人参皂苷Rg1通过miR-144/Nrf2/ARE通路对糖尿病大鼠肝损伤的影响

目的探究人参皂苷(G)-Rg1通过微小RNA(miR)-144/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)通路对糖尿病(DM)大鼠肝损伤的影响。方法将大鼠随机分成control组、模型(model)组、二甲双胍(MET)组(100 mg/kg MET)组、G-Rg1-L(10 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H(30 mg/kg G-Rg1)组、G-Rg1-H+mimics NC组、G-Rg1-H+miR-144 mimics组、G-Rg1-H+miR-144 mimics+Nrf2激活剂(Hesperin组(10 mg/kg Hesperin)各10只;除control组外,其余组通过高脂高糖饲料喂养及链脲佐菌素(STZ)腹腔注射构建DM模型,并灌胃相应剂量MET或G-Rg1,尾静脉注射相应剂量mimics NC、miR-144 mimics慢病毒液,腹腔注射相应剂量Hesperin,control组、model组灌胃、尾静脉及腹腔注射等剂量生理盐水,共为期8 w。血糖测试仪及全自动生化分析仪检测血糖、肝功能指标;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测血清中二者含量;苏木素-伊红(HE)及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肝组织病理形态及糖原含量变化;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western印迹分析肝组织中miR-144、血红素加氧酶(HO)-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-144与Nrf2的靶向关系。结果与control组比,model组空腹血糖(FBG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与model组比,MET组、G-Rg1-L组、G-Rg1-H组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);MET组与G-Rg1-H组比较,上述指标无明显差异(P>0.05);与G-Rg1-H组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著增加,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.05);与G-Rg1-H+miR-144 mimics组比,G-Rg1-H+miR-144 mimics+Hesperin组FBG、ALT、AST、MDA水平、肝组织病理程度、miR-144表达显著减少,SOD含量、糖原数量、HO-1及Nrf2 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,Nrf2是miR-144的潜在靶基因。结论G-Rg1通过抑制miR-144表达来激活Nrf2/ARE通路,改善DM大鼠的肝损伤。

胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平与病理特征及预后的关系

目的研究胃癌患者血清微小RNA(miR)-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平与病理特征及预后的关系。方法回顾性选取2018年7月至2019年12月西安医学院第一附属医院收治的胃癌患者作为恶性组(80例),另选取该院同期收治的胃部良性病变患者作为良性组(93例)。统计两组血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平,比较不同病理特征胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平。胃癌患者随访3年,根据患者不同预后情况将其分为死亡组和存活组,比较死亡组和存活组血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平单独及三者联合检测对胃癌患者预后的预测价值。结果恶性组血清miR-125b-5p、miR-93表达水平均高于良性组,血清miR-144表达水平低于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况、腹膜种植转移情况患者miR-125b-5p表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况、腹膜种植转移情况、脉管浸润患者血清miR-144、miR-93表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组纳入33例患者,存活组纳入47例患者。死亡组血清miR-125b-5p、miR-93表达水平均高于存活组,miR-144表达水平低于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93单独检测预测胃癌患者预后的曲线下面积分别为0.737、0.757、0.738,均低于三者联合检测的0.887(Z=2.123、2.362、2.308,P<0.05)。结论胃癌患者、胃部良性病变患者及不同病理特征、不同预后胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平存在明显差异,血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93联合对胃癌患者预后具有较好的预测价值,有望成为预测胃癌患者预后的标志物。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

