结直肠癌癌组织中miR-106a、miR-92a、miR-31与其新生血管生成及侵袭转移的关系研究

目的 探究结直肠癌(CRC)癌组织中miR-106a、miR-92a、miR-31与其新生血管生成及侵袭转移的关系。方法 选取本院2018年1月至2020年1月诊治的100例结直肠癌患者作为CRC组,另选取同期健康体检者60例作为对照组。全部均行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-106a、miR-92a、miR-31表达量,采用免疫组化法检测CD34表达,计算微血管密度(MVD);术后随访3年,收集患者肿瘤侵袭转移等资料。分析miR-106a、miR-92a、miR-31与CRC新生血管生成及侵袭转移的关系。结果 CRC组miR-106a、miR-92a、miR-31表达量及MVD均比对照组高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-106a、miR-92a、miR-31表达量与CRC患者MVD均呈正相关(P<0.05)。单因素分析显示,侵袭转移组肿瘤高、中分化程度人数及TNM分期Ⅲ、Ⅳ期人数比未侵袭转移组多,术前miR-106a、miR-92a、miR-31表达量比未侵袭转移组高(P<0.05)。多元逐步回归分析显示,肿瘤分化程度、TNM分期、术前miR-106a表达量、术前miR-92a表达量、术前miR-31表达量均为CRC患者肿瘤侵袭转移的独立影响因素(P<0.05)。结论 结直肠癌癌组织中miR-106a、miR-92a、miR-31高表达,且与结直肠癌新生血管生成及侵袭转移密切相关。

肺炎支原体肺炎患儿外周血miR-106a、miR-20a表达与胸部X线表现及炎症的相关性

目的:探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血微小RNA(miR)-106a、miR-20a表达与胸部X线(CXR)表现及炎症的相关性。方法:选取2020年1月至2021年12月本院收治的393例MPP患儿作为研究对象。采用全自动血细胞分析仪检测白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、中性分叶核白细胞等,免疫透射比浊法检测C反应蛋白(CRP)水平。采用实时定量聚合酶链反应法检测外周血miR-106a和miR-20a表达。所有患儿均在入组后接受CXR检查。结果:MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a的表达水平分别为1.00(0.61,2.11)、1.06(0.73,1.67)。根据中位值分组,与miR-106a和miR-20a低表达组相比,高表达组患儿CRP水平和肺实变患儿比例明显更高(P<0.05);miR-20a高表达组患儿胸腔积液患儿比例也显著高于低表达组(P<0.05)。MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a与CRP呈显著正相关(r值分别为0.212、0.230,均P<0.001)。肺实变组外周血miR-106a和miR-20a表达水平均显著高于非肺实变组(P<0.05)。经ROC曲线分析,外周血miR-106a和miR-20a预测MPP肺实变的曲线下面积(AUC)为0.811(95%CI:0.767~0.855)、0.807(95%CI:0.762~0.852),灵敏度分别为75.3%和77.4%,特异度分别为76.5%和76.4%,对应的截断值为1.20和1.18。Logistic回归分析显示,外周血miR-106a和miR-20a高表达是MPP肺实变的独立影响因素(P<0.05)。结论:MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a过表达与CXR严重表现和炎症加重有关,两者可作为指示MPP严重程度和炎症进展的标志物。

miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究

目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。

LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)生长停滞特异性转录本5反义RNA(growth arrest specific transcript 5 antisense RNA,GAS5-AS1)被发现在多种癌症中扮演肿瘤抑制因子的作用.但是其在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)进展中的作用和机制尚不清楚.目的探讨LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p在CRC进展中的作用.方法实时荧光定量聚合酶链反应分析LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p在43对CRC组织和癌旁组织样本中的表达.分别转染pcDNA、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-106a-5p、si-NC、si-LncRNA GAS5-AS1、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics至HCT8细胞.细胞计数试剂盒-8法检测细胞活力;Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数.通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,CRC组织中LncRNA GAS5-AS1表达降低(P<0.05),miR-106a-5p表达升高(P<0.05).与转染pcDNA比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1后HCT8细胞活力、迁移、侵袭、miR-106a-5p表达显著降低(P<0.05).与转染anti-miR-NC比较,转染anti-miR-106a-5p后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05).与转染si-NC比较,转染si-LncRNA GAS5-AS1后miR-106a-5p表达水平显著升高(P<0.05).与转染miR-NC比较,转染miR-106a-5p能显著降低LncRNA GAS5-AS1-WT载体的荧光素酶活性,表明miR-106a-5p是LncRNA GAS5-AS1的直接靶点.与转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05).结论LncRNA GAS5-AS1通过靶向miR-106a-5p来抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭.

