人喉癌细胞株Hep-2增殖的作用

目的通过比较研究海藻麒麟菜多糖粗提物、无机硒化合物-亚硒酸钠(Na2SeO3)及其共价化合物-硒化麒麟菜多糖对人喉癌细胞株Hep-2的作用,探索新的具有抗肿瘤活性的有机硒化合物。方法应用不同剂量的样品作用于Hep-2细胞株后,用MTT比色分析法计算肿瘤抑制率。结果硒化多糖对Hep-2细胞的抑制率高于相同多糖浓度的麒麟菜多糖和相同硒浓度的亚硒酸钠(P<0.05)。硒化多糖的抑制率可高达71.53%,其多糖IC50与硒IC50分别为1805μg/ml和7.0μmol/L,分别低于麒麟菜多糖的多糖IC50(3034μg/ml)和亚硒酸钠的硒IC50(9.0μmol/L)。结论硒化麒麟菜多糖具有抗Hep-2细胞增殖的活性,其抑制作用明显优于亚硒酸钠及天然麒麟菜多糖的抗肿瘤活性。

田基黄对人喉癌Hep-2和人宫颈癌Hela细胞株生长的抑制作用

体外实验研究结果,田基黄对Hep-2和Hela人癌细胞株的生长均有明显抑制作用,使细胞圆缩、不贴壁和死亡。电镜观察,给药组Hep-2、Hela细胞线粒体肿胀、耗损和结构模糊;细胞核膜不完整、界限不清。

藻蓝蛋白诱导喉癌HEP-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨藻蓝蛋白对人喉癌HEP-2细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度藻蓝蛋白处理HEP-2细胞,分别以MTT、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞术检测藻蓝蛋白对HEP-2细胞活力及凋亡的影响;DCFH-DA标记的流式细胞术检测细胞内的活性氧水平;分光光度法检测细胞内caspase-3、-8、-9的活性;RT-PCR、Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:MTT结果显示藻蓝蛋白能够抑制喉癌HEP-2的细胞活力,且呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜、电镜、流式细胞术的一系列定性化和定量化实验证实藻蓝蛋白可显著诱导HEP-2细胞的凋亡;藻蓝蛋白处理后细胞内ROS水平升高,caspase-3、-8、-9被激活;RT-PCR结果表明,藻蓝蛋白作用后Bax、Fas、P53、caspase-3和caspase-9表达显著上调(P<0.05),Bcl-2表达显著下调(P<0.05);Western blot结果和RT-PCR结果一致。结论:藻蓝蛋白能够诱导HEP-2细胞的凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平升高,上调Bax、Fas和P53 mRNA,下调Bcl-2 mRNA的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞凋亡有关。

槲皮素对喉癌细胞Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用

目的研究槲皮素在体外对喉癌Hep-2细胞株的生长和凋亡的影响。方法应用MTT法、电镜和流式细胞术等方法对在体外经不同浓度槲皮素处理过的Hep-2细胞进行检测,观察细胞增殖和凋亡的改变。结果①槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Hep-2细胞的生长,作用72 h的半数抑制浓度(IC50)是52.48μmol/L,呈剂量依赖性关系。②PB能诱导Hep-2细胞凋亡,发生G1→S期阻滞。结论槲皮素可使喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,为槲皮素用于喉癌临床治疗提供了部分依据。

抗肿瘤药物与TRAIL联用对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响

目的探讨化疗药物顺铂(DDP)、5氟尿嘧啶(5-Fu)单独及与TRAIL联合对HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响。方法MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率。结果TRAIL与5-Fu、DDP联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率高于单独作用时的抑制率和凋亡率。结论TRAIL与5-Fu、DDP联合作用有协同抑制HEP-2细胞株增殖、诱导HEP-2细胞株凋亡的作用。

猴头多糖HEP-2化学成分研究

猴头菌 (Hericiumerinaceus (Bull )Pers )的菌丝体培养物经水溶、乙醇沉淀、除蛋白等步骤得到猴头多糖 (HEP) ,利用柱层析从HEP中分离得到两个组分HEP 1和HEP 2。用高效液相凝胶法 (HPGPC)鉴定了HEP 2的纯度及分子量 ,通过有机元素分析、IR、ICP等多种分析方法确定HEP 2为一种硫酸化复合多糖 ,首次确定了猴头多糖的基本化学组成。

