彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

肺动脉平滑肌细胞外泌体上调miR-106b-5p增强肺动脉内皮细胞Warburg效应促进动脉型肺动脉高压的分子机制

目的探讨肺动脉平滑肌细胞与内皮细胞的胞间通讯在促进动脉型肺动脉高压(PAH)疾病进展中的作用机制。方法采集并分离健康个体(HC)和PAH患者外周血浆中的外泌体,并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析。体外缺氧诱导处理原代人肺动脉平滑肌细胞(h PASMCs)和原代肺动脉内皮细胞(hPAECs),分为常氧组和缺氧诱导组。生物信息学分析miR-106b-5p和USP32的序列互作位点。腺病毒转染过表达/敲低h PASMCs内miR-106b-5p,过表达/敲低hPAECs内PKM2。双荧光素酶报告基因分析确证二者的负作用方式。Western blot法测定胞内USP32、PKM2、GLUT1、HK2、LDHA蛋白质的表达水平。结果微阵列测定和差异表达分析结果显示,与HC组相比,PAH组外周血浆中外泌体内miR-106b-5p的水平明显上调。在体外,与常氧组相比,miR-106b-5p的水平在缺氧诱导组hPASMCs上清液外泌体内明显上调,而在h PAECs细胞上清液外泌体中则无此变化。miR-106b-5p负调控USP32的表达。与miR-NC组/Inhibitor-NC组相比,在h PASMCs中miR-106b-5pmimic/miR-106b-5pinhibitor处理后,胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显增强/抑制。与shRNA-NT组/vector组相比,在hPAECs中PKM2 shRNA/PKM2-OE处理后,胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显抑制/增强(P<0.05)。结论hPASMCs通过外泌体上调miR-106b-5p增强hPAECs胞内Warburg效应,在动脉型肺动脉高压中具有潜在的促进疾病进展的作用。

LncRNA SNHG16通过miR-106b-5p/PHF1轴调节结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)通过miR-106b-5p/聚梳组蛋白家族指蛋白1(PHF1)轴对结直肠癌(CRC)细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织、相邻正常组织及体外培养的CRC细胞系(LoVo、Caco-2、HCT116和SW480)和正常人结肠上皮细胞(CCD 841 CON)中SNHG16、miR-106b-5p、PHF1表达。将SW480细胞随机分组为对照组、si-NC组、si-SNHG16组、si-SNHG16+inhibitor-NC组、si-SNHG16+miR-106b-5p inhibitor组、si-PHF1组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-106b-5p+pcDNA组、miR-106b-5p+pcDNA-PHF1组。采用qRT-PCR检测各组SW480细胞中SNHG16、miR-106b-5p和PHF1的表达水平。MTT法、流式细胞术和Transwell法分别检测SW480细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16、miR-106b-5p和PHF1之间的相互作用。Western blot检测PHF1的蛋白水平。结果SNHG16和PHF1在CRC组织和细胞中高表达,miR-106b-5p低表达(P<0.05)。选择SNHG16表达最高的SW480细胞进行转染实验。SNHG16的下调降低了SW480细胞的增殖、迁移、侵袭,促进了SW480细胞的凋亡(P<0.05)。miR-106b-5p可与SNHG16相互作用,其抑制剂恢复沉默SNHG16对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。PHF1是miR-106b-5p的靶点,沉默PHF1可抑制SW480细胞的进展(P<0.05)。PHF1过表达恢复了miR-106b-5p对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。SNHG16通过下调miR-106b-5p促进SW480细胞中PHF1的表达(P<0.05)。结论LncRNA SNHG16通过靶向调控miR-106b-5p/PHF1轴促进CRC细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制凋亡。