牙周炎患者牙周膜组织miR-106a、miR-34a水平与炎症反应、牙槽骨吸收的相关性

目的:分析牙周炎患者牙周膜组织miR-106a、miR-34a水平与炎症反应、牙槽骨吸收的相关性。方法:选取2021年6月至2023年6月期间在杭州师范大学附属萧山医院接受治疗的81例牙周炎患者为牙周炎组,另选取在本院接受治疗的牙齿正畸患者81例作为对照组。入院后行牙周检查,包括菌斑指数(PLI)、龈沟出血指数(BI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)。采用RT-PCR法测定牙周膜组织miR-106a、miR-34a的表达水平;采用ELISA测定热休克蛋白60(HSP60)、趋化因子12(CXCL12)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、IL-17、I型胶原交联C-末端肽(CTX)、I型前胶原氨基末端肽(PINP)、骨保护素(OPG)、Runt相关转录因子2(Runx2)、I型胶原交联氨基末端肽(NTX)表达水平。Pearson法分析牙周膜组织miR-106a、miR-34a表达与炎症反应、牙槽骨吸收指标的相关性;ROC曲线分析牙周膜组织miR-106a、mi R-34a对牙周炎的诊断价值。结果:与对照组相比,牙周炎组患者PLI、BI、PD、AL表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,牙周炎组患者牙周膜组织中miR-106a表达水平降低,miR-34a表达水平显著增加(P<0.05)。与对照组相比,牙周炎组患者HSP60、CXCL12、ICAM-1、IL-17表达水平均显著升高(P<0.05),槽骨吸收指标中CTX、NTX表达水平显著升高,PINP、OPG、Runx2表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,miR-106a与HSP60、CXCL12、ICAM-1、IL-17、CTX、NTX水平呈负相关(P<0.05),与PINP、OPG、Runx2水平呈正相关(P<0.05)。miR-34a表达水平与HSP60、CXCL12、ICAM-1、IL-17、CTX、NTX水平呈正负相关(P<0.05),与PINP、OPG、Runx2水平呈负正相关(P<0.05)。牙周膜组织miR-106a、miR-34a二者联合诊断牙周炎的AUC最高,优于牙周膜组织miR-106a、miR-34a各自单独诊断(Z_(二者联合-miR-106a)=2.553、P=0.011,Z_(二者联合-miR-34a)=2.834、P=0.005)。结论:牙周炎患者牙周膜组织miR-106a水平显著降低,miR-34a水平显著升高,二者与炎症反应、牙槽骨吸收之间具有相关性,二者联合诊断牙周炎有效性提高。

