HPLC测定枳实导滞丸中枳实所含6种成分及其药材基原分析

目的建立枳实导滞丸中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、马尔敏的含量测定方法,同时鉴别其中枳实来源。方法采用Waters Symmetry C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分析,以乙腈(A)-乙酸水(B)为流动相,梯度洗脱,柱温30℃,流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:285 nm、320 nm,进样量10μL。结果6个成分在各自线性范围内均符合要求,相关系数r均≥0.9993;各成分平均回收率范围在98.68%~101.16%,RSD均≤2.5%。12批枳实导滞丸中芸香柚皮苷质量分数在0.37~5.65 mg·g^(-1),柚皮苷在0~12.16 mg·g^(-1),橙皮苷在0~53.90 mg·g^(-1),新橙皮苷在0~18.90 mg·g^(-1),水合橙皮内酯在0~0.23 mg·g^(-1),马尔敏在0~0.13 mg·g^(-1)。12批次枳实导滞丸样品分别呈现与酸橙或甜橙药材一致的黄酮类成分含量情况。香豆素类成分主要存在于酸橙制备的丸剂中且含量偏低。结论该方法简便、准确、可靠,可同时测定枳实导滞丸中6种有效成分的含量并鉴别丸剂中枳实的基原,可为枳实导滞丸质量评价提供依据。

基于肠道菌群探讨水合橙皮内酯对AS抑郁症共病模型大鼠的调节作用

目的分析水合橙皮内酯(Meranzin hydrate,MH)治疗AS和抑郁共病的疗效,探讨药物的作用机理。方法实验采用维持饲料饲养SD大鼠作为对照组,高脂饲料饲养ApoE^(-/-)大鼠12周建立AS抑郁症共病模型,并随机分为模型组和干预组(MH3.5 mg·kg^(-1)、MH 7 mg·kg^(-1)和辛伐他汀7 mg·kg^(-1)),每组6只。结果MH干预能有效降低血浆和海马促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平,调整血脂水平,下调主动脉斑块面积,增加海马5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)水平,改善大鼠抑郁样行为,调整肠道菌群结构。结论MH通过抗炎调脂,调整肠道菌群结构从而发挥抗AS抑郁共病的作用。

基于斑马鱼模型水合橙皮内酯增强免疫作用及基于网络药理学机制探讨

目的 基于模式生物斑马鱼结合网络药理学,研究枳壳的活性成分水合橙皮内酯增强免疫作用及作用机制。方法建立2种斑马鱼免疫低下模型:以雷帕霉素建立尾部中性粒细胞数目减少模型,以酒石酸长春瑞滨建立静脉血管中巨噬细胞荧光强度减弱模型,检测水合橙皮内酯(10、20、50、100、200μg·mL^(-1))各给药组斑马鱼尾部中性粒细胞数目、斑马鱼尾部静脉血管中巨噬细胞荧光强度,计算中性粒细胞增长率和巨噬细胞改善率。基于网络药理学预测水合橙皮内酯增强免疫作用的机制,使用Pharm Mapper、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)进行水合橙皮内酯靶点筛选,运用Gene Cards数据库和OMIM数据库检索增强免疫相关靶点,运用Venny2.1将上述两组靶点取交集后导入String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,在Cytoscape3.9.1软件中构建水合橙皮内酯的增强靶点PPI网络,并以节点度值的中位数筛选关键靶点。结果 与模型组相比,水合橙皮内酯可显著增加斑马鱼尾部中性粒细胞数目(P<0.01、0.001)、静脉血管中巨噬细胞荧光强度(P<0.05),证明水合橙皮内酯具有抗雷帕霉素、酒石酸长春瑞滨引起的免疫力低下作用,呈剂量相关性。水合橙皮内酯增强免疫的作用机制可能与AKT1、EGFR、SRC、MMP9、ESR1等关键靶点及PI3K-Akt、Rap1、AGE-RAGE等信号通路有关。结论 水合橙皮内酯具有增强免疫作用,可能通过调控PI3K-Akt、Rap1、AGE-RAGE等信号通路发挥作用。

