基于miR-378探讨丹红注射液干预压力超负荷心力衰竭大鼠心肌纤维化机制

目的探讨丹红注射液对压力超负荷心力衰竭大鼠心肌纤维化的作用与机制。方法取50只大鼠并对其行主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction,TAC),造模9周后将其随机分为模型(TAC)组、丹红注射液(DH)组(6.0 mL·kg-1)、卡托普利(Captopril)组(8.8 mg·kg-1),另设立10只为假手术(Sham)组。药物干预15 d后对各组大鼠进行超声心动图检测;酶联免疫法测定血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro brain natriuretic peptide,NT-pro BNP)含量;HE、Masson染色观察心肌病理学及纤维化改变,Western blot检测心肌组织中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen-1,COL-1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen-3,COL-3)及α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;qRT-PCR检测心肌组织中miR-378、TGF-β1 mRNA、Col-1 mRNA、Col-3 mRNA、ɑ-SMA mRNA表达。结果与Sham组比较,TAC组左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、心肌组织miR-378下降,左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic dimension,LVEDD)、左室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、血浆NT-pro BNP、TGF-β1、COL-1、COL-3及α-SMA mRNA及蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞排列紊乱,纤维化明显。与TAC组比较,DH组LVEF、LVFS、心肌组织miR-378上升,LVEDD、LVESD、血浆NT-pro BNP、TGF-β1、COL-1、COL-3及α-SMA mRNA及蛋白表达下降,差异均有统计学意义(P<0.01);细胞排列趋于整齐,胶原纤维沉积减轻。结论丹红注射液能够改善压力超负荷心力衰竭大鼠心肌纤维化,其机制与调控miR-378/TGFβ-1信号通路表达有关。

过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞复合胶原蛋白海绵支架对大鼠股骨缺损的修复作用

目的 探究过表达miR-378a修饰骨髓间充质干细胞(BMMSCs)复合胶原蛋白海绵(CS)支架修复大鼠股骨缺损的效果。方法 分离培养BMMSCs并采用流式细胞术鉴定细胞表型。使用过表达miR-378a的慢病毒及阴性空载慢病毒转染BMMSCs,将转染细胞分为3组:过表达miR-378a转染BMMSCs组(LV-miR-378a组)、阴性对照慢病毒转染BMMSCs组(LV-miR-NC组)、未转染BMMSCs组(对照组),并采用流式细胞术检测转染效率。制备转染细胞与CS支架的复合物,使用扫描电镜观察细胞与支架的相容性。建立SD大鼠股骨缺损回植模型,将15只SD大鼠随机分为3组(n=5):LV-miR-378a+CS组(植入过表达miR-378a慢病毒的BMMSCs复合CS支架)、LV-miR-NC+CS组(植入阴性空载慢病毒转染的BMMSCs复合CS支架)、CS组(只植入CS支架)。术后第8周,使用CO_(2)吸入法处死SD大鼠,取手术侧股骨样本进行大体观察、微型CT扫描重建,定量分析骨密度(BMD)及骨体积分数(BV/TV),并采用HE、Masson及骨桥蛋白(OPN)免疫组化染色观察骨修复情况。结果 流式细胞术检测BMMSCs细胞表型显示,细胞表面抗原CD44阳性表达率95.5%,CD29阳性表达率94.7%,而CD45阳性表达率0.8%,CD34阳性表达率0.7%。流式细胞术检测各组转染效率显示,与对照组比较,LV-miR-378a组和LV-miR-NC组转染效率明显增高(P<0.05),而LV-miR-378a组与LV-miR-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察显示,CS支架材料具有良好的三维空洞结构,两组细胞与CS支架共培养7 d后,LV-miR-378a组较LV-miR-NC组细胞在支架材料表面铺展区域更大,细胞呈团簇状生长,伸出的伪足更多。大体观察结果显示,术后8周,LV-miR-378a+CS组骨缺损区修复较为完全,LV-miR-NC+CS组及CS组骨缺损中心均可观察到未完全矿化的新生骨质,且CS组仍可见缺损区大致轮廓。微型CT三维重建及定量分析结果显示,术后8周,LV-miR-378a+CS组骨缺损区修复效果优于其余两组,新骨沉积量较多,BMD及BV/TV值均明显高于其余两组(P<0.05),而LVmiR-NC+CS组及CS组缺损区均未完全修复,且CS组新骨沉积量较少,密度不均一。HE、Masson染色结果显示,术后8周,LV-miR-378a+CS组支架材料完全降解,可见较多成熟骨小梁,新生骨与宿主骨交界区连续性较好,骨小梁彼此连接且形态规则;LV-miR-NC+CS组成熟骨小梁相对较少,新生骨与宿主骨交界区未完全相连;CS组支架材料未完全降解,处于改建重塑中的骨小梁仍较多且形态不规则。免疫组化染色结果显示,术后8周LV-miR-378a+CS组骨桥蛋白表达率明显低于其余两组(P<0.05),且LV-miR-NC+CS组骨桥蛋白表达率低于CS组(P<0.05)。结论 过表达miR-378a修饰BMMSCs复合CS支架可促进新骨形成。