急性髓系白血病患者血清miR-24,miR-106a水平表达及其临床诊断价值

目的探究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者血清微小RNA(micro RNA,miR)-24,miR-106a水平表达及其临床诊断价值。方法选取四川大学华西医院2018年6月~2020年6月收治的急性髓系白血病患者98例作为研究组,根据疗效将患者分为完全缓解组、部分缓解组和未缓解组,另选取同期健康体检者98例作为对照组;血清miR-24,miR-106a采用qRT-PCR检测;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-24,miR-106a与急性髓系白血病患者预后的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-24,miR-106a对急性髓系白血病患者的诊断价值。结果与对照组相比,研究组血清miR-24表达水平(0.62±0.16 vs 1.01±0.21)显著降低,miR-106a表达水平(1.64±0.38vs 1.02±0.24)显著升高,差异具有统计学意义(t=14.624,13.656,均P<0.05)。完全缓解组、部分缓解组和未缓解组血清miR-24水平依次降低,血清miR-106a水平依次升高,差异具有统计学意义(F=65.207,24.280,均P<0.05)。miR-24,miR-106a表达水平与脾肿大和WBC有关(χ^(2)=5.029,6.153;9.216,8.151,均P<0.05)。miR-24高表达组生存率显著高于低表达组(59.57%vs 39.22%,χ^(2)=9.851,P<0.05),miR-106a高表达组生存率显著低于低表达组(38.00%vs 60.42%,χ^(2)=21.728,P<0.05)。根据ROC曲线得知,血清miR-24,miR-106a诊断急性髓系白血病患者的曲线下面积(AUC)分别为0.894,0.880,二者联合诊断急性髓系白血病患者的AUC为0.929,二者联合诊断优于各自单独诊断(Z=2.624,2.735,均P<0.05)。结论急性髓系白血病患者血清miR-24水平显著降低,miR-106a水平显著升高,二者联合检测可提高其诊断价值。

早期非小细胞肺癌组织中miR-106a的表达变化及意义

目的观察早期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中微小RNA-106a(miR-106a)的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测52例早期NSCLC患者肿瘤组织及癌旁正常肺组织中的miR-106a。结果早期NSCLC组织中miR-106a的表达量明显高于癌旁正常肺组织(P<0.001),早期NSCLC组织中miR-106a的表达与术后复发和死亡显著相关(P均<0.05)。结论早期NSCLC组织中miR-106a高表达。miR-106a检测有助于早期NSCLC的诊断和预后判断。

miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎大鼠软骨退变和细胞外基质降解的修复及血清炎症因子的影响

目的:本文旨在探究miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎大鼠软骨退变和细胞外基质降解的修复及血清炎症因子的影响。方法:将大鼠按随机数字表法分为4组:Control组、ACLT组、ACLT+Scramble组和ACLT+miR-106a agomir组进行后续实验。HE染色检测病理组织损伤程度;RT-PCR检测miR-106a-5p表达;半自动图像数字化分析仪检测Tb.N、Tb.Sp、BV/TV;阿利新蓝染色检测软骨损伤;Western blot检测Aggrecan、SOX-9、typeⅡcollagen、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平;ELISA检测外周血和骨组织中IL-6、TNF-α水平。结果:与Control组相比,ALCT组呈现明显病理损伤,miR-106a-5p表达降低(P<0.05),Tb.N、BV/TV降低(P<0.05),Tb.Sp升高(P<0.05),软骨损伤加重,Aggrecan、SOX-9、ColⅡ蛋白水平降低(P<0.05),cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bax/Bcl-2升高(P<0.05),外周血和骨组织中IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);与ACLT+Scramble组相比,ACLT+miR-106a agomir组病理损伤程度明显改善,miR-106a-5p表达升高(P<0.05),Tb.N、BV/TV明显升高(P<0.05),Tb.Sp明显降低(P<0.05),软骨损伤减轻,Aggrecan、SOX-9、ColⅡ蛋白水平升高(P<0.05),cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bax/Bcl-2降低(P<0.05),外周血和骨组织中IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。结论:miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎模型大鼠病理损伤具有保护作用。

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0.15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0.15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。

miR-106a对小鼠卵巢癌移植瘤生长的影响研究

目的研究miR-106a对小鼠卵巢癌移植瘤生长的影响。方法选择SPF级BALB/c小鼠作为实验动物,将SKOV3卵巢癌细胞注入小鼠皮下以复制卵巢癌移植瘤模型,将模型小鼠随机分为空白对照组、阴性对照组、miR-106a抑制组,分别用不含抑制剂的转染试剂、含阴性对照抑制剂的转染试剂、含miR-106a抑制剂的转染试剂进行干预,干预前及干预后分别测定移植瘤体积以及移植瘤中PTEN信号通路分子的表达量。结果干预后10、20、30和40d时,空白对照组、阴性对照组、miR-106a抑制组之间瘤体体积的比较差异有统计学意义(P<0.05),每组内不同时间点的比较差异有统计学意义(P<0.05),组间与时间变化趋势的比较差异有统计学意义(P<0.05);干预后40d时,miR-106a抑制组小鼠肿瘤组织中PTEN的mRNA表达高于空白对照组和阴性对照组,PI3K、AKT、CyclinD1、Survivin、MMP-2、MMP-9、VEGF的mRNA表达低于空白对照组和阴性对照组。结论miR-106a对小鼠卵巢癌移植瘤的生长具有抑制作用,增强PTEN信号通路是miR-106a抑制肿瘤生长的分子机制。

