三七皂苷R1通过miR-181/IL-8/TLR4通路调控糖尿病性视神经病变的机制研究

目的探究三七皂苷R1(NGR1)通过微小RNA-181/白细胞介素-8/Toll样受体4(miR-181/IL-8/TLR4)通路调控糖尿病性视神经病变(DON)大鼠的作用及抗炎机制。方法尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)、低剂量NGR1组(LNGR1)、中剂量NGR1组(MNGR1)、高剂量NGR1组(HNGR1),另设对照组(CG),每组8只,共40只。LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠每2日灌胃1次,剂量依次为15、30、60 mg/kg的NGR1,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,连续给药6周,期间监测大鼠血糖及体质量。给药完成后苏木精-伊红(HE)染色观察检测大鼠视神经形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测视神经糖化血红蛋白(HbA1c)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测视神经miR-181表达,荧光素酶报告试验检测miR-181和IL-8靶向关系,Western Blot法检测视神经IL-8、TLR4的蛋白表达。结果(1)体重、血糖和HbA1c:与CG组比较,MG大鼠体重降低(t=-3.675,P=0.001),血糖、HbA1c较高(t_(血糖)=67.721,t_(HbA1c)=27.213,均P=0.000);与MG组比较,MNGR1、HNGR1组大鼠体重较高(t_(MNGR1)=4.863,t_(HNGR1)=6.018,均P=0.000),血糖较低(t_(MNGR1)=-29.171,t_(HNGR1)=-43.981,均P=0.000),HbA1c较低(t_(MNGR1)=-18.468,t_(HNGR1)=-22.799,均P=0.000),差异均有统计学意义。(2)炎症因子:与CG组比较,MG组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-9表达较高(t_(IL-1β)=22.949,t_(IL-6)=20.732,t_(TNF-α)=12.785,t_(MMP-9)=12.276,均P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠血清IL-1β水平较低(t_(LNGR1)=-6.465,t_(MNGR1)=-18.598,t_(HNGR1)=-21.943,均P=0.000)、IL-6水平较低(t_(LNGR1)=-3.765,P=0.001;t_(MNGR1)=-13.274,t_(HNGR1)=-15.405,均P=0.000)、TNF-α水平较低(t_(MNGR1)=-9.221,t_(HNGR1)=-10.523,均P=0.000)、MMP-9水平较低(t_(LNGR1)=-2.934,P=0.006;t_(MNGR1)=-4.343,t_(HNGR1)=-9.991,均P=0.000),差异均有统计学意义。(3)视神经形态:与CG比较,MG组大鼠视神经出现明显的出血和血管扩张、轴突肿胀以及胶质细胞增生,但LNGR1、MNGR1、HNGR1组以上情况较MG随药物剂量较高改善。与CG组比较,MG组大鼠视神经横截面积较低(t=-27.680,P=0.000),胶质细胞数较高(t=5.501,P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠视神经横截面积较大(t_(LNGR1)=6.241,t_(MNGR1)=7.853,t_(HNGR1)=10.248,均P=0.000),HNGR1组胶质细胞数较低(t_(HNGR1)=-3.097,P=0.004),差异均有统计学意义。(5)IL-8与miR-181的靶向关系:miR-181与IL-8存在结合位点。(6)miR-181/IL-8/TLR4通路蛋白:与CG组比较,MG组大鼠视神经miR-181、IL-8、TLR4表达较高(t_(miR-181)=33.870,t_(IL-8)=62.851,t_(TLR4)=20.802,均P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠视神经miR-181表达较低(t_(LNGR1)=13.476,t_(MNGR1)=14.420,t_(HNGR1)=11.187,均P=0.000)、IL-8表达较低(t_(LNGR1)=2.460,P=0.019;t_(MNGR1)=19.230,t_(HNGR1)=46.383,均P=0.000)、TLR4表达较低(t_(LNGR1)=8.350,t_(MNGR1)=14.185,t_(HNGR1)=11.502,均P=0.000),差异均有统计学意义。结论NGR1可降低DON大鼠血糖,改善视神经病理状况,其机制可能与调控视神经miR-181/IL-8/TLR4通路及相关炎症有关。