miRNA-144-3p靶向CCNE2调控肺腺癌细胞周期并抑制其增殖

目的探究微小RNA(MicroRNA,miRNA)-144-3p靶向细胞周期蛋白E2(Cyclin E2,CCNE2)调控肺腺癌细胞周期和增殖的机制。方法通过TCGA数据库分析miRNA-144-3p和CCNE2的相对表达水平。在肺腺癌细胞中转染miRNA-144-3p模拟物(miRNA-144-3p mimic)或miRNA-144-3p抑制剂(miRNA-144-3p inhibitor),实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction)检测miRNA-144-3p和CCNE2的mRNA表达水平,应用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期的分布。免疫印迹(Western blot,WB)检测细胞周期蛋白CCNE2的表达水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miRNA-144-3p和CCNE2的靶向关系。结果miRNA-144-3p在肺腺癌细胞中显著低表达,转染miRNA-144-3p mimic后,肺腺癌细胞的增殖能力受到显著抑制,肺腺癌细胞周期阻滞于G1期。miRNA-144-3p靶向结合于CCNE2,并且miRNA-144-3p可下调CCNE2的表达。结论肺腺癌细胞中miRNA-144-3p通过靶向负调控CCNE2的表达,抑制细胞增殖和细胞周期进展。

血清miR-181c-miR-144-3p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的探讨血清中微小RNA-181c(miR-181c)、微小RNA-144-3p(miR-144-3p)表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值。方法选取2020年6月至2022年6月接诊的心力衰竭患者118例,根据患者1年预后情况,将心力衰竭患者分为预后良好组86例和预后不良组32例,选择体检的健康人员80例作为对照组,实时荧光定量PCR检测血清中miR-181c、miR-144-3p水平,比较各组血清中miR-181c、miR-144-3p水平,多因素Logistic回归分析心力衰竭患者1年预后不良的危险因素,ROC曲线评价miR-181c、miR-144-3p水平对心力衰竭患者预后不良的预测价值。结果与对照组比较,心力衰竭组患者血清中miR-181c表达水平显著降低,miR-144-3p表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅰ~Ⅱ级患者比较,Ⅲ、Ⅳ级的心力衰竭患者中血清中miR-181c水平显著降低,miR-144-3p水平显著升高(P<0.05);与Ⅲ级患者比较,Ⅳ级心力衰竭患者血清中miR-181c水平显著降低,miR-144-3p水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的Hcy、miR-144-3p水平显著高于预后良好组,LVEF、血红蛋白、miR-181c水平显著低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Hcy、miR-144-3p是影响心力衰竭患者1年预后不良的独立危险因素,而miR-181c的是保护因素(P<0.05)。血清miR-181c、miR-144-3p水平单独和二者联合预测心力衰竭患者1年预后不良的AUC分别为0.896、0.797、0.948,二者联合预测价值优于单独预测。结论心力衰竭患者血清miR-181c表达水平降低,miR-144-3p表达水平升高,与患者心功能及预后有关,可能作为心力衰竭诊断和预后评估的标志物。

低剂量CT灌注成像参数及血清miR-144-3p、miR-378水平联合检测对早期肺癌的诊断价值

目的探讨低剂量CT灌注成像参数及血清微小RNA-144-3p(miR-144-3p)、微小RNA-378(miR-378)水平联合检测对早期肺癌的诊断价值。方法回顾性选取2021年8月至2023年8月河南大学第一附属医院收治的早期肺癌患者80例,纳入观察组,另选取同期良性肺病患者80例,纳入对照组。比较两组低剂量CT灌注成像参数[血容积(BV)、血流量(BF)、平均通过时间(MTT)、通透性(PMB)]及血清miR-144-3p、miR-378水平,分析其联合诊断价值及不同水平发生早期肺癌的危险度。结果观察组BV、BF、MTT、PMB值及血清miR-378水平高于对照组,血清miR-144-3p水平低于对照组(P<0.05);BV、BF、MTT、PMB、miR-144-3p、miR-378联合诊断早期肺癌的AUC为0.896,最佳诊断敏感度为90.00%,最佳特异度为87.50%,约登指数为0.775,且高水平患者发生早期肺癌的危险度是低水平的2.333倍、2.810倍、2.478倍、1.857倍、0.509倍、1.759倍(P<0.05)。结论低剂量CT灌注成像参数及血清miR-144-3p、miR-378与早期肺癌发生密切相关,联合检测具有一定诊断效能,且不同水平发生早期肺癌的危险度存在差异,可作为临床诊断早期肺癌的有效方式。