lncRNA-H19通过靶向miR-106a-5p在骨关节炎软骨基质降解和钙化中的调控作用

目的:探讨长链非编码RNA H19通过靶向microRNA(miR)-106a-5p对骨关节炎(OA)软骨基质降解和钙化的调控作用。方法:收集临床骨关节炎软骨组织和健康软骨组织,采用实时荧光定量PCR检测软骨组织中lncRNA-H19、miR-106a-5p mRNA表达水平;将人软骨细胞系(HC-A)分为H19干扰组(si-H19)、阴性转染组(si-Control)、miR-106a-5p mimic组(miR-106a-5p)、mimic阴性对照组(miR-106a-5p-NC)、miR-106a-5p抑制剂组(inhibitor)、阴性抑制剂对照组(inhibitor-NC)组、inhibitor+si-H19和inhibitor-NC+si-H19组,检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和骨涎蛋白(BSP)mRNA表达水平;Western blot检测软骨细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13和II型α1胶原纤维(COL2A1)的水平;CCK-8检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:OA软骨组织中lncRNA-H19 mRNA表达上调(P<0.05),miR-106a-5p mRNA表达下调(P<0.05);沉默lncRNA-H19可明显抑制软骨细胞凋亡,促进软骨细胞增殖(P<0.05),并下调MMP-1和MMP-13的表达水平(P<0.05),上调COL2A1的表达(P<0.05)。沉默lncRNA-H19可抑制软骨细胞ALP、OCN、BSP mRNA水平和ALP活性(P<0.05)。沉默miR-106a-5p逆转了沉默lncRNA-H19对软骨细胞基质降解和钙化标志物的抑制作用(P<0.05)。结论:lncRNA-H19可通过抑制miR-106a-5p表达,促进细胞外软骨基质的降解和钙化,从而参与OA的进展。

Hsa_circ_0045943靶向miR-106a对胃癌细胞生物学特性的影响

目的探讨hsa_circ_0045943靶向miR-106a对胃癌细胞生物学特性的影响及机制。方法培养人胃癌细胞MKN-45、AGS和胃黏膜上皮细胞GES-1,real-time PCR检测circ_0045943在胃癌细胞中的表达;构建并转染circ_0045943的过表达和沉默腺病毒载体OE-circRNA和sh-circRNA及阴性对照OE-NC和sh-NC,采用CCK-8法检测AGS细胞在circ_0045943过表达和抑制后的增殖能力变化,TUNEL法检测细胞凋亡,transwell法检测细胞迁移和侵袭,划痕法检测细胞迁移。StarBase数据库筛选circ_0045943和miR-106a的结合位点,real-time PCR检测miR-106a表达;给予OE-circRNA和sh-circRNA,检测circ_0045943表达及miR-106a在circ_0045943过表达和抑制后的表达水平变化。结果Real-time PCR结果显示,与GES-1相比,circ_0045943在胃癌细胞MKN-45、AGS中表达均降低(P均<0.001);CCK-8显示,OE-circRNA组AGS细胞吸光度值低于sh-circRNA组(P24 h<0.01,P48 h<0.001,P72 h<0.001);TUNE结果显示,过表达circ_0045943时AGS细胞凋亡数增多,沉默circ_0045943时凋亡数减少;transwell结果显示,OE-circRNA组AGS细胞迁移和侵袭数量均低于sh-circRNA组(P均<0.001);划痕实验结果显示,OE-circRNA组AGS细胞迁移率最低,sh-circRNA组迁移率高(P<0.001)。Starbase数据库检索circ_0045943和miR-106a具有互补结合序列。Real-time PCR结果显示,miR-106a在胃癌细胞中高表达(P<0.001);OE-circRNA和sh-circRNA处理后circ_0045943和miR-106a表达有统计学差异(P均<0.001),伴随circ_0045943表达的升高和下降,miR-106a表达出现相反变化。结论circ_0045943在胃癌细胞中低表达,促进或抑制circ_0045943的表达可能通过靶向miR-106a而调控胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

