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Effect of Nitrogen Form on the Activity of Tonoplast Pyrophosphatase in Tomato Roots 被引量:4
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作者 朱祝军 钱亚榕 Wolfgang PFEIFFER 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第11期1146-1149,共4页
Effect of nitrate and ammonium on the activity of tonoplast pyrophosphatase (V-PPase) was investigated in the roots of tomato ( Lycopersicon esculentum L.). The results showed that the activity of V-PPase was increase... Effect of nitrate and ammonium on the activity of tonoplast pyrophosphatase (V-PPase) was investigated in the roots of tomato ( Lycopersicon esculentum L.). The results showed that the activity of V-PPase was increased by ammonium nutrition, compared with nitrate nutrition. The H+ transport of tonoplast vesicles by V-PPase was also stimulated by ammonium nutrition. The result of Western blot indicated that the protein amount of V-PPase was increased by ammonium nutrition. 展开更多
关键词 TOMATO nitrogen form TONOPLAST pyrophosphatase
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植物液泡膜H^+-Pyrophosphatase基因功能研究进展
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作者 刘雪 张少英 王晓娇 《华南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第4期8-14,共7页
植物液泡膜H+-PPase是一种区别于H+-ATPase的质子泵,广泛存在于生物体内.该文重点介绍植物液泡膜H+-PPase基因及同源基因的结构和功能方面的研究进展,以及该基因在不同植物上遗传转化体系的建立,并展望了该基因应用于植物耐盐抗旱基因... 植物液泡膜H+-PPase是一种区别于H+-ATPase的质子泵,广泛存在于生物体内.该文重点介绍植物液泡膜H+-PPase基因及同源基因的结构和功能方面的研究进展,以及该基因在不同植物上遗传转化体系的建立,并展望了该基因应用于植物耐盐抗旱基因工程中的前景. 展开更多
关键词 植物液泡膜H^+-PPase 结构 功能 遗传转化
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Inorganic Pyrophosphatases:Study of Interest
3
作者 Mar Papa Daouda El Khalfi Bouchra +2 位作者 Perez-Castineira Jose Roman Serrano Delgado Aurelio Soukri Abdelaziz 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2017年第10期388-397,共10页
Inorganic pyrophosphatases are enzymes that catalyze the hydrolysis of inorganic pyrophosphate to orthophosphate. These enzymes are divided into two groups: the soluble pyrophosphatases and the membrane pyrophosphatas... Inorganic pyrophosphatases are enzymes that catalyze the hydrolysis of inorganic pyrophosphate to orthophosphate. These enzymes are divided into two groups: the soluble pyrophosphatases and the membrane pyrophosphatases. They vary in structure and each has a determined catalysis mechanism. Soluble pyrophosphatases are ubiquitous enzymes and play a key role in regulating the rate of pyrophosphate and balance in this sense, the biosynthetic reactions. Membrane