miRNA-144对肝癌侵袭性的影响

目的探讨mi RNA-144对肝癌细胞侵袭性的影响。方法从广东省人民医院肝癌标本库中选取52例肝癌组织标本及其对应的癌旁组织,用原位杂交技术检测mi RNA-144在肝癌及相应的癌旁组织的表达情况,分析其与临床病理特征的关系,并行在线靶基因软件预测到mi R-144的靶基因中有SRF。结果mi R-144在肝癌组织中相对癌旁组织高表达,并且mi R-144在肝癌组织中表达量仅与肝癌病理分级和术后早期复发有关,三大在线靶基因软件预测到mi R-144的靶基因中都有SRF。结论筛选得到的肝癌早期复发的mi RNA差异表达谱可能与肝癌的病理分级和早期复发有关。

微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测:采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA,观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化,选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察:取对数生长期HCT116细胞分为3组,1组细胞顺序转染miR-144模拟物(miR-144 mimics)和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR-144与HOXA10的结合力观察:取对数生长期HCT116细胞分为4组:A组先后转染野生型HOXA10荧光素酶报告基因质粒(HOXA10-WT)、miR-144mimics,B组先后转染HOXA10-WT、空白对照NC-mimics,C组先后转染突变型HOXA10-MUT、miR-144 mimics,D组先后转染HOXA10-MUT、NC-mimics,转染24 h时采用双荧光素酶检测试剂测算各组细胞的相对荧光素酶活性(代表HOXA10、miR-144的靶向结合力)。结果 与FHC细胞比较,HCT116、SW480、CL-11细胞miR-144相对表达量低,HOXA10 mRNA相对表达量高(P均<0.05)。与3组比较,2组细胞miR-144相对表达量高(P<0.05),培养24、48、72 h时细胞OD值均降低,迁移及侵袭穿膜细胞数少,HOXA10蛋白相对表达量低(P均<0.05);与2组比较,1组细胞HOXA10蛋白相对表达量高,培养24、48、72 h时细胞的OD值均高,迁移及侵袭穿膜细胞数多。与B组比较,A组HCT116细胞的相对荧光素酶活性低(P<0.05)。结论 miR-144可抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移,同时抑制细胞HOXA10蛋白表达。HCT116细胞中miR-144与HOXA10靶向结合力较高,miR-144可能通过抑制HOXA10蛋白表达,进一步抑制结肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

骨髓增生异常综合征患者循环microRNA-144的检测及其临床意义

目的探讨mi RNA-144在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法收集MDS患者24例,健康对照12例,q RT-PCR检测外周血mi RNA-144相对表达量,统计分析mi RNA-144在MDS中的表达情况及与其预后相关性。结果 mi RNA-144在MDS亚型难治性血细胞减少伴单系病态造血(RCUD)、难治性血细胞减少伴多系病态造血(RCMD)、难治性贫血伴环形铁粒幼细胞(RARS)、难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)及难治性贫血伴原始细胞增多-2(RAEB-2)中的相对表达量分别为3.81、3.64、4.56、6.49及8.73,均显著高于健康对照组,P<0.01;mi RNA-144在预后好和预后差组中的相对表达量分别为3.81和7.18,差异具有统计学意义,P<0.01。结论 mi RNA-144在MDS中高表达,且可作为潜在的预后评估指标。

MicroRNA-144-3p在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌侵袭转移的影响

目的检测胰腺癌患者组织及胰腺癌细胞系中microRNA-144-3p(miR-144-3p)的表达及其对胰腺癌侵袭转移的影响。方法收集13对手术切除的胰腺癌及对应癌旁组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证临床标本与4种人胰腺癌细胞系中miR-144-3p的表达;应用划痕和Transwell实验检测转染miR-144-3p模拟物(mimic)及阴性对照(mimic NC)后胰腺癌细胞PANC-1的迁移及侵袭能力;数据库预测miR-144-3p的靶基因,并用Western blotting检测miR-144-3p对E26转录因子-1(E26 transformation specific-1,ETS1)蛋白表达的影响。结果胰腺癌组织miR-144-3p的表达显著低于癌旁组织(P<0.05),胰腺癌细胞系miR-144-3p的表达较正常胰腺细胞明显降低(P<0.05)。划痕实验显示,mimic组划痕愈合速度明显慢于mimic NC组。Transwell迁移及侵袭实验显示,mimic组细胞迁移和侵袭能力较mimic NC组明显减弱(P<0.05)。过表达miR-144-3p抑制ETS1的蛋白水平。结论 miR-144-3p在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系中均呈低表达,上调miR-144-3p可能通过靶向抑制ETS1减弱胰腺癌细胞的侵袭转移能力。