miR-106a在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞系A498增殖的影响

目的研究miR-106a在肾癌、癌旁正常组织表达情况及其在肾癌细胞系A498中的作用。方法运用real-time PCR检测33例肾癌及相应的癌旁正常组织中miR-106a的表达,分析其与临床病理特征的相关性;在肾癌A498细胞中转染miR-106a过表达载体及其抑制剂,实验分为4组:空载体对照组、miR-106a过表达载体组、阴性对照组、miR-106a抑制剂组;MTT实验检测miR-106a对肾癌A498细胞增殖的影响;应用流式细胞仪分析miR-106a对细胞周期的影响。结果 miR-106a在肾癌组织中的表达显著上调(P<0.01),并与肾癌的T分期有相关性(P<0.05)。miR-106a过表达载体与空载体对照组相比,促进了细胞增殖,G_0/G_1期细胞数量显著减少(P<0.01),S和G_2/M期细胞数量显著增加(P<0.01);而miR-106a抑制剂组与阴性对照组相比,细胞增殖抑制,G_0/G_1期细胞数量显著增加(P<0.01),S和G_2/M期细胞数量显著减少(P<0.01)。结论 miR-106a在肾癌组织中上调,通过促使细胞进入S和G_2/M期而促进肾癌细胞分裂、增殖。

胃癌患者血清中miR-106a的表达及其临床意义

目的探讨胃癌患者血清miR-106a表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用实时定量RT-PCR方法检测21例胃癌患者及10例健康人血清中miR-106a表达的水平。结果实时定量RT-PCR方法能够检测到血清样本中微量miRNA的表达。21例胃癌患者miR-106a表达水平的中位数为0.34(0.17～0.69),10例健康人为0.63(0.27～1.0),两者差异有统计学意义(P=0.002)。在21例胃癌患者中,血清miR-106a表达水平与肿瘤分化程度有关,在低分化胃癌中的表达水平明显高于中分化胃癌(P=0.01);血清miR-106a表达水平亦与血清CA724相关(P=0.03),而与分期、性别、年龄无关(P>0.05)。结论采用实时定量RT-PCR方法检测血清中miR-106a的表达敏感可靠。血清miR-106a作为新的生物学指标对于胃癌的诊断具有一定的价值。

KLF4转录水平负调控miR-106a表达对人胃癌细胞BGC-823侵袭能力的影响

目的探讨转录因子kruppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对微小RNA-106a(miR-106a)表达的调控及其相互作用对人胃癌细胞侵袭能力的影响。方法通过转录因子结合位点数据库JASPAR检索与miR-106a启动子区结合的转录因子KLF4。构建KLF4过表达载体(KLF4-pcDNA)和miR-106a报告基因(pmiR-106a-WT/MUT-luc),双荧光素酶报告基因检测KLF4对miR-106a启动子活性的影响。收集人胃癌和癌旁石蜡包埋-甲醛固定(formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE)标本各40例,实时定量PCR和免疫组织化学法检测KLF4表达。人胃癌细胞株BGC-823培养并按miR-106a mimic组、mimic NC组、KLF4+pcDNA组、pcDNA basic组分别进行处理,Transwell法检测各组胃癌细胞侵袭能力变化。结果双荧光素酶报告基因检测显示KLF4-pcDNA具有拮抗miR-106a启动子活性的作用,表现为pmiR-106a-WT-luc荧光素酶活性被抑制(pmiR-106a-WT+pcDNA-basic与pmiR-106a-WT+pcDNA-KLF4比较,P<0.001),但对pmiR-106a-MUT-luc荧光素酶活性影响不明显(pmiR-106a-MUT+pcDNA-basic与pmiR-106a-MUT+pcDNA-KLF4比较,P>0.05)。FFPE样本显示KLF4在胃癌组织中的相对表达量为0.69±0.59,与癌旁组织相比,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌的细胞分化程度、淋巴转移和浸润深度相关(P<0.05);KLF4阳性表达主要位于胃黏膜上皮细胞核及胞质。Transwell实验表明各处理组胃癌细胞的穿膜数量不全相同(P<0.001),miR-106a mimic组为89.00±14.85,mimic NC组为50.90±17.94,KLF4+pcDNA组为37.70±12.60,pcDNA basic组为66.20±3.19。结论转录因子KLF4与miR-106a启动子区至少存在体外的直接结合,可能通过在上游转录水平负调控miR-106a表达而参与影响胃癌细胞的侵袭转移进程。

