XRCC1在MMS致人细胞DNA单链断裂修复中的作用

【目的】阐明人X线修复交叉互补基因1(XRCC1)在人支气管上皮细胞DNA单链断裂修复(SSBR)中的作用。【方法】以XRCC1蛋白缺陷细胞株为模型,用标准断裂剂甲基磺酸甲酯(MMS)染毒,检测细胞存活、微核形成、彗星实验及细胞周期变化等方法测定细胞遗传毒性。【结果】XRCC1蛋白水平的降低使细胞对DNA损伤剂的杀细胞效应敏感度增加、微核形成增加、DNA单链损伤修复能力降低以及引起明显的细胞周期阻滞。【结论】结果提示XRCC1基因在DNA单链损伤修复及基因组稳定性方面起着重要的作用。

MMS对白花泡桐种子发芽率和内源激素的影响

在白花泡桐种子萌发的不同时段、采用不同浓度的甲基磺酸甲酯对种子进行不同时间浸泡处理,记录种子发芽率,测定各处理种苗的内源激素含量。结果表明:在3种因素中,不同时段的处理对种子发芽率和GA含量影响极显著;浸泡时间对ABA含量影响显著;而3种因素对种子芽内的IAA含量、ZR含量影响均不显著;GA含量与种子的发芽率成正相关。

瞬时转染siRNA抑制大鼠神经干细胞内MMS2基因的表达

目的建立有效的脂质体瞬时转染法,转染小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),沉默大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)内甲基磺酸敏感蛋白2(Methyl Methanesulfonate Sensitive 2,MMS2)的表达。方法设计并化学合成针对MMS2基因的3对siRNA分子序列,采用阳离子脂质体法瞬时转染NSCs,运用实时荧光定量PCR检测NSCs内MMS2基因mRNA的表达。结果 MMS2-siRNA对大鼠NSCs内MMS2基因的沉默效果在转染后36 h达到最大抑制作用;3对特异性MMS2-siRNA序列均有效地抑制了MMS2基因的表达,沉默效率分别为siRNA_A(58±5)%、siRNA_B(64±6)%、siRNA_C(84±3)%,与空白对照组相比均存在显著性差异(P<0.05);siRNA_C沉默效率最高。结论靶向MMS2基因的siRNA分子片段可以有效地抑制NSCs内MMS2基因的表达,为后续相关研究提供实验方法。

甲磺酸对丙酸甲酯工业生产设备金属材质的腐蚀研究

在丙酸甲酯的生产过程中,一般需使用少量的甲磺酸调整体系酸值,随着甲磺酸的浓缩(浓度升高),会对设备造成腐蚀,通过试验研究压力1.0 MPa、温度100℃条件下含甲磺酸和甲醇的丙酸甲酯溶液对316L不锈钢、哈氏合金C-276、SS2205不锈钢、SS304不锈钢、TA2钛材的腐蚀情况,评价优选丙酸甲酯工业生产所用设备的材质。试验结果表明,丙酸甲酯工业生产设备材质优选SS2205和C-276,结合经济因素,选择SS2205更优。

TK6细胞tk基因突变试验检测甲基磺酸甲酯的诱变性

本研究通过用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)处理TK6细胞 ,对培养物进一步作tk位点突变测试 ,以及细胞p5 3基因蛋白表达水平的检测 .结果表明 ,MMS可诱导TK6细胞tk位点的突变 ,诱发突变是自发突变的 2～ 7倍 .在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落 :即正常生长突变体 (tk NGmutant)和慢生长突变体 (tk SGmutant) .但以慢生长突变体为主 .MMS处理后 ,TK6细胞P5 3蛋白的表达水平增高 .本研究为将TK6细胞应用于我国tk基因突变的毒理学评价和机理的研究提供了实验依据 .