miR-574-5p和miR-144-5p在腹主动脉瘤患者外周血中的表达及其与腔内血栓厚度的关系

目的分析腹主动脉瘤(AAA)患者外周血内微小RNA-574-5p(miR-574-5p)、微小RNA-144-5p(miR-144-5p)的表达及其与腔内血栓(ILT)厚度的关系。方法选取84例AAA患者纳入观察组,另选取同期行体检的75例健康人群纳入对照组,采集两组外周静脉血,检测对比其miR-574-5p、miR-144-5p差异;另外,对观察组患者行彩色多普勒超声检测,连续检测3次,取其平均值,依据其ILT厚度的不同将所有患者分为薄ILT组(n=48,ILT厚度≤平均值)与厚ILT组(n=36,ILT厚度>平均值)两个亚组;统计对比两组的miR-574-5p、miR-144-5p水平;另外,绘制受试者工作曲线(ROC),分析miR-574-5p、miR-144-5p两者联合预测AAA患者ILT厚度的效能。结果观察组miR-574-5p高于对照组,miR-144-5p低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);厚ILT组miR-574-5p高于薄ILT组,miR-144-5p低于薄ILT组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC结果显示:miR-574-5p、miR-144-5p两者联合预测AAA患者ILT厚度的曲线下面积(AUC)高于两者单独预测。结论AAA患者外周血内的miR-574-5p、miR-144-5p呈异常表达,而miR-574-5p、miR-144-5p与患者的ILT厚度密切相关,miR-574-5p越高,miR-144-5p越低,则AAA患者的ILT厚度越大,两者联合检测可有效反映AAA患者的ILT厚度,临床应用价值较高,可进行大力的推行。

外周血中miR-574-5p、miR-144-5p表达与腹主动脉瘤患者腔内血栓厚度的关系

目的探讨微小RNA-574-5p(miR-574-5p)、微小RNA-144-5p(miR-144-5p)在腹主动脉瘤(AAA)患者血清内的表达水平及其与腔内血栓(ILT)厚度的关系。方法回顾性分析60例AAA患者的临床资料,依据腔内厚度将所有研究对象划分成两组,其中ILT≤7.89 mm的28例薄ILT患者纳入对照组,ILT>7.89 mm的32例厚ILT患者纳入观察组。采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)测定两组miR-574-5p、miR-144-5p水平,并应用多因素Logistic回归分析模型分析miR-574-5p、miR-144-5p与ILT厚度的关系。结果观察组的miR-574-5p表达水平(4.95±0.83)高于对照组(3.20±0.69),miR-144-5p表达水平(0.26±0.09)低于对照组(0.48±0.13),有统计学差异(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示:miR-574-5p表达水平高、miR-144-5p表达水平低为AAA患者ILT厚度增加的独立危险因素(P<0.05)。结论AAA患者的外周血内miR-574-5p呈高表达,miR-144-5p呈低表达,两项指标表达水平与ILT厚度密切相关。

miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335在脑胶质瘤组织中的表达分析

目的分析微小RNA(miRNA)-34a、miRNA-145及miRNA-335在脑胶质瘤组织的表达意义。方法选取2018年1月~2023年2月沧州市中心医院神经外一科收治的60例脑胶质瘤患者为观察组,同时期到院体检的20例健康者为对照组,比较2组miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335水平,并分析不同疾病脑胶质瘤患者的mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-335水平表达情况。结果观察组mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-335水平低于对照组,且高级别胶质瘤组各指标水平更低(P<0.05)。结论在脑胶质瘤患者中,miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335水平表达均呈现较低状态,且分级越高,其水平越低,可为患者病情诊断及病理分级提供可靠参考。