基于HPLC指纹图谱研究衢枳壳与不同栽培变种枳壳质量差异

目的基于HPLC指纹图谱技术和统计学分析方法,比较和评价常山柚橙Citrus aurantium‘Changshan-huyou’未成熟的干燥果实(衢枳壳)与不同栽培变种酸橙间质量的一致性与差异性。方法使用Extend XDB C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),检测波长330 nm,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温为30℃。通过聚类分析(cluster analysis,CA)和主成分分析(principal component analysis,PCA)对35批样品的指纹图谱进行评价。结果建立的酸橙枳壳的指纹图谱共有模式获得24个共有峰,并指认出12个目标化合物。13批衢枳壳样品的相似度结果范围0.920~0.947,质量一致性好,不同基原枳壳相似度结果为0.127~0.990,质量差异大。CA将衢枳壳均与酸橙枳壳聚为一类,朱栾和部分黄皮酸橙单独聚为一类,结合PCA获得区分不同基原枳壳的差异性标志物,其中9个已知化合物分别为葡萄内酯水合物、川陈皮素、柚皮苷、桔皮素、木犀草素、新橙皮苷、芸香柚皮苷、橙皮苷、柚皮素。结论研究表明衢枳壳的化学成分与酸橙枳壳相似度高,且药材质量一致性好,药材质量优于朱栾和塘橙,推荐作为《中国药典》的枳壳植物基原之一。同时应增加区分不同基原枳壳的关键化合物作为指标成分,以全面准确的评价和控制枳壳药材质量。

RP-HPLC法测定枳壳中5个脂溶性成分的含量

目的:建立RP-HPLC测定枳壳中水合橙皮内酯、马尔敏、川陈皮素、桔皮素和橙皮油素的含量。方法:采用DiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇(A)-水(B),梯度洗脱(0～7min,51%A;7～9min,51%A→59%A;9～14min,59%A→60%A;14～15min,60%A→64%A;15～25min,64%A;25～29min,64%A→95%A;29～30min,95%A→100%A;30～36min,100%A),流速1.0mL.min-1,检测波长324nm,柱温30℃。结果:5个成分均能获得基线分离,水合橙皮内酯、马尔敏、川陈皮素、桔皮素和橙皮油素进样量分别在0.0855～2.052,0.0341～0.819,0.0414～0.993,0.0416～0.998,0.0408～0.978μg范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为99.11%(RSD=0.59%),101.1%(RSD=2.6%),99.52%(RSD=0.85%),99.59%(RSD=0.95%),97.44%(RSD=1.6%)。结论:该法简便快速,重现性好,准确可靠,可作为枳壳药材及饮片中水合橙皮内酯、马尔敏、川陈皮素、桔皮素和橙皮油素5个脂溶性成分测定的有效方法。

高速逆流色谱法分离制备化橘红中的柚皮苷、橙皮内酯水合物和异橙皮内酯

目的：建立高速逆流色谱法高效、快速分离制备化橘红中3个主要成分柚皮苷、橙皮内酯水合物、异橙皮内酯的新方法。方法：化橘红用9 5%乙醇超声提取,经石油醚（6 0~9 0℃）、二氯甲烷、正丁醇分级萃取初步分离,再进行高速逆流色谱分离。石油醚层所用的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（1∶1∶1∶1）,二氯甲烷层所用的溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（1∶2∶1∶2.5）,正丁醇层所用两相溶剂体系为乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5）,高速逆流色谱仪转速8 5 7 r.min-1,所得产物的纯度经HPLC检测,结构经NMR和M S鉴定。结果：从化橘红粗提物中分离得到纯度高于9 8.0%的柚皮苷、橙皮内酯水合物,纯度高于9 5.0%的异橙皮内酯,得率均高于2 5%。结论：由该法从化橘红中制备柚皮苷、橙皮内酯水合物、异橙皮内酯简便、快速,所得产物纯度高,适合于其对照品的大规模制备。

HPLC法测定化橘红中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量

目的：建立HPLC法同时测定化橘红药材中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量。方法：采用Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇（A）-水（B）为流动相,二元梯度洗脱（0～6 min,49%A;6～15 min,49%A→75%A;15～26 min,75%A→100%A;26～30 min,100%A;30～32 min,100%A→49%A;32～35 min,49%A）,流速1.0 mL·min^-1,检测波长324 nm,柱温30℃。结果：水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的进样量分别在0.378 0～2.268μg（r=0.999 7）、0.088 56～0.531 4μg（r=0.999 7）、0.089 58～0.537 5μg（r=0.999 8）和0.053 38～0.320 3μg（r=0.999 9）范围内呈良好的线性关系;平均回收率（n=6）分别为100.6%、101.5%、99.68%、98.93%,RSD为2.9%、2.7%、2.2%、2.3%。12批化橘红样品中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯含量测定结果分别为0.123%～0.452%、0.036%～0.094%、0～0.090%、0～0.035%。结论：经方法学验证,本法可用于化橘红药材中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量测定。

