膜转运体Megalin、Cubilin在C57小鼠肾发生发育中的时空表达研究

目的观察膜转运体Megalin、Cubilin在发生发育小鼠肾内的分布,从而揭示它们在肾发生发育中相应功能分化的时空规律。方法C57BL/6小鼠按雌雄1∶1合笼饲养,并于胚(胎)龄(Ed)E10、12、14、16、18 d,及生后日龄(Pd)P1、3、7、14、28、42 d,分离胎鼠、仔鼠或成鼠的肾脏。应用改良的块染技术对不同发育阶段的肾脏组织进行整体固定及染色,分别进行常规石蜡包埋,制成连续的石蜡切片(5μm)。选取连续切片中目标切片,采用免疫组织化学技术和免疫荧光技术对不同发育阶段的小鼠肾脏膜转运体Megalin和Cubilin进行定位,观察其在不同发育阶段的表达情况。结果Megalin和Cubilin在E10 d的中肾管上皮细胞开始有表达,E12 d时表达于肾脏输尿管芽上皮细胞的近腔面游离缘,二者主要以共表达模式存在。E14 d以后在发生发育小鼠肾脏的“逗号”小体、“S”型小体上皮细胞的游离缘呈弱表达,于肾脏近端小管的上皮细胞游离缘表达明显,偶尔可见在未发育成熟的血管球有弱表达。Megalin和Cubilin在细段、远端小管、集合管系统以及间质部分都未见表达。结论膜转运体Megalin和Cubilin在中肾管、输尿管芽、“逗号”小体、“S”型小体,以及近端小管的依次表达规律提示小鼠肾脏在中肾形成时期就开始有蛋白或多肽的转运功能。此外,二者稳定地出现在较为成熟的近端小管,较弱地出现在未成熟近端小管,表明其重吸收蛋白质的功能与近端小管结构的成熟度有关。

糖尿病肾病早期白蛋白尿与Megalin的表达变化

目的:通过链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠Megalin的表达变化,了解糖尿病肾病时肾小管重吸收白蛋白的能力与Megalin的关系。方法:将SD大鼠分为正常对照组(N组)和糖尿病肾病组(DN组)。DN组以55mg/kg体重的剂量一次性腹腔注射1%STZ,N组一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液。在实验的2、4、6周分别处死两组的5只大鼠,并测量大鼠的血糖、24h尿量、24h尿白蛋白量、24h尿肌酐浓度、血清肌酐和尿素氮、体重和肾脏重量,计算肌酐清除率和肾脏肥大指数,应用免疫组化和RT-PCR技术观察各组大鼠2、4、6周的肾小管Megalin表达。结果:第2周DN组的Megalin表达水平与N组相比有显著下降(P<0.05),与第6周比较DN组Megalin表达逐渐降低,且有统计学差异(P<0.05)。结论:STZ腹腔注射所致大鼠糖尿病肾病的24h白蛋白尿增加与肾小管近端的Me-galin表达呈显著负相关关系。Megalin表达的降低不是一过性,也不能自行恢复,不加干预会随着病程延长而逐渐加重。

肾脏Megalin表达的调控机制

Megalin属于低密度脂蛋白（LDL）受体家族成员的一种跨膜受体蛋白，也是广泛存在于机体内的多功能内吞受体。糖尿病肾病、继发性肾小管损伤和透析相关肾淀粉样变等多种肾脏疾病与肾脏Megalin的缺失有密切关系。在肾脏，Megalin受多种因素调控，本文就目前对meggalin在肾脏表达的调控机制的最新研究进展作详细阐述。

缬沙坦通过上调肾皮质Megalin的表达减少自发性高血压大鼠肾小管性蛋白尿

目的:研究缬沙坦是否可通过上调近端肾小管多配体的胞吞受体Megalin的表达,从而减少自发性高血压大鼠(SHR)肾小管性蛋白尿。方法:选取14周龄雄性SHR72只,随机分为3组,每组24只,分组:缬沙坦组(50 mg·kg-1·d-1,SHR-V);氨氯地平组(10 mg·kg-1·d-1,SHR-A);空白对照组(SHR)。灌胃法给药7周,用药前后均测定血压。7周后处死大鼠,取出肾组织,免疫印迹法(WB)测定各组大鼠肾皮质中Megalin的表达含量。结果:SHR-V与SHR-A组降低系统性高血压的程度相当。SHR-V组降低白蛋白尿作用明显优于SHR-A组(P=0.01)。SHR-V与SHR-A、SHR组比较,可以显著减少肾小管性蛋白尿,这与SHR-V组Megalin表达上调相关(135±28%)。结论:血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦具有非血压依赖的肾脏保护作用,与肾皮质Megalin表达上调密切相关。此外,肾小管衰竭是高血压患者发生蛋白尿的重要机制之一。

