内皮微粒包裹的miR-204-3p介导川崎病血管炎性损伤的机制探讨

目的 探讨内皮微粒(EMP)包裹的miR-204-3p介导川崎病(KD)血管炎性损伤的作用机制。方法 2016年4月至2021年3月,58例KD患者和50例对照组入选本研究。其中,18例KD患者伴有冠状动脉瘤(CAA),其余为无冠状动脉瘤(NCAA)。分离各组血清样品中EMP,并进行全基因组miRNA测序。在体外试验中,将VSMC或预转染miR-204-3p模拟物(AgomiR-204-3p)、miR-204-3p抑制剂(AntagomiR-204-3p)的VSMC与各组EMP共培养。结果 通过全基因组miRNA测序以及RT-qPCR分析证实miR-204-3p在KD EMP中显著增加,并且EMP中miR-204-3p水平根据冠状动脉病理严重程度显著降低,顺序为NCAA>SCAA>MCAA>GCAA。与对照组EMP共培养相比,VSMC与NCAA EMP共培养48 h后增殖率显著降低(P<0.05),VSMC分化标志物(ACTA2和CNN1)表达显著增加(P<0.05),去分化标志物(OPN和PDGFRβ)表达显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测证实,EMP中miR-204-3p在功能上靶向VSMC中的PDGFRβ。在与NCAA EMP孵育的VSMC中,使用AntagomiR-204-3p可显著降低分化标记物(ACTA2和CNN1)的表达,并增加去分化标记物(OPN和PDGFRβ)的表达。在与CAA EMP孵育的VSMC中,给予AgomiR-204-3p显著增加分化标记物的表达,并降低去分化标记物的表达。结论 EMP将miR-204-3p转移到VSMC并通过靶向PDGFRβ部分介导KD血管炎性损伤。因此,靶向miR-204-3p-PDGFRβ轴可能为KD诱导的血管病变提供新的治疗选择。

蒙药壮西-4调控miR-204对骨质疏松大鼠成骨细胞增殖的影响及机制

目的 探讨蒙药壮西-4调控miR-204对骨质疏松大鼠成骨细胞增殖的影响及机制。方法 将60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、低、中和高剂量组各10只。建模各组给予维A酸溶液灌胃建立骨质疏松模型,连续14 d。阳性对照组给予戊酸雌二醇灌胃,低、中、高剂量组分别给予不同剂量(50、100、200 mg/kg)蒙药壮西-4灌胃,空白对照组和模型对照组给予同体积的生理盐水灌胃,连续42 d。采用骨密度(BMD)仪测定大鼠第4腰椎及右股骨的BMD值,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)血清miR-204表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清骨桥蛋白(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)含量。取MC3T3-E1细胞,分为对照组、促进组、抑制组和药物组,分别加入生理盐水、miR-204模拟物、miR-204抑制剂和蒙药壮西-4。采用RT-PCR法检测miR-204表达量,Western印迹检测RANKL、OPG蛋白表达量,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,计算细胞存活率。结果 各组第4腰椎和右股骨BMD值、血清miR-204表达量、血清OPG含量差异有统计学意义(均P<0.05);空白对照组明显高于建模各组,模型对照组明显低于低、中、高剂量组、阳性对照组,阳性对照组和中剂量组明显高于低、高剂量组(均P<0.05)。各组血清RANKL含量差异有统计学意义(均P<0.05),空白对照组明显低于建模各组(均P<0.05),模型对照组明显高于低、中、高剂量组和阳性对照组(均P<0.05),阳性对照组和中剂量组明显低于低、高剂量组(均P<0.05)。各组miR-204表达量、OPG蛋白表达量、细胞存活率差异有统计学意义(均P<0.05),促进组和药物组明显高于对照组和抑制组,抑制组明显低于对照组(均P<0.05)。各组RANKL蛋白表达量差异具有统计学意义(均P<0.05),促进组和药物组明显低于对照组和抑制组,抑制组明显高于对照组(均P<0.05)。结论 蒙药壮西-4能增加骨质疏松大鼠BMD,其可能机制为通过上调miR-204表达促进大鼠成骨细胞增殖。