一测多评法同时测定玳玳果黄酮滴丸中4个活性成分的含量

目的：建立一测多评法同时测定玳玳果黄酮滴丸中活性成分柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物及枳属苷的含量。方法：采用高效液相色谱法,使用250-4 lichrocart C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈（A）-0.2%醋酸水溶液（B）,线性梯度洗脱（0-10 min,22%A;10-20 min,22%A→35%A;20-25 min,35%A→48%A;25-30 min,48%A→22%A）,流速1.0 m L·min-1,检测波长284 nm,柱温25℃,进样量20μL。柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物及枳属苷的色谱峰分离度R〉1.5,理论塔板数按柚皮苷计〉3 000。建立测定代表性成分柚皮苷含量并以其为内参物,通过柚皮苷与新橙皮苷、橙皮内酯水合物和枳属苷的相对校正因子计算新橙皮苷、橙皮内酯水合物和枳属苷含量的一测多评法,实现多指标成分的同步测定;同时与外标法分别测定玳玳果黄酮滴丸上述4个成分含量的结果比较。结果：柚皮苷质量浓度在119.40-477.60μg·m L-1、新橙皮苷质量浓度在122.20-488.80μg·m L-1、橙皮内酯水合物质量浓度在7.62-22.86μg·m L-1、枳属苷质量浓度在3.00-21.00μg·m L-1范围内线性关系良好;柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷平均加样回收率（n=3）分别为98.67%（RSD=1.5%）、98.20%（RSD=0.50%）、101.9%（RSD=1.7%）、100.9%（RSD=0.35%）;柚皮苷与新橙皮苷、橙皮内酯水合物、枳属苷的相对校正因子分别为1.153、0.434、0.893,RSD（n=6）分别为2.7%、3.1%、1.2%;外标法与一测多评法含量测定结果无显著性差异。结论：以柚皮苷为内参物,利用相对校正因子一测多评法同时测定玳玳果黄酮滴丸活性成分柚皮苷、新橙皮苷、橙皮内酯水合物与枳属苷含量的结果准确,为以中药有效部位为原料制备的中药制剂实现多指标成分群质量控制评价提供了可借鉴的方法。

高速逆流色谱法分离制备枳壳中水合橘皮内酯等3个标准物质的研究

目的:采用高速逆流色谱法从枳壳中分离制备高纯度的水合橘皮内酯、川陈皮素和橘皮素。方法:枳壳用乙醇回流提取,经三氯甲烷萃取得到萃取物,再应用制备型高速逆流色谱仪,通过优化各分离条件,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(10:9:7:8)四元两相溶剂系统上相为固定相,下相为流动相,高速逆流色谱仪转速880 r·min^(-1),流动相流速2 mL·min^(-1),制备分离枳壳三氯甲烷萃取部分粗提物,所得产物的纯度经HPLC检测,结构经EI-MS、~1H-NMR和^(13)C-NMR鉴定。结果:100 mg粗提物经270min 1次分离制备得到了3个化合物,鉴定为水合橘皮内酯、川陈皮素和橘皮素,称量,水合橘皮内酯8.8 mg、川陈皮素7.3 mg和橘皮素4.7mg,采用峰面积归一化法计算其质量分数分别为96.70%、97.89%和98.52%。结论:由该法从枳壳中分离制备水合橘皮内酯、川陈皮素和橘皮素简便、经济,所得化合物纯度高,可作为枳壳药材质量控制的参考物质。

