猪miR-192靶向调控Wnt7a基因表达的研究

【目的】鉴定猪miR-192与Wnt家族成员7A(Wnt7a)基因之间的靶向关系,为进一步构建miR-192介导的胚胎通讯提供依据。【方法】使用miRNA pull-down鉴定miR-192和Wnt7a基因间的互作关系;利用生物信息学软件RNAhybrid 2.2预测miR-192和Wnt7a基因3′-UTR的结合位点,构建含有miR-192结合位点的Wnt7a基因3′-UTR野生型和突变型基因片段,克隆至双荧光素酶报告基因质粒,通过NotⅠ、XhoⅠ酶切和测序进行鉴定;鉴定成功的质粒分别与miR-192 mimics和mimics NC共转染猪子宫内膜上皮细胞,检测双荧光素酶活性;将miR-192 mimics、mimics NC、miR-192 inhibitor、inhibitor NC分别与构建的Wnt7a基因3′-UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因质粒共转染至猪子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测Wnt7a基因mRNA和蛋白的表达水平。【结果】pull-down结果显示,miR-192 mimics组与其阴性对照组相比,Wnt7a基因相对表达量极显著升高(P<0.01),miR-192 input组相对于其阴性对照组极显著降低(P<0.01);RNAhybrid 2.2软件预测到miR-192种子区与Wnt7a基因3′-UTR存在结合位点(UGACCUA);转染Wnt7a野生型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组相比双荧光素酶活性显著降低(P<0.05),转染Wnt7a突变型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组之间双荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。实时荧光定量PCR结果表明,miR-192 mimics组Wnt7a基因mRNA相对表达量显著低于其阴性对照组(P<0.05),miR-192 inhibitor组显著高于其阴性对照组(P<0.05)。Western blotting结果表明,过表达miR-192极显著抑制了Wnt7a蛋白的表达(P<0.01),抑制miR-192后Wnt7a蛋白的表达量极显著上升(P<0.01)。【结论】miR-192能够与Wnt7a基因3′-UTR发生靶向作用并抑制其表达。研究结果可为今后深入研究miR-192在妊娠着床过程中的调控机制提供理论依据。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

支气管哮喘患儿血清中miR-192-3p表达水平与气道炎症的相关性分析

目的分析血清miR-192-3p表达水平与支气管哮喘患儿气道炎症的相关性。方法回顾性选取2020年3月至2021年3月上海交通大学附属第六人民医院门诊儿科诊疗的82例支气管哮喘患儿,其中支气管哮喘发作期41例为发作期组;支气管哮喘缓解期41例为缓解期组;另选小儿40例作为对照组。测定并对比3组研究对象75%呼气中期流量(MEF75)、50%呼气中期流量(MEF50)、25%呼气中期流量(MEF25)、最大呼气中期流量(MMEF)指标及血清miR-192-3p水平、白细胞介素13(IL-13)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、趋化素样因子-1(CKLF-1)水平;分析血清miR-192-3p表达水平与支气管哮喘患儿肺功能指标及炎症因子水平的相关性;采用受试者工作特征曲线分析血清miR-192-3p表达水平对儿童支气管哮喘的诊断效能。结果缓解期组、发作期组患儿MEF75、MEF50、MEF25、MMEF均明显低于对照组,且发作期组患儿的MEF75、MEF50、MEF25、MMEF水平均明显低于缓解期组患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。缓解期组与发作期组患儿血清miR-192-3p相对表达量均明显低于对照组,且发作期组患儿血清miR-192-3p相对表达量低于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。缓解期组与发作期组患儿的IL-13、TGF-β1、VEGF、CKLF-1水平均高于对照组,且发作期组患儿的IL-13、TGF-β1、VEGF、CKLF-1水平均高于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。入组哮喘患儿血清miR-192-3p相对表达量与血清IL-13、TGF-β1、CKLF-1水平呈正相关(P<0.05),与血清VEGF、肺功能MEF75、MEF50、MEF25、MMEF水平呈负相关(P<0.05)。以0.758为临界值,血清miR-192-3p相对表达量诊断儿童支气管哮喘的曲线下面积为0.828,敏感度为87.69%,特异度为67.24%。结论血清miR-192-3p相对表达量在支气管哮喘患儿血清中明显降低,且与气道肺功能及炎症因子相关,对儿童支气管哮喘有较高的诊断效能。