miR-204-5p通过靶向负性调控RAB22A促进膀胱癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨MiR-204-5p靶向RAB22A对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法TCGA数据库进行了miR-204-5p的生存分析和临床病理性状的相关性分析;检测膀胱癌组织和癌旁组织以及正常尿路上皮细胞和膀胱癌细胞中miR-204-5p的表达水平;过表达/敲低miR-204-5p后检测细胞增殖、迁移和侵袭、和凋亡等变化;转录组测序,数据库分析和多种实验证实miR-204-5p靶向抑制RAB22A基因调控膀胱癌细胞的生物学行为。结果TCGA数据库中MiR-204-5p高表达患者的中位生存期较低,表现出较差的预后(P<0.05);miR-204-5p在膀胱癌组织和细胞表达明显上调(P<0.05);过表达miR-204-5p可促进细胞增殖(P<0.05)、迁移和侵袭(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),敲低后则相反;转录组测序,数据库分析和双荧光素酶实验提示RAB22A是miR-204-5p下游关键因子,qRT-PCR,Western blotting证实过表达miR-204-5p可抑制RAB22A的表达(P<0.05);过表达RAB22A可部分逆转miR-204-5p对膀胱癌细胞生长的促进作用(P<0.05)。结论miR-204-5p通过靶向负性调控RAB22A促进膀胱癌细胞的恶性生物学行为。

Has-miR-204-5p介导椎间盘退变和相关疼痛症状的发生:来自孟德尔随机化和生物信息学的证据

目的:挖掘椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)及其相关疼痛症状的新MicroRNA生物标志物并探索相关分子机制。方法:从已发表的文献和全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)Catlog数据库中获取MicroRNA、背部疼痛和坐骨神经痛的GWAS数据,从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载IDD相关的MicroRNA和mRNA表达数据。利用孟德尔随机化和生物信息学分析挖掘关键MicroRNA,并基于GeneMANIA数据库探索其靶基因的生物学功能。结果:孟德尔随机化分析结果表明,has-miR-204-5p与背部疼痛(GCST90018797,OR=0.9761)和坐骨神经痛(GCST90044614,OR=0.8957)均具有明显的因果效应。同时,生物信息学分析结果显示,has-miR-204-5p在IDD组织中明显低表达,其3个靶基因Ⅲ型胶原蛋白α1链(collagen typeⅢalpha 1 chain,COL3A1),核糖体蛋白侧柄亚基P1(ribosomal protein lateral stalk subunit P1,RPLP1)和转录因子4(transcription factor 4,TCF4)在IDD组织中异常高表达。此外,生物学功能富集分析揭示,3个靶基因主要富集在胶原蛋白、核糖体和Wnt信号通路等与IDD密切相关的生物学功能上。结论:HasmiR-204-5p是一种可靠的IDD生物标志物,在IDD及其相关疼痛症状中发挥重要作用。

hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。其中,MAPT下降趋势最明显。结论:hsamiR-204-5p可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。

miR-204和SIRT1在结直肠癌中的表达情况及临床意义

目的探讨miR-204和沉默信息调节因子1(silence information regulator 1,SIRT1)在结直肠癌组织中的表达情况及其临床价值。方法收集2018年5月至2020年6月嘉兴大学附属医院胃肠外科诊治的60例结直肠癌患者的癌组织标本和癌旁组织标本为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-204及SIRT1的基因表达情况,Pearson分析比较miR-204与SIRT1基因的表达相关性。采用免疫组织化学SABC法检测SIRT1蛋白表达,并比较不同SIRT1蛋白表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析不同SIRT1蛋白表达的结直肠癌患者的生存差异。结果癌组织中miR-204基因mRNA表达显著低于癌旁组织(P<0.05),SIRT1基因mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织中SIRT1蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson相关分析显示miR-204与SIRT1基因mRNA在癌旁组织和癌组织中的表达均呈负相关(r=–0.647、–0.737,P<0.05)。SIRT1蛋白的表达与结直肠癌的分化水平、浸润层次、淋巴结转移与否及TNM分期相关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤部位无关(P>0.05)。Kaplan-Meier分析显示癌组织中SIRT1阳性表达患者的生存率显著低于SIRT1阴性表达患者(χ^(2)=5.001,P=0.025)。结论结直肠癌组织中miR-204表达下调,SIRT1表达上调,二者可能通过相互影响共同促进结直肠癌的转移、侵袭,并影响患者预后。