水合橙皮内酯通过BDNF/TrkB/CREB信号通路对阿尔兹海默症的保护作用

目的探究水合橙皮内酯对阿尔兹海默症大鼠的保护作用及可能机制。方法SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、阿尔兹海默症组(AD组)和水合橙皮内酯组(MH组),每组10只。水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察大鼠海马组织病理学变化;尼氏染色观察大鼠海马组织神经元存活;ELISA方法检测大鼠海马组织神经递质及相关因子水平;TUNEL实验检测大鼠海马组织细胞凋亡;Western blot检测大鼠海马组织BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达水平。结果水合橙皮内酯降低阿尔兹海默症大鼠逃避潜伏期,增加大鼠穿越平台次数和海马组织神经元细胞数,降低大鼠海马组织TUNEL阳性细胞数,增加大鼠海马组织BDNF、TrkB和p-CREB蛋白表达水平。结论水合橙皮内酯通过激活BDNF/TrkB/CREB信号通路改善AD大鼠学习记忆能力。

HPLC法同时测定绿衣枳壳中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量

目的:建立绿衣枳壳中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯同时测定的HPLC方法。方法:采用Diamonsil C_(18)柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-水(38∶62),流速1.0 m L·min^(-1),检测波长:324 nm,柱温:25℃。结果:水合橘皮内、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯分别在0.003 8~0.022 9μg(r=0.999 7)、0.005 8~0.034 7μg(r=0.999 5),0.006 5~0.038 9μg(r=0.999 2)和0.822 6~4.935 7μg(r=0.999 8)的进样量范围内呈良好的线性关系;其平均回收率(n=6)分别为103.50%,97.80%,99.51%和105.00%,其RSD值分别为2.1%,1.7%,2.9%和2.5%。结论:本法简便、准确,可用于绿衣枳壳中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量测定。

不同产地枳壳药材中12种有效成分的主成分分析和判别分析

目的采用主成分分析和判别分析对不同产地枳壳药材中12种有效化学成分的HPLC的含量测定结果进行分析比较,以鉴别区分其产地来源。方法以异柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、水合橘皮内酯、柚皮素、橙皮素、橘皮内酯、马尔敏、川陈皮素、橘皮素及葡萄内酯为指标,用HPLC法进行含量测定,并对其含量进行主成分分析和判别分析。结果主成分分析结果表示各产地的枳壳药材具有一定的相似性,且江西产地的枳壳药材含量较为稳定;判别分析结果表明,江西樟树、宜春,湖南沅江、怀化和浙江金华、兰溪产地的枳壳样品可以区分开来,而江西新干和浙江金华、兰溪产地的枳壳样品有重叠。结论本方法简单、方便、可靠,可用于初步筛选出适合枳壳生长的地区,以期为进一步阐述枳壳药材的道地性奠定基础。

基于指纹图谱和网络药理学的江枳壳质量标志物预测分析

目的:基于指纹图谱和网络药理学方法分析预测道地药材江枳壳中潜在的质量标志物(Q-Marker)。方法:对18批江枳壳药材分别建立超高效液相色谱(UPLC)、气相色谱-质谱(GC-MS)指纹图谱,并结合化学计量学方法,筛选出Q-Marker候选成分。运用网络药理学构建“核心成分-靶点-通路”网络,预测江枳壳Q-Marker及核心靶点,再用分子对接方法验证江枳壳Q-Marker生物活性。结果:18批江枳壳药材运用UPLC、GC-MS指纹图谱结合化学计量学分析,共筛选出9个Q-Marker候选成分,通过网络药理学分析,预测川陈皮素、新橙皮苷、橙皮内酯、柚皮苷、D-柠檬烯为江枳壳Q-Marker,作用于核心靶点转化蛋白p21/H-Ras-1(HRAS)、肿瘤蛋白抗原p53(TP53)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、转录因子AP-1(JUN)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3B)、肿瘤坏死因子(TNF)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑因子1A(CDKN1A)、环磷酸腺苷(cAMP)依赖性蛋白激酶催化亚基α(PRKACA)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、环腺苷酸反应元件结合蛋白1(CREB1),发挥胃肠动力、抗抑郁、抗炎、抗肿瘤等作用;分子对接表明川陈皮素、新橙皮苷、橙皮内酯、柚皮苷、D-柠檬烯与筛选出的10个核心靶点有较好的结合能力,体现了江枳壳Q-Marker较好的生物活性。结论:从挥发性和非挥发性成分两方面着手全面预测江枳壳Q-Marker,为江枳壳药材质量的控制和进一步研究其药效相关机制提供参考。