miR-192-5p和miR-22-3p在痛风性关节炎患者中的表达水平及调节机制

目的:分析痛风性关节炎患者血清miR-192-5p和miR-22-3p的表达水平及调节机制。方法:将秦皇岛市第一医院2020年1月2021年12月收治65例痛风性关节炎患者和65例健康体检人员分别分为观察组和对照组,采用实时荧光定量PCR法检测患者血清miR-192-5p和miR-22-3p的表达水平及相对表达量,采用红细胞沉降压积仪检测红细胞沉降率(ESR),用全自动生化分析仪检测血尿酸(BUA)。结果:与对照组比较,观察组患者血清miR-192-5p和miR-22-3p相对表达量升高(均P<0.05),ESR和BUA升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10表达水平升高(均P<0.05),Th1细胞表达水平和Th1/Th2比值升高(均P<0.05),Th2细胞表达水平降低(P<0.05)。ROC曲线分析发现,血清miR-192-5p和miR-22-3p在痛风性关节炎中具有良好的诊断效能。结论:痛风性关节炎患者血清miR-192-5p和miR-22-3p异常升高,其可能机制与炎症反应和免疫反应相关。

miR-192进化分析、靶基因预测及组织表达分析

【目的】研究miR-192的生物进化进程和潜在靶基因功能,以及miR-192在大围子猪(脂肪型猪)和大约克夏猪(瘦肉型猪)脂肪组织中的差异表达。【方法】利用miBase数据库获取miR-192成熟序列,并利用Ensembl数据库定位miR-192在不同物种基因组的分布特征;采用Mega 11.0软件程序构建miR-192系统进化树;通过实时荧光定量PCR检测miR-192在大围子猪和大约克夏猪背部脂肪组织中的表达情况,并比较表达差异;利用不同在线网站预测猪miR-192靶基因,并对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】miR-192在生物进化过程中具有高度保守性;实时荧光定量PCR结果显示,miR-192在大围子猪背部脂肪组织的表达量极显著高于大约克夏猪(P<0.01);GO功能和KEGG通路富集分析结果表明,miR-192靶基因主要起转录前调节和结合的作用,且主要在染色质和细胞核中发挥作用,多数基因富集在与脂肪代谢相关的信号通路;对3个网站不同物种预测结果取交集共获得猪miR-192保守靶基因5个。【结论】miR-192在生物进化过程中具有高度保守性,可能通过靶向调节靶基因的表达,从而在猪脂肪组织分化中起作用,为进一步探讨miR-192在脂肪组织分化中的调控机制提供理论基础。

血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断价值

目的探讨血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断价值。方法纳入收治的早期鼻咽癌患者90例为研究组,鼻咽炎患者90例为炎症组、90例健康体检者为对照组。检测3组血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平。用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)的AUC分析血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p检测在早期鼻咽癌中的诊断意义。结果研究组、炎症组、对照组血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平具有显著差异(P<0.05)。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p单项检测研究组与炎症组的灵敏度为91%、89%、98%,特异度分别为90%、90%、94%。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p单项检测研究组与对照组的灵敏度为96%、94%、95%,特异度均为95%。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断灵敏度为94.44%,特异度为93.89%,准确度为94.07%。结论血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平检测可作为早期鼻咽癌的潜在标志。

原发性肾小球肾炎患者血浆miR-26a、miR-192表达水平及临床意义

目的:探讨原发性肾小球肾炎(PGN)患者血浆miR-26a、miR-192表达水平及临床意义。方法:选取2020年2月至2022年2月我院收治的98例PGN患者作为观察组,另选取同期来我院体检的45例健康人作为对照组。检测血浆miR-26a、miR-192水平;检测血清肌酐(Scr)、血尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)水平;分析探讨血浆miR-26a、miR-192与肾功能的相关性;评价血浆miR-26a、miR-192及两者联合诊断PGN的价值。结果:观察组PGN患者收缩压、舒张压高于对照组,ALB、Hb、肾小球滤过率低于对照组(P<0.05)。观察组PGN患者血浆miR-26a水平低于对照组,miR-192水平高于对照组(P<0.05)。对照组PGN患者血清Scr、UA、BUN水平均低于观察组(P<0.05)。相关分析显示,血浆miR-26a与血清Scr、UA、BUN均呈负相关(r=-0.342、-0.527、-0.498,均P<0.001);血浆miR-192与血清Scr、UA、BUN均呈正相关(r=0.612、0.509、0.541,均P<0.001)。ROC曲线分析显示,血浆miR-26a、miR-192诊断PGN的AUC(95%CI)分别为0.777(0.704~0.844)、0.856(0.806~0.906),截点值分别为1.63、6.17,特异度分别为51.11%、68.89%,敏感度92.86%、92.86%,二者联合诊断的AUC(95%CI)为0.901(0.851~0.951),特异度为86.67%,敏感度为86.73%。结论:PGN患者的血浆miR-26a水平降低、miR-192水平升高,二者与PGN患者的肾功能存在密切联系,有望作为诊断PGN的生物学指标。