miR-181基因家族在临床常见疾病中的研究进展

微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,广泛存在于真核生物体内,能够在转录后通过抑制目的基因信使RNA(mRNA)的翻译或促进mRNA降解来调节基因表达。miRNA已成为多种生物过程的关键调控因子,各种调控机制不仅控制着它们的表达,还控制着它们的活性和生物利用度,这取决于miRNA在人类相关蛋白质编码基因的潜在结合位点。miRNA在免疫系统的发育和调控中也发挥着重要的作用,可以调控机体关键的细胞过程,包括细胞分化、血管生成和炎症反应的发生。现已发现很多生理过程和病理结果高度依赖于miRNA,包括癌症、心血管疾病和代谢性疾病。其中,miR-181基因家族在胚胎发育、细胞增殖、凋亡、自噬、线粒体功能和免疫反应等关键生物过程中发挥调节作用。该文综述了近年来miR-181基因家族在临床疾病中的诊断和治疗方向及研究前沿,以期为miRNA的临床疾病治疗提供新的思路。

miR-181a促进人子宫内膜间质细胞蜕膜化催乳素的表达

目的目前虽已发现一些在胚胎着床过程中起重要作用的分子,但微小RNA(microRNA,miRNA)在蜕膜化过程中作用的研究报道较少,文中调查孕鼠围着床期子宫组织中miR-181a的表达规律,并探讨miR-181a对人子宫内膜间质细胞(human endometrial stromal cell,hESC)体外诱导蜕膜化过程中蜕膜化标志基因蜕膜化催乳素(decidual prolactin,dPRL)表达的调控作用。方法收集怀孕0～6.5 d孕鼠子宫组织,采用TRIZOL法提取总RNA,通过实时定量PCR检测子宫组织中miR-181a的表达。制备Ad-miR-181a重组腺病毒,并感染hESC,24 h后采用0.5 mmol/L 8-Br-cAMP和1μmol/L Medroxyproges-terone(MPA)联合进行体外蜕膜化诱导培养;通过化学发光免疫法和实时定量PCR分别检测细胞培养液上清中dPRL的浓度与间质细胞中催乳素(prolactin,PRL)mRNA的表达;同时采用荧光素酶报告基因检测miR-181a对hESC中dPRL(-332/+65)启动子的调控作用。结果早孕小鼠子宫组织中miR-181a的表达高于非妊娠小鼠子宫,且随着妊娠天数的增加呈逐渐上升的趋势,在小鼠着床"窗口期"即孕4.5 d达到高峰(2.60±0.15倍,P<0.01,n=5),孕5.5 d子宫miR-181a的表达开始平稳下降;成功获得滴度为5.19×1010ifu/ml的miR-181a腺病毒,该腺病毒介导的miR-181a过表达显著增加hESC蜕膜化标志基因dPRL mRNA表达水平,增高超过8倍(P<0.01);在8-Br-cAMP和MPA联合诱导hESC体外蜕膜化时,高表达miR-181a可明显增加8-Br-cAMP联合MPA诱导的PRL mRNA表达水平与PRL蛋白分泌(P<0.01)。荧光素酶报告基因进一步证实miR-181a可以激活dPRL(-332/+65)启动子的活性达到2倍(P<0.05)。结论 miR-181a参与8-Br-cAMP和MPA诱导子宫内膜间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达调控。

miR-181调控人晶状体上皮细胞凋亡的机制研究

目的:探讨miR-181在白内障晶状体组织中的表达情况,及其对人晶状体上皮细胞凋亡的调控机制。方法:利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和人晶状体上皮细胞凋亡模型中miR-181的表达情况;利用Lipofectamine 2 000瞬时转染miR-181 mimic和inhibitor调节人晶状体上皮细胞中miR-181的表达,利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果:与对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组和人晶状体上皮细胞凋亡模型组,miR-181的表达显著升高;miR-181 mimic转染组,miR-181的表达显著升高,细胞凋亡率显著升高;miR-181 inhibitor转染组,miR-181的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-181在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达,miR-181能够促进人晶状体上皮细胞凋亡,从而可能在年龄相关性白内障的发病过程中发挥一定作用,miR-181可能成为白内障非手术治疗的一种新途径,但具体机制有待进一步研究。