miR-106b对缺氧诱导的大鼠视网膜血管化的影响及其机制

目的探讨miR-106b对缺氧诱导的大鼠视网膜血管化的影响及其机制。方法本研究实验动物为无特定病原菌级SD怀孕大鼠所产的12只新生大鼠。将新生大鼠与母鼠(用于哺乳)随机分配至对照组与氧诱导视网膜病变(OIR)组,每组6只,对照组正常饲养,OIR组新生大鼠建立OIR模型。采用免疫荧光染色观察大鼠视网膜的组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜组织中miR-106b的表达情况。分离大鼠视网膜微血管内皮细胞(MRMVEC),采用双荧光素酶报告基因系统实验与Western blot验证miR-106b与缺氧诱导因子-1A(HIF1A)、血管内皮生长因子A(VEGFA)的靶向关系。将MRMVEC分为5组:Nor组(常氧培养)、Hyp组(缺氧处理)、Hyp-miR组(转染miR-106b mimic后接受缺氧处理)、Hyp-miR-pcHIF组(转染pcDNA-HIF1A与miR-106b mimic后接受缺氧处理)与Hyp-miR-pcVEG组(转染pcDNA-VEGFA与miR-106b mimic后接受缺氧处理);分别采用CCK-8法、划痕实验与成管实验检测细胞增殖、迁移及体外血管形成能力。结果免疫荧光染色结果显示:与对照组相比,OIR组大鼠视网膜血管内皮细胞增殖与迁移明显增强。实时荧光定量PCR检测结果显示:OIR组大鼠视网膜组织中miR-106b相对表达量(0.26±0.06)显著低于对照组(1.02±0.08),差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因系统实验与Western blot结果表明,miR-106可与HIF1A和VEGFA靶向结合并抑制其表达。与Nor组相比,Hyp组MRMVEC的相对细胞活力、相对迁移能力、相对血管形成能力均提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与Hyp组相比,Hyp-miR组MRMVEC的相对细胞活力、相对迁移能力、相对血管形成能力均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与Hyp-miR组相比,Hyp-miR-pcHIF组与Hyp-miR-pcVEG组MRMVEC的相对细胞活力、相对迁移能力、相对血管形成能力均有所提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论上调miR-106b可靶向抑制HIF1A和VEGFA表达,从而减少缺氧诱导的视网膜微血管内皮细胞增殖、迁移与新生血管生成。

IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为

目的:探讨IL-37对肾细胞癌细胞生物学行为的影响和潜在机制。方法:RT-qPCR检测肾细胞癌组织中IL-37mRNA和miR-106b-5p表达。Western blot检测肾细胞癌组织中10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达。将肾细胞癌细胞786-0分为对照组、IL-37(10、50、100 ng/ml)组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p组、IL-37+miR-NC组、IL-37+miR-106b-5p组。采用MTT法、平板克隆实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测786-0细胞增殖、迁移和凋亡能力。荧光素酶实验检测miR-106b-5p与PTEN的靶向关系。结果:肾细胞癌组织中miR-106b-5p表达量显著升高(P<0.05),IL-37 mRNA和PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与对照组比较,IL-37(10、50、100 ng/ml)组细胞活力、集落形成数、迁移距离、miR-106b-5p表达显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与IL-37+miR-NC组比较,IL-37+miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著升高(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05)。PTEN是miR-106b-5p的靶基因。结论:外源性IL-37可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能是通过抑制miR-106b-5p/PTEN途径发挥作用。