原发性高血压患者血清miR-192表达水平与左室肥厚的关系

目的 探讨原发性高血压患者血清中miR-192表达与左心室肥厚的相关性。方法 收集2018年6月至2019年12月期间治疗的187例原发性高血压患者临床资料,行超声心动图检查获得LVPWd、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVEF和LVMI等指标,并根据超声心动图检查结果将患者分为肥厚组和对照组。实时荧光定量PCR检测血清中miR-192表达,ELISA法测定TGF-β1、Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)水平。结果 经超声心动图检查,187例原发性高血压患者中,76例出现左心室肥厚(肥厚组),111例未发现左心室肥厚(对照组);肥厚组患者LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI和hs-CRP均较对照组升高(P <0.05);肥厚组患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP和PⅠCP水平较对照组升高(P <0.05);Pearson相关分析结果显示,原发性高血压患者血清中miR-192水平与LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI、TGF-β1、PⅠCP和PⅢNP呈正相关(P <0.05);多元线性回归分析结果显示,LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP和PⅢNP是影响原发性高血压患者血清中miR-192水平的相关因素(P <0.05)。结论 血清miR-192水平在原发性高血压左心室肥厚患者中升高,且与左心室肥厚程度及心肌纤维化有关。

miR-192-5p在恶性肿瘤中作用机制的研究进展

恶性肿瘤是威胁人类健康的常见疾病,其治疗也是加重社会经济负担的主要因素之一。恶性肿瘤患者的死亡率高,预后极差。因此,如何提高恶性肿瘤患者的生存率、改善预后至关重要。miRNA是一类小的非编码RNA,通过参与基因表达的转录后调控,在肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和凋亡等过程中发挥重要作用。近年来,人们逐渐开始研究miR-192-5p在恶性肿瘤中的表达及作用,本文将对miR-192-5p在不同恶性肿瘤中作用机制的研究进展进行综述。

miR-192、Cys C、25(OH)D联合检测在糖尿病早期肾损害诊断中的价值

目的 探讨糖尿病早期肾损害(diabetes early kidney damage, DEKD)患者血清miR-192、胱抑素C(Cys C)、25羟维生素D[25(OH)D]联合检测的诊断价值。方法 选取132例糖尿病患者作为研究对象,按照尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)水平分组,分为DEKD组(n=74,UACR 30~300 mg·g^(-1))、糖尿病组(n=58,UACR<30 mg·g^(-1))。比较2组患者一般资料,比较2组患者血清miR-192、Cys C、25(OH)D水平,Pearson分析血清miR-192、Cys C、25(OH)D与血糖、肾功能指标的相关性,偏相关性分析miR-192、Cys C、25(OH)D水平与DEKD的关系;分析血清miR-192、Cys C、25(OH)D联合检测对糖尿病早期肾损伤的诊断价值;分析不同水平miR-192、Cys C、25(OH)D发生早期肾损害的危险度。结果 DEKD组FPG、FINS、BUN、UA、Scr低于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);DEKD组血清miR-192、25(OH)D水平低于糖尿病组,Cys C水平高于糖尿病组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-192、25(OH)D水平与血糖、肾功能指标呈负相关,血清Cys C与血糖、肾功能指标呈正相关(P<0.05);logistic分析发现,血清miR-192、Cys C、25(OH)D水平与DEKD显著相关(P<0.05);血清miR-192、Cys C、25(OH)D水平单独诊断DEKD的曲线下面积(AUC)分别为0.739、0.725、0.766,对以上各指标进行综合回归,得到联合诊断DEKD的AUC为0.908;血清miR-192、Cys C、25(OH)高水平患者发生早期肾损害的危险度是低水平的2.713、2.463、2.631倍(P<0.05)。结论 血清miR-192、Cys C、25(OH)D异常表达与DEKD发展有关,联合检测有助于提高DEKD诊断效能。