lncRNA JPX靶向miR-378参与丹参酮ⅡA对结肠癌SW620细胞增殖、克隆、凋亡的影响

目的研究lncRNA JPX靶向miR-378参与丹参酮ⅡA对结肠癌SW620细胞增殖、克隆、凋亡的影响及机制。方法结肠癌SW620细胞分成对照组、丹参酮ⅡA组(丹参酮ⅡA处理)、vector组(转染阴性对照载体)、JPX组(转染pcDNA-JPX)、丹参酮ⅡA+vector组(转染阴性对照载体,然后给予丹参酮ⅡA处理)、丹参酮ⅡA+JPX组(转染pcDNA-JPX,然后给予丹参酮ⅡA处理)、丹参酮ⅡA+JPX+miR-NC组(共转染pcDNA-JPX、mimics control,然后给予丹参酮ⅡA处理)、丹参酮ⅡA+JPX+miR-378组(共转染pcDNA-JPX、miR-378 mimics,然后给予丹参酮ⅡA处理)、丹参酮ⅡA+Anti-NC组(转染inhibitor control,然后给予丹参酮ⅡA处理)、丹参酮ⅡA+Anti-miR-378组(转染miR-378 inhibitor,然后给予丹参酮ⅡA处理)。CCK-8检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡。荧光素酶报告系统检测定JPX和miR-378的靶向关系。结果与对照组比较,丹参酮ⅡA组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均降低,凋亡率升高(P<0.05)。与vector组比较,JPX组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均升高,凋亡率降低(P<0.05)。与丹参酮ⅡA+vector组比较,丹参酮ⅡA+JPX组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均升高,凋亡率降低(P<0.05)。与丹参酮ⅡA+Anti-NC组比较,丹参酮ⅡA+Anti-miR-378组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均升高,凋亡率降低(P<0.05)。与丹参酮ⅡA+JPX+miR-NC组比较,丹参酮ⅡA+JPX+miR-378组结肠癌SW620细胞存活率、克隆形成数目均降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。JPX靶向促进miR-378表达。结论丹参酮ⅡA通过下调JPX靶向miR-378诱导结肠癌SW620细胞凋亡。

miR-378-3p靶向调控EZH2表达对血管瘤内皮细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:研究miR-378-3p靶向调控果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)表达影响血管瘤内皮细胞侵袭和迁移能力的机制。方法:分离培养人血管瘤内皮细胞,分成空白对照组、miR-NC组(转染模拟物阴性对照)、miR-378-3p组(转染miR-378-3p模拟物)3组,或miR-378-3p+pcDNA3.1组(共转染pcDNA3.1、miR-378-3p模拟物)、miR-378-3p+pcDNA3.1-EZH2组(共转染pcDNA3.1-EZH2、miR-378-3p模拟物)2组,MTT法测定增殖活性,克隆形成实验检测克隆形成数,Transwell小室检测侵袭细胞数和迁移细胞数。生物信息学数据库预测miR-378-3p与EZH2有互补结合位点,双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果:miR-378-3p组与空白对照组、miR-NC组相比,细胞增殖活性、克隆形成数、侵袭细胞数和迁移细胞数降低(P<0.05)。miR-378-3p+pcDNA3.1-EZH2组与miR-378-3p+pcDNA3.1组比较,细胞增殖活性、克隆形成数、侵袭细胞数和迁移细胞数升高(P<0.05)。双荧光素酶报告系统鉴定结果证实miR-378-3p和EZH2存在靶向关系。结论:miR-378-3p靶向下调EZH2表达可抑制血管瘤内皮细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