miR-106a-5p靶向ERK2逆转胃癌细胞MGC-803对顺铂化疗的耐药性

目的探究miR-106a-5p与细胞外调节蛋白激酶(ERK2)的靶向作用关系对胃癌细胞MGC-803顺铂耐药性的影响。方法通过RT-PCR检测miR-106a-5p与ERK2在胃癌细胞MGC-803和耐药细胞株MGC-803/顺铂(DDP)中的表达差异;荧光素酶报告实验确定miR-106a-5p与ERK2的靶向关系;将miR-106a-5p mimic与过表达载体pcDNA3.1-ERK(pc-ERK)分别转染至耐药细胞株MGC-803/DDP中,并分为control组、mimic组、ERK2组和mimic+ERK2共转染组,MTT和EDU检测细胞增殖活力,Hochest33342检测细胞凋亡水平,Transwell检测细胞侵袭能力,通过Western blot检测各组细胞中E-钙黏附蛋白(E-cad)、N-钙黏附蛋白(Ncad)的表达水平。结果胃癌细胞MGC-803中miR-106a-5p的表达量高于耐药细胞株(P<0.05),而ERK2的表达量低于耐药细胞株(P<0.05)。其次,荧光素酶报告实验表明miR-106a-5p靶向抑制ERK2的表达。转染miR-106a-5p mimic和pc-ERK之后,与对照组相比,ERK2组细胞的活力、细胞增殖数量和细胞侵袭数量均升高(P<0.05),凋亡数量减少(P<0.05);mimic组中细胞的活力、细胞增殖数量和细胞侵袭数量较对照组均下降(P<0.05),凋亡数量增多(P<0.05);而与ERK2组相比,mimic+ERK2组细胞的活力、细胞增殖数量和细胞侵袭数量下降(P<0.05),凋亡数量增多(P<0.05)。最后,与对照组相比,miR-106a-5p mimic组中E-cad表达量升高(P<0.05),而N-cad表达量下降(P<0.05);而ERK2组中E-cad表达量下降(P<0.05),而N-cad表达量升高(P<0.05);与ERK2组相比,mimic+ERK2组中E-cad表达量上升(P<0.05),而N-cad表达量下降(P<0.05)。结论miR-106a-5p可通过靶向下调ERK2的表达,降低胃癌细胞对顺铂的耐药性,有望联合临床上顺铂化疗方案并提高顺铂化疗疗效。

miR-106a抑制胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡

目的胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤,具有较高的病死率。现有的研究表明miR-106a在多种肿瘤中表达上调,并发挥着致癌性作用,但miR-106a在胶质瘤中的表达和作用却并不清楚。方法不同级别胶质瘤组织和胶质瘤细胞系(T98G,SHG44,U87,U251,U373)内的miR-106a水平通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定。转染miRNA寡聚核苷酸后的U87和U251细胞的增殖能力和细胞周期分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪测定,并且通过膜联蛋白/碘化丙啶(annexin V/PI)双染法测定了miR-106a对胶质瘤细胞的凋亡影响。结果miR-106a在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系内表达水平相对正常脑组织显著下降,并且miR-106a表达水平与胶质瘤病理级别负相关。胶质瘤细胞转染miR-106a后,可检测到过表达的miR-106a可显著抑制胶质瘤细胞的增殖能力,阻滞细胞周期于G0/G1期,同时诱导胶质瘤细胞凋亡增加。结论 miR-106a可阻滞胶质瘤细胞细胞周期、抑制增殖和诱导凋亡。