超抗原活化淋巴细胞对喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的观察超抗原活化淋巴细胞后对喉癌细胞的抑制作用。方法金黄色葡萄球菌肠毒素A与人淋巴细胞混合培养24h,激活淋巴细胞,再加入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞混合培养72h,通过MTT法观察喉癌细胞的抑制情况。结果①实验组金黄色葡萄球菌肠毒素A激活淋巴细胞后对人喉鳞癌Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率是42.68%,高于对照组4.82%(P<0.01)。②抑制作用呈现时间的依赖性。③金黄色葡萄球菌肠毒素A在不同浓度时对喉癌细胞的生长均有抑制作用,特别在浓度是1μg/ml、72h培养时抑制率最高,达82.83%。结论超抗原活化淋巴细胞后明显抑制喉癌细胞的生长。

siRNA抑制cortactin基因表达对Hep-2细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:皮层肌动蛋白(cortactin)是一种微丝肌动蛋白结合蛋白,其主要参与细胞骨架系统的调控,细胞外信号转导以及细胞黏附等过程,研究表明cortactin与肿瘤的侵袭和转移有关。因此,本研究旨在探讨siRNA(small interfering RNA)抑制cortactin基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖和侵袭的影响。方法:构建含有cortactin基因的siRNA表达载体,转染Hep-2细胞,同时以转染空载体和空白细胞组作为对照(3组细胞分别命名为pSilencer3.1-cortactin-siRNA/Hep-2、pSilencer3.1/Hep-2和Hep-2),G418筛选稳定转染的细胞;Western blot检测siRNA对cortactin蛋白表达的影响;MTT和平皿克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移侵袭能力。结果:成功构建获得cortactin缺陷型稳定转染细胞系pSilencer3.1-cortactin-siRNA/Hep-2;与Hep-2细胞比较,pSilencer3.1-cortactin-siRNA/Hep-2组细胞中cortactin含量为11.22%(P<0.01),增殖被抑制,克隆形成率降低为21.47%(P<0.01),迁移、侵袭能力显著降低(P<0.01)。结论:cortactin表达下调能抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭。

松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因转录的影响

运用基因芯片技术分析松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因表达的影响及分子机制。结果表明,经松乳菇多糖600μg/m L处理48 h后,在人喉癌Hep-2细胞中发现相关肿瘤差异基因共68个,其中人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因下调倍数大于100倍的基因共8个,下调50~100倍的基因共14个,同时按基因转录水平将这些基因进行了分类。运用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析技术分析相关基因通路,结果显示松乳菇多糖主要抑制人喉癌Hep-2细胞中的MAPK信号转导通路和PI3K-AKT信号转导通路。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2细胞的凋亡是多种基因共同作用的综合结果。用筛选出的基因进一步研究肿瘤凋亡的分子机制,对寻找潜在的抗肿瘤作用靶点具有重要生物学意义。

慢病毒介导的siRNA靶向CD47基因对人喉癌细胞Hep-2增殖、凋亡的影响

目的探究慢病毒载体介导siRNA抑制CD47基因表达后对人喉癌细胞株Hep-2体外增殖凋亡的影响。方法构建慢病毒载体,将靶向CD47基因的siRNA慢病毒转染至Hep-2细胞;用荧光显微镜行细胞形态学变化观察;RT-PCR检测细胞CD47 mRNA表达的变化;Western blotting检测CD47蛋白表达的变化情况;MTT法检测细胞的增殖凋亡情况。结果 CD47-siRNA慢病毒转染Hep-2细胞后,形态学观察显示CD47-siRNA能有效抑制Hep-2细胞增殖,细胞变形明显,体积变小,可见细胞坏死及凋亡。RT-PCR和Western blotting检测显示,CD47的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P〈0.05）,使CD47 mRNA表达减少76%~82%,CD47蛋白表达减少77%;慢病毒转染细胞在48h后MTT检测细胞凋亡率明显提高（P〈0.01）。结论慢病毒介导的siRNA干扰CD47基因表达后,明显抑制了喉癌Hep-2细胞CD47的表达并且诱导了Hep-2凋亡。

