miR-185-5p通过靶向抑制IL-1β减轻急性痛风性关节炎的炎症反应

目的 探索白细胞介素1β(IL-1β)在急性痛风性关节炎(AGA)的关节损伤过程中与miR-185-5p的关系。方法 采用实时荧光定量PCR检测89名AGA患者及91名健康志愿者的血清miR-185-5p的水平,采用Pearson相关系数法评估miR-185-5p的表达水平与视觉模拟(VAS)评分以及IL-1β水平之间的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-185-5p对AGA的诊断价值。采用尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞建立体外急性痛风性炎症细胞模型,通过体外转染miR-185-5p模拟物或抑制物增加或降低THP-1细胞miR-185-5p的表达水平后,采用ELISA检测THP-1细胞白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-8及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;荧光素酶报告基因实验确定miR-185-5p与IL-1β的3′-非翻译区(3′-UTR)的相互作用。结果 与健康对照组相比,AGA患者血清miR-185-5p的水平显著降低;血清miR-185-5p的水平与VAS评分和IL-1β的表达水平均呈负相关;ROC曲线下面积为0.905,敏感性为80.17%,特异性为83.52%。下调miR-185-5p显著促进THP-1细胞IL-1β、 IL-8及TNF-α的表达,而过表达miR-185-5p则呈现相反的结果;荧光素酶报告基因实验显示IL-1β是miR-185-5p的靶基因,并且负调控IL-1β的表达。结论 miR-185-5p通过靶向抑制IL-1β减轻AGA的炎症反应。

缺血性心力衰竭患者血清miR-9-5p、miR-185-5p表达与心功能及心室重构的关系

目的探讨缺血性心力衰竭(IHF)患者血清miR-9-5p和miR-185-5p表达与心功能和心室重构的关系。方法选取2021年2月—2023年2月南阳市中心医院IHF患者108例(IHF组),参照美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将IHF患者分为Ⅰ~Ⅱ级组(35例)、Ⅲ级组(42例)和Ⅳ级组(31例)。另选取同期南阳市中心医院轻度冠心病缓解期且无心力衰竭的患者50例作为疾病对照组。收集所有研究对象的一般资料和实验室常规生化项目检测结果,并检测血清miR-9-5p、miR-185-5p、B型钠尿肽(BNP)、左室射血分数(LVEF)、左室前后径(LAD)和左室舒张末期内径(LVEDD)。采用Pearson相关分析评估血清miR-9-5p、miR-185-5p与心功能和心室重构的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miR-9-5p、miR-185-5p诊断IHF的效能。结果IHF组血清miR-9-5p、miR-185-5p相对表达量和BNP、LAD、LVEDD均显著高于疾病对照组(P<0.05),LVEF显著低于疾病对照组(P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组血清miR-9-5p、miR-185-5p相对表达量和LAD、LVEDD、BNP均依次升高(P<0.001),LVEF依次降低(P<0.001)。血清miR-9-5p、miR-185-5p水平与LAD、LVEDD、BNP均呈正相关(P<0.05),与LVEF均呈负相关(P<0.05)。miR-9-5p、miR-185-5p均为IHF发生的危险因素[比值比(OR)值分别为2.114、2.224,95%可信区间(CI)分别为1.129~3.958、1.297~3.813,P<0.05]。miR-9-5p、miR-185-5p、LVEF、BNP单项检测诊断IHF的AUC分别为0.806、0.789、0.734、0.751;miR-9-5p+miR-185-5p+LVEF、miR-9-5p+miR-185-5p+BNP和4项指标联合检测的AUC分别为0.879、0.876、0.936。结论IHF患者血清miR-9-5p、miR-185-5p表达升高,且与心功能损伤程度有关,可能参与了心室重构过程。血清miR-9-5p、miR-185-5p、BNP和LVEF联合检测对IHF有较高的诊断效能。