麦冬对甲基磺酸甲酯诱发的小鼠精子非程序DNA合成的抑制作用

目的 :观察中草药麦冬对雄性小鼠生殖细胞遗传物质损伤的防护作用。方法 :采用雄性小鼠生殖细胞非程序 DNA合成实验。结果 :麦冬各剂量组诱导的非程序 DNA合成与正常对照组比较差异无显著性 ( P>0 .0 5 ) ;6.8～ 1 3.6g· kg-1剂量 ,麦冬对甲基磺酸甲酯所诱导的非程序 DNA合成有明显抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ,并且随着麦冬浓度的增加 ,其抑制作用逐渐增强 ,超过一定剂量 ,其抑制作用不再增强。结论

甲基磺酸甲酯处理的豫杂一号泡桐丛枝病幼苗的生长及SSR分析

DNA甲基化在基因表达、细胞分化以及系统发育中起着重要的调节作用（陆光远等,2005;Meyeret al.,1994;Ulian et al.,1996;Rossi et al.,1997）。在植物生长发育过程中,DNA甲基化水平过高或过低,都会导致植物形态发生异常。

GC-MS/SIM法测定盐酸鲁拉西酮片中甲磺酸酯类物质残留量

建立了气相色谱-质谱/选择离子监测法(GC-MS/SIM),检测盐酸鲁拉西酮片中甲磺酸酯类物质残留量。使用DB-624毛细管色谱柱(30m×0.32mm×1.8μm)实现了甲磺酸酯的分离,对提取溶剂、起始柱温、分流比等条件参数进行了优化。在选择离子监测模式(SIM)下,选取适宜的特征离子,进行定性定量分析。结果表明,目标物在0.01~0.40mg/L范围内线性关系均良好,线性相关系数(R2)均大于0.999;检出限、定量限均分别为0.003mg/L、0.01mg/L;在0.16、0.20、0.24mg/L三个加标浓度下,平均回收率为88.43%~104.15%,相对标准偏差为0.97%~1.82%。该方法精密度良好,操作简便快速、准确可靠、灵敏度高,适用于盐酸鲁拉西酮片中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯残留的同时检测。

甲基磺酸甲酯对毛泡桐丛枝病苗DNA甲基化的影响

分别采用扩增片段长度多态性(AFLP)和甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术,研究不同浓度甲基磺酸甲酯(MMS)处理毛泡桐丛枝病幼苗后DNA碱基序列及其甲基化的变化,并对发病相关特异DNA片段对应蛋白的功能进行预测。结果表明:健康和丛枝病幼苗及MMS处理后丛枝病幼苗的DNA碱基序列在AFLP水平上相同。随着MMS浓度的升高,处理后丛枝病幼苗的总DNA甲基化水平逐渐升高,但最大浓度(100 mg·L-1)MMS处理后的DNA甲基化水平仍低于健康苗。与毛泡桐丛枝病幼苗相比,MMS处理后丛枝病幼苗的DNA去甲基化多态性皆低于DNA甲基化多态性。序列同源性功能分析结果表明特异DNA甲基化片段对应蛋白功能可能涉及物质和能量代谢、转录和转运、信号转导及致病相关。毛泡桐丛枝病发生可能与其DNA甲基化水平降低和DNA甲基化模式变化密切相关。

两种人类淋巴母细胞TK、HPRT基因突变实验比较研究

背景与目的:比较2种人类淋巴细胞在4种受试物作用下TK、HPRT2个位点突变情况,为其在遗传毒性实验中的应用积累资料。材料与方法:甲磺酸乙酯(ethylmethanesulfonate,EMS),甲磺酸甲酯(methylmethanesulfonate,MMS),乙二醛(glyoxal,GLY),邻苯二胺(o-phenylenediamine,OPD)4种不同化学结构和致突变方式的致突变物作为受试物,采用微孔培养板法比较TK6和TK6-E6细胞在TK和HPRT2个位点的突变情况。结果:TK6-E6细胞比TK6细胞对4种受试物毒性更为耐受;4种受试物在2种细胞,2个位点突变实验结果均为阳性,以TK6-E6细胞的TK实验最为敏感;TK6的慢生长集落比例(RSC)较TK6-E6低,各受试物间无差别(P>0.05)。结论:TK6-E6和TK6细胞在TK、HPRT2个位点的基因突变实验中均能检出致突变物;TK6-E6相对于TK6对细胞毒性耐受,可以用于检测更高浓度的受试物,同时有较高的突变敏感性。