外周血miRNA-124表达水平与创伤性颅脑损伤病情严重程度及预后的关系

目的探究外周血miRNA-124表达水平与创伤性颅脑损伤病情严重程度及预后的关系方法 选取2019年5月~2022年5月我院诊治的118例创伤性颅脑损伤患者,收集记录患者的一般临床资料以及病情、预后情况,观察外周血miRNA-124表达水平与患者病情严重程度的关系,并采用因素logistic回归分析影响患者预后的独立相关因素,采用受试者工作特性曲线(ROC)评估相关指标预测患者预后的预测价值,并以患者预后对相关指标进行比较分析。结果 118例患者中,轻度27例,中度50例,重度41。轻度组miRNA-124低于中、重度组,中度组miRNA-124低于重度组,差异有统计学意义(P <0.05)。118例患者中,92例预后良好,26例预后不良。影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的单因素分析结果提示,D-二聚体、APACHEⅡ评分、国家早期预警评分(NEWS)、miRNA-124、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血糖均是影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的相关因素(P <0.05)。进一步多因素logistic回归分析结果提示,miRNA-124(OR=5.436,95%CI:1.600~18.468,P=0.008)、血糖(OR=3.296,95%CI:1.044~10.405,P=0.042)、APACHEⅡ评分(OR=1.633,95%CI:1.023~2.607,P=0.040)均是影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的独立危险因素。受试者工作特征曲线(ROC)结果显示,mi RNA-124相对表达量的ROC曲线下面积(AUC)为0.894,其敏感度为0.808,特异度为0.917,3组指标联合的AUC为0.943,其敏感度为0.924,特异度为0.859。结论 患者的miRNA-124、血糖、APACHEⅡ评分均为影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的独立影响因素,且miRNA-12相对表达量与3组指标联合对创伤性颅脑损伤病情严重程度具有较好的预测效能,临床治疗可对相关指标予以关注。

miR-144-3p/SLC7A11轴通过调控铁死亡增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

目的:探讨微小RNA-144-3p(microRNA-144-3p,miR-144-3p)在卵巢癌细胞对顺铂耐药中的作用并分析其作用机制与溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和铁死亡是否有关。方法:将miR-144-3p mimic转染入耐顺铂人卵巢癌细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP后,RT-qPCR法检测miR-144-3p的表达丰度;CCK-8法检测细胞对顺铂的敏感性;集落形成实验测定细胞增殖情况;试剂盒法评估细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;Fe^(2+)探针及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)荧光探针检测细胞内Fe^(2+)含量及ROS水平;透射电子显微镜观察线粒体形态;双萤光素酶报告基因实验验证miR-144-3p与SLC7A11之间的靶向结合。建立耐药细胞株A2780/DDP异种移植瘤模型,体内评估miR-144-3p对肿瘤生长的影响。结果:耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP中的miR-144-3p表达显著低于亲本细胞株A2780和SKOV3(P<0.05)。转染miR-144-3p mimic可抑制细胞增殖,增强耐药细胞株对顺铂的敏感性(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验结果显示SLC7A11是miR-144-3p的作用靶点。过表达SLC7A11可通过铁死亡途径逆转miR-144-3p对细胞增殖及化疗敏感性的作用(P<0.05)。异种移植瘤实验结果表明miR-144-3p可显著抑制瘤体生长,抑制SLC7A11及谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达(P<0.01),提高4-羟基壬烯醛(4-hy-droxynonenal,4-HNE)水平(P<0.01)。结论:miR-144-3p通过靶向SLC7A11而增强耐药卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能涉及铁死亡过程。