稳定长期沉默肾小管上皮细胞Megalin基因表达的载体构建

目的:为探讨沉默Megalin基因对肾小管上皮细胞Megalin蛋白诱导表达的抑制作用,构建长期下调Megalin蛋白表达的慢病毒载体作为研究工具。方法:分别用30,50,80,100nmol/LsiRNA或对照siRNA转染人HK-2细胞,48h后用免疫荧光和RT-PCR鉴定Megalin基因表达筛选有效的序列,用有效或对照组序列的正义链和反义链,中间加loop环,两端加入XhoⅠ和hindⅢ的酶切位点作为目的序列,经过XhoⅠ和HindⅢ双酶切的慢病毒载体质粒PLL3.7作为载体,将目的序列与载体连接,转化到XL-10Gold高感受态大肠杆菌中,XhoⅠ和HindⅢ双酶切初步鉴定,测序进一步鉴定正确的序列。得到长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,免疫组化鉴定干扰有效,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株。结果与结论:成功筛选出有效干扰人Megalin基因的siRNA,通过慢病毒感染成功获得长期稳定下调人Megalin表达的肾小管上皮细胞株。

受体Megalin和Cubilin在培养的Opossum肾近端小管细胞的表达

目的及方法 采用Western印迹法及免疫细胞化学双标记法检测肾近端小管培养的OK细胞株上受体megalin及cubilin的表达及分布。结果 受体megalin及cubilin在分离的OK细胞膜上有所表达 ,并且 ,应用me galin及cubilin抗体的免疫细胞化学双标记法显示 ,它们分布在细胞内顶部胞质的细胞内吞系统 ,包括微绒毛根部的有被小凹、胞内的有被吞饮小泡、大泡、溶酶体及参与细胞膜再循环的顶部致密小管。结论 这一分布特征提示 ,两种大分子糖蛋白受体与肾近端小管上皮细胞受体介导的细胞内吞功能有关。由于其分布极其接近 ,很可能在一些大分子的重吸收中起到相互作用。

剪切应力增加致肾小管上皮细胞megalin／cubilin mRNA表达的变化及效应

目的检测剪切应力作用下肾小管上皮细胞megalin/dcubilin mRNA表达的变化，探讨糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）早期肾小管间质病变的发生机制。方法应用流室系统（flow chamber）提供0．5、1Pa（5、10dyn／cm^2）的剪切应力处理培养的肾小管上皮细胞，分别作用1、3、6h后，用RT-PCR法检测megalin／cubilin mRNA的表达。结果剪切应力以大小、时间依赖性的方式下调肾小管上皮细胞megalin／cubilin mRNA的表达。结论DN早期流体剪切应力的增加可下调肾小管上皮细胞megalin／cubilin mRNA的表达，从而减少了肾小管对蛋白质的重吸收,表明DN早期微量白蛋白尿的发生可能与肾小管间质的早期损伤有关。

受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管细胞的表达及定位

目的 检测肾小管细胞膜大分子糖蛋白受体Megalin和Cubilin在Opossum肾小管 (OK)细胞的表达及亚细胞分布。方法 采用Western印迹法、免疫荧光双标记法及免疫细胞化学双标记法。结果 受体Megalin及Cubilin在分离的OK细胞膜上有表达 ,荧光双标记显示两种受体十分相似地分布在细胞周边部 ,电镜下 ,标记金颗粒的两种受体相近地分布在细胞顶部胞质的细胞内吞系统。结论 两种受体在OK细胞上的分布特征与两种受体在体内肾近端小管小皮细胞的分布相似 ,提示OK细胞可成为研究两种受体介导可能的、未知的配体细胞内吞功能的有效细胞株 。

受体megalin和cubilin介导白蛋白吸收的免疫组织化学研究

目的及方法 采用免疫荧光双标记技术对培养的opossum肾 (OK)细胞膜受体megalin和cubilin的表达及其与荧光标记的白蛋白摄取的关系进行研究。结果 不同荧光标记的受体megalin及cubilin同时表达在相同的OK细胞上 ,分布主要局限在细胞膜 ,而且形式相似。被摄取的荧光标记的白蛋白点状分布在OK细胞内。此外 ,有受体megalin和cubilin表达的细胞就有白蛋白的摄取 ;反之 ,既不表达受体megalin和cubilin的细胞 ,也没有白蛋白的摄取。结论 这种白蛋白的摄取与受体megalin和cubilin表达的特征提示 ,两种大分子糖蛋白受体megalin和cubilin与白蛋白的摄取有密切相关性 ,很可能在肾小管重吸收白蛋白中起到相互作用。