lncRNA MALAT1调节miR-106b-5p/TLR4轴对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织炎性损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)调节miR-106b-5p/Toll样受体4(TLR4)轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织炎性损伤的影响。方法以气管滴注脂多糖溶液并联合烟熏法构建COPD模型大鼠,随机分成5组(每组12只模型大鼠):模型组、lncRNA MALAT1敲低组、miR-106b-5p antagomir组、阴性对照组、lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组,选12只正常大鼠气管内滴注与造模大鼠等剂量的生理盐水,且不进行烟熏,作对照组,分组干预处理后,检测大鼠肺功能,比较各组用力肺活量(FVC)、呼气峰流值(PEF)、吸气阻力(Ri)、潮气量(VT);实时荧光定量PCR实验检测肺组织lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA表达;Giemsa染色对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数;HE染色观察各组大鼠肺组织炎性损伤,并做Holfbauer评分;酶联免疫吸附测定(ELASA)法测量各组大鼠BALF和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-10(IL-10)水平;双荧光素酶报告基因实验检测L2细胞中lncRNA MALAT1对miR-106b-5p、miR-106b-5p对TLR4的靶向调节。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织发生炎性损伤,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。与模型组比较,lncRNA MALAT1敲低组大鼠肺组织肺炎性损伤减轻,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平升高(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05);阴性对照组大鼠各指标无显著差异(P>0.05)。与lncRNA MALAT1敲低组比较,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。L2细胞中lncRNA MALAT1可靶向下调miR-106b-5p,且miR-106b-5p可靶向下调TLR4表达。结论下调lncRNA MALAT1可通过促进miR-106b-5p分泌而降低TLR4表达,进而减少促炎因子产生,增加抗炎因子产生,阻止炎症发生发展,最终减轻COPD大鼠肺组织炎性损伤。

miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡的促进和对增殖的抑制作用

目的探讨miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡和增殖的影响。方法应用miRNA芯片分析获得鼻咽癌组织和癌旁正常组织表达差异的miRNA,TaqMan miRNA检测试剂盒和实时荧光定量PCR分别检测miR-106和RhoC mRNA在鼻咽癌和癌旁组织中的表达,用miRnada预测miR-106b和靶基因的结合位点,采用双荧光素酶验证靶基因,Western blot检测miR-106b调控靶基因RhoC的表达水平。用Annexin V-PI和TUNEL检测miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡的影响,用MTT检测miR-106b对鼻咽癌细胞增殖的影响。结果 miRNA芯片分析发现鼻咽癌组织中miR-106b的表达较癌旁正常组织低。RT-PCR结果显示miR-106b在鼻咽癌组织中表达减少(P<0.05),RhoC在鼻咽癌组织中表达增加(P<0.05),miR-106b和RhoC在鼻咽癌组织中表达呈负相关(r=―0.586 6,P<0.001)。荧光素酶报告基因实验结果显示miR-106b组荧光素酶活性低于空质粒组(P<0.05),Western blot结果显示miR-106b组鼻咽癌细胞中RhoC的表达较空质粒组降低(P<0.05)。Annexin V-PI和TUNEL结果显示,miR-106b组鼻咽癌细胞凋亡较空质粒组增加(P<0.05);MTT结果显示miR-106b组鼻咽癌细胞增殖能力较空质粒组降低(P<0.05)。结论 miR-106b可能通过下调RhoC的表达诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制鼻咽癌细胞增殖。

miR-106b在原发性肝癌中的表达及与预后的关系

目的探讨miR-106b在肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义。方法选择10对HCC组织及相应正常肝组织标本及82例有随访资料的HCC组织切片。qRT-PCR法及锁定核酸原位杂交检测miR-106b在HCC组织的表达,分析miR-106b表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 miR-106b在HCC组织中表达上调(P<0.05)。miR-106b表达与转移、组织分级、肝硬化及血清甲胎蛋白明显相关(P=0.046、0.019、0.004及0.043),而与年龄、性别、乙型肝炎、肿瘤大小及门脉癌栓无明显相关。HCC组织miR-106b高表达的患者5年生存率明显低于低表达患者(P<0.01),miR-106b高表达是影响HCC患者总体生存的独立风险因素(P<0.05)。结论 miR-106b在HCC组织中表达明显上调,可能参与了HCC的发展过程,有望成为一种新的HCC预后参考指标。