离子色谱法测定齐多夫定中甲磺酸甲酯的质量浓度

根据甲磺酸甲酯在碱性条件下能水解生成甲磺酸,建立了离子色谱检测齐多夫定中甲磺酸甲酯的方法体系.样品加水超声溶解,在pH值为10、温度为80℃的条件下水解15 min,对水解液直接进样分析.分析条件：采用6.3 mmol·L^-1 NaHCO3、1.7 mmol·L^-1Na2CO3的混合溶液为流动相,流速为0.50 mL·min^-1,柱温为40 ℃.结果表明,甲磺酸甲酯的质量浓度在0.50~10.00 mg·L^-1时能完全水解.甲磺酸的质量浓度在0.50~10.00 mg·L^-1时线性相关系数R为0.999 6,检出限（S/N=3）为0.10 mg·L^-1,相对标准偏差（RSD,n=7）为086%.添加浓度水平为5.00，2.00，1.00 mg·L^-1时，本方法的回收率为92.06%~97.28%.

甲基磺酸甲酯诱发WTK1细胞tk位点突变试验方法的建立

目的 :建立WTK1细胞tk基因突变试验方法 ,为毒理学评价和机制的研究提供实验依据。 方法 :用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)处理WTK1细胞 ,检测tk位点突变率和细胞 p53基因蛋白表达水平的改变。 结果 :MMS可诱导WTK1细胞tk位点突变率增加 ,MMS的处理剂量达到10mg·L-1 时 ,tk位点突变率为985.2/106 个细胞 ,并有剂量反应关系。诱发突变率约是自发突变率3～10倍。在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落 ,即正常生长突变体(tk_NGmutant)和慢生长突变体(tk_SGmutant) ,但以慢生长突变体为主。MMS处理后 ,WTK1细胞P53蛋白的表达水平增高。 结论 :MMS可以诱发WTK1细胞tk位点的突变率增加 ,MMS处理细胞后 ,P53蛋白的表达水平增高 ,说明WTK1细胞的P53蛋白的功能尚未丧失。该方法的建立 ,为进一步开展tk基因突变试验 。

MMS2在血管紧张素II诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程中的作用

目的探讨甲基磺酸敏感蛋白2（MMS2）在血管紧张素II（AII）诱导神经干细胞（NSCs）向多巴胺（DA）能神经元定向分化过程中的作用。方法体外分离培养新生鼠大脑来源的NSCs，通过巢蛋白免疫细胞化学方法对神经前体细胞进行鉴定；在此基础上，将第2代的NSCs按实验设计分成6组：A：对照组；B：All组；C：ATl受体拮抗剂ZD7155组；D：ATI受体拮抗剂ZD7155＋AII组；E：AT2受体拮抗剂PD123319组；F：AT2受体拮抗剂PD123319＋AII组。通过实时荧光定量PCR检测各组细胞MMS2及THmRNA的表达；转染MMS2基因的小干扰RNA（siRNA）片段到NSCs上沉默MMS2在NSCs的表达，再按以上分组将其诱导分化为DA能神经元，通过实时荧光定量PCR方法检测转染后诱导分化的各组细胞THmRNA的表达。结果体外分离培养的NSCs，在培养基中呈悬浮生长，神经球表达Nestin。实时荧光定量PCR法检测B组、D组细胞的MMS2及THmRNA的表达高于对照组，其差异有统计学意义（P〈0．05）；C、E、F组细胞的MMS2及THmRNA的表达与对照组比较无统计学意义（P〉0．05），转染MMS2-siRNA后诱导分化的各组细胞间THmRNA的表达无统计学意义（P〉0．05）。结论AII通过AT2受体使MMS2在NSCs的表达升高并诱导NSCs向DA能神经元分化，MMS2在AII诱导NSCs向DA能神经元定向分化的过程中可能发挥重要作用。