宫颈癌患者血清外泌体miR-185-5p表达水平变化及临床应用价值

目的:探究宫颈癌患者血清微小RNA-185-5p表达水平及临床应用价值。方法:选取113例宫颈癌患者(宫颈癌组)、101例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者(CIN组)和95例健康体检女性(健康对照组),采用实时荧光定量PCR法检测三组血清外泌体miR-185-5p的表达水平,比较各组血清外泌体miR-185-5p水平差异,并探讨其与宫颈癌患者临床病理特征的关系。采用Cox回归模型对血清外泌体miR-185-5p水平及临床病理资料进行多因素分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体miR-185-5p对宫颈癌的诊断价值。结果:与健康对照组比较,宫颈癌组和CIN组患者血清外泌体miR-185-5p表达水平显著降低(P<0.01),且宫颈癌组更低于CIN组(P<0.01)。在FIGO分期Ⅲ、Ⅳ期、有淋巴结转移和有阴道壁累及的宫颈癌患者其血清外泌体miR-185-5p水平分别显著低于FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期、无淋巴结转移和无阴道壁累及的患者(P<0.05或P<0.01)。血清外泌体miR-185-5p的水平(HR=0.260,P<0.01)与淋巴结转移(HR=1.572,P<0.05)是宫颈癌患者预后的独立影响因素。血清外泌体miR-185-5p鉴别宫颈癌的ROC曲线下面积为0.796,敏感度为67.26%,特异度为81.05%。结论:血清外泌体miR-185-5p水平有助于宫颈癌的临床诊断和早期预后评估。

埃克替尼与安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效比较及对miR-185-5p、miR-204-5p表达水平影响观察

目的:比较埃克替尼与安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效,及对微小核糖核酸(miR)-185-5p、miR-204-5p表达水平的影响。方法:60例晚期NSCLC患者分为观察组和对照组,每组30例。对照组患者给予埃克替尼治疗,观察组患者给予安罗替尼治疗,比较两组疗效、治疗前后血清miR-185-5p、miR-204-5p水平变化、生存情况以及药品不良反应差异。结果:观察组患者的肿瘤控制率,以及总生存期和无瘤生存期均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者的血清miR-185-5p、miR-204-5p水平均较前显著升高(P<0.05),且观察组血清miR-204-5p、miR-185-5p水平高于对照组(P<0.05)。两组患者的药品不良反应发生例数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:相比埃克替尼,安罗替尼治疗晚期NSCLC患者疗效更佳,可显著上调患者血清miR-185-5p、miR-204-5p水平。

miR-185对癫痫海马神经元中BDNF-TrkB通路表达的影响

目的研究海马神经元癫痫模型中的BDNF/TrkB信号通路及miR-185*对其的调控。方法构建miR-185*表达载体。体外培养海马神经元,7d后将其随机分为正常组、癫痫组、正常+BDNF组、癫痫+BDNF组、正常转染miR-185*组、癫痫转染miR-185*组、癫痫转染miR-185*+BDNF组。免疫荧光、膜片钳及免疫印迹技术观察转染miR-185*后BDNF/TrkB通路的表达变化。结果癫痫+BDNF组海马神经元细胞的TrkB蛋白磷酸化水平较正常+BDNF组降低,有统计学意义(P<0.05);正常+BDNF组TrkB蛋白的磷酸化水平比正常组的磷酸化水平升高,有统计学意义(P<0.001);癫痫+BDNF组TrkB蛋白磷酸化水平比癫痫组升高,有统计学意义(P<0.05);而癫痫+miR-185*+BDNF组的TrkB蛋白磷酸化水平较癫痫+BDNF组和癫痫转染miR-185*组升高(P<0.001)。结论BDNF可以激活BDNF/TrkB信号通路,转染miR-185*后可以消除对癫痫状态下BDNF/TrkB信号传导通路的抑制。

miR-185靶向Six1对肺癌上皮-间质转化过程的影响及其机制

目的探讨miR-185影响人肺癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制。方法在肺癌细胞系H520和A549中转染miR-185mimic获得miR-185过表达,利用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验验证miR-185靶向Six1基因;采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-185对细胞中Six1基因表达水平的影响;Western blot法检测miR-185过表达对肺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响。结果 miR-185过表达降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P<0.01),间质细胞标志物vimentin表达降低(P<0.01),H520细胞过表达miR-185后,Six1基因表达水平降低(P<0.01),miR-185调控肺癌细胞的迁移和侵袭是通过靶向Six1基因实现的。结论 miR-185靶向Six1基因调控人肺癌细胞EMT途径。