pyrophosphatases are ion pumps, producing a proton or sodium gradient, and provide critical energy reserves to organisms, especially during stress conditions. Several studies have shown that these enzymes are involved in numerous disorders (diseases, fault cell growth&middot;&middot;&middot;). However they are potential targets for the development of agents against parasites. This article consists of a description of the different types, structures, catalytic properties of inorganic pyrophosphatases and their involvement in cellular metabolism. 展开更多
关键词 pyrophosphatases STRUCTURE Catalytic Activity PHYLOGENY PATHOLOGY
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Prognostic significance of BMP and activin membrane-bound inhibitor in colorectal cancer 被引量:3
4
作者 Nozomi Togo Susumu Ohwada +11 位作者 Shinji Sakurai Hiroyuki Toya Ichiro Sakamoto Tatsuya Yamada Tetsuhiro Nakano Ken Muroya Izumi Takeyoshi Takashi Nakajima Takashi Sekiya Yusuke Yamazumi Tsutomu Nakamura Tetsu Akiyama 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第31期4880-4888,共9页
AIM: To investigate the clinical significance of BMP and activin membrane-bound inhibitor (BAMBI) which is a pseudoreceptor of transforming growth factorbeta (TGF-β) type 1 receptors and acts as a negative regul... AIM: To investigate the clinical significance of BMP and activin membrane-bound inhibitor (BAMBI) which is a pseudoreceptor of transforming growth factorbeta (TGF-β) type 1 receptors and acts as a negative regulator of TGF-β signaling and expression aberrantly elevated in colorectal cancers (CRCs). We studied BAMBI expression in CRCs. METHODS: We studied BAMBI expression in 183 surgically resected CRCs by immunochemical and immunoblotting analyses using a generated monoclonal anti-BAMBI antibody. Commercially available anti-β- catenin and anti-p53 antibodies were also applied for immunochemical analyses as a comparison control.RESULTS: Immunohistochemical analysis revealed that BAMBI expression was observed in 148 (80.8%), and strong BAMBI expression was observed in 46% of the CRCs. Strong BAMBI expression was positively correlated with histological type, depth of invasion, lymph node metastases, and tumor node metastasis (TNM) stage (P 〈 0.05). Clear associations were found between BAMBI and β-catenin (P = 0.035) and p53 (P =0.049) expression. In curatively resected CRC, 5-year recurrence-free survival was 51.9% (P = 0.037) for strong BAMBI expression compared to 79.8% for weak BAMBI expression. In the Cox's multivariate analysis, lymph node