细胞内吞受体megalin和cubilin在胚胎期小鼠肾的表达

目的研究细胞内吞受体megalin和cubilin在胚胎发生发育小鼠肾的表达,及其与肾小管发生发育的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测不同胚龄小鼠肾（每组5只）megalin和cubilin的表达。同时,结合透射电镜观察肾近端小管与细胞内吞功能相关的细胞器的发育变化。结果胚龄9.5d时,megalin和cubilin表达于中肾管及中肾小管上皮细胞游离面。胚龄11d至18d,两受体表达于输尿管芽上皮细胞游离面,在S小体期肾小管近腔面呈弱阳性表达,肾小管细胞内吞体及溶酶体少见,微绒毛稀疏。随着近髓肾单位细胞内吞体及微绒毛发育成熟,两受体表达局限于近端小管近腔面及刷状缘。结论megalin和cubilin在胚胎肾发生发育中,从表达在分化早期所有小管近腔面胞质,到局限于成熟期近端小管游离面刷状缘,提示两受体协同重吸收功能是随着近端小管上皮细胞的发育而逐渐形成的。

人Megalin基因四个结构域的cDNA克隆

以人肾脏组织cDNA为模板,用PCR技术克隆了编码人Megalin基因四个结构域的cDNA,并对其进行了测序.结果表明,编码人Megalin基因四个结构域的cDNA长度分别为863bp、1,008 bp、1,247 bp及1,359 bp.编码第一结构域的cDNA序列与GenBank报道的序列有99.9%的同源性,其中两个位点有差异(第457位和605位分别为C和G,而非G和A);其余三个结构域对应的基因序列与GenBank报道的序列完全相同.

成人肾病综合征患者肾小管megalin表达变化及其可能机制探讨

目的检测成人不同病理类型肾病综合征患者肾小管Megalin表达的差异,进一步探讨肾病综合征患者蛋白尿形成和肾小管损伤的发生机制。方法选取我院确诊为原发性肾病综合征患者62例,按照肾脏病理分为微小病变组(MCD)、膜性肾病组(MN)、局灶节段硬化组(FSGS)。收集各病例组临床资料以及血清、尿液等临床指标,包括患者病程、起效时间、ALB、BUN、Scr、CH、TG、HB、24小时尿蛋白定量等;应用免疫组织化学方法检测各病例组肾小管megalm的表达;各病例组行肾脏病理常规染色,并根据肾小管损伤标准进行肾小管-间质损伤程度评分。分析肾小管megalin表达量与临床和病理指标的相关关系。结果 MCD组肾小管megalin表达量与对照组比较无统计学差异,而MN组、FSGS组肾小管megalin表达均显著低于MCD组和对照组,以FSGS组降低最为显著。各病理类型亚组肾小管megalin的表达水平与临床指标无显著相关关系。全组肾病综合征、MCD亚组、MN亚组megalin的表达水平均与肾小管损伤评分存在负相关关系。结论某些病理类型肾病综合征患者肾小管megalin表达降低可能与蛋白尿毒性有关,megalin表达的下降反过来可能参与这些患者的尿蛋白形成。

Megalin在胚胎期小鼠肾脏中的表达

目的观察胞吞受体megalin在胚胎发育不同时期小鼠肾脏中的表达。方法采用免疫组织化学技术及体视学方法检测胚龄9.5、11、14、16、18d小鼠肾脏megalin的表达。结果Megalin在胚龄9.5d小鼠表达于中肾管上皮细胞游离面,胚龄11d表达于输尿管芽的上皮细胞游离面,胚龄14d megalin表达量逐渐增多,主要分布于输尿管芽的壶腹部和发育中的肾近端小管上皮细胞游离面及较成熟的近端小管刷状缘。胚龄16d至胚龄18d megalin主要表达于近端小管的刷状缘,肾小球内也有微量表达。结论Megalin在胚胎肾发生中的表达存在着时空顺序,可能与肾小管,乃至肾单位的分化及成熟有关。

Megalin和cubilin生理表达与相关疾病

Megalin和cubilin是两个大分子、多配体的受体糖蛋白,广泛分布于极化的上皮细胞内。在体内,尤其在肾脏,它们通过胞吞作用在介导蛋白质和许多维生素的吸收方面发挥着重要的生理功能。两受体任何一方功能异常或缺失会出现明显的蛋白尿和某些肾病,因此两种受体的病理生理作用越来越受到人们的关注。本文就Megalin和cubilin的生理功能及其相关疾病简要综述。