miR-185通过调控E2F6抑制肺鳞癌细胞增殖和侵袭

目的探讨微小RNA-185(micro RNA-185,miR-185)对肺鳞癌细胞增殖和侵袭能力的作用及其可能的作用机制。方法人肺鳞癌细胞系(NCI-H520、NCI-H226)以及正常肺上皮细胞(BEAS-2B)为实验用细胞;q RT-PCR检测miR-185表达量;miR-NC(对照)和miR-185 mimics(miR-185类似物)利用Turbofect进行转染;Western blot检测E2F6的蛋白表达量;双荧光素酶报告基因检测miR-185与E2F6的靶向调控关系;MTT检测细胞的增殖能力;细胞侵袭试剂盒检测细胞的侵袭能力;构建pc DNA.3.1-E2F6重组载体,并转染肺鳞癌细胞过表达E2F6。结果 miR-185表达量在肺鳞癌细胞中显著降低(P<0.01)。miR-185靶向抑制E2F6基因(P<0.05)。转染miR-185 mimics显著上调miR-185的细胞含量(P<0.01)并抑制E2F6蛋白表达(P<0.01),肺鳞癌细胞增殖能力(P<0.05或P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)亦显著受抑。转染pc DNA.3.1-E2F6到miR-185含量升高的细胞,E2F6蛋白表达量显著升高(P<0.01)且细胞增殖(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)上升。结论 miR-185可以通过靶向E2F6抑制肺鳞癌细胞增殖和侵袭。

增强miR-185-5p表达可减轻小鼠实验性牙周炎的炎症反应

背景:目前牙周炎的发生发展机制仍不十分明确,治疗靶点有待探讨。近年研究发现,miR-185-5p在多种疾病中表现出抗炎作用,其在牙周炎中的作用尚不清楚。目的:探讨调节miR-185-5p表达对小鼠实验性牙周炎炎症反应的影响。方法:C57B/6J小鼠24只随机分为正常对照组、牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组、牙周炎miR-mimics组,每组6只。除正常对照组外,其余组均构建实验性牙周炎模型。造模4周后,在牙周炎miR-mimics组小鼠双侧下颌第二磨牙近远中牙龈乳头注射100μL含0.5 mmol/L miR-185-5p mimics的生理盐水,在牙周炎miR-NC组注射100μL含0.5 mmol/L阴性对照miR-NC的生理盐水,在正常对照组、牙周炎对照组注射等量生理盐水。给药8周后处死小鼠,Micro-CT检测左下颌骨,qRT-PCR检测左下颌牙龈miR-185-5p、MZB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6基因表达,免疫组织化学染色检测小鼠右下颌牙龈MZB1、磷酸化p65核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6蛋白表达。结果与结论:①Micro-CT检测显示,与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比,牙周炎miR-mimics组的牙槽骨丧失减少(P<0.05);②qRT-PCR结果显示,牙周炎miR-mimics组的miR-185-5p表达高于正常对照组、牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组(P<0.05);与牙周炎对照组、牙周炎miR-NC组相比,牙周炎miR-mimics组的MZB1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的mRNA表达降低(P<0.05);③免疫组织化学染色结果显示,与牙周炎对照组及牙周炎miR-NC组相比,牙周炎miR-mimics组的MZB1、磷酸化p65核因子κB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6蛋白表达减少(P<0.05);④提示增强miR-185-5p表达能抑制牙周炎炎症反应,抑制牙槽骨吸收,该作用可能与下调牙龈组织中MZB1、核因子κB通路有关。

miR-185在妊娠合并系统性红斑狼疮患者的T细胞异常甲基化中的作用及分子机制

目的探讨miR-185是否在妊娠合并系统性红斑狼疮(SLE)患者中有重要作用。方法采用实时定量PCR和蛋白质印迹等分子生物学技术对miR-185在SLE患者的T细胞异常甲基化中所起的作用进行研究,并与健康人群对比,分析其可能的分子机制。结果 miR-185在妊娠合并SLE患者的CD4+T细胞中显著上调,其过表达与DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA水平呈负相关。miR-185靶基因预测分析和双荧光素酶报告实验结果证实,DNMT1是miR-185的直接作用靶标。而且,在健康人CD4+T细胞中,miR-185的过表达会导致DNA低甲基化、编码CD11a和CD70的基因上调。抑制SLE患者的CD4+T细胞中miR-185的表达,会产生DNA甲基化逆转作用。结论 miR-185通过靶向作用于DNMT1导致系统性红斑狼疮患者妊娠期间CD4+T细胞的DNA低甲基化。miR-185可能是SLE干预治疗的潜在治疗靶点。