鸡miR-181a组织的表达谱及其转录调控区域

【目的】分析鸡miR-181a的转录起始位点,并分析其在1日龄和成年鸡不同组织中的表达谱,以期为研究miR-181a的功能奠定基础。【方法】采用qPCR技术构建miR-181a在1日龄和成年鸡肝脏、脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织中的表达谱。用version(1.83)分析miR-181a的保守性,并采用ENCODE数据库进行miR-181a转录起始位点和启动子区域的分析。【结果】①采用qPCR检测miR-181a在鸡下丘脑中的表达量和高通量测序的结果一致,1日龄下丘脑中的表达量显著低于成年鸡的表达量(P<0.05);②miR-181a在11个组织中均有表达,且在1日龄和成年鸡脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织的表达量差异显著(P<0.05),而在肝脏中表达量的差异不显著(P>0.05);③miR-181a的前体miR-181a-1上游区域有一个启动子区和一个潜在的转录起始位点;④miR-181a-1的转录调控区域内存在的多个转录因子,转录因子主要有NFKB,c-Fos等。【结论】鸡miR-181a的表达有组织和时序差异,其成熟序列在脊椎动物中十分保守,上游有一个转录起始位点及启动子区。

miR-181及miR-146家族在不同甲状腺癌细胞株中的表达及与BRAF^V600E基因突变的关系

目的探讨miR-146及miR-181家族中各成员(miR-146a、miR-146b、miR-181a、miR-181b、miR-181c和miR-181d)在不同甲状腺癌细胞株(TPC-1和BCPAP)中的相对表达量及与BRAF V600E基因突变的关系。方法采用实时定量PCR技术检测甲状腺癌细胞株TPC-1(无BRAF V600E基因突变)及BCPAP(BRAF V600E基因突变)中miR-146a、miR-146b、miR-181a、miR-181b、miR-181c和miR-181d的表达水平,并初步探讨其表达水平与BRAF V600E基因突变的关系。结果miR-146a、miR-181b、miR-181d在甲状腺癌细胞BCPAP中相对高表达,分别为1.52±0.03、4.13±0.01、6.51±0.87。BRAF V600E基因突变细胞株BCPAP中的miR-146a、miR-181a、miR-181b、miR-181c、miR-181d表达量较无BRAF V600E基因突变的细胞株TPC-1明显增高(P<0.01)。BRAF V600E基因突变细胞株BCPAP中miR-146b的表达量较无BRAF V600E基因突变细胞株TPC-1明显减低(P<0.01)。结论miR-146a、miR-181b、miR-181d在甲状腺癌细胞BCPAP中表达水平相对较高。miR-146及miR-181家族中各成员的相对表达量与BRAF V600E突变均有明显相关性。

miR-181b-5p靶向调控Nr6a1抑制GC-1spg细胞的增殖与迁移

Micro RNA(mi RNA)是一段长约为22 nt的内源性非编码单链RNA,研究表明mi RNA对正常精子发生和雄性发育必不可少。为了探究mi R-181b-5p在雄性生殖细胞发育中的功能以及寻找其靶基因,首先采用流式细胞术、噻唑蓝检测以及划痕实验分析了mi R-181b-5p在小鼠GC-1spg精原细胞系中的生物学效应,随后利用Targetscan和GO数据库等生物信息学软件预测发现生殖核受体Nr6a1可能为其靶基因,进而通过双荧光素酶报告基因实验以及q PCR证实了mi R-181b-5p与Nr6a1的靶向识别关系,最后采用细胞功能回补实验明确了mi R-181b-5p通过靶向调控Nr6a1来抑制GC-1spg细胞的增殖和迁移。结果表明mi R-181b-5p通过其靶基因Nr6a1在精子发生中起到负调控的作用。

胃癌患者血清miR-21、miR-181表达与临床病理参数、预后的关系

目的探究胃癌患者血清微小RNA-21(miR-21)、miR-181的表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数、预后的关系。方法收集于2012年6月至2014年4月入住我院的97例胃癌患者的血清样本,另收集同期100例在我院体检的健康志愿者的血清样本。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测血清样本中miR-21、miR-181的表达水平,同时分析miR-21、miR-181与患者临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-21、miR-181的表达与患者预后的关系;并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-21、miR-181表达对胃癌预后的预测价值。结果胃癌患者血清中miR-21、miR-181表达水平均明显高于健康志原者,差异具有统计学意义(P<0.05)。患者血清中miR-21表达水平与有无淋巴结转移、分化程度、浸润深度相关;miR-181的表达水平与有无淋巴结转移、肿瘤TNM分期相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。KaplanMeier生存曲线显示,miR-21高表达胃癌患者5年累积生存率为18.4%,低于低表达胃癌患者的25.0%(P<0.05);miR-181高表达胃癌患者的5年累积生存率为14.3%,低于低表达胃癌患者29.2%(P<0.05)。血清miR-21、miR-181两指标对胃癌预后具有较高的辅助预测价值,曲线下面积(AUC)均高于0.7,而二者联合应用,其诊断效能更高,敏感度、特异性、和约登指数分别为0.908、0.667、0.574。结论胃癌患者血清miR-21、miR-181表达水平高于健康人群,且与患者不良预后相关,二者可作为胃癌预后预测的潜在生物标志物。