HPLC法同时测定九里香中橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯的含量

目的:建立九里香中橙皮内酯和脱水长叶九里香内酯含量测定方法,并测定其在广西不同产地及药材中不同部位的含量。方法:采用高效液相色谱法,使用Agilent Esclipe XDB-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(57:43),流速0.7mL/min,检测波长332nm,柱温25℃。结果:橙皮内酯进样量在0.092-1.104μg,脱水长叶九里香内酯进样量在0.14-1.68μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系,相关系数r均为0.9999(n=5);橙皮内酯与脱水长叶九里香内酯的平均回收率(n=6)分别为98.25%和98.30%,RSD分别为0.76%和1.19%。结论:本法结果准确,操作简便,重现性好,可为九里香药材的质量控制提供方法。

黄花三宝木中香豆素类成分研究

目的对黄花三宝木Trigonostemon lutescens枝叶的95%乙醇提取物中的化学成分进行研究。方法利用硅胶柱色谱、MCI和Sephadex LH-20柱色谱及半制备型高效液相等色谱方法分离纯化,结合理化性质和MS、NMR等波谱学数据对化学结构进行解析。结果从黄花三宝木醋酸乙酯萃取物中发现并鉴定了11个化合物,分别为7个香豆素类:酸橙素烯醇(1)、水合橘皮内酯(2)、花椒毒素(3)、佛手柑内酯(4)、异茴芹内酯(5)、别异欧芹属素乙(6)、异去甲基呋喃羽叶芸香素(7);2个苯丙素糖苷:3,4-dihydroxyallylbenzene-4-O-β-D-glucopyranoside(8)、1-O-β-D-glucopyranosyl-4-allylbenzene(9);1个苯乙醇类:1-(2-ethylphenyl)-1,2-ethanediol(10);1个生物碱类:8-hydroxy-3-methoxy-5H-pyrido [2,1-c] pyrazin-5-one(11)。结论化合物1～11均为首次从三宝木属植物中分离得到。

常用芸香科柑桔属药材特征图谱鉴别研究

目的 建立同时适用于芸香科柑桔属药材鉴别的HPLC特征图谱,为同属药材的鉴定及质量评价提供科学依据。方法 采用Waters Xselect HSS T3(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量为1.0 m L/min;检测波长为284 nm,采用相似度软件、SPSS软件和SIMCA-P 12.0软件对数据进行分析。结果 特征图谱研究结果显示,橙皮苷为6种药材的共有成分,特征成分为芸香柚皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、水合橙皮内酯、川陈皮素和橘皮素;药材种内相似度均很高,种间相似度较低,种间存在明显差异;通过聚类分析和主成分分析能将橘、橙、柚3大类药材各聚为一类,并能区分橙不同成熟期的果实;通过偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)能区分不同成熟期橘的果实和果皮。结论 建立的HPLC特征图谱较全面地反映了常用芸香科药材的化学成分,分析方法专属性强,准确可靠,为柑桔属药材及其饮片鉴定、质量评价提供参考。

大果藤黄中2个新的香豆素类化学成分

目的研究大果藤黄Garcinia pedunculata果实的化学成分,以期发现新的活性化合物。方法运用硅胶、Sephadex LH-20、Chromatorex C18、Diol silica gel、MCI gel CHP-20P以及反相半制备型高效液相等各种现代色谱分离技术进行系统的分离纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质进行结构鉴定。结果从大果藤黄中共分离得到11个香豆素类化合物,分别鉴定为(S)-5-羟基-7-甲氧基-8-(2-羟基-3-甲基-3-丁烯-1-基)-2H-1-苯并吡喃-2-酮(1)、(S)-5-羟基-7-甲氧基-8-(2-羟基-3-乙氧基-3-甲基丁基)-2H-1-苯并吡喃-2-酮(2)、异欧前胡素(3)、橙皮油内酯(4)、(-)-3′-乙基-橙皮内酯水合物(5)、(+)-2′-羟基-异蛇床子素(6)、(+)-2′-乙酰基-3′-羟基-蛇床子素(7)、(-)-yuehgesin B(8)、异橙皮内酯(9)、(-)-橙皮内酯水合物I(10)、(-)-橙皮内酯水合物(11)。结论化合物1、2是新香豆素类化合物,命名为(S)-5,2′-二羟基-异蛇床子素和橙皮内酯水合物V,以上香豆素类成分均在大果藤黄中首次分离得到。