MiR-192靶向负调控Bim表达诱导肺癌顺铂耐药

背景与目的顺铂是非小细胞肺癌化疗的一线药物,但获得性耐药限制了其疗效的发挥。本研究的目的是筛选鉴定与肺癌顺铂耐药相关的microRNAs,探讨其与肺癌顺铂耐药的影响及分子机制。方法应用miRNA芯片及RT-PCR筛选鉴定A549与A549/DDP肺癌细胞间的差异表达miRNAs,将差异表达miR-192转染A549和A549/DDP细胞株,CCK-8检测miR-192对半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,生物软件预测及双荧光素酶报告基因法寻找miR-192的靶基因,RT-PCR及Western blot检测靶基因表达水平在转染前后的变化。结果 MiR-192在A549/DDP中显著高表达,表达量是A549细胞表达量的37.59±0.35倍。在低表达miR-192的A549细胞中过表达miR-192,细胞对顺铂的IC50显著增高,顺铂引起的细胞凋亡率显著降低;反之,在高表达miR-192的A549/DDP中抑制miR-192的表达,顺铂的IC50显著降低,顺铂引起的细胞凋亡率显著增加。miR-192可靶向作用促凋亡基因Bim的3’-UTR,并在转录后水平负向调控Bim的表达。结论 MiR-192通过靶向负调控促凋亡基因Bim表达,诱导肺腺癌细胞株A549产生顺铂耐药,并减少顺铂引起的细胞凋亡。

猪miR-192/-215的组织表达谱及其关键靶基因分析

【目的】在前期通过Illumina Solexa高通量测序技术并结合荧光定量验证筛选出断奶仔猪E.coliF18菌株感染下表达量极显著上调的micro RNAs—miR-192和miR-215的基础上,为了解miR-192和miR-215的组织表达情况,进一步筛选确定miR-192和miR-215靶向调控E.coli F18菌株感染的关键靶基因,为探讨miR-192和miR-215调控断奶仔猪E.coli F18感染的分子调控机制奠定基础。【方法】试验采用Real-time PCR方法检测miR-192和miR-215在35日龄梅山仔猪各个组织中的分布情况,同时利用MEGA 5.0分析了其保守性,Target Scan预测miR-192和miR-215的靶基因,并对靶基因分别进行Gene Ontology和Pathway通路的富集分析,进一步利用DAVID对靶基因蛋白进行功能分类,最后将预测的靶基因与课题组前期筛选出的断奶仔猪E.coli F18感染抗性相关的调控基因取交集。【结果】miR-192和miR-215在35日龄梅山仔猪十二指肠和空肠中均高度表达,二者成熟序列在脊椎动物中高度保守。miR-192和miR-215对应的靶基因相同,具有156个靶基因,只在轴突导向通路(axon guidance pathway)显著富集(P-value<0.05)以及25个GO功能中显著富集(P-value<0.05)。靶基因蛋白按功能分为12类,其中信号转导功能的磷蛋白(phosphoprotein)和DNA结合蛋白(dna-binding)占主要部分。靶基因与前期筛选的E.coli F18感染抗性相关的调控基因(GEO登录号:GSE26854)取交集,发现DLG5、ALCAM、FRMD4B、MIPOL1和ZFHX3等5个基因为miR-192和miR-215的重要靶基因,其中DLG5为维持小肠上皮细胞结构完整性的重要因子。【结论】miR-192与miR-215是参与维持断奶仔猪肠道正常功能与抗F18大肠杆菌感染的重要因子,DLG5可能是miR-192和miR-215靶向调控E.coli F18菌株感染中关键的靶基因,今后需要进一步验证其能否作为梅山猪抗F18大肠杆菌的有效遗传标记。