苦参碱对喉鳞癌细胞株Hep-2侵袭转移的影响

目的:研究不同浓度苦参碱对喉鳞癌细胞株Hep-2侵袭和转移的影响及其作用机制。方法:Hep-2细胞体外培养,经0g/L、0.1g/L、0.2g/L和0.3g/L苦参碱分别处理1h、8h及48h,细胞黏附实验检测细胞黏附力,细胞迁移实验检测细胞运动力,细胞侵袭实验检测细胞侵袭力,RT-PCR法检测Hep-2细胞MMP-2和MMP-9mRNA的表达。结果:不同浓度苦参碱与对照组比较,苦参碱能有效抑制Hep-2细胞的黏附力、运动力和侵袭力(P<0.01),且能下调Hep-2细胞MMP-2和MMP-9mRNA的表达(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制Hep-2细胞的浸润转移能力,其机制可能与下调MMP-2和MMP-9mRNA的表达使Hep-2细胞的黏附力、运动力和侵袭力下降有关。

粉防己碱对喉癌耐药细胞株Hep-2／ADM多药耐药逆转作用研究

目的探讨天然有效成分粉防己碱(tetrandrine,TET)对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM的多药耐药逆转作用及其可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对Hep-2/ADM细胞的增殖抑制效应,选取其无毒剂量;MTT法检测长春新碱(vincristine,VCR)对HEP-2和Hep-2/ADM细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱后的变化;采用流式细胞仪检测细胞内药物蓄积和外排程度以及细胞凋亡。结果1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对Hep-2/ADM细胞无明显细胞毒性作用。加入1.0μg/ml和1.5μg/ml粉防己碱后,Hep-2/ADM对VCR的耐药逆转倍数分别为1.72和2倍。1.5μg/ml浓度的粉防己碱可提高VCR在Hep-2/ADM细胞内药物的蓄积,增强VCR诱导的Hep-2/ADM细胞凋亡。结论粉防己碱可以部分逆转Hep-2/ADM细胞的多药耐药,随药物浓度增加,逆转效果有可能增强,其逆转机制可能与抑制P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关。

雷帕霉素与顺铂对Hep-2细胞的联合作用

目的探讨联合应用顺铂和mTOR抑制剂雷帕霉素对喉癌Hep-2细胞的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测雷帕霉素和顺铂单独或联合应用对喉癌Hep-2细胞的抑制率,计算IC50值,探讨联合用药的效果;采用流式细胞术和Hoechst33258免疫荧光检测药物单独或联合使用对喉癌Hep-2细胞凋亡的影响。结果雷帕霉素的IC50值为11.03nmol/L,顺铂的IC50值为8.81μmol/L。雷帕霉素可以拮抗Hep-2细胞增殖,使细胞停滞在G1期。联合使用雷帕霉素和顺铂进行化疗的协同治疗指数q>1.15(金氏公式),显示具有协同治疗作用;流式细胞术和免疫荧光检测显示联合使用雷帕霉素和顺铂可以明显增强对Hep-2细胞的凋亡水平。结论联合应用雷帕霉素和顺铂可以明显提高对喉癌Hep-2细胞的杀伤效果,二者具有明显的协同作用。

金纳米花介导的近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用

各向异性的金纳米粒子由于其表面等离子共振吸收峰可红移至近红外光区而具有特殊的近红外光热转换性能[1].研究结果表明,纳米棒等各向异性金纳米粒子可将入射的近红外光能转换成热能,从而有效杀伤肿瘤细胞[2].与手术、放化疗等常规治疗相比,金纳米粒子介导的近红外（NIR）热疗具有非侵入及无耐药性等优点,在肿瘤热疗和载药等领域具有广泛应用前景[3,4].传统的各向异性金纳米粒子的制备过程中需引入对生物体有毒的表面活性剂作配体[5,6],限制了其在生物医学领域的应用.