miR-204启动子甲基化作为结直肠癌表观遗传生物标志物的临床研究

目的 探讨miR-204启动子甲基化在结直肠癌(CRC)中的临床意义。方法 收集2018年1月至2020年3月于我院就诊的69例CRC患者血浆样本、肿瘤组织标本和癌旁正常结肠黏膜组织标本;另外招募68例健康志愿者作为正常对照组,采集血浆样本。使用肿瘤基因图谱计划(TCGA)数据库与基因芯片数据(Methyl450K)分析肿瘤和正常组织中识别的CpG位点的甲基化水平。采用定量甲基化特异性PCR法(qMSP)和实时荧光定量PCR法(qPCR)检测样本中miR-204启动子区甲基化状态和基因表达量。结果 TCGA数据表明miR-204表达与宿主基因TRPM3的表达协调下调,并确定了miR-204启动子周围的两个CpG岛。与癌旁组织比较,CRC组织中miR-204启动子甲基化参考百分比(PMR)升高[1.78(0.35,16.61)vs. 1.51(0.45,2.98),P<0.001],且与miR-204表达量呈负相关(r=-0.324,P=0.007),与DNA甲基转移酶1 mRNA呈正相关(r=0.502,P<0.001)。此外,与正常对照组比较,CRC患者血浆cfDNA中miR-204启动子PMR显著升高[6.57(0.76,12.45)vs. 1.60(0.59,3.4),P=0.015],并且与CRC组织miR-204启动子PMR呈正相关(r=0.418,P<0.001)。血浆cfDNA中miR-204启动子PMR用于CRC的诊断的受试者工作特征曲线下面积为0.701(95%CI:0.610~0.791),灵敏度和特异度分别为56.5%和94.1%。此外,进一步依据临床分期、分化程度等进行分层分析,并未观察到miR-204启动子超甲基化与CRC患者主要临床特征的关系(P>0.05)。结论 miR-204启动子甲基化与CRC显著相关,并且血浆cfDNA中miR-204启动子甲基化状态或可作为CRC诊断和监测的潜在生物标记物。

miR-204在儿童神经母细胞瘤中的表达及其对癌细胞生长的影响

目的 分析miR-204在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及其对NB细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测42例NB患儿肿瘤组织及癌旁组织中miR-204的表达,分析miR-204与NB患儿病理指标的关系,同时采用Kaplan-Meier生存曲线评估其与总生存期(OS)的关系。培养人NB细胞(SH-SY5Y)并分为miR-204 mimics组、mimics-对照(mimics-NC)组和空白对照(BC)组,采用MTT法、流式细胞术及Transwell法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,采用Western blot法检测相关蛋白的表达。结果 NB患儿肿瘤组织中miR-204表达水平低于癌旁组织(P<0.05);miR-204高表达组和低表达组临床分期、骨转移、危险度及N-myc扩增比较差异有统计学意义,且miR-204低表达组OS短于高表达组(P<0.05)。与BC组和mimics-NC组相比,miR-204 mimics组SH-SY5Y细胞的增殖、迁移和侵袭能力及Bcl-2、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均降低,凋亡率及Bax蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论 miR-204在NB患儿中低表达,与NB的发生、发展及预后有关;上调miR-204可抑制NB细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