HBx基因下调miR-192对人肝癌细胞株HepG2周期的影响

目的探讨HBx基因通过调节miR-192的表达影响人肝癌细胞株HepG2周期进展的机制。方法流式细胞仪分析以下3组细胞的周期变化:HepG2/HBx细胞(HepG2细胞稳定转染HBx基因)、HepG2/pcDNA3.1细胞(HepG2细胞稳定转染空载体pcDNA3.1)以及HepG2细胞。3组细胞中miR-192的表达采用Taqman探针荧光定量PCR法检测。流式细胞术观察转染miR-192后HepG2细胞的周期分布变化,SYBR Green荧光定量PCR和Westernblot分别检测miR-192对HepG2细胞p53、CDKN1A mRNA和蛋白表达的影响。结果 3组细胞中,HepG2/HBx细胞G0/G1期细胞比例明显降低[(52.78±4.08)%vs(67.37±4.87)%,(65.08±5.15)%],S期和G2/M期比例明显升高[S期:(25.22±1.84)%vs(19.78±1.26)%,(18.84±1.68)%;G2/M期:(22.00±2.07)%vs(12.85±1.29)%,(16.08±1.44)%]。HepG2/HBx细胞miR-192表达显著下调[(49.1±5.9)%vs(98.0±8.9)%,(100.0±9.1)%]。转染miR-192引起HepG2细胞G0/G1期和G2/M期阻滞,同时p53、CDKN1A mRNA(p53:1.68±0.12 vs 0.90±0.06;CD-KN1A:2.36±0.12 vs 1.05±0.06)和蛋白(p53:3.07倍;CDKN1A:2.82倍)的表达水平亦显著上升。结论 miR-192通过促进p53和CDKN1A表达引起HepG2细胞周期阻滞,而HBx通过下调miR-192加速HepG2细胞周期进程。

糖尿病肾病患者尿液miR-192的表达及临床意义

目的探讨miR-192在糖尿病肾病(DN)患者尿液中的表达及其临床意义。方法选择140例2型糖尿病患者(T2DM)作为研究对象,按照24h尿清蛋白定量(24h-UAE)将其分为正常蛋白尿组(n=55)、微量蛋白尿组(n=48)、大量蛋白尿组(n=37)。另选择30例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测尿液miR-192的表达水平。分析其与患者各临床指标的相关性。结果正常蛋白尿组、微量蛋白尿组、大量蛋白尿组患者尿液miR-192表达相对值分别为(0.63±0.12,0.97±0.20和1.12±0.18),明显高于对照组(0.47±0.08);且表现为随DN的发展而逐渐增加的趋势(P<0.05)。相关性分析结果显示尿液miR-192水平与血肌酐、血尿素氮、24h尿蛋白和胱抑素C呈正相关(P<0.05);而与糖尿病病程、空腹血糖和糖化血红蛋白无明显相关性(P>0.05)。线性回归分析结果显示尿液miR-192水平与DN有相关性(OR=1.037、1.094,P<0.05),是T2DM患者发生DN的独立预测因子。结论 miR-192水平在DN患者尿液中表达显著升高,其水平反映DN患者肾功能损伤,并与肾功能损伤的程度相关。

异钩藤碱上调miR-192-5p对TNF-α诱导的人支气管上皮细胞凋亡和炎症因子释放的作用及其机制

目的:探讨异钩藤碱(IRN)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡和炎症因子释放的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用不同浓度[(0(对照组)、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0和40.0μmol·L^(-1)]IRN处理16HBE细胞24 h后,采用20 mg·L^(-1)TNF-α处理细胞18 h。将16HBE细胞分为对照组、TNF-α组(20 mg·L^(-1))、IRN组(20μmol·L^(-1))、TNF-α+IRN组(20 mg·L^(-1)TNF-α和20μmol·L^(-1)IRN)、TNF-α+IRN+miR-192-5p inhibitor组(20 mg·L^(-1)TNF-α、20μmol·L^(-1)IRN和50 nmol·L^(-1)miR-192-5p inhibitor)以及TNF-α+IRN+pcDNA3.1 CXCR5组[20 mg·L^(-1)TNF-α、20μmol·L^(-1)IRN和2μmol·L^(-1)pcDNA3.1-C-X-C趋化因子受体5(CXCR5)]。采用CCK-8法检测各组16HBE细胞活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组16HBE细胞中miR-192-5p和CXCR5 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组16HBE细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、Bcl-2、Cleaved-Caspase3、CXCR5以及磷酸化的p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、c-Jun和核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达水平,ELISA法检测各组16HBE细胞上清液中IL-1β和MCP-1水平,流式细胞术检测各组16HBE细胞凋亡率,TargetScan7.1网站预测靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p与CXCR5之间的靶向结合关系。结果:与对照组比较,不同浓度TNF-α组细胞活性明显降低(P<0.05);与对照组组比较,5.0、10.0、20.0和30.0μmol·L^(-1)IRN组细胞活性升高(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+IRN组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显降低(P<0.05);与TNF-α+IRN+NC inhibitor组比较,TNF-α+IRN+miR-192-5p inhibitor组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。与NC mimic和NC inhibitor组比较,miR-192-5p mimic组16HBE细胞中CXCR5 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),miR-192-5p inhibitor组16HBE细胞中CXCR5mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+IRN组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显降低(P<0.05);与TNF-α+IRN+pcDNA3.1组比较,TNF-α+IRN+pcDNA3.1 CXCR5组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。结论:IRN能减轻TNF-α诱导的人支气管上皮细胞凋亡和炎症因子释放,其作用机制可能与miR-192-5p/MAPKs/NF-κB信号通路有关。