男性不育症患者精浆miR-106b水平变化及意义

目的检测男性不育症患者精浆全基因组微小核糖核酸（miRNAs）表达谱，筛选差异表达的miR-106b，探讨其作为男性不育症分子诊断指标的可行性。方法收集163例男性不育症患者及126例正常生育男性精浆，分别混合；用Solexa测序技术分别检测弱精症、非梗阻性无精症和正常生育男性的混合精浆中592种miRNAs的表达，用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）对表达异常的miR．106b在单个样本中逐一进行验证。结果Solexa测序结果显示，19种miRNAs在不育症患者精浆中的表达量与健康男性相比变化〉2倍，miR．106b在弱精症和无精症患者中分别上调了6．89倍和2．6l倍。qRT-PCR结果表明，弱精症组miR．106b含量[中位数（四分位数）]为719．35（518．49，1183．39）fmol／L，与正常生育组的291．35（148．83，421．56）fmol／L比较，明显升高（U=91．00，P〈0．01）；无精症患者miR-106b的含量则明显降低，为60．07（18．38，292．52））fmol／L（U=195．00，P〈0．01）。ROC曲线分析显示，miR-106b诊断弱精症和无精症的曲线下面积（AUCROC）分别为0．844（95％CI，0．734～0．954）和0．720（95％CI，0．575～0．864）；鉴别弱精症和无精症的AUCROC为0．902（95％CI，0．822～0．982）。结论男性不育症患者精浆miR．106b表达水平与正常生育男性存在明显差异，有望成为男性不育症诊断和鉴别诊断的辅助指标。

miR-106b靶向调控TGF-β/Smad通路对结肠癌细胞侵袭和迁移的促进作用

目的:探讨miR-106b靶向转化生长因子β受体1(TGF-βR1)对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响,阐明miR-106b与TGF-βR1基因的靶向关系及其可能作用机制。方法:选取30例结肠癌患者癌组织和癌旁正常结肠组织、结肠癌SW-480细胞及正常结肠上皮NCM460细胞为研究对象;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各种组织和细胞中miR-106b表达水平及细胞中TGF-βR1 mRNA表达水平。将结肠癌SW-480细胞分为空质粒组(转染miR-NC空质粒)、miR-106b组(转染miR-106b-mimics)、pGL3-TGF-βR1组(转染pGL3-TGF-βR1)和miR-106b-mimics+pGL3-TGF-βR1组(同时转染miR-106b-mimics和pGL3-TGF-βR1);生物信息分析法预测miR-106b与TGF-βR1的靶向作用关系,荧光素酶报告实验检测各组SW-480细胞中荧光素酶活性。Transwell小室实验检测各组SW-480细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测各组SW-480细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组SW-480细胞中TGF-βR1、磷酸化Smad同源物2(p-Smad2)和磷酸化Smad同源物3(p-Smad3)蛋白表达水平。结果:结肠癌组织中miR-106b表达水平高于正常结肠组织,结肠癌SW-480细胞中miR-106b表达水平高于正常结肠上皮NCM460细胞(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果提示TGF-βR1为miR-106b的靶基因。与空质粒组比较,miR-106b组SW-480细胞中TGF-βR1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),侵袭细胞数和细胞划痕愈合率明显升高(P<0.01),细胞中p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与miR-106b组比较,miR-106b-mimics+pGL3-TGF-βR1组SW-480细胞中TGF-βR1 mRNA和蛋白表达表达水平明显升高(P<0.01),侵袭细胞数和细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01),细胞中p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:miR-106b过表达可能通过抑制TGF-β/Smad通路促进结肠癌细胞的侵袭和迁移。

miR-106b在肝癌细胞中激活Wnt通路

目的:探讨肝癌细胞中miR-106b对Wnt/β-catenin信号传导通路的影响。方法:改变肝癌细胞中miR-106b表达,TOP/FOP荧光素酶试验检测Wnt/β-catenin信号通路活性的变化;Real-time PCR方法检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的改变;Western blotting方法检测细胞核内β-catenin表达改变。结果:过表达miR-106b,肝癌细胞中TOP/FOP荧光比值显著增加,其下游6个靶基因mRNA表达量也显著上调。而抑制miR-106b,则下调荧光比值和下游靶基因的表达。同时发现,miR-106b表达,促进QGY-7703细胞核内β-catenin表达增加,而抑制miR-106b,则核内β-catenin下调。结论:miR-106b在肝癌细胞中可激活Wnt/β-catenin信号通路。

