蓝藻的类金属硫蛋白及其研究进展

单细胞蓝藻中的类金属硫蛋白已经得到分离纯化，并在蛋白质水平上与标准的哺乳动物金属硫蛋白做了对比性分析，发现二者氨基酸组成和序列差异很大，前者只形成一个结构域，但二级结构和金属结合性质具有一定的相似性，是进化上功能趋同的表现．同时克隆并分析了它的基因ＯＲＦ结构，研究了金属诱导和逆向转录抑制对于蛋白质表达的调控及类似于哺乳动物金属硫蛋白基因具有的放大和重排现象机理，提出了近期研究的重点和方向．

刺激ECV304细胞增殖的新基因EOLA1的克隆和功能研究

目的扩增内皮细胞受内毒素刺激后上调表达的新序列标签ST55(GenBank No.BM121646)全长cDNA序列并研究其结构和生物学功能。方法应用快速扩增cDNA末端技术延伸ST55获得其全长cDNA序列,以Northern杂交检测其组织分布,通过酵母双杂交筛选其胞内相互作用蛋白,在ECV304细胞中稳定转染目的基因并强制表达后观察细胞生长变化。结果获得1个全长为1404碱基的cDNA序列,作为人类新mRNA被GenBank接受(AY074889),命名为内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial-overexpressedlipopolysaccharide-associatedfactor1,EOLA1)。生物信息学分析显示EOLA1基因含5个外显子,定位于染色体Xq27.4,编码蛋白质由158个氨基酸组成,分子量为1789。Northern印迹显示EOLA1在人各组织和癌细胞系有不同的表达;以EOLA1cDNA作为诱铒,进行酵母双杂交筛选人肝cDNA文库,鉴定了金属硫蛋白2A(metallothionein2A,MT2A)为其相互作用蛋白并采用免疫共沉淀验证了这一结果。高表达EOLA1显著促进了ECV304细胞增殖。结论EOLA1是人内皮活化相关新基因,EOLA1与MT2A的相互作用可能在炎症反应中细胞内保护方面发挥作用。

基于蛋白组学探讨细辛水提物诱发肝损伤的作用机制

目的基于蛋白组学探讨细辛水提物诱发肝损伤的作用机制。方法30只大鼠随机分为对照组和细辛高、低剂量(12、6 g/kg)组,每组10只,每日ig给药1次,连续28 d。末次给药后采取血清样本和肝脏样本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;苏木素-伊红(hematoxylineosin,HE)染色法观察肝脏病理组织形态;串联质谱标签定量蛋白质组学法检测肝组织差异表达蛋白;免疫组化法测定大鼠肝脏组织细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)、金属硫蛋白-1(metallothionein-1,MT-1)、肌肉特异性烯醇化酶3(recombinant enolase 3,ENO3)、抗原转运蛋白(transporter associated with antigen processing 1,TAP1)蛋白表达。CCK-8法考察细辛水提物对小鼠肝实质AML-12细胞活力的影响,并采用qRT-PCR与Western blotting检测AML-12细胞中CYP1A1、MT-1、ENO3、TAP1蛋白及m RNA表达。结果与对照组比较,细辛组大鼠血清AST、ALT活性均显著升高(P<0.01);肝组织出现明显炎性改变;肝组织中存在179个差异蛋白,主要富集于次级代谢产物的生物合成途径、视黄醇代谢途径、吞噬体等;肝组织CYP1A1、MT-1蛋白表达显著增加(P<0.01),ENO3、TAP1蛋白表达显著减少(P<0.01)。体外实验结果显示,细辛组AML-12细胞CYP1A1、MT-1 m RNA与蛋白表达显著增加(P<0.05、0.01),ENO3、TAP1 m RNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。结论细辛水提物可诱发大鼠肝损伤,引起肝功能异常和肝组织病理改变,肝损伤机制与上调CYP1A1、MT-1 m RNA及蛋白表达及下调ENO3、TAP1 m RNA及蛋白表达有关。