直肠癌患者血清miR-144-5p、miR-876-5p表达变化及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨直肠癌患者血清微小RNA-144-5p(miR-144-5p)、miR-876-5p表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择直肠癌患者85例(观察组)、健康志愿者52例(对照组),采集所有研究对象外周静脉血,离心留取血清,采用RT-q PCR法检测血清miR-144-5p、miR-876-5p表达。分析血清miR-144-5p、miR-876-5p表达与直肠癌患者临床病理特征和预后的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-144-5p、miR-876-5p表达对直肠癌患者预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-144-5p、miR-876-5p表达均显著低于对照组(P均<0.05)。血清miR-144-5p、miR-876-5p表达与直肠癌浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关(P均<0.05),与性别、年龄、肿瘤最大径、组织分化程度无关(P均>0.05)。随访3年,85例直肠癌患者3年生存率为76.47%(65/85)。miR-144-5p、miR-876-5p高表达者3年生存率均显著高于其低表达者(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-144-5p、miR-876-5p表达单独和联合预测直肠癌患者预后不良的曲线下面积分别为0.781、0.795、0.888,血清miR-144-5p、miR-876-5p表达联合预测直肠癌患者预后不良的曲线下面积大于血清miR-144-5p、miR-876-5p表达单独(P均<0.05)。结论直肠癌患者血清miR-144-5p、miR-876-5p低表达,二者表达与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移以及患者预后密切相关,并可作为预测直肠癌患者预后不良的生物标志物。

LncRNA NEAT1调节微小RNA-144-3p/NOVA1轴对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤的影响

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富含丰富的转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1,NEAT1)通过微小RNA(micro RNA,miR)-144-3p/神经肿瘤腹侧抗原1(neural tumor ventral antigen 1,NOVA1)对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,hRMECs)损伤的影响。方法将h RMECs分为高糖组(不转染)、对照组(不转染)、高糖+si-NEAT1-阴性对照(negative control,NC)组(转染siRNA-NC)、高糖+si-NEAT1组(转染NEAT1 siRNA)、高糖+si-NEAT1+抑制剂-NC组(共转染NEAT1 siRNA+抑制剂-NC)、高糖+si-NEAT1+miR-144-3p抑制剂组(共转染NEAT1 siRNA+miR-144-3p抑制剂)、高糖+si-NOVA1-NC组(转染NOVA1 siRNA-NC)、高糖+si-NOVA1组(转染NOVA1 siRNA)。实时荧光定量聚合酶链反应技术(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测hRMECs中NEAT1、miR-144-3p表达量;CCK-8、Transwell和血管形成实验分别分析hRMECs增殖、迁移和血管形成能力;双荧光素酶报告实验分析NEAT1与miR-144-3p、miR-144-3p与NOVA1的结合情况;Western blot检测NOVA1、VEGF蛋白表达。结果与对照组比较,高糖组hRMECs中NEAT1表达(2.67±0.13 vs.1.02±0.08)、相对活力、迁移数量[(271.50±20.35)个vs.(144.30±16.41)个]、成管节点数[(426.50±22.75)个vs.(181.70±12.43)个]、管长度[(12725.46±136.57)μm vs.(8009.32±107.32)μm]均较高,miR-144-3p表达(0.46±0.06 vs.1.00±0.05)较低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲低NEAT1可明显下调h RMECs中NEAT1的表达,上调miR-144-3p的表达,同时降低NOVA1(0.80±0.09 vs.1.35±0.07)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达及hRMECs的相对活力、迁移数量[(231.60±14.25)个vs.(271.50±20.35)个]、成管节点数[(234.30±13.18)个vs.(426.50±22.75)个]和管长度[(9208.74±130.85)μm vs.(12725.46±136.57)μm],差异有统计学意义(P<0.05),上述作用可被miR-144-3p抑制剂减弱。NEAT1可结合并下调miR-144-3p表达,且NOVA1为miR-144-3p的靶基因。敲低NOVA1可明显降低hRMECs相对活力、迁移数量、成管节点数、管长度,差异有统计学意义(P<0.05)。结论敲低NEAT1可上调miR-144-3p表达,下调NOVA1蛋白表达,进而抑制hRMECs增殖、迁移和血管形成能力。