miR-204-5p靶向调控BCL2L2促进急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的研究

目的探讨miR-204-5p在急性肝衰竭大鼠肝组织中的表达情况及其促进肝细胞凋亡的的作用及潜在机制。方法根据随机数字表法将32只SD大鼠分为4组,即对照组(0h)、模型组(24、48、72h),每组8只。模型组腹腔注射D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导急性肝衰竭,对照组为腹腔内注射等量的0.9%氯化钠溶液。分别取对照组及模型组造模完成后24、48、72h大鼠静脉血及肝组织,ELISA检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)的水平,通过HE、TUNEL染色法行肝组织病理学检查和肝细胞凋亡观察。生物信息学工具预测miR-204-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。RT-PCR和Western blot法检测肝组织中miR-204-5p、BCL2L2的表达情况。结果与对照组比较,模型组随着造模时间的延长,ALT、AST、TBIL值逐渐升高,肝组织坏死程度、炎性细胞浸润逐渐加重,肝细胞凋亡指数逐渐升高。RT-PCR结果显示,随着造模时间的延长,miR-204-5p基因的相对表达水平逐渐升高,而BCL2L2基因的相对表达水平逐渐降低;Western blot法检测结果亦显示,BCL2L2蛋白表达水平逐渐降低(P均<0.05)。miR-204-5p和BCL2L2之间存在靶向关系,miR-204-5p能够靶向调控BCL2L2表达。结论miR-204-5p可能通过靶向调控BCL2L2促进肝细胞凋亡,进而促进急性肝衰竭疾病的发生、发展。

急性冠脉综合征患者血浆外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9的表达水平及临床意义

目的检验急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血浆外泌体富含核富集的转录物1(Nucleraenriched autosomal transcript,NEAT1),微小核糖核酸(microRNA,miR)-204和基质金属蛋白酶(metalloproteinase,MMP)-9的表达水平,并研究其对ACS的诊断价值,分析其与冠脉病变严重程度的相关性。方法选取2020年5月~2021年5月于首都医科大学附属北京世纪坛医院诊断为ACS的120例患者作为实验组,其中急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者72例,不稳定心绞痛(unstable angina,UA)患者48例;另选取行冠脉造影检查无明显狭窄的108例体检者作为Control组。提取所有研究对象的血浆外泌体,并采用透射电镜和Western blot鉴定该外泌体。应用试剂盒提取血浆外泌体总RNA,采用qRT-PCR法检测外泌体NEAT1和miR-204的表达水平,采用Western blot检测外泌体MMP-9蛋白表达水平。应用Pearson相关分析明确外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9水平与病变严重程度评分(Gensini评分)之间的相关性。Logistic回归模型判断外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9是否可作为诊断ACS的独立危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(AUC)分析三者表达水平对ACS病变严重程度的预测价值。结果透射电镜观察到,血浆外泌体呈椭圆形双层膜囊泡结构,Western blot结果显示,CD63和CD81蛋白在外泌体中呈高表达。Control组NEAT1,miR-204和MMP-9表达水平分别为0.62±0.08,1.02±0.20和0.97±0.15,UA组患者NEAT1,miR-204表达水平分别为0.65±0.11,1.05±0.18,与Control组比较差异无统计学意义(t=2.790,3.225,P>0.05),而MMP-9表达水平(1.15±0.20)较Control组明显升高,差异有统计学意义(t=13.682,P<0.05);AMI组患者血浆外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9表达水平分别为0.98±0.15,1.22±0.23和1.37±0.25,较Control组明显升高,差异均有统计学意义(t=12.112,9.885,21.530,均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,AMI患者外泌体NEAT1,MMP-9与Gensini评分呈中度正相关,miR-204与Gensini评分呈弱正相关,差异有统计学意义(r=0.179~0.548,均P<0.05)。UA患者外泌体NEAT1与Gensini评分呈弱正相关(r=0.207,P=0.032),MMP-9与Gensini评分呈中度正相关(r=0.574,P<0.05),但miR-204与Gensini评分无相关性(r=0.108,P=0.465)。Logistic回归分析结果显示,外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9均可作为AMI预测的独立危险因素,但外泌体miR-204不可作为预测UA的独立危险因素。ROC结果显示,AMI组外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9水平及联合检测对应AUC分别为0.821,0.702,0.750和0.905,UA组外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9水平及联合检测对应AUC分别为0.776,0.682,0.718和0.883,三者对AMI的诊断价值均高于UA,且联合检测具有更高诊断价值。结论血浆外泌体NEAT1,miR-204和MMP-9具有预测冠状动脉病变严重程度的潜力,并且三者联合检测对AMI具有较高诊断价值,可作为辅助诊断AMI的潜在标志物。