MiR-106b对食管癌KYSE150细胞的生长及细胞上皮间质转化的影响

目的研究微小RNA106b(miR-106b)对食管癌KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的影响,为临床治疗食管癌提供新的理论依据。方法用miR-106b慢病毒转染KYSE150细胞,实验分为3组:control组(未转染miR-106b的KYSE150细胞)、miR-NC组(转染随机序列)和miR-106b组(转染miR-106b的KYSE150的细胞)。采用实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测miR-106b和EMT的相关标记物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-Cadherin)的表达情况,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell方法检测细胞的侵袭能力。结果慢病毒稳定转染miR-106b后,食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(P<0.05);qRT-PCR与Western blot检测显示miR-106b组E-Cadherin表达较miR-NC组、control组明显降低(P<0.05);N-Cadherin表达明显升高(P<0.05)。结论 miR-106b能够促进食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,同时能促进上皮间质的转化。

人脑胶质瘤中miR-106b^25基因簇表达的研究

目的:检测胶质瘤细胞系及组织中miR-106b^25基因簇成员miR-106b、miR-93、miR-25的表达情况。方法:运用实时定量PCR的方法检测不同人脑胶质母细胞瘤细胞系及不同病理级别胶质瘤标本中miR-106b^25基因簇成员miR-106b、miR-93和miR-25的表达水平。原位杂交技术检测含不同病理级别及瘤旁正常脑组织的胶质瘤组织芯片中miR-106b^25基因簇成员的表达情况,进而分析该簇miRNAs的表达与胶质瘤病理级别的相关性。结果:以正常脑组织表达量为基准,3种miRNA在所有检测细胞系中均有增高的趋势。收集43例胶质瘤标本中,RT-PCR结果显示,随着肿瘤病理级别的升高,3种miRNA在各组中的平均表达量也逐步升高。其中,miR-106b(F=4.479,P=0.018)和miR-93(F=3.493,P=0.040)各组间的表达差异均有统计学意义。而miR-25表达无明显的统计学差异(F=2.766,P=0.075)。原位杂交结果显示3种miRNA的表达在高级别胶质瘤中的表达量明显高于低级别肿瘤。Spearman等级相关分析表明3种miRNA的表达信号强度分布均与胶质瘤的WHO病理分级呈正相关,在miR-106b、-93、-25中的相关系数分别为rs=0.617(P<0.001)、rs=0.438(P<0.001)、rs=0.463(P<0.001)。结论:miR-106b^25在胶质瘤中表达呈不同程度增高,并与肿瘤分级呈正相关。

miR-106b～25基因簇增强乳腺癌MCF-7肿瘤干细胞相关耐药性

目的探讨乳腺癌细胞中miR-106b～25基因簇过表达与肿瘤耐药形成及乳腺癌干细胞特性的关系。方法利用慢病毒表达载体,在乳腺癌细胞系MCF-7中建立稳定过表达miR-106b～25基因簇,建立MCF-7-mirC细胞系,观察细胞对化疗药物敏感性的改变。利用细胞毒性实验、耐药克隆形成实验、细胞衰老相关β-半乳糖苷酶染色对细胞的耐药状况进行评价;通过流式细胞术和实时定量PCR测定P-gp的表达;通过微球体(mammosphere)培养实验及对乙醛脱氢酶(ALDH1)活性的检测评价MCF-7-mirC肿瘤干细胞特性的变化。结果过表达miR-106b～25基因簇能帮助细胞更快脱离由阿霉素引起的细胞衰老状态,促进耐药克隆的生长。但是,miR-106b～25基因簇对P糖蛋白(P-gp)在mRNA和蛋白水平表达均无影响。对ALDH1的检测及mammo-sphere形成实验结果显示,过表达miR-106b～25基因簇能提高MCF-7细胞中肿瘤干细胞的比例。结论 miR-106b～25基因簇对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的调控不依赖于P-gp表达,至少与促进肿瘤干细胞特性有关。