miR-185-5p影响小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移的研究

目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 通过前期研究获得乳腺癌中表达显著下调的miR-185-5p, NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列;EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡能力的影响;利用C57BL/6小鼠建立皮下肿瘤模型和肺转移模型,观察过表达miR-185-5p对体内肿瘤增殖能力以及肺部转移情况的变化。结果 EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术结果分别显示,敲低miR-185-5p使PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著增强,抑制细胞凋亡;而过表达miR-185-5p抑制PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡;C57BL/6小鼠体内成瘤实验显示,过表达miR-185-5p减缓C57BL/6小鼠体内肿瘤生长速度;肺转移实验显示,过表达miR-185-5p抑制C57BL/6小鼠肺转移能力。结论 miR-185-5p作为抑癌基因抑制小鼠乳腺癌PY8119细胞体内外增殖、侵袭迁移的能力。

miR-185与PKM2在胃癌中的表达及临床意义

目的 研究miR-185与PKM2在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用原位杂交和免疫组化技术检测胃癌组织与癌旁正常胃粘膜组织中miR-185与PKM2的表达情况,分析miR-185与PKM2之间的相关性以及与胃癌患者临床病理参数的关系。结果 原位杂交检测显示,在126例胃癌组织中miR-185阳性表达率为38.10%,与正常对照组56.38%比较,差异有统计学意义（χ^2=14.36,P=0.000）。免疫组化结果显示,在126例胃癌组织中PKM2阳性表达率为63.49%,与正常对照组43.59%比较,差异有统计学意义（χ^2=7.74,P=0.006）。相关性分析显示,在胃癌组织中miR-185的表达与PKM2的表达呈负相关（r=0.09,P=0.006）;Ⅲ-Ⅳ期胃癌患者miR-185的高表达率明显低于Ⅰ-Ⅱ期胃癌患者（P=0.001）,且有淋巴结转移者miR-185的高表达率也明显低于无淋巴转移者（P=0.003）;而PKM2在Ⅲ-Ⅳ期胃癌患者的高表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期胃癌患者（P=0.002）,且在有淋巴结转移者PKM2的高表达率也明显高于无淋巴转移者（P=0.006）,但是miR-185与PKM2在胃癌患者中的表达与患者的年龄、性别、组织分化程度以及T分期无明显相关性。结论 miR-185在胃癌组织中低表达,PKM2在胃癌组织中高表达可能是肿瘤细胞发生浸润转移的重要生物学标志。

miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞黏附介导耐药中的作用

目的探讨miR-185在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞黏附介导耐药(cell adhesion mediated-drug resistance,CAM-DR)中的作用。方法采用qPCR法分析人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中miR-185的表达。应用Western blot法检测人DLBCL细胞株OCI-Ly8、OCI-Ly10中PYK2和pPYK2(Tyr402)的表达状态。在人胚肾HEK-293T细胞中利用荧光素酶报告基因实验分析miR-185是否可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验分析miR-185和PYK2对CAM-DR的影响。结果qPCR检测发现,OCI-Ly8与纤连蛋白(fibronectin,FN)黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.17±0.07)vs(1.01±0.11)(t=9.05,P<0.001);OCI-Ly10细胞与FN黏附培养组与悬浮培养组中miR-185的表达:(0.35±0.15)vs(1.01±0.15)(t=4.50,P=0.011);提示OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可下调miR-185的表达。Western blot法检测发现,OCI-Ly8及OCI-Ly10细胞与FN黏附培养可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在悬浮及FN黏附培养状态下,敲低miR-185可上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平。在HEK-293T细胞中过表达miR-185后,3′非翻译区(untranslated region,UTR)空载体组与野生型PTK2B 3′UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06)vs(0.49±0.04)(t=9.54,P<0.001);3′UTR空载体组与突变型PTK2B 3′UTR组的相对荧光素酶报告基因活性:(1.00±0.06)vs(0.94±0.06)(t=1.01,P=0.371);提示miR-185可靶向抑制PYK2。台盼蓝拒染实验显示,OCI-Ly8细胞黏附培养状态下shCtrl(对照慢病毒)+Doxo(多柔比星)组与sh-miR-185(miR-185下调慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(39.43±3.94)%vs(26.93±6.25)%(t=2.93,P=0.043);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下shCtrl+Doxo组与sh-miR-185+Doxo组细胞死亡比例:(43.67±9.66)%vs(16.10±3.42)%(t=4.66,P=0.009)。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下Ctrl(对照慢病毒)+Doxo组与PYK2(PYK2过表达慢病毒)+Doxo组细胞死亡比例:(37.70±7.64)%vs(20.07±7.59)%(t=2.84,P=0.047);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下Ctrl+Doxo组与PYK2+Doxo组细胞死亡比例:(34.00±5.46)%vs(14.37±3.46)%(t=5.26,P=0.006)。细胞黏附介导的miR-185下调和PYK2表达增加,可促进CAM-DR。OCI-Ly8细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(25.03±3.30)%vs(39.37±5.06)%(t=4.11,P=0.015);OCI-Ly10细胞黏附培养状态下sh-miR-185+Doxo组与sh-miR-185+Doxo+PF-562271组细胞死亡比例:(27.50±6.52)%vs(47.53±9.43)%(t=3.03,P=0.039);PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR表型。结论DLBCL细胞与FN黏附培养可下调miR-185表达,并上调PYK2总蛋白及pPYK2(Tyr402)表达水平;在DLBCL中miR-185可靶向抑制PYK2,细胞黏附介导的miR-185下调可能通过诱导PYK2表达增加促进CAM-DR;PF-562271可抑制miR-185下调介导的CAM-DR。

沉默XIST通过靶向miR-185抑制人胶质瘤U87细胞增殖

目的探讨沉默长链非编码RNA XIST对人胶质瘤U87细胞增殖的影响及可能机制。方法 Lipo3000将XIST沉默质粒载体转染胶质瘤U87细胞后,Real-Time PCR检验转染效率;CCK-8法检测沉默XIST对U87细胞增殖的影响;Real-Time PCR检测转染XIST沉默载体后,U87细胞中miR-185的表达水平变化;双荧光素酶报告基因实验验证XIST与miR-185存在靶向结合;Lipo3000将miR-185过表达和沉默质粒载体分别转染U87细胞,Real-Time PCR检验转染效率;CCK-8法检测转转染miR-185后,U87细胞增殖能力的变化;Lipo3000将miR-185过表达和沉默质粒载体分别转染建立完成的XIST沉默U87细胞系,应用CCK-8法检测U87细胞的增殖水平变化。结果 XIST沉默显著降低了U87细胞的增殖能力,显著提高了miR-185在U87细胞中的表达水平。验证了XIST和miR-185存在着靶向结合。miR-185沉默显著提高了U87细胞增殖能力;显著阻断了沉默XIST下调U87细胞增殖能力的作用;miR-185过表达则作用相反。结论沉默XIST能够通过靶向miR-185,抑制胶质瘤U87细胞增殖。

miR-185/YWHAZ轴通过糖酵解调控NSCLC A549细胞凋亡

目的 探讨miR-185/YWHAZ轴通过糖酵解对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞凋亡的影响。方法 糖酵解抑制剂处理后,检测各组糖酵解酶、乳酸、NADH水平和细胞凋亡水平。过表达或敲低miR-185后,过表达或敲低YWHAZ后,均检测细胞乳酸、NADH和细胞凋亡水平。荧光素酶报告实验检测miR-185与YWHAZ mRNA的相互作用。结果 糖酵解抑制剂处理后,糖酵解酶、乳酸、NADH下降,细胞凋亡水平上升(P<0.05)。过表达miR-185时,细胞乳酸、NADH下降,YWHAZ mRNA和蛋白水平下降,细胞凋亡水平上升;敲低miR-185时上述变化逆转(P<0.05)。敲低YWHAZ时,细胞乳酸、NADH下降,细胞凋亡水平上升;过表达YWHAZ时上述变化逆转(P<0.05)。miR-185靶向YWHAZ mRNA的3′端非翻译区。结论 YWHAZ、miR-185分别是促进和抑制糖酵解的关键分子。miR-185靶向YWHAZ mRNA的3′端非翻译区,减少了YWHAZ表达,促进了NSCLC的细胞凋亡。