不同猪种背最长肌中miR-27a和miR-378的差异表达研究

为了研究miRNA表达量与肉质风味表型指标的相关性,试验采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测了藏猪和大约克夏猪背最长肌中miR-27a、miR-378的差异表达。结果表明:藏猪在6月龄时背最长肌中miR-27a和miR-378的表达量均极显著低于大约克夏猪(P<0.01)。相关性分析显示,miR-27a、miR-378与肌内脂肪含量和硫胺素呈负相关,而与肌纤维直径、眼肌面积和瘦肉率呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01)。说明miR-27a和miR-378对猪肉品质具有重要的负调控作用。

miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤

目的探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究。方法离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率,蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达,荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3'非翻译区(UTR)的直接调控作用。结果 miR-378在N2A细胞内表达水平,随着3 h OGD复糖复氧时间的增加,而显著降低(P<0.05,n=5);在3 h OGD/24 h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中,上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(P<0.05,n=6);而在非OGD条件下,miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响;同样,在3 h OGD/24 h复糖复氧条件下,miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(P<0.05,n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平;共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因的表达(P<0.05,n=6)。结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平,来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤,所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点。

血清miR-210、miR-378、miR-499水平与AMI患者术后左心功能和MACE发生情况的关系

目的 研究血清微小核糖核酸(miR)-210、miR-378、miR-499水平与急性心肌梗死(AMI)患者术后左心功能和MACE发生情况的关系。方法 采取前瞻性研究,将2018年1月到2019年1月行PCI治疗的120例AMI患者作为研究对象,按照术后是否发生不良心血管事件(MACE)分为MACE组(n=29)和非MACE组(n=91),按是否发生左心室重构(LVR)分为LVR组(n=44)和非LVR组(n=76),比较MACE组与非MACE组、LVR组与非LVR组患者血清miR-210、miR-378、miR-499之间的差异,分析血清miR-210、miR-378、miR-499联合检测对MACE以及LVR的诊断效能。结果 MACE组术后miR-210、miR-378、miR-499水平均明显高于非MACE组(P<0.001)。LVR组的术后miR-210、miR-378、miR-499水平均明显高于非LVR组(P<0.001)。血清miR-210、miR-378、miR-499对MACE的诊断临界值分别为1.71、4.10、4.89,对LVR的诊断临界值分别为1.82、4.82、5.02。结论 联合检测血清miR-210、miR-378、miR-499水平对判断AMI患者术后左心功能和MACE发生具有指导意义,可为AMI的临床诊断以及预后评价提供科学依据。

miR-378对人胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响

目的:探讨miR-378对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:构建miR-378表达质粒并合成miR-378反义寡核苷酸,通过实时定量RT-PCR检测miR-378的表达,然后利用MTT、流式细胞仪、transwell检测抑制与过表达miR-378对增殖、凋亡、细胞周期、迁移及侵袭的影响。结果:过表达miR-378能够抑制胃癌细胞的增殖、促进细胞凋亡以及抑制细胞的迁移与侵袭,而抑制miR-378的表达则得到相反的结果,但对细胞周期影响不大。结论:miR-378能够影响人胃癌细胞株SGC-7901的生物学行为,在胃癌中起到了抑癌基因的作用。