子母补泻取穴法针刺联合推拿治疗急性腰椎小关节紊乱的疗效观察及对血清miR-204、miR-223-5p水平的影响

目的 观察子母补泻取穴法针刺联合推拿治疗急性腰椎小关节紊乱的临床疗效及对血清miR-204、mi R-223-5p水平的影响。方法 将92例急性腰椎小关节紊乱的患者按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组46例。对照组采用推拿手法治疗,治疗组在对照组治疗基础上采用子母补泻取穴法针刺治疗。观察两组治疗前后视觉模拟量表(visual analog scale, VAS)评分、Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index, ODI)评分、生活质量(quality of life, QOL)评分、血清炎症因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)及白细胞介素-8(interleukin-8, IL-8)]水平、血清mi R-204和mi R-223-5p表达水平变化,并比较两组临床疗效。结果 治疗组总有效率为87.0%,对照组为71.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后VAS评分、ODI评分、血清炎症因子水平较同组治疗前显著下降(P<0.05),且治疗组低于对照组(P<0.05);两组QOL评分较同组治疗前升高(P<0.05),且治疗组高于对照组(P<0.05);两组血清mi R-204水平较治疗前显著降低(P<0.05),且治疗组低于对照组(P<0.05);两组血清miR-233-5p水平较治疗前升高(P<0.05),且治疗组高于对照组(P<0.05)。结论 子母补泻取穴法针刺联合推拿治疗腰椎小关节紊乱,可显著减轻患者疼痛感,降低血清炎症指标,降低血清mi R-204表达水平,升高血清miR-233-5p表达水平,疗效显著。

miR-204通过靶向调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、侵袭的体外实验研究

目的:探讨miR-204对急性淋巴细胞白血病(ALL)CEM/C1细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与SOX4的靶向关系。方法:选取ALL细胞株CEM/C1,对CEM/C1细胞进行转染,分为NC组(无处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-204组(转染miR-204-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-SOX4组(转染si-SOX4)、miR-204+pcDNA组(转染miR-204-mimic+pcDNA)及miR-204+pcDNA-SOX4组(转染miR-204-mimic+pcDNA-SOX4)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-204表达水平,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞SOX4表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光素酶实验验证miR-204与SOX4的靶向关系。结果:转染细胞48 h和72 h时,miR-204组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、miR-NC组(P<0.05),凋亡率高于NC组、miR-NC组(P<0.05)。si-SOX4组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、si-NC组(P<0.05),凋亡率高于NC组、si-NC组(P<0.05)。miR-204+pcDNA-SOX4组细胞48 h、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量均明显高于miR-204+pcDNA组、miR-204组(P<0.05),凋亡率低于miR-204+pcDNA组、miR-204组(P<0.05)。与对照组相比,SOX4野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P<0.05),SOX4突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论:miR-204可负性调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、迁移和侵袭。