miR-192负性调控人肝癌细胞株HepG2中RB1基因的表达

目的探讨miR-192对人肝癌细胞株HepG2中RB1基因表达的调节作用。方法运用生物信息学方法对miR-192进行靶基因预测并分析其潜在靶基因RB1;将含有miR-192结合位点的RB1mRNA 3′端非编码区(3′UTR)片段和在miR-192结合位点进行突变的RB1 3′UTR突变片段克隆至报告基因载体pMIR-Report luciferase vector,重组质粒分别命名为pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut;将重组质粒、Beta-gal内参质粒和microRNA共转染HepG2细胞,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达;SYBR Green荧光定量PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测miR-192对内源性RB1表达的调节作用。结果生物信息学分析筛选出89个miR-192的潜在靶基因,RB1基因是其中之一;测序验证重组质粒pMIR-RB1和pMIR-RB1-mut构建成功;过表达miR-192时,共转染pMIR-RB1质粒的细胞相对荧光素酶活性(4.80±0.36)较相应过表达miR-NC组(7.90±0.91)明显降低(P<0.05),而共转染pMIR-Luc或pMIR-RB1-mut质粒的细胞相对荧光素酶活性[pMIR-Luc:(7.68±1.04);pMIR-RB1-mut:(7.56±0.99)]较相应过表达miR-NC组[pMIR-Luc:(7.86±0.73);pMIR-RB1-mut:(7.82±1.05)]无显著差异;上调miR-192水平显著降低HepG2细胞中内源性RB1mRNA[(0.56±0.10)vs(1.05±0.13)]和蛋白(47%vs 100%)的表达。结论 RB1基因是miR-192的一个靶基因,在HepG2细胞中,miR-192通过直接结合RB1mRNA 3′UTR而负性调控RB1基因表达。

miR-9、miR-192和miR-205在宫颈癌诊断中的价值

目的探讨miR-9、miR-192和miR-205诊断宫颈癌的临床价值。方法选取78例宫颈癌患者(观察组)和30例健康者(对照组)为研究对象,采用RT-qPCR反应检测2组血清miR-9、miR-192和miR-205水平;分析宫颈癌患者血清miR-9、miR-192和miR-205水平与临床病理的关系;采用ROC曲线分析血清miR-9、miR-192和miR-205水平诊断宫颈癌的敏感性和特异性。结果观察组血清miR-9、miR-205水平显著高于对照组,miR-192水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-9、miR-192和miR-205与肿瘤的TNM分期、分化程度具有相关性(P<0.05),miR-9、miR-205与肿瘤的组织类型具有相关性(P<0.05),miR-9、miR-192与肿瘤的淋巴结远处转移具有相关性(P<0.05)。miR-9、miR-192和miR-205检测宫颈癌的敏感度分别为80.93%、78.23%和69.82%,特异度分别为77.03%、79.35%和81.14%。结论宫颈癌患者中miR-9和miR-205呈高表达,miR-192呈低表达,和宫颈癌的临床病理学关系密切,对宫颈癌的诊断具有一定的参考价值。