miR-106b在阿尔茨海默病中的作用机制

目的探讨miR-106b在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）发病中的作用。方法取3月龄和6月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织,进行microRNA芯片的检测;利用real-time PCR检测3、6、9月龄APPswe/PSΔE9小鼠脑组织中miR-106b的表达,对芯片检测结果进行验证;通过构建miR-106b稳定转染细胞系和miR-106b knockdown研究miR-106b与TGFBR2表达之间的关系;构建TGFBR2 3’UTR-荧光素酶报告载体,验证miR-106b是否可以直接调控TGFBR2蛋白的表达;采用Western blot的方法检测APPswe/ΔPSΔE9小鼠和对照小鼠脑组织中TGFBR2蛋白的表达情况。结果 miR-106b在3月龄和6月龄AD模型小鼠脑组织中表达升高,在9月龄模型小鼠脑组织中表达降低;通过体外实验,我们发现miR-106b与TGFBR2蛋白的表达呈负相关;荧光素酶报告实验表明TGFBR2 3’UTR序列中包含miR-106b的结合位点;TGFBR2蛋白在3、6、9、12月龄AD模型小鼠脑组织中表达均降低。结论 miR-106b可能通过调控TGFBR2蛋白的表达影响TGF-β信号通路,从而参与AD的发病。

MiR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌中的表达及生物信息学分析

目的微小RNA(microRNA,miRNA)是一类小分子单链非编码RNA,广泛参与各种生物学过程,与肿瘤、糖尿病、心血管疾病关系密切,miR-106b与胰岛素抵抗糖尿病密切相关。文中检测miR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌中的表达,并对其靶基因进行预测及相关生物信息学分析,为miR-106b靶基因的实验验证提供数据支持,并为深入研究miR-106b的生物学功能和调控机制提供理论指导。方法利用实时PCR技术检测miR-106b在糖尿病db/db小鼠骨骼肌中表达。利用miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析miR-106b序列。把利用TargetScan和StarBase 2种计算方法预测的miR-106b靶基因的交集作为分析的基因集合,分别进行基因本体(gene ontology,GO)注释描述、GO富集分析和生物通路富集分析。结果①miR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌表达显著升高;②miR-106b在各物种之间具有高度保守性;③预测靶基因集合分别富集在代谢调节、生物合成、细胞增殖与凋亡等基本生物学过程和蛋白结合、转录调控等分子功能上(P<0.001)。经典miR-106b预测靶基因集合显著富集于KEGG通路数据库中的Wnt信号通路、mTOR信号通路、TGF-β信号通路和胰岛素信号通路等12个信号转导通路,以及前列腺癌、慢性髓细胞性白血病、黑素瘤等12个疾病通路中(P<0.05)。结论 MiR-106b在db/db小鼠骨骼肌表达升高。miR-106b与多种肿瘤的发生和细胞周期调节有关。miR-106b参与物质代谢等过程的调控,可能在胰岛素抵抗、2型糖尿病的发病中起重要作用。