化学诱变剂对同源四倍体毛泡桐体外植株再生的影响

在建立同源四倍体毛泡桐体外植株再生系统的同时,研究了甲基磺酸甲酯(MMS,DNA甲基剂)和5-氮胞苷(5-Aza,DNA去甲基剂)对以叶片为外植体的体外植株再生系统的影响.结果表明,同源四倍体毛泡桐幼苗叶片在无MMS和5-Aza的MS培养基上,愈伤组织最高诱导率皆可达到100%,而幼苗叶柄和茎段则只能在NAA 0.7,0.9,1.1 mg.L-1,BA 2和4 mg.L-1组合的MS培养基上达到100%.叶片愈伤组织芽诱导率达到100%的培养基为MS+NAA 0.9 mg.L-1+BA 16 mg.L-1.MMS和5-Aza对同源四倍体毛泡桐叶片体外植株再生有抑制作用,并且随着MMS和5-Aza质量浓度的升高,抑制作用越明显.此外,5-Aza对叶片芽和根诱导的抑制作用皆大于MMS.

人参二醇组皂甙对甲基磺酸甲酯诱发小鼠精子非程序DNA合成的抑制作用

应用雄性小鼠生殖细胞非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验方法，动态地观察了人参二醇组皂甙（ＰＤＳ）对甲基磺酸甲酯（ＭＭＳ）所诱发ＵＤＳ的抑制作用。结果表明，在ｉｐＭＭＳ（７５ｍｇ／ｋｇ）同时或提前１～５ｈ将ＰＤＳ（２４０ｍｇ／ｋｇ）ｉｐ小鼠，可明显抑制小鼠精子ＵＤＳ，而在ＭＭＳ给予后ｉｐＰＤＳ则对ＭＭＳ诱发的ＵＤＳ无明显影响。提示ＰＤＳ可预防ＭＭＳ对遗传物质的损伤作用。

甲基磺酸甲酯和环磷酰胺抑制小鼠精子的受精能力

本文应用小鼠卵子体外受精的方法,研究了诱变剂甲基磺酸甲酯和环磷酰胺对小鼠精子受精能力的影响.结果显示,以上两种诱变剂能明显抑制小鼠精子的受精能力,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),同时受精后的胚胎发育延缓,但对精子的活力和密度无明显影响.

TK6和WTK1细胞tk位点突变敏感性的比较研究

目的 比较研究 2种起源于人类的tk+ - 杂合子细胞TK6和WTK1细胞对化合物———甲基磺酸甲酯(MMS)诱发tk位点突变的敏感性 ,为tk位点突变敏感细胞株的筛选提供实验依据。方法 用标准诱变剂MMS处理TK6和WTK1细胞 ,对培养物进一步作tk位点突变测试 ,以及细胞p5 3基因蛋白表达水平的检测。结果 MMS可诱导TK6和WTK1细胞tk位点的突变 ,其诱发突变分别是自发突变的 2～ 7倍和 3～ 10倍。WTK1细胞对MMS的细胞毒作用具有较大的抗性。MMS的作用下 ,WTK1细胞的突变频率分别是TK6细胞的 15 7、19 0和 2 0 4倍。在tk位点诱发了 2种不同表型的突变集落 ,但以慢生长突变体为主。无论是自发突变还是MMS的诱发突变 ,WTK1细胞的突变频率均显著地高于TK6细胞。经MMS处理后 ,TK6细胞p5 3蛋白的表达水平增高更为明显。结论 WTK1细胞是更为敏感的tk基因突变试验检测细胞株。MMS诱发的突变有染色体畸变和基因突变 。