metastases (relative risk 6.685; P 〈 0.001) and depth of invasion (RR 14.0; P = 0.013) were significant indicators for recurrence, and strong BAMBI expression (RR 2.26; P = 0.057) tended to be significant. CONCLUSION: BAMBI was linked to a potentially aggressive tumor phenotype and predicted tumor recurrence and cancer-related death in CRC. BAMBI expression might be applicable in the routine clinical setting of CRC. 展开更多
关键词 BMP and activin membrane-bound inhibitor Colorectal cancer Transforming growth factor-beta signal PROGNOSIS Wnt signal
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A novel semi-dominant allele of the transmembrane NAC transcription factor ZmNTL2 reduces the size of multiple maize organs
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作者 Chuan Li Yun Bai +9 位作者 Yuwei Hou Siyu Wang Yue Xin Tao Yu Jing Wang Xiaowei Liu Hongyang Yi Chao Xia Hai Lan Moju Cao 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2024年第3期676-687,共12页
Maize plant architecture influences planting density and,in turn,grain yield.Most of the plant architecture-related traits can be described as organ size.We describe a miniature maize mutant,Tiny plant 4(Tip4),which e... Maize plant architecture influences planting density and,in turn,grain yield.Most of the plant architecture-related traits can be described as organ size.We describe a miniature maize mutant,Tiny plant 4(Tip4),which exhibits reduced size of multiple organs and exhibits a semi-dominant monofactorial inheritance characteristic.Positional cloning confirmed that a 4-bp deletion in the NAC TF with transmembrane motif 1-Like(NTL)gene ZmNTL2,denoted as ZmNTL2^(Δ),confers the Tip4 mutation.qRT-PCR showed that ZmNTL2 was expressed in all tested tissues.ZmNTL2 functions as a transcriptional activator and is located in both the nucleus and biomembranes.The mutation does not affect the mRNA abundance of ZmNTL2 locus,but it does result in the loss of transmembrane domain and confines the ZmNTL2^(Δ)protein to the nucleus.Knocking out ZmNTL2 has no effect on maize organ size development,indicating that the 4-bp deletion might be a gain-of-function mutation in organ size regulation.Combining transcriptome sequencing with cytokinin and auxin content determination suggests that the decreased organ size may be possibly mediated by changes in hormone homeostasis. 展开更多
关键词 Organ size c-ray mutagenesis membrane-bound NAC TF Hormone homeostasis MAIZE
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大肠杆菌焦磷酸酶的表达及其酶学性质研究
6