miR-181家族在胶质母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的探讨miR-181家族在人多形性脑胶质母细胞瘤(GBM)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用茎环实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测40例胶质母细胞瘤中miR-181a、miR-181b、miR-181c、miR-181d的表达水平,并分析其与胶质母细胞瘤临床病理特征的关系。采用慢病毒转染上调胶质瘤细胞系U251 miR-181a的表达,分析miR-181a对U251克隆形成、细胞增殖和凋亡的影响。结果 miR-181a高表达的GBM患者生存预期明显延长(P<0.05);且miR-181a表达水平越高,GBM瘤周水肿越明显(P<0.05)。O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)阳性组的GBM miR-181a表达明显高于阴性组(P<0.05)。上调miR-181a的表达后,U251胶质瘤细胞克隆形成数明显少于对照组(P<0.05),且细胞生长抑制在第5天最明显,差异有统计学意义(P<0.01);对细胞凋亡起促进作用(P<0.05)。结论 miR-181a表达水平与GBM患者的临床预后相关。miR-181a表达减少与GBM的发生密切相关。

miR-181靶向TIMP3调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的实验研究

目的研究miR-181靶向金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)调控胆囊癌细胞迁移及侵袭的作用。方法培养胆囊癌GBC-SD细胞,转染miR-181 mimic、阴性对照(NC)mimic、TIMP3 siRNA、NC siRNA、表达TIMP3的重组质粒、空白质粒,荧光定量PCR检测miR-181的表达量,Western blot检测TIMP3的表达量,Transwell检测细胞迁移和侵袭活力,生物信息学分析及荧光素酶报告基因实验验证miR-181靶向TIMP3;皮下注射转染miR-181 mimic或NC mimic的GBC-SD细胞后建立荷瘤鼠模型,检测移植瘤质量及miR-181、TIMP3表达量。结果细胞实验显示:转染miR-181 mimic促进细胞迁移及侵袭、抑制细胞中TIMP3的表达及双荧光素酶报告基因的荧光素酶活力;转染TIMP3 siRNA促进细胞迁移及侵袭;转染表达TIMP3的重组质粒后,miR-181 mimic促进细胞迁移、侵袭的作用减弱。动物实验显示:转染miR-181 mimic使移植瘤的质量减轻、移植瘤中TIMP3的表达增加。结论miR-181具有促进胆囊癌细胞迁移和侵袭的作用,靶向抑制TIMP3是介导该作用的分子机制之一。

下调miR-181a对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨下调miR-181a对人胃癌细胞生物学行为的影响。方法:转染miR-181a inhibitor下调miR-181a在人胃癌细胞SGC-7901中的表达。通过MTT法、流式细胞仪、Annexin-V+PI双染色法和Transwell实验,观察下调miR-181a表达对人胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭迁移等生物学行为的影响。结果:瞬时转染miR-181a inhibitor后胃癌细胞SGC-7901中miR-181a的表达明显下调(P=0.002 7)。转染miR-181a inhibitor后7901细胞增殖明显减弱(P=0.000 6),被阻滞的G0/G1期细胞明显增多(P=0.007 5),S期细胞明显减少(P=0.002 2),细胞凋亡比例增加(P<0.001 7)。Transwell实验证实下调miR-181a表达能促进人胃癌细胞侵袭与迁移(P=0.000 6、P=0.000 4)。结论:下调miR-181a表达抑制胃癌细胞增殖、促进凋亡,促进侵袭迁移,提示miR-181在胃癌的发生发展中可能发挥重要的作用。