血清miR-144、miR-203对胃癌根治术患者预后的评估

目的 探讨血清微小RNA(miR)-144、miR-203对胃癌根治术患者预后的评估价值。方法 选取113例接受胃癌根治术治疗的胃癌患者为胃癌组,另选取同期66例接受内镜下切除治疗的胃息肉患者为对照组。比较两组患者血清miR-144、miR-203水平,分析血清miR-144、miR-203水平与胃癌患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清miR-144、miR-203水平与胃癌根治术后3年累积存活率,多因素Cox回归分析胃癌根治术预后不良影响因素,ROC曲线判断血清miR-144、miR-203水平对胃癌根治术预后不良的评估价值。结果 胃癌组血清miR-144、miR-203水平低于对照组(P均<0.05)。血清miR-144、miR-203水平与胃癌患者TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,高血清miR-144、miR-203水平组胃癌根治术后3年累积存活率高于低水平组(P均<0.05)。多因素Cox回归分析显示,TNM分期(HR=2.609,95%CI:1.112~6.121)、淋巴结转移(HR=2.916,95%CI:1.149~7.403)为胃癌根治术预后不良独立风险因素,miR-144(HR=0.582,95%CI:0.217~0.874)、miR-203(HR=0.603,95%CI:0.389~0.986)为独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-144+miR-203评估胃癌根治术预后不良的曲线下面积(AUC)(AUC=0.922,95%CI:0.856~0.964)大于miR-144(AUC=0.826,95%CI:0.744~0.891)、miR-203(AUC=0.838,95%CI:0.757~0.901)(P均<0.05),灵敏度、特异度、准确度分别为93.10%、88.10%、89.38%。结论 胃癌患者血清miR-144、miR-203水平下调,为胃癌根治术不良预后独立保护因素,联合检测可提升不良预后评估价值。

慢性心力衰竭患者血miRNA-21的变化及意义

目的:探讨mi RNA-21在慢性心力衰竭患者中表达的差异及临床意义。方法:入选2014年11月至2015年12月在我科住院的慢性心力衰竭患者150例(CHF组)和体检中心无心力衰竭者45例(对照组)。根据NYHA心功能分级,CHF组被分为A组(心功能Ⅱ级,49例),B组(心功能Ⅲ级,51例)和C组(心功能Ⅳ级,50例)3个亚组;运用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)方法检测mi RNA-21含量。测定B型脑钠肽(BNP)、左室射血分数(LVEF)及左室舒张末内径(LVEDD)等。结果:CHF各组患者mi RNA-21水平均较对照组高,并且C组较A、B组明显升高,B组较A组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析表明:mi RNA-21的表达量与BNP(r=0.763,P<0.01)、LVEDD(r=0.691,P<0.01)呈正相关,与LVEF呈负相关(r=-0.918,P<0.01)。结论:mi RNA-21可能为心力衰竭潜在的诊断学标记物,并可为慢性心力衰竭诊断及预后评估提供重要参考依据。

急性缺血性脑卒中患者血清miRNA-335表达水平及临床意义

目的检测mi RNA-335(mi R-335)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,探讨其与AIS发病的相关性。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法测定106例AIS患者及98例健康对照者血清mi R-335表达情况,卒中患者病情评估采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行评分,并比较病程为3天内、4~7天和8~14天的AIS患者血清mi R-335表达水平,分析患者血清mi R-335水平与NIHSS评分的相关性。运用生物学数据库预测mi R-335的靶基因,采用DAVID数据库对靶基因集合进行功能注释分析。结果 1与健康对照组相比较,AIS组患者血清mi R-335表达明显下调(P<0.01),病程为3天内、4~7天和8~14天的AIS患者血清中mi R-335水平均低于健康对照组(P<0.01);2血清mi R-335水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.28,P<0.01),NIHSS>5分组患者血清mi R-335水平明显低于NIHSS≤5分组(P<0.01);3数据库分析显示:mi R-335预测靶基因功能分析主要富集在核酸代谢、转录调控、细胞增殖、神经元发育与分化、血管形成的生物学过程,并富集在通道活性的调节、钙离子结合活性、阳离子金属离子结合活性和转录调节的活性等分子功能,定位于细胞核质成分,并富集于MAPK信号转导、氧化应激和血管形成的信号通路中。结论 AIS患者血清mi R-335表达明显下降,与卒中后患者病情密切相关,是其可能的血清生物学标志之一。