作者 王赞丞 王璐 +4 位作者 樊俊萍 陈雨点 陈婷婷 刘露露 李勇昊 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第9期65-71,共7页
该研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增克隆大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)的焦磷酸酶(PPase)基因,采用无缝克隆技术构建焦磷酸酶表达载体pET-28a-ppa,并转化至感受态E.coliRosetta(DE3),构建重组菌株E.coli PPa.采用单因素试验... 该研究通过聚合酶链式反应(PCR)扩增克隆大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)的焦磷酸酶(PPase)基因,采用无缝克隆技术构建焦磷酸酶表达载体pET-28a-ppa,并转化至感受态E.coliRosetta(DE3),构建重组菌株E.coli PPa.采用单因素试验对其诱导表达条件进行优化,并进一步采用镍离子磁珠纯化重组PPas,研究其酶学性质。结果表明,成功构建重组菌株E.coliPPa,当异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导温度和诱导时间分别为0.4 mmolL、20℃和8h时,重组PPase活性达到最高,为129.05 IU/mL,是优化前的3.14倍。重组PPase的理论分子质量为19.7kDa;最适反应温度和pH分别为55℃和9,在温度10~30℃及pH 7.0~9.0范围内稳定;金属离子K^(+)、Mg^(2+)和Na^(+)可极显著性提高该酶活性(P<0.01),而Mn^(2+)和Zn^(2+)对该酶有极显著抑制作用(P<0.01);重组PPase的动力学参数米氏常数(K_(m)值)为3.58 μmol/mL、最大反应速率(V_(max)值)为314.66μmol/(mL·min),催化常数(K_(cat)值)为87300.56S^(-1),半失活时间为10 min。该研究为后续工业化生产PPase及对该酶的理性设计提供依据。 展开更多
关键词 焦磷酸酶 大肠杆菌 诱导表达 酶学性质
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农杆菌介导glgC-TM基因转化水稻研究 被引量:11
7
作者 林鸿生 华志华 +8 位作者 李娜 高勇 卢德赵 颜美仙 钱前 华泽田 邵国军 T.W.OKITA 黄大年 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期129-133,共5页
利用农杆菌介导将 glg C- TM基因导入多个水稻品种。研究表明农杆菌转化过程中 ,潮霉素是一种很好的筛选剂 ,成熟胚以及国产的羧苄青霉素不适宜用作农杆菌介导的遗传转化。不同品种以及不同的质粒在转化过程中对抗性愈伤的得率和阳性植... 利用农杆菌介导将 glg C- TM基因导入多个水稻品种。研究表明农杆菌转化过程中 ,潮霉素是一种很好的筛选剂 ,成熟胚以及国产的羧苄青霉素不适宜用作农杆菌介导的遗传转化。不同品种以及不同的质粒在转化过程中对抗性愈伤的得率和阳性植株的转化率不存在显著影响。 T1 代 PCR检测表明 ,在转基因当代就有可能获得转基因纯系。 展开更多
关键词 glgC-TM基因 水稻 农杆菌 基因转化 葡萄糖腺苷二磷酸焦磷酸化酶基因
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无机焦磷酸化酶基因转化甘蔗的遗传研究 被引量:9
8
作者 赵丽宏 王俊刚 +3 位作者 杨本鹏 张树珍 黄东杰 蔡文伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期73-77,共5页
甘蔗是我国最为重要的糖料作物,也是一种重要的能源作物,提高甘蔗的含糖量是甘蔗育种的主要目标。通过农杆菌介导法将无机焦磷酸化酶(PPase)基因导入甘蔗,以期获得提高蔗糖含量的转基因植株。经过PPT抗性筛选获得72株抗性植株,并对其进... 甘蔗是我国最为重要的糖料作物,也是一种重要的能源作物,提高甘蔗的含糖量是甘蔗育种的主要目标。通过农杆菌介导法将无机焦磷酸化酶(PPase)基因导入甘蔗,以期获得提高蔗糖含量的转基因植株。经过PPT抗性筛选获得72株抗性植株,并对其进行PPase基因和bar筛选标记基因的双重PCR检测,其中有13株都呈阳性。结果初步证明无机焦磷酸化酶基因已整合到甘蔗的基因组中。 展开更多
关键词 甘蔗 无机焦磷酸化酶基因 遗传转化
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人细胞核dUTPase的克隆表达及其酶学活性 被引量:5
9
作者 陈巧林 任宏伟 +2 位作者 康巧华 王宗元 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期606-611,共6页
以阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)患者脑cDNA文库质粒为模板 ,用PCR方法扩增得到人细胞核dUTP焦磷酸酶 (dUTPase)的cDNA ,将其克隆到谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 4T 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1中获得高效表达 .表... 以阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)患者脑cDNA文库质粒为模板 ,用PCR方法扩增得到人细胞核dUTP焦磷酸酶 (dUTPase)的cDNA ,将其克隆到谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 4T 1中 ,并在大肠杆菌BL2 1中获得高效表达 .表达的融合蛋白GST dUTPase经过谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,凝血酶酶切和SephacrylS 10 0纯化 ,得到高纯度dUTPase蛋白 .通过SDS PAGE ,氨基酸组成分析 ,N端氨基酸序列测定以及HPLC测Mr 结果与期望值一致 .通过检测该酶水解dUTP释放的焦磷酸 (PPi)来测定表达产物dUTPase蛋白及GST dUTPase融合蛋白的酶活性 ,发现两蛋白都具有正常的酶水解dUTP活性 ,但融合蛋白的活性比dUTPase蛋白低 7~ 8倍 .同时研究了Mg2 展开更多
关键词 人细胞核 DUTPASE 克隆 表达 酶学活性 dUTP焦磷酸酶 亲和层析
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植物焦磷酸酶(PPase)的研究进展 被引量:12
10
作者 李小园 曾日中 校现周 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第S2期83-87,共5页
植物焦磷酸酶(PPase)可分为存在于细胞质中可溶性的无机焦磷酸酶和与膜结合的不可溶性焦磷酸酶.后者不仅能水解焦磷酸,同时还具有质子泵的功能.橡胶树乳管中与黄色体膜结合的不可溶性焦磷酸酶,是调控橡胶生物合成的一个必不可少的酶.对... 植物焦磷酸酶(PPase)可分为存在于细胞质中可溶性的无机焦磷酸酶和与膜结合的不可溶性焦磷酸酶.后者不仅能水解焦磷酸,同时还具有质子泵的功能.橡胶树乳管中与黄色体膜结合的不可溶性焦磷酸酶,是调控橡胶生物合成的一个必不可少的酶.对植物焦磷酸酶的结构及其功能和分子生物学研究的进展进行了综合论述,并着重阐述了焦磷酸酶在橡胶树橡胶生物合成中的作用. 展开更多
关键词 植物焦磷酸酶 橡胶生物合成 研究进展
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基于生物信息学分析的水稻无机焦磷酸化酶基因OsIP1的克隆及其遗传转化 被引量:5
11
作者 张亚芳 余永旗 +3 位作者 左示敏 娄丽娟 陈宗祥 潘学彪 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期17-25,共9页
无机焦磷酸化酶在植物体内催化焦磷酸基团分解为磷酸基团的反应,而焦磷酸的及时降解,被认为是原初光合产物合成双糖特别是蔗糖,进而进行长距离运输的关键步骤之一。但是,蔗糖在维管束中的运输需要焦磷酸,因此,在叶肉细胞中特异性过表达... 无机焦磷酸化酶在植物体内催化焦磷酸基团分解为磷酸基团的反应,而焦磷酸的及时降解,被认为是原初光合产物合成双糖特别是蔗糖,进而进行长距离运输的关键步骤之一。但是,蔗糖在维管束中的运输需要焦磷酸,因此,在叶肉细胞中特异性过表达焦磷酸化酶基因,被认为是拉动和促进光合作用的关键措施之一。对水稻中约30个无机焦磷酸化酶编码基因进行氨基酸序列比较、结构域特征、亚细胞定位预测以及上游顺式元件释义等生物信息学分析,进而克隆了1个预测为编码胞质型可溶性无机焦磷酸化酶的基因OsIP1(Os04g0687100),并将其与叶肉细胞特异性启动子cyFBPase相连,构建成嵌合基因cyFBPase:OsIP1;通过农杆菌转化法将其转入2个水稻品种中,累计获得48个阳性转基因植株。 展开更多
关键词 水稻 无机焦磷酸化酶 基因克隆 叶肉细胞特异启动子
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小拟南芥液泡膜H^+-PPase基因OpVP1的克隆、序列分析及表达 被引量:8
12
作者 徐芳 赵云霞 +3 位作者 魏艳玲 李超 孙黎 黄先忠 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第1期77-82,共6页
植物液泡膜质子转运无机焦磷酸酶(V-PPase)酸化植物液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性起着重要的作用。为了克隆小拟南芥液泡膜H+-PPase基因,采用RT-PCR结合RACE的方法从小拟南芥叶片的cDNA中克隆了1个液泡膜H+-PPase基... 植物液泡膜质子转运无机焦磷酸酶(V-PPase)酸化植物液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性起着重要的作用。为了克隆小拟南芥液泡膜H+-PPase基因,采用RT-PCR结合RACE的方法从小拟南芥叶片的cDNA中克隆了1个液泡膜H+-PPase基因,命名为OpVP1。OpVP1基因的cDNA全长为2698bp,开放阅读框(ORF)为2313bp,编码770个氨基酸。OpVP1蛋白与琴叶拟南芥、拟南芥相似性最高,分别为98.6%、98.4%。系统进化分析表明OpVP1基因属于Ⅰ型液泡膜质子焦磷酸酶基因。OpVP1蛋白的分子量是80745.9Da,等电点pI为5.13,含有14个跨膜螺旋结构。三维结构分析表明OpVP1蛋白是由2个单体组成的二聚体蛋白。qRT-PCR表明OpVP1基因在角果中表达高于根、茎、叶和花中的表达。 展开更多
关键词 焦磷酸酶 H+-PPase 小拟南芥 OpVP1 克隆
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镉对大鼠精囊腺超微结构及硫胺素焦磷酸酶细胞化学和血清睾酮含量的影响 被引量:19