miR-185抑制VEGFA导致抑郁症大鼠海马神经元损伤

目的探索miR-185对抑郁症模型大鼠海马区神经细胞的影响.方法采用实施慢性不可预知的轻度压力(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模拟大鼠抑郁症模型.SD大鼠40只随机分为2组(n=20):对照组(Control)、模型组(Model).记录两组大鼠体重、检测大鼠糖水偏好及通过旷场实验对大鼠行为学进行评分.Western印迹检测海马组织血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、Bax、Bcl-2和Ki67的表达水平;qRT-PCR检测两组大鼠海马组织和原代海马神经元细胞的miR-185和VEGFA的mRNA水平.原代分离大鼠海马区神经细胞.荧光素酶报告实验验证miR-185与VEGFA靶向关系;细胞分为4组:健康组(Con-trol,从健康组大鼠分离)、模型组(Model,从模型组大鼠分离)、miR-185 inhibitor(从模型组大鼠分离,并转染miR-185 inhibitor)组和miR-185 mock组(从模型组大鼠分离,并转染miR-185 mock);分别检测各组细胞的细胞活力(CCK-8法)、细胞凋亡(流式细胞术)以及相关蛋白的表达水平.结果与对照组相比,模型组海马组织miR-185表达水平升高(P<0.01),而VEGFA表达水平下降(P<0.01);且除Bax增加外,VEGFA、BDNF、Bcl-2和Ki67的表达水平较对照组减少(P<0.01);与模型组相比,miR-185 inhib-itor抑制miR-185表达,增加VEGFA表达,miR-185 mimic有相反的效果.生物信息学预测和荧光素酶报告实验证明miR-185靶向结合到VEGFA 3′-未翻译区域(3′-UTR).与对照组相比,模型组和miR-185 mock组细胞活力下降,细胞凋亡率增加,且除Bax增加外,VEGFA、BDNF、Bcl-2和Ki67的表达水平较对照组减少(P<0.01);与模型组相比,miR-185 inhibitor增加细胞活力,降低凋亡率,减少Bax/Bcl2比率,增加VEGFA、BDNF和Ki67的表达水平.结论miR-185通过下调VEGFA导致抑郁症大鼠海马区神经细胞损伤.

PCA3调控miR-185对霍奇金淋巴瘤细胞L428增殖和凋亡的影响

目的探讨PCA3对霍奇金淋巴瘤细胞L428增殖和凋亡的影响及可能机制。方法收集39例霍奇金淋巴瘤患者淋巴瘤组织和正常瘤旁组织,RT-qPCR检测组织中PCA3和miR-185表达水平。体外培养淋巴瘤L428细胞,分为si-NC组、si-PCA3组、si-PCA3+NC组、si-PCA3+miR-185 inhibitor组,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,RT-qPCR法检测PCA3和miR-185表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证PCA3和miR-185的调控关系。结果淋巴瘤组织中PCA3的表达升高,miR-185的表达降低(P<0.05);转染si-PCA3可抑制细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。PCA3靶向负调控miR-185表达。共转染si-PCA3、miR-185 inhibitor可降低转染si-PCA3对细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用。结论干扰PCA3表达可靶向负调控miR-185抑制淋巴瘤细胞L428增殖,并促进L428细胞凋亡。

miR-185通过靶向调控MRTF-A抑制VEGF引起的HUVECs迁移和血管形成

目的:探究过表达miR-185是否会抑制血管内皮生长因子(VEGF)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移及血管形成。方法:在HUVECs中过表达miR-185并利用50 ng/mL的VEGF处理,划痕实验和transwell实验检测HUVECs的迁移情况;Matrigel血管形成实验检测其血管形成情况。结果:划痕实验和transwell实验表明过表达miR-185后,抑制了VEGF引起的HUVECs迁移,并降低迁移标志基因MYL9(MYL9)、CYR61(CYR61)的表达;Matrigel血管形成实验表明过表达miR-185抑制了VEGF引起的HUVECs血管形成。结论:过表达miR-185可以抑制VEGF引起的HUVECs迁移和血管形成。