miR-181基因rs16927589位点单核苷酸多态性在中国广西人群中的分布特点

目的分析miR-181基因rs16927589位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)在中国广西地区人群中的分布特点,并比较其基因型和等位基因频率与其他种族和地区人群间的分布差异。方法采用SNa Pshot SNP技术和DNA测序技术检测299例中国广西人群rs16927589位点SNPs,用统计学方法分析其基因型和等位基因频率与国际人类基因组单体型图(Haplotype map,Hap Map)计划公布的北京人群(Hap Map-HCB)、日本人群(Hap Map-JPT)、肯尼亚人群(Hap Map-LWK)、印度人群(Hap Map-GIH)及欧洲人群(Hap Map-CEU)间的差异。结果中国广西人群存在miR-181基因rs16927589多态性,有TT、TC和CC三种基因型,其频率分别为73.6%、25.4%和1.0%,含T和C两种等位基因,频率分别为86.3%和13.7%,两者男女组间比较差异无统计学意义(P>0.05);与HapMap-HCB人群比较差异无统计学意义(P>0.05),但与Hap Map-GIH、Hap Map-LWK、Hap Map-JPT及Hap Map-CEU比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论在中国广西人群存在miR-181基因rs16927589多态性,且在不同地域和种族人群间比较存在差异。不同种族和地区人群SNP差异可能是miR-181基因相关疾病在临床表现和发病率不同的重要因素之一。

miR-155、miR-181在急性淋巴细胞白血病患儿外周血单核细胞中的表达及临床意义

目的探讨miR155、miR181在急性淋巴细胞白血病患儿外周血单核细胞中的表达及临床意义。方法收集51例ALL患儿为研究组,51例健康儿童为对照组。分离外周血PBMC,提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术检测miR155、miR181表达水平。Kaplan-Meier生存曲线比较2组患儿生存情况。结果研究组患儿PBMC中miR155、miR181水平明显高于对照组(P<0.001)。ALL患儿PBMC中miR155、miR181水平与患儿年龄、性别及有无肝脾肿大无关(P>0.05),但与患儿白细胞计数、LDH及CA-125水平相关(P<0.05)。化疗后不同效果患儿PBMC中miR155、miR181水平有明显差异(P<0.001),而CR、PR组患儿PBMC中miR-155、miR-181水平明显低于复发组患儿(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果显示PBMC中miR-155、miR-181表达水平上升患儿的生存率明显低于表达水平正常者(P<0.05)。结论miR-155、miR-181在ALL患儿PBMC中表达水平升高,其高表达与患儿复发及预后不良相关。

miR-181-5p通过下调AKT3抑制肝癌细胞侵袭和转移

目的探讨miR-181-5p通过靶向作用AKT3通路,从而影响肝癌细胞增殖、侵袭和转移。方法利用q RT-PCR技术检测人肝癌标本与正常肝组织中miR-181-5p、AKT3含量,并且采用免疫组化染色检测miR-181-5p高表达肝癌组织和miR-181-5p低表达的肝癌组织中AKT3、E-cadherin和N-cadherin的含量及分布情况;体外培养肝癌细胞SMMC-7721,采用miR-181-5p mimic或inhibitor处理以促进或抑制肝癌细胞miR-181-5p表达,AKT3si RNA沉默AKT3基因;平板克隆实验和Transwell实验检测肝癌细胞增殖、侵袭和转移能力。结果肝癌组织中miR-181-5p呈低表达水平,而AKT3表达升高。miR-181-5p高表达肝癌组织较miR-181-5p低表达的肝癌组织中AKT3、E-cadherin和N-cadherin的表达量降低。通过si RNA抑制AKT3表达,可以抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。结论 miR-181-5p在肝癌组织中低表达,miR-181-5p能抑制AKT3表达,从而抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移。

miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞系SLK细胞迁移、侵袭的影响

目的通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。

miR-181家族基因SNPs及CNV在系统性红斑狼疮疾病的研究进展

微小RNA广泛参与多种疾病的发生发展,尤其是系统性红斑狼疮。微小RNA-181基因簇是目前发现较新的一个微小RNA,可通过多种机制参与系统性红斑狼疮的疾病活动和病情进展。笔者就miR-181基因簇单核苷酸多态性及拷贝数变异在系统性红斑狼疮疾病的研究进展进行综述。