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作者 徐晨 李维信 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期314-318,共5页
以超微结构形态计量学及硫胺素焦磷酸酶(TPPase)细胞化学和血清睾酮放射免疫测定等,探讨镉对大鼠精囊腺的影响及其作用机理。结果表明,大鼠腹腔内注射氯化镉(2mg/kg体重)后1h,主细胞超微结构出现改变,TPPas... 以超微结构形态计量学及硫胺素焦磷酸酶(TPPase)细胞化学和血清睾酮放射免疫测定等,探讨镉对大鼠精囊腺的影响及其作用机理。结果表明,大鼠腹腔内注射氯化镉(2mg/kg体重)后1h,主细胞超微结构出现改变,TPPase反应产物开始减少,15~30d退变最明显,60d呈恢复趋势。主要改变为线粒体肿胀,高尔基复合体囊泡扩大,髓样结构及脂滴增多。注射后15d,主细胞大分泌颗粒体密度、面数密度明显减少,30d消失,60d有所恢复。大分泌颗粒直径于3d开始减小,15d降至正常直径1/2,60d仍未恢复。注射镉后7d血清睾酮含量显著降低,60d仍未恢复正常。提示镉对精囊腺有早期直接损伤作用,睾酮下降及毛细血管内皮损伤则又加速精囊腺退变。 展开更多
关键词 精囊腺 超微结构 硫胺素焦磷酸酶 睾酮
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猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析 被引量:4
14
作者 刘振勇 吕志慧 +6 位作者 郑亚东 窦永喜 乔军 骆学农 张艳 景志忠 才学鹏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期192-199,共8页
【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase... 【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾蚴dUTPase的活性。【结论】成功克隆表达了猪囊尾蚴dUTPase基因并鉴定了它的酶学活性,为进一步研究dUTPase在猪囊尾蚴中的生物学功能奠定了基础,同时也为抗猪囊尾蚴病的药物设计和开发提供了研究基础。 展开更多
关键词 dUTP焦磷酸酶 猪囊尾蚴 原核表达 酶学活性
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马铃薯无机焦磷酸酶基因cDNA克隆及其反义植物表达载体构建 被引量:6
15
作者 刘海英 李有忠 +2 位作者 柳娜 司怀军 王蒂 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第1期131-135,共5页
以马铃薯栽培品种大西洋(Atlantic)试管苗叶片为材料,用Trizol试剂提取总RNA,通过RT-PCR方法获得马铃薯PPase基因的cDNA片段,将该片段反向连接到克隆载体pBluescriptSK+,酶切鉴定后进行基因测序,所得PPase基因片断为673bp,编码211个氨基... 以马铃薯栽培品种大西洋(Atlantic)试管苗叶片为材料,用Trizol试剂提取总RNA,通过RT-PCR方法获得马铃薯PPase基因的cDNA片段,将该片段反向连接到克隆载体pBluescriptSK+,酶切鉴定后进行基因测序,所得PPase基因片断为673bp,编码211个氨基酸,与已克隆的PPase基因同源性达到97.62%。将该PPase基因反向插入到表达载体pBI121、pBIC和pBIrd中,分别构建了组成型启动子CaMV35S、块茎特异表达启动子CIPP和低温诱导表达启动子rd29A驱动的反义PPase基因植物表达载体,以期利用转基因技术培育出块茎休眠期延长或缩短的马铃薯新种质。 展开更多
关键词 马铃薯 无机焦磷酸酶基因 CDNA克隆 反义植物表达载体
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急性病毒性坏死病毒dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析 被引量:5
16
作者 贾志磊 王崇明 +3 位作者 任伟成 梁彦韬 曲朋 李赟 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1320-1326,共7页
根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,... 根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建表达质粒pET32a-dut。然后,将其转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,诱导表达蛋白分子量约为46 ku,与预期表达蛋白大小一致。经Western-blotting及质谱分析鉴定,所表达蛋白即为重组dUTPase。表达产物经Co2+柱纯化后进行酶学活性测定。结果显示,重组dUTPase能特异性催化dUTP,EDTA可以抑制dUTPase的活性,而Mg2+可以增强其活性。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 dUTP焦磷酸酶 急性病毒性坏死病毒 原核表达 酶学活性
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橡胶树3个可溶性无机焦磷酸酶基因的原核表达 被引量:2
17
作者 朱家红 徐靖 +2 位作者 于晓惠 畅文军 张治礼 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期41-45,共5页