miR-185对肝癌细胞生长增殖及侵袭迁移的影响

目的探讨miR-185对人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721生长增殖、侵袭迁移能力的影响。方法构建miR-185过表达载体、合成miR-185反义寡聚核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO),经脂质体转染肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721。利用CCK-8和Transwell小室实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力;生物信息学数据库预测结合基因芯片结果确定miR-185的候选靶基因NR1D1;利用实时荧光定量PCR技术和Western blot检测miR-185对细胞中NR1D1基因表达水平的影响;荧光报告载体实验验证miR-185对靶基因的调控作用。结果 miR-185在人肝癌细胞中的mRNA表达水平显著低于正常肝细胞(P<0.01);过表达miR-185使人肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力降低,下调肝癌细胞中NR1D1基因的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.01);荧光报告载体实验证明miR-185可以通过作用于NR1D1 mRNA的3'端非翻译区(untranslated region,UTR)下调其表达水平(P<0.05)。结论 miR-185能抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移能力,NR1D1是miR-185的直接靶基因。

miR-146a和miR-185对恶性胸腔积液的诊断价值

目的:探讨胸腔积液中miR-146a、miR-185的表达水平对临床上恶性胸腔积液的诊断价值。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测40例恶性胸腔积液和41例良性胸腔积液中miR-146a、miR-185的相对表达量,构建受试者工作特征(ROC)曲线并与癌胚抗原和细胞角蛋白19片段(CYFRA 21-1)进行比较,评估两种miRNA的诊断价值。结果:miR-146a、miR-185在恶性胸腔积液中的表达量均明显低于良性胸腔积液(P均<0.01)。ROC曲线显示,两种miRNAs的曲线下面积(AUC)均低于癌胚抗原,但高于CYFRA 21-1。miR-146a诊断的敏感性均高于癌胚抗原及CYFRA 21-1,miR-185的诊断敏感性高于CYFRA 21-1低于癌胚抗原,但两类miRNA诊断的特异性均低于癌胚抗原及CYFRA 21-1。两种miRNAs联合诊断的AUC明显低于单独诊断的AUC,敏感性亦较单独诊断的敏感性降低,而特异性高于miR-146a,但低于miR-1 85。联合癌胚抗原能进一步提高两类miRNA诊断恶性胸腔积液的AUC。但两种miRNAs共同联合癌胚抗原诊断恶性胸腔积液的AUC较任一种miRNA联合癌胚抗原无明显上升。两种miRNA的表达量与临床参数无明显相关性(P>0.05)。结论:miR446a、miR-185在恶性胸腔积液中的低表达使之有可能作为临床诊断恶性胸腔积液的标志物。

MiR-185-5p靶向调控REG1A表达对膀胱肿瘤发生和侵袭的影响

目的探讨REG1A基因和微小RNA miRNA-185-5p对膀胱癌细胞增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化的影响,并探讨其可能存在的分子调控机制。方法应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测膀胱癌细胞系中REG1A和miR-185-5p的mRNA表达水平,应用免疫组化技术检测24对膀胱癌临床样本中REG1A的蛋白表达水平。应用荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A的特异性结合,进一步应用细胞转染技术和qRT-PCR明确miR-185-5p和REG1A的调控关系。应用细胞转染技术分别研究miR-185-5p抑制物(inhibitor)和模拟物(mimic)对膀胱癌T24细胞功能的影响。利用小RNA干扰技术敲低REG1A后进行T24细胞功能回复实验。结果与正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1相比,T24、J82和UM-UC-3细胞系中REG1A显著高表达(P<0.05),miR-185-5p显著低表达(P<0.05);与癌旁组织相比,膀胱癌组织中REG1A蛋白显著高表达(P<0.05)。荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A存在特异性结合,qRT-PCR结果表明,细胞转染后miR-185-5p靶向调控REG1A在T24细胞的表达。miR-185-5p mimic和inhibitor能分别抑制和增强T24细胞的增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),差异有统计学意义(P<0.05)。REG1A-siRNA能减弱miR-185-5p inhibitor对T24细胞的增殖、侵袭、血管形成能力和EMT的促进作用。结论miR-185-5p靶向调控REG1A表达影响膀胱癌的增殖、侵袭、血管形成和EMT发生,miR-185-5p/REG1A调控通路是潜在的膀胱癌治疗靶点。