猪miR-378种子序列的多态性对其功能以及胴体性状的影响

本研究旨在探索miR-378种子序列多态性对其结构、功能和猪胴体性状的影响。利用荣昌猪和亚洲野猪的单核苷酸多态性(SNP)进行群体遗传选择分析,预测miR-378种子序列的多态性对其结构的改变,统计不同猪种中等位基因频率;采用microRNA类似物验证种子序列多态性对miR-378在脂肪细胞中功能以及相关基因表达的影响;运用猪屠宰测定数据与miR-378基因型进行关联分析。结果发现,荣昌猪miR-378位点具有极强的受选择信号,miR-378-3p种子序列第5位出现了A>G的突变,在不同猪种中该位点等位基因频率不同,其中人工选择越强的猪种A等位基因频率越高;该突变会抑制miR-378在脂肪细胞中促进脂质生成的功能,同时会消除miR-378对脂肪分化相关基因(PGC-1α和PGC-1β)以及脂肪分解代谢相关基因(HSL、ATGL和CGI-58)的调控作用;而且该位点的基因型与猪胴体性状显著相关,GG型的背膘厚显著高于AG型和AA型,AA型眼肌面积显著高于GG型。本研究发现的miR-378种子序列这个多态性位点可作为猪生长、胴体性状辅助选择的分子标记应用于猪的育种实践中。

牦牛miR-378前体克隆及组织表达分析

旨在克隆牦牛miR-378的前体序列,阐明其组织表达规律,结合bta-miR-378靶基因的生物信息学预测和分析,探讨miR-378在牦牛生长发育过程中的调控功能。采用PCR方法成功克隆类乌齐牦牛miR-378前体序列,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-378-3p在各组织中的表达模式,结合生物信息学软件TargetScan、DAVID以及数据库NCBI、miRbase等对miR-378进行保守性分析、靶基因预测及其生物学功能分析。结果表明,miR-378在各物种间高度保守,且miR-378-3p在各组织中广泛表达,其中在臀大肌中表达水平最高,显著高于其他组织(P<0.01),在臀脂中的表达高于卵巢、大脑、乳腺和肝脏。获得的272个靶基因主要参与细胞分化、细胞发育、大分子代谢等多个生物学过程,涉及孕酮介导的卵母细胞成熟、促性腺激素释放激素(GnRH)信号通路等,由此推测,miR-378可能在卵泡发育、卵母细胞成熟过程中起关键作用,进而影响母牦牛的繁殖性能。

MiR-378对肝癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制

目的:探讨miR-378对肝癌细胞侵袭迁移的影响并阐明其作用机制。方法:用脂质体介导的转染方法将miR-378模拟物(miR-378 mimics)转染肝癌细胞株hepG2及hepG2.2.15,采用Transwell实验及划痕实验检测细胞侵袭迁移能力。构建过表达IGF1R的质粒载体,与miR-378mimics共转染肝癌细胞株hepG2及hepG2.2.15,观察miR-378是否通过IGF1R对肝癌细胞侵袭迁移进行调节。结果:与对照组比较,miR-378 mimics组肝癌细胞侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.01)。共转染IGF1R及miR-378 mimics后,与转染miR-378 mimics相比,肝癌细胞侵袭和迁移能力均显著增强(P<0.01),表明过表达IGF1R消除了miR-378诱导的肝癌细胞侵袭和迁移的抑制。结论:MiR-378抑制肝癌细胞侵袭迁移,其作用是通过抑制其下游靶基因IGF1R发挥的。

慢性乙肝患者血清25-羟维生素D3及miR-378水平与病毒载量的相关性研究

目的探讨慢性乙肝患者血清25-(OH)D3及miR-378水平与HBV病毒载量的关系。方法收集74例慢性乙肝患者,按照HBVDNA高低分为2组,运用化学发光法测量25-(OH)D3,采用qRT-PCR法测定miR-378和HBV DNA水平。采用回归法分析miR-378表达量、25-(OH)D3水平与HBVDNA含量之间的关系。结果CHB患者血清HBVDNA含量与血清25-(OH)D3水平呈显著负相关(r=-0.32,P<0.001),与miRNA-378表达量呈负相关(r=-0.24,P=0.002);血清miR-378表达量与25-(OH)D3水平呈现正相关(r=0.18,P=0.021)。患者年龄和性别标准化调整后,HBVDNA含量与25-(OH)D3水平负相关(B1=-0.198,P=0.008),与miR-378表达量负相关(B2=-0.177,P=0.020)。结论CHB患者血清25-(OH)D3以及miRNA-378均能够抑制机体内HBV复制,但是血清25-(OH)D3不直接通过miRNA-378来调控HBVDNA复制水平。