焦磷酸酶对橡胶的生物合成具有重要的调控作用。将已克隆的3个可溶性无机焦磷酸酶基因的编码区插入到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建3个焦磷酸酶基因表达载体(pGEX-HbSIP1、pGEX-HbSIP2和pGEX-HbSIP3),再将表达载体转入大肠杆菌表达菌株... 焦磷酸酶对橡胶的生物合成具有重要的调控作用。将已克隆的3个可溶性无机焦磷酸酶基因的编码区插入到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建3个焦磷酸酶基因表达载体(pGEX-HbSIP1、pGEX-HbSIP2和pGEX-HbSIP3),再将表达载体转入大肠杆菌表达菌株进行诱导表达。结果表明:pGEX-HbSIP1、pGEX-HbSIP2表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,pGEX-HbSIP3只在补充稀有密码子的大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,表达率分别为35.4%、43.7%和18.5%。对原核表达的蛋白质进行纯化,获得3种可溶性重组蛋白GST-HbSIP1、GST-HbSIP2和GST-HbSIP3,总回收率分别约为7%、8%、3%。该结果为进一步研究这3种焦磷酸酶蛋白的分子特性、抗体制备及功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 橡胶树 焦磷酸酶 基因 原核表达 蛋白纯化
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转PPase基因对马铃薯块茎休眠相关生理特性的影响 被引量:4
18
作者 文义凯 杜宏辉 +3 位作者 刘柏林 张宁 司怀军 王蒂 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第2期325-328,共4页
马铃薯块茎的休眠和发芽对于马铃薯栽培、贮藏保鲜和加工等具有十分重要的意义。本研究以25℃室温条件下贮藏90d后的转正义和反义无机焦磷酸酶(PPase)基因马铃薯Favorita的块茎为材料,对贮藏块茎的PPase活性和及Pi、可溶性糖、淀粉、蛋... 马铃薯块茎的休眠和发芽对于马铃薯栽培、贮藏保鲜和加工等具有十分重要的意义。本研究以25℃室温条件下贮藏90d后的转正义和反义无机焦磷酸酶(PPase)基因马铃薯Favorita的块茎为材料,对贮藏块茎的PPase活性和及Pi、可溶性糖、淀粉、蛋白质含量进行了测定,以探讨PPase基因对马铃薯相关休眠生理特性的影响。结果表明,与对照相比,转正义PPase基因的两个株系F-2-1和F-2-4块茎中的PPase活性、Pi含量和可溶性糖含量增加、淀粉含量和蛋白质含量降低,且与对照相比均达到极显著水平(只有F-2-4淀粉含量与对照相比无显著性变化);转反义PPase基因的两个株系F-1-1和F-1-2块茎中PPase活性、Pi含量和可溶性糖含量降低、淀粉含量增加,与对照相比均达到极显著性水平,而蛋白质含量与对照相比无显著性变化。 展开更多
关键词 马铃薯 转基因植株 无机焦磷酸酶基因 生理特性
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植物液泡膜质子转运焦磷酸酶研究进展 被引量:4
19
作者 朱昀 李朝炜 魏景芳 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2013年第6期639-643,共5页
液泡膜质子转运焦磷酸酶是一种区别于H+-ATPase的质子泵,广泛存在于植物和少数藻类、原生动物以及细菌中.综述了植物液泡膜质子转运焦磷酸酶在结构特性以及功能方面的研究进展,并展望了该基因在植物抗旱耐盐基因工程中的应用前景.
关键词 液泡膜质子转运焦磷酸酶 抗盐性 耐旱性
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猪背最长肌焦磷酸酶的分离纯化与酶学特性 被引量:1
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作者 靳红果 万可慧 +2 位作者 田锐花 彭增起 王蓉蓉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第3期168-173,共6页
通过离心、50%~70%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换柱层析,从猪背最长肌中分离纯化出焦磷酸酶(PPase)。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示,PPase分子质量约72kD。焦磷酸酶酶学特性研究表明,最适反应温度和pH值分别为50℃和7.5。Mg2+是PP... 通过离心、50%~70%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-52离子交换柱层析,从猪背最长肌中分离纯化出焦磷酸酶(PPase)。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示,PPase分子质量约72kD。焦磷酸酶酶学特性研究表明,最适反应温度和pH值分别为50℃和7.5。Mg2+是PPase的激活剂,在浓度4.75mmol/L时,酶活力最强。但Na+和K+都能抑制酶的活力,且Na+的抑制效果强于K+。PPase水解焦磷酸钠(TSPP)的动力学参数Vmax为0.086μmol/(L.min)),Km为0.36mmol/L。 展开更多
关键词 焦磷酸酶 纯化 酶学特性 猪肉
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