艾司氯胺酮调控miR-204-5p/CXCR4轴减轻机械通气诱导的大鼠肺损伤

目的:探讨艾司氯胺酮(Esket)调控miR-204-5p/趋化因子受体4(CXCR4)轴对机械通气诱导的大鼠肺损伤的影响。方法:将SD大鼠随机分为对照组(NC组)、模型组(model组)、低剂量Esket组(Esket-L组)、高剂量Esket组(Esket-H组)、antagomir阴性对照组(antagomir NC组)、miR-204-5p antagomir组、Esket-H+antagomir NC组、Esket-H+miR-204-5p antagomir组。除NC组外,其余各组大鼠机械通气4 h,在机械通气前3 d给予相应药物处理。比较各组肺组织湿重(W)/干重(D)比值、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,苏木精—伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理变化,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-204-5p表达,western blotting法检测Bax、Caspase-3、CXCR4蛋白表达。结果:与model组比较,Esket-L组、Esket-H组肺组织病理损伤减轻,肺损伤评分、W/D比值、细胞凋亡率、MDA、IL-6、TNF-α、Bax、Caspase-3、CXCR4表达水平降低,SOD活性和miR-204-5p表达量升高(均P<0.05)。与model组、antagomir NC组比较,miR-204-5p antagomir组肺组织病理损伤加重,肺损伤评分、W/D比值、细胞凋亡率、MDA、IL-6、TNF-α、Bax、Caspase-3、CXCR4表达水平升高,SOD活性和miR-204-5p表达降低(均P<0.05)。miR-204-5p antagomir减弱了Esket-H对机械通气诱导的大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-204-5p可靶向调控CXCR4表达(P<0.05)。结论:Esket可能通过上调miR-204-5p来抑制CXCR4表达,进而减轻机械通气诱导的大鼠肺损伤。

miR-204-5p靶向TRIB3对脂多糖诱导的肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨miR-204-5p对脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用LPS诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)建立细胞损伤模型,实验分组:NC组、LPS组、LPS+miR-con组、LPS+miR-204-5p组、LPS+si-con组、LPS+si-TRIB3组、LPS+miR-204-5p+pcDNA组、LPS+miR-204-5p+pcDNA-TRIB3组;MTT法检测细胞活力;qRT-PCR、Western blot检测miR-204-5p、TRIB3表达;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶实验检测miR-204-5p与TRIB3的靶向关系。结果与NC组比较,LPS组细胞活力、miR-204-5p表达量降低(1.00±0.10比0.43±0.04),细胞凋亡率、TRIB3 mRNA(1.00±0.09 vs 2.13±0.18)和蛋白(0.40±0.04 vs 0.83±0.08)水平、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);过表达miR-204-5p或敲低TRIB3可升高细胞活力,降低细胞凋亡率和TNF-α、IL-6水平(P<0.05);TRIB3是miR-204-5p的靶基因,上调TRIB3可减弱过表达miR-204-5p对细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响。结论miR-204-5p过表达可靶向负调控TRIB3表达促进细胞增殖,抑制细胞凋亡和炎症反应,从而减轻LPS诱导的肺微血管内皮细胞损伤。

干扰STX18-AS1通过靶向miR-204保护心肌细胞

目的探讨干扰长链非编码RNA STX18-AS1(long non-coding RNA,LncRNA STX18-AS1)是否通过上调微小RNA-204(miR-204)的表达从而影响心肌细胞缺氧损伤。方法体外培养心肌细胞H9C2,采用二氯化钴(CoCl_(2))处理心肌细胞建立细胞缺氧损伤模型,采用qRT-PCR检测CoCl_(2)处理不同时间点STX18-AS1、miR-204的表达量;实验设置对照组、模型组、si-NC组、si-STX18-AS1组、miR-NC组、miR-204组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖活性;流式细胞术与TUNEL检测细胞凋亡率;采用生化试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性;双荧光素酶报告实验验证STX18-AS1、miR-204的靶向关系。结果与对照组比较,在CoCl_(2)处理6 h、12 h、18 h、24 h时模型组和si-NC组STX18-AS1表达水平升高(P<0.01),miR-204表达水平降低(P<0.01);与模型组、si-NC组比较,在CoCl_(2)处理6 h、12 h、18 h、24 h时si-STX18-AS1组STX18-AS1的表达水平降低(P<0.01),miR-204的表达水平升高(P<0.01);与对照组比,模型组、si-NC组细胞增殖活性降低(P<0.01),细胞凋亡率及LDH活力、MDA的水平升高(P<0.01),SOD、CAT的活力降低(P<0.01);与模型组、si-NC组比较,si-STX18-AS1组细胞增殖活性升高(P<0.01),细胞凋亡率及LDH活力、MDA的水平降低(P<0.01),SOD、CAT的活力升高(P<0.01);转染miR-204mimics对心肌细胞增殖活性、凋亡及氧化应激的作用与转染si-STX18-AS1的作用相同;双荧光素酶报告实验证实STX18-AS1可靶向结合miR-204。结论干扰STX18-AS1表达可能通过上调miR-204,抑制细胞凋亡、促进增殖,减轻CoCl_(2)诱导的心肌细胞氧化损伤。

miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长

目的探讨微小RNA 204(miR-204)在肝细胞癌中的表达、临床意义及可能分子机制。方法收集手术切除的60例肝细胞癌及对应癌旁肝组织,实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-204在肝癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与组蛋白脱乙酰酶1(Sirt1)的表达;用人工合成的miR-204模拟物转染人SMMC-7721肝癌细胞,MTT法及流式细胞术检测SMMC-7721细胞的增殖、凋亡的情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2与Sirt1的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在肝癌组织中表达水平显著低于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-204低表达与肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤TNM分期显著相关;miR-204低表达组Bcl-2与Sirt1蛋白表达显著高于miR-204高表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-204与Bcl-2、Sirt1蛋白表达呈显著负相关;miR-204可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bcl-2与Sirt1的mRNA与蛋白表达水平。结论 miR-204在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-204抑制肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用可能与下调Bcl-2和Sirt1表达有关。

埃克替尼与安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效比较及对miR-185-5p、miR-204-5p表达水平影响观察

目的:比较埃克替尼与安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床疗效,及对微小核糖核酸(miR)-185-5p、miR-204-5p表达水平的影响。方法:60例晚期NSCLC患者分为观察组和对照组,每组30例。对照组患者给予埃克替尼治疗,观察组患者给予安罗替尼治疗,比较两组疗效、治疗前后血清miR-185-5p、miR-204-5p水平变化、生存情况以及药品不良反应差异。结果:观察组患者的肿瘤控制率,以及总生存期和无瘤生存期均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组患者的血清miR-185-5p、miR-204-5p水平均较前显著升高(P<0.05),且观察组血清miR-204-5p、miR-185-5p水平高于对照组(P<0.05)。两组患者的药品不良反应发生例数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:相比埃克替尼,安罗替尼治疗晚期NSCLC患者疗效更佳,可显著上调患者血清miR-185-5p、miR-204-5p水平。

miR-204-5p靶向溴结构域蛋白4对舌鳞状细胞癌细胞SCC25增殖和迁移侵袭的影响研究

目的探讨miR-204-5p对溴结构域蛋白(BRD)4的靶向作用机制以及对舌鳞状细胞癌SCC25细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测舌鳞状细胞癌组织以及不同细胞株系间的miR-204-5p和BRD4 mRNA的表达水平;miR-204-5p转染SCC25细胞后,细胞计数试剂盒(CCK)8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测miR-204-5p对SCC25迁移和侵袭的影响;使用TargetScan和荧光素酶实验分析并验证miR-204-5p与BRD4的靶向调控关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-204-5p模拟物和抑制剂对BRD4表达水平的影响;Transwell小室法和CCK8法检测miR-204-5p调控BRD4对SCC25增殖和迁移侵袭的影响。结果miR-204-5p在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达下调,BRD4在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达上调;提高miR-204-5p表达量抑制SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭;TargetScan和荧光素酶实验证实miR-204-5p与BRD4具有靶向负调控关系;miR-204-5p模拟物抑制BRD4表达,miR-204-5p抑制剂促进BRD4表达上调;当在SCC25细胞中同时过表达miR-204-5p和BRD4时,BRD4能够回补miR-204-5p对SCC25细胞的抑制作用。结论miR-204-5p能够通过靶向负调控BRD4抑制舌鳞状细胞癌SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭。