循环miR-106a/b表达水平在肝细胞癌的诊断及预后中的作用

目的评估循环miR-106a/b表达水平在肝细胞癌(HCC)诊断及预后中的作用。方法纳入108例HCC患者和54例健康志愿者(HCs),采集受试者外周血,并采用实时荧光定量PCR进行miR-106a/b表达水平的检测。对HCC患者进行随访,并记录其总体生存期(OS)。结果 HCC患者中血浆miR-106a表达水平显著高于HCs(P<0.001)。血浆miR-106b在HCC患者中表达同样升高(P<0.001)。受试者工作特征曲线显示miR-106a/b的诊断效能较好,曲线下面积分别为0.670(95%CI:0.573~0.768)和0.684(95%CI:0.593~0.776)。HCC患者中循环miR-106a表达量与乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)(P=0.028)、病理分化(P=0.025)、肿瘤大小(P=0.002)、淋巴结转移(P=0.028)以及TNM分级(P=0.037)正相关;miR-106b表达量与HBsAg(P=0.003)、AFP(P=0.031)以及肿瘤大小(P=0.005)正相关。Kaplan-Meier曲线分析显示,血浆miR-106a高水平的HCC患者具有较差的OS(P=0.013)。多因素Cox回归模型分析显示,miR-106a高表达是HCC患者OS差的独立预测因素(P=0.038)。结论循环miR-106a/b表达水平可作为HCC患者的诊断标志物,且循环miR-106a高表达是HCC患者预后不良的独立预测因素。

Hsa-miR-106a在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的分析hsa-miR-106a在胃癌组织中相对于正常组织的表达及其与病理分级及临床分期的关系。方法从石蜡组织包埋的19例胃癌及19例正常组织中提取总RNA,应用Real-time PCR方法检测miR-106a的表达情况,并分析其与胃癌病理分级及临床分期的关系。结果 miR-106a在胃癌组织中有14例高表达,5例低表达,在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),其表达与胃癌的病理分级、临床分期密切相关。结论 miR-106a可能参与了胃癌的发生、发展过程。

循环miR-106a/b在胰腺导管腺癌诊断及预后中的作用

目的评估循环miR-106a/b的表达水平在胰腺导管腺癌(PDAC)诊断及预后中的作用。方法纳入101例PDAC患者,同时纳入50例年龄、性别匹配的健康志愿者作为健康对照组(HCs)。采集受试者外周血样本,抽提血浆总RNA并采用实时荧光定量PCR进行miR-106a/b表达水平的检测。对PDAC患者进行随访,并记录其总体生存期(OS)。结果相对于健康对照组,血浆miR-106a在PDAC患者中的表达水平显著升高(P<0.001);同时,血浆miR-106b在PDAC患者中的表达水平同样升高(P<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-106a/b的诊断效能较好,曲线下面积(AUC)分别为0.708,95%CI:0.612~0.803和0.728,95%CI:0.637~0.818。PDAC患者中循环miR-106a的表达量与病理分化(P=0.031)、肿瘤大小(P=0.045)以及淋巴结转移(P=0.007)呈正相关,与年龄、性别、神经侵犯、血管侵犯等无关;miR-106b表达量与肿瘤大小(P=0.028)呈正相关,与年龄、性别、病理分化、淋巴结转移、神经侵犯、血管侵犯等无关。通过Kaplan-Meier曲线分析,血浆miR-106a高水平的PDAC患者具有较差的OS(P=0.009),采用单元、多元Cox's风险比回归模型分析结果显示miR-106a高表达是PDAC患者OS差的独立预测因素(P=0.030)。结论循环miR-106a/b表达水平可作为PDAC患者的诊断标志物,并且循环miR-106a高表达是PDAC患者预后不良的独立风险因素。