DNA修复基因MMS19单核苷酸多态性与非小细胞肺癌组织学类型的关系

目的:探讨DNA修复基因甲基磺酸敏感性基因19(methyl methanesulfonate sensitivity gene19,MMS19)单核苷酸多态性与非小细胞肺癌(non-small cell lung carcer,NSCLC)组织学类型的关系。方法:收集原发性肺癌患者299例,应用AllGloTM探针结合实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)的方法分析MMS19基因rs3740526多态位点的基因型分布情况,采用卡方和回归方法比较不同基因型与NSCLC患者年龄、性别、是否吸烟以及肺癌组织学类型的关系。结果:MMS19(rs3740526)基因型在不同年龄、性别、吸烟群体中的分布,差异均无统计学意义(P值分别为0.609、0.621和0.755),在不同组织学类型(鳞癌和腺癌)中的分布,差异有统计学意义(P=0.026)。调整后比值比(odds ratio,OR)值分别为0.359[95%可信区间(confi dence interval,CI)=0.162～0.795,P=0.012]和0.445(95%CI=0.213～0.930,P=0.031)。结论:DNA修复基因MMS19rs3740526的多态性可能与NSCLC组织学类型具有相关性。

肝癌缺失基因1(DLC-1)甲基化在多发性骨髓瘤患者中的临床意义

目的探讨肝癌缺失基因1(DLC-1)启动子区CpG岛甲基化在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及相关临床意义。方法采用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法定量检测自2016年10月—2017年12月在新疆医科大学附属肿瘤医院初诊的30例MM患者DLC-1基因的甲基化状态,分别进行MM患者的临床资料分析、MM患者及健康对照组关于DLC-1基因甲基化情况的比较,以及MM患者DLC-1基因甲基化情况与相关临床指标的比较。结果(1)临床资料有关M蛋白的免疫分型提示:30例MM患者中IgG型21例(21/30),IgA型6例(6/30),轻链型3例(3/30);骨髓细胞学检查提示:MM患者中骨髓瘤细胞比例<30%的有6例(21/30),30%~50%之间的有19例(19/30),≥50%的有5例(5/30)。(2)MM组与对照组比较提示:MM组DLC-1启动子区甲基化率显著高于正常组(P=0.009),其中CpG岛4、6、7、13、21位点的甲基化率显著高于正常对照组(P值分别为0.017、0.030、0.023、0.017、0.044)。(3)进一步对MM患者深入比较发现,DLC-1基因的甲基化比例分别在Ⅱa+Ⅲa期与Ⅲb期组间、血清肌酐正常与升高患者组间、骨髓异常浆细胞/骨髓瘤细胞比例50%≥与<50%组间均存在统计学差异(P均<0.05)。结论DLC-1异常甲基化可能与肿瘤负荷及肾功能损害相关,深入研究有关DLC-1基因甲基化在MM患者中的表达情况,可为今后MM的去甲基化治疗提供新的研究思路。

利福平和甲基磺酸甲酯对感染植原体毛泡桐中长链非编码RNA变化的影响

为研究与泡桐丛枝病相关的长链非编码RNAs(lncRNAs),以毛泡桐(Paulownia tomentosa)的健康苗、患丛枝病的病苗及分别用100 mg·L^-1的利福平和60 mg·L^-1甲基磺酸甲酯处理病苗得到的处理苗为试验材料,利用高通量测序技术研究病健苗及试剂处理苗中的lncRNAs及相应靶基因的表达情况。共鉴定出3 700个lncRNAs,2 219个靶基因,从中得到389个差异表达的lncRNAs和对应的203个靶基因,并对其靶基因进行了GO功能分类。通过方案设计鉴定得到3个与泡桐丛枝病相关的lncRNAs,预测其对应的靶基因分别为磷脂酶D、蛋白磷酸酶以及WNK赖氨酸缺乏蛋白激酶。采用实时定量PCR技术验证随机挑选的5个lncRNAs及其靶基因,验证结果与高通量测序结果一致。