FUT8对megalin功能及白蛋白负荷致肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

[目的]探讨α1-6-岩藻糖基转移酶(α1-6-fucosyltransferase,FUT8)所催化的核心岩藻糖基化对低密度脂蛋白受体相关蛋白-2(LRP-2,meglain)内吞白蛋白功能和对白蛋白超负荷诱导的肾小管上皮细胞炎症的影响。[方法]用10 mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)孵育HK-2细胞4 h建立白蛋白超负荷细胞模型,分别用FUT8siRNA或FUT8过表达载体转染,用流式细胞仪测定白蛋白的绑定和内吞以及megalin的核心岩藻糖基化水平。用免疫印迹、免疫沉淀和凝集素印迹方法测定单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及megalin的蛋白表达,用单因素方差检验方法进行统计学处理。[结果]BSA的绑定和内吞有时间和浓度依赖性。BSA诱导后HK-2细胞FUT8、MCP-1明显升高。白蛋白超负荷条件下,FUT8过表达组细胞MCP-1表达水平明显高于BSA组。此外,FUT8的过表达显著提高megalin的核心岩藻糖基化水平及绑定和内吞白蛋白能力。沉默FUT8基因降低megalin的核心岩藻糖基化及绑定、内吞白蛋白能力,同时抑制MCP-1的升高,使其保持在正常表达水平。[结论]核心岩藻糖基化是megalin发挥白蛋白绑定和内吞功能的必需过程,抑制megalin蛋白合成后的核心岩藻糖基化修饰能够减轻蛋白超负荷诱导的肾小管上皮细胞炎症介质表达。

达尼（DALI）Megaline Ⅱ旗舰音箱

1983年成立的丹麦达尼是一个相当发烧的音响品牌，老板及设计师Peter Lyngdorf十分享受音响，早年推出的旗舰Megaline高大威猛，为开放式箱体设计，曾引起过不少的关注。

高糖与切应力对肾小管上皮细胞megalin及cubilin表达的影响及其意义

目的观察高糖与切应力对肾小管上皮细胞白蛋白受体megalin、cubilin表达的影响并探讨其意义。方法链尿菌素（STZ）腹腔注射SD雄性大鼠制作糖尿病肾病（DN）模型，以健康SD雄性大鼠为对照。于第2、4、6周分别检测尿白蛋白量（24h）；免疫组化法检测各组肾脏megalin、cubilin蛋白的表达。将体外培养的肾近端小管上皮细胞（NRK-52E）分为空白对照组、甘露醇组、高糖组，并以平行板流室系统提供0．5、1．0Pa的切应力处理各组NRK-52E细胞，分别作用1、3、6h。以RT—PCR法检测各组细胞megalin、cubilinmRNA表达。结果对照组肾脏megalin、cubilin蛋白表达水平高于相应时间点DN组（P〈0．05）。肾脏megalin、cubilin表达水平与尿白蛋白量（24h）呈负相关（r=-0．832及-0．815，均P〈0．05）。高糖抑制NRK-52E细胞megalin、cubilinmRNA的表达（P〈0．05）。切应力加载抑制细胞megalin、cubilinmRNA的表达，其抑制作用比单纯高糖更明显，且与切应力大小及作用时间有关（P〈0．05）。结论DN早期高滤过导致滤出液对肾近端小管上皮细胞的切应力增加，其与高糖协同作用可下调细胞megalin、cubilinmRNA的表达，减少肾小管对白蛋白的重吸收，是DN早期微量白蛋白尿发生的机制之一。

RNAi沉默Megalin基因对尿白蛋白激活肾小管上皮细胞的影响

目的探讨Megalin基因对尿白蛋白刺激肾小管上皮细胞(HK-2)后释放趋化因子的影响。方法构建长期下调人Megalin基因表达的慢病毒载体,并包装慢病毒感染人HK-2细胞,以此获取Megalin表达下调的HK-2细胞株,用尿白蛋白刺激此细胞株,检测对照组和干扰组细胞释放MCP-1、RANTES、Fractalkine等趋化因子的表达变化。结果与对照组相比,干扰组MCP-1、Fractalkine的表达有显著性下降,RANTES的表达没有明显变化。结论 Megalin受体在介导肾小管上皮细胞白蛋白内吞的同时,能刺激趋化因子的释放;Megalin受体表达下调能显著抑制趋化因子的释放从而缓解炎症刺激。