miR-192、miR-215及ERCC3在NSCLC细胞系A549放疗后的表达变化及意义

目的探讨非小细胞肺癌细胞系A549放疗后,miR-192、miR-215及ERCC3的表达变化及意义。方法体外常规培养的A549细胞分为对照组、20 Gy剂量放疗组及40 Gy剂量放疗组,采用RT-qPCR检测miR-192和miR-215变化,Western blot检测ERCC3蛋白表达情况。结果 A549细胞受不同剂量(20 Gy和40 Gy)的射线照射后,miR-192、miR-215表达上调。在20 Gy剂量组中,miR-192上调(4.27±0.56)倍,miR-215上调(6.58±0.56)倍。在40 Gy剂量组中,miR-192上调(4.94±0.39)倍,miR-215上调(7.48±0.47)倍。而ERCC3蛋白水平下调,相较于对照组(1.35±0.23),40 Gy剂量组中ERCC3表达量(0.28±0.08)呈5倍下降,与20 Gy组(0.63±0.14)相比,其值约呈2倍下降。结论在非小细胞肺癌中,放疗可上调miR-192和miR-215的表达,下调其下游靶基因ERCC3的表达,从而对放疗后DNA损伤及修复发挥调控作用。

藤梨根提取物通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞的增殖和凋亡

背景藤梨根提取物(rattan root extract,RRE)可抑制胃癌、肺癌等肿瘤细胞增殖,具有一定抗肿瘤作用,但其是否影响结直肠癌细胞的恶性表型还未知.miR-192-5p在结直肠癌组织中表达降低,且其低表达与肿瘤大小等临床病理特征相关,可作为结直肠癌诊治的潜在生物学标志物.StarBase生物信息学软件预测显示,环腺苷酸调节的磷酸化蛋白19(cAMP-regulated phosphoprotein 19,ARPP19)可能是miR-192-5p的靶基因.本研究假设RRE可通过调控miR-192-5p/ARPP19轴影响结直肠癌细胞增殖和凋亡.目的探讨RRE对结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法RRE干预SW480细胞后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、C-caspase-3和ARPP19蛋白水平,RT-qPCR检测细胞中miR-192-5p和ARPP19 mRNA水平.转染miR-192-5p模拟物或ARPP19小干扰RNA至SW480细胞,上述相同方法观察过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p和ARPP19调控关系.结果RRE可降低SW480细胞存活率及ARPP19 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),增加SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白和miR-192-5p的表达(P<0.05).过表达miR-192-5p或抑制ARPP19表达均可降低SW480细胞存活率及CyclinD1蛋白表达(P<0.05),而提高SW480细胞凋亡率及C-caspase-3蛋白表达(P<0.05).miR-192-5p在SW480细胞中靶向负调控ARPP19表达.抑制miR-192-5p表达可逆转RRE对SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.抑制ARPP19表达可逆转抑制miR-192-5p表达对RRE处理的SW480细胞增殖、凋亡及CyclinD1和C-caspase-3蛋白表达的影响.结论RRE可有效抑制结直肠癌SW480细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与调miR-192-5p/ARPP19轴有关.

血浆miR-192表达与丙泊酚全麻下肝脏肿瘤切除术肝损伤相关性研究

目的评估外周血mi R-192表达与丙泊酚全麻下肝脏肿瘤切除术肝损伤的相关性,探讨循环血中mi R-192可否作为肝脏肿瘤术后肝损伤的生物标志物。方法选取行肝脏肿瘤择期手术的患者101例,记录患者一般状况、麻醉药物及麻醉方法,肿瘤大小、手术类型、是否肝门阻断、术中出血量,术后12~24h内患者的肝肾功能。术后第1天取外周血测定循环血中mi R-192浓度。应用统计学方法分析循环血中mi R-192水平与手术肝损伤的相关性。结果术中出血量≥500ml的患者,术后ALT、AST、mi R-192升高幅度显著高于出血量<500ml的患者,差异有统计学意义(P=0.046、0.020、0.000)。有肝门阻断的患者,术后mi R-192升高幅度显著高于无肝门阻断患者,差异有统计学意义(P=0.001)。mi R-192与ALT、AST均呈正相关(r=0.930、0.744,P=0.000、0.000)。术中丙泊酚用量与术后ALT、AST、mi R-192均呈正相关(r=0.231、0.248、0.232,P=0.020、0.012、0.020)。手术持续时间与术后ALT、AST、mi R-192均呈正相关(r=0.184、0.241、0.185,P=0.011、0.001、0.011)。结论血浆mi R-192表达与丙泊酚全麻下肝脏肿瘤切除术肝损伤具有良好的相关性,mi R-192可能对缺血性肝损伤和创伤性肝损伤较为敏感,可以作为肝脏肿瘤切除术肝损伤的标志物。