miR-181a对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响

为了探讨miR-181a对牛骨骼肌卫星细胞分化的影响,试验将分离培养的牛骨骼肌卫星细胞接种在6孔板中,待细胞汇合度为70%时,用PEI转染miR-181a的模拟物miR-181a-M、抑制剂miR-181a-I、模拟物对照miR-181a-M-NC和抑制剂对照miR-181a-I-NC进入牛骨骼肌卫星细胞中,在0,1,2,3天用Western-blot检测肌肉有关分化蛋白MyoD、MyoG和MYH3以及靶基因HOX-A11蛋白的表达量,用免疫荧光法检测细胞肌管的数量。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,转染miR-181a模拟物的牛骨骼肌卫星细胞,有关肌肉分化蛋白质如MyoD、MyoG和MYH3的表达量明显增加,细胞肌管数量显著增多,进一步证实miR-181a促进细胞的分化。在双荧光素酶报告系统中,miRNA-181a和HOX-A11基因的3'-UTR结合时荧光素酶活性明显下降,miRNA-181a和突变的3'-UTR结合时荧光素酶活性没有下降。说明HOX-A11是miR-181a的靶基因,miR-181a对牛骨骼肌卫星细胞的分化具有促进作用。

miR-181a-5p在非小细胞肺癌中抗癌机制的研究

目的探索miR-181a-5p的抑癌机制,探讨其是否可作为临床检测肺癌的标志物。方法采用CCK8法检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株A549细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测miR-181a-5p对A549细胞运动的影响;利用双荧光报告基因实验和RT-PCR实验探讨miR-181a-5p与靶基因的相互作用。结果在非小细胞肺癌细胞株A549中过表达miR-181a-5p能明显抑制A549细胞株的增殖,促进细胞的早期凋亡(P<0.05)。细胞划痕和Transwell实验结果表明miR-181a-5p能明显抑制细胞的运动(P<0.05);miR-181a-5p可通过3'UTR靶向下调Kras基因的表达,且在NSCLC中Kras表达与miR-181a-5p表达有一定关系。结论 miR-181a-5p可显著抑制NSCLC A549细胞的生物进程,是潜在的治疗NSCLC的靶标。

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性B淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性B淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。

长链非编码RNA DRAIC调控miR-181通过STAT信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DRAIC调控miR-181通过STAT信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR检测lncRNA DRAIC和miR-181在卵巢癌细胞株中的表达差异;双荧光素酶实验检测lncRNA DRAIC和miR-181之间的关系;平板克隆细胞实验和Transwell侵袭实验分别检测lncRNA DRAIC对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测lncRNA DRAIC对卵巢癌细胞成瘤能力的影响;Western Blot实验检测lncRNA DRAIC对JAK1/STAT2信号通路激活的影响。结果SKOV3中lncRNA DRAIC的表达(2.51±0.26)高于COC1(2.31±0.21),CAOV3(1.03±0.13)和A2780(1.93±0.12)细胞株(P<0.05);SKOV3中miR-181的表达(2.55±0.31)高于CAOV3(0.76±0.11)和A2780(1.62±0.13)细胞株(P<0.05),稍低于COC1细胞株(2.72±0.24);DRAIC-siRNA转染卵巢癌细胞后,miR-181-WT的表达水平明显降低[(1.02±0.11)vs(0.38±0.05),P<0.05],而miR-181-MUT的表达水平变化不大[(1.02±0.11)vs(0.96±0.08),P>0.05];转染DRAIC-siRNA 48、60 h后,SOKV3细胞的增殖能力明显低于对照组;Transwell侵袭实验显示DRAIC-siRNA组的侵袭细胞数目[(186.4±12.4)vs(73.6±8.6),P<0.05]显著降低;划痕愈合实验显示DRAIC-siRNA组的细胞迁移距离比例[(2.53±0.24)vs(1.21±0.09),P<0.05]显著降低;裸鼠成瘤实验显示DRAIC-siRNA组平均肿瘤体积明显小于对照组[(1.135±0.09)cm 3 vs(2.13±0.13)cm 3,P<0.05],DRAIC-siRNA组平均肿瘤重量也显著低于对照组[(1.52±0.12)g vs(1.89±0.21)g,P<0.05];Western Blot实验显示DRAIC-siRNA组的磷酸化p-JAK1和p-STAT2蛋白表达水平相应下调,而同时过表达miR-181-mimic后,磷酸化p-JAK1和p-STAT2蛋白表达水平相应的恢复。结论LncRNA DRAIC通过调控miR-181的表达激活JAK1/STAT2磷酸化进而影响卵巢癌细胞的恶性生物学行为的发生。