miR-378初始体rs1076064多态性与中国汉族人群乳腺癌的关联研究

目的探讨miR-378初始体rs1076064多态性与中国汉族女性乳腺癌发病的关联。方法运用二代测序技术分析miR-378初始体rs1076064多态性在乳腺癌(n=133)和健康对照人群(n=216)中的分布频率;运用SPSS25.0统计软件包处理数据。结果在共显性、显性和隐性遗传模型中,rs1076064多态性与乳腺癌发病无相关性(TC与TT相比,OR=1.15,95%CI:0.67-1.95;CC与TT相比,OR=1.35,95%CI:0.73-2.52;TC/CC与TT相比,OR=1.21,95%CI:0.73-2.00;CC与TT/TC相比,OR=1.24,95%CI:0.74-2.05)。亦未发现rs1076064多态性与乳腺癌肿瘤大小和淋巴结转移等临床特征之间存在相关性。结论miR-378初始体rs1076064可能不是中国汉族人群乳腺癌发病的易感位点。

序列变异对miR-378生物发生以及靶标关系的影响

本研究旨在探索序列变异对miR-378的结构、表达水平以及靶标关系的影响。利用PCR测序比对不同猪种miR-378的序列突变,预测突变对miR-378二级结构和自由能的改变;构建miR-378表达载体检测突变对其加工过程中各级产物表达水平的作用;运用TargetScan和TargetRank对突变引起的靶标关系变化进行分析;采用microRNA pull-down技术验证突变对靶标关系的影响。结果发现,在荣昌猪和内江猪群体内pre-miR-378的+49和+68位均发生A>G的序列变异,且改变了pre-miR-378的二级结构和自由能;这两个位点突变后影响了pri-miR-378到pre-miR-378的加工过程,提升了pre-miR-378和成熟体miR-378的表达水平;同时+49/A>G的突变改变了miR-378的功能及其靶标关系,其中GDF6和RAB10分别为突变后获得和缺失的靶基因,而Runx1t1、Galnt3为不受突变影响的靶基因。本研究的结果强调了miRNAs序列变异的重要性及其对miRNAs生物发生和功能的显著影响。

慢性髓系白血病miR-378甲基化研究

目的:探讨miR-378基因启动子在慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的甲基化状态,并分析其临床意义。方法:运用实时定量甲基化特异性PCR(real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)分别检测25例健康供髓者及53例CML患者骨髓单个核细胞中miR-378基因启动子未甲基化水平。结果:17/53例(32.1%)CML患者miR-378基因低甲基化,与对照组仅1/25例(4.0%)相比,两组差异有显著统计学意义(P<0.01)。CML慢性期、加速期、急变期患者miR-378未甲基化频率分别为14/40例(35.0%)、2/5例(40.0%)、1/8例(12.5%),但CML患者不同分期以及核型分组之间的miR-378基因未甲基化水平并无明显差异。未甲基化阳性与阴性组患者的年龄、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量以及BCR/AABL1融合基因转录水平无显著差异(P>0.05)。结论:miR-378基因低甲基化是CML中常见的分子事件,并且主要见于CML慢性期和加速期患者。

卒中后抑郁患者外周血miR-23a和miR-378表达对其诊断价值

目的 探讨卒中后抑郁(PSD)患者外周血清miR-23a和miR-378表达对其诊断价值。方法 选取128例脑卒中患者,依据是否发生抑郁分为PSD组(48例)和非PSD组(80例),进行美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评定。采用RT-qPCR方法检测两组患者血清miR-23a和miR-378表达水平,多因素Logistic回归分析PSD发生独立危险因素,通过受试者工作特征(ROC)分析其对PSD的诊断价值。结果 PSD组NIHSS评分高于非PSD组(P<0.05)。PSD组血清中miR-23a和miR-378的相对表达量均高于非PSD组(P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示NIHSS评分增高、miR-23a和miR-378升高是影响卒中患者发生抑郁的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,PSD患者血清中miR-23a的曲线下面积为0.907(P<0.01),最佳诊断为1.81,特异性为0.938,敏感性为0.725。PSD患者血清中miR-378的曲线下面积为0.835(P<0.01),最佳诊断为1.51,特异性为0.896,敏感性为0.600。结论 卒中患者血清中miR-23a及miR-378表达升高是PSD发生的独立危险因素,卒中后早期检测miR-23a及miR-378有助于预测PSD的发病情况。

miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响

目的研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响。方法我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞。然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达。用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证。结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)%,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)%、(2.78±1.04)%,P<0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高。用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达。结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达。

miR-378促进脂质生成相关靶基因鉴定

旨为验证miR-378在脂肪细胞中的功能,及其脂质相关靶基因的筛选和鉴定。利用miR-378类似物转染3T3-L1细胞,验证miR-378在脂肪细胞中的功能;根据靶标位点的保守性以及促脂功能确定miR-378潜在靶基因;采用microRNA pulldown技术验证miR-378与靶基因的靶标关系;运用双荧光素报告基因实验确定miR-378与靶基因的结合位点。结果发现,miR-378可以通过增加脂质合成和减少脂质分解两条途经来促进脂肪细胞中脂质生成,确定了miR-378与Runx1t1、Galnt3、和RAB10的靶标关系以及结合的靶位点。

肾细胞癌患者癌组织和血清微囊泡miR-378表达水平的临床应用价值研究

目的 检测肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)患者癌组织和血清微囊泡(extracellular vesicles, EVs)中微小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miR)-378表达变化,评估其对于RCC辅助诊断价值。方法 收集2014年1月~2018年12月东部战区总医院泌尿外科初收的RCC患者癌组织和癌旁组织40对;同时,收集RCC患者及年龄、性别匹配的健康对照血清标本各60例。运用实时荧光定量聚合酶链反应技术(real-time quantitative polymerase chain reaction, qRTPCR)检测组织、血清EVs中miR-378表达水平变化,评估RCC癌组织和患者血清EVs中miR-378表达水平测定对于患者辅助诊断价值,进一步通过生物信息学分析miR-378参与RCC的生理病理功能。结果 qRT-PCR结果显示,与癌旁正常组织[0.134 (0.054,0.546)]相比,miR-378在RCC组织中[0.050 (0.016,0.137)]表达显著降低,差异有统计学意义(Z=-3.481, P=0.003);同时,RCC患者血清EVs中miR-378水平[8.295 (4.930, 15.60)]与健康对照[3.501(2.005, 6.853)]相比显著升高,差异具有统计学意义(U=850,P <0.001)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析结果显示,组织中miR-378相对含量对于RCC患者诊断的ROC曲线下面积(AUC)为0.665(95%CI:0.544~0.786);血清EVs中miR-378水平对于RCC诊断的AUC为0.764(95%CI:0.680~0.848)。生物信息学分析miR-378功能结果显示:miR-378主要涉及的生物过程有分解代谢、细胞骨架蛋白调节和蛋白激酶活力调节。结论 RCC癌组织和血清EVs中miR-378表达测定对于RCC患者具有一定的辅助诊断价值,其中血清EVs miR-378测定更具优势;miR-378可通过调控多种生物学过程及功能参与RCC发生发展。

miR-378与非小细胞肺癌预后的相关性研究

目的分析miR-378与非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理特征和预后的关系。方法共有120名接受肺叶切除术的NSCLC患者入选。收集临床资料和miR-378表达量,采用单变量和多变量COX回归分析,分析miR-378表达与NSCLC临床预后之间的关系。结果 120例NSCLC中,72例高表达miR-378,48例低表达。年龄、性别、肿瘤大小、病理类型和分化程度在低表达组与高表达组间差异无统计学意义(P>0. 05)。miR-378的表达与淋巴结和TNM分期相关(χ~2=6. 899 8,P=0. 001;χ~2=10. 551,P=0. 005)。多变量cox回归结果表明,miR-378高表达是NSCLC患者独立的预后因子(无病生存期和总生存期)(HR=1. 69,95%CI:1. 17-2. 45,P=0. 005; HR=2. 38,95%CI1. 67-3. 91,P <0. 001)。结论miR-378与NSCLC的TNM分期和淋巴结转移密切相关,是NSCLC患者预后的独立危险因素。