MiR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移

目的探讨miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1对乳腺癌侵袭和转移的影响。方法生物信息学数据库查询miR-204在乳腺癌患者中的表达情况和miR-204对乳腺癌患者生存率的影响;RT-qRCR检测miR-204在乳腺癌细胞系中的表达情况;利用GV369-miR-204过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中的miR-204;Transwell实验检测miR-204对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响;生物信息学方法确定miR-204的关键基因(Hub基因);双荧光素酶实验检测miR-204和HNRNPA2B1的靶向关系;Western blot实验检测过表达miR-204后HNRNPA2B1的表达情况;Transwell实验检测MDA-MB-231/miR-204+NC、MDA-MB-231/miR-204+HNRNPA2B1细胞的侵袭和迁移能力的变化。结果miR-204在乳腺癌组织中表达降低(P<0.05),低表达水平的miR-204与患者不良预后相关(P<0.05);miR-204在乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞系中表达量低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达(P<0.0001)。通过过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中miR-204的表达,结果显示上调miR-204可抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力(P<0.05);HNRNPA2B1为miR-204的Hub基因,starbase网站发现miR-204-5p和HNRNPA2B1表达呈负相关且HNRNPA2B1在乳腺癌患者中表达升高(P<0.05);生存分析证明高表达HNRNPA2B1的乳腺癌患者预后不良(P<0.05);双荧光素酶实验证明miR-204和HNRNPA2B1可靶向结合(P<0.05)。Western blot和Transwell实验证明,miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和迁移,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-204在乳腺癌组织和细胞中表达降低,且miR-204可通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移。

miR-204-5p、miR-1233-3p在妊娠期高血压疾病孕妇中的表达及临床意义

目的探讨miR-204-5p、miR-1233-3p在妊娠期高血压疾病(HDCP)中的诊断价值。方法选择2018年12月至2020年6月河北省沧州市中心医院(以下简称"我院")收治的197例HDCP患者为研究对象,其中妊娠期高血压102例为妊娠期高血压组,子痫前期95例为子痫前期组;另随机选择同期于我院产科门诊规律围产期保健并入院待产的82名正常足月单胎妊娠孕妇为对照组。检测受试者外周血清miR-204-5p、miR-1233-3p表达及白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。分析miR-204-5p、miR-1233-3p表达与HDCP患者临床参数及IL-6、TNF-α的相关性及miR-204-5p、miR-1233-3p对HDCP的诊断价值。结果子痫前期组、妊娠期高血压组血清miR-204-5p、miR-1233-3p表达及IL-6、TNF-α水平高于对照组(P<0.05);子痫前期组血清miR-204-5p、miR-1233-3p表达及IL-6、TNF-α水平高于妊娠期高血压组(P<0.05)。HDCP患者miR-204-5p、miR-1233-3p表达与分娩孕龄、新生儿体重呈负相关(r_(mi R-204-5p)=-0.403、-0.395,r_(mi R-1233-3p)=-0.321、-0.354,P<0.05);与收缩压、舒张压、24 h尿蛋白定量、IL-6、TNF-α呈正相关(r_(mi R-204-5p)=0.653、0.619、0.597、0.594、0.601,r_(mi R-1233-3p)=0.624、0.609、0.543、0.615、0.631,P<0.05)。miR-204-5p、miR-1233-3p联合诊断HDCP的曲线下面积值大于miR-204-5p、miR-1233-3p单独检测(P<0.05)。结论 miR-204-5p、miR-1233-3p高表达与分娩孕龄、新生儿体重、炎症因子均有关,对HDCP诊断具有较高应用价值。