miR-106b对HeLa细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的:探讨miR-106b对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法:采用实时定量PCR检测转染miR-106b抑制剂和类似物后HeLa细胞中miR-106b的表达,MTT法及流式细胞仪检测转染后HeLa细胞对顺铂的敏感性和凋亡,Western blot检测细胞中Twist1、PTEN、p-AKT(Ser473)蛋白的表达。结果:miR-106b抑制剂可减少HeLa细胞中miR-106b的表达;而miR-106b类似物可增加HeLa细胞中miR-106b的表达。转染miR-106b抑制剂后,细胞对顺铂的敏感性增强、凋亡及PTEN蛋白表达增加,Twist1、p-AKT表达降低(P<0.05);转染miR-106b类似物后,细胞对顺铂的敏感性减弱,凋亡及PTEN蛋白表达降低,Twist1、p-AKT表达增加(P<0.05)。结论:miR-106b可能通过调节Twist1、PTEN和p-AKT的表达影响HeLa细胞对顺铂耐药。

miR-106b-25基因簇在小鼠肝泡型包虫病中的表达

目的探讨miR-106b-25基因簇(miR-93,miR-106b)在肝泡型包虫病中的表达及靶基因预测。方法Balb/c小鼠40只随机分为实验组24只(注射0.1 ml泡球蚴组织匀浆液)、对照组15只(注射0.1 ml生理盐水),正常组1只(不作任何处理)。分别收集实验组和对照组小鼠1月、3月和6月肝脏标本,提取RNA并定量测定miR-93和miR-106b的相对表达量,预测miR-93和miR-106b的靶基因。结果在感染3月实验组小鼠的肝内miR-93和miR-106b相对表达量分别为3.704±1.776和5.901±2.921,明显高于对照组和正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组1月和6月的相对表达量与对照组和正常组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);经生物信息数据库比对后可知p21可能是miR-93、miR-106b共同的目的基因,主要发挥调控细胞周期及参与细胞凋亡等功能。结论miR-93和miR-106b在肝泡型包虫病中的表达差异可能与靶基因p21有关。miR-106b-25基因簇可能参与泡球蚴肝损伤的过程。

miR-106b在胃癌中对BTG3蛋白表达的调控机制

目的探讨BTG3蛋白在胃癌发生、发展中的作用及其在胃癌中表达的调控机制。方法免疫组化检测胃癌、癌旁、癌前病变组织及对照组织石蜡标本中BTG3蛋白表达情况;qRT-PCR检测胃癌细胞BTG3和miR-106b表达,Western blotting检测转染miR-106b模拟剂和miR-106b抑制剂后胃癌细胞中BTG3蛋白表达水平,荧光素酶报告基因实验验证miR-106b在胃癌细胞中对BTG3的调控。结果免疫组化结果:BTG3蛋白在胃癌组表达率32.50%,明显低于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05),且与胃癌肿瘤分期(P=0.041)及分化程度(P=0.021)有显著相关性,H.pylori阳性胃癌组BTG3蛋白表达率明显低于H.pylori阴性胃癌组(P=0.017);qRT-PCR结果提示,胃癌细胞中BTG3低表达,而miR-106b高表达;Westen blotting结果显示,转染miR-106b模拟剂或miR-106b抑制剂的胃癌细胞BTG3蛋白表达水平相应降低或升高,荧光素酶报告实验显示,转染miR-106b模拟剂后野生型BTG3-3′UTR报告质粒荧光素酶活性降低(P<0.001)。结论BTG3在胃癌低表达,与胃癌分期及分化程度相关,与H.pylori感染可能有关,miR-106b在胃癌中高表达,可能通过靶向调控BTG3发挥作用。

子宫内膜癌组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达与患者临床病理分期相关性研究

目的:探究子宫内膜癌患者子宫内膜组织中血管紧张素(1-7)、微小RNA-106b(miR-106b)表达情况及其与患者病理分期间的关系。方法:107例子宫内膜癌患者作为患病组,据其TNM病理分期分为Ⅰ-Ⅱ期组(n=69例),Ⅲ-Ⅳ期组(n=38例),另择20例同期健康子宫内膜组织为健康组,对比两组及不同病理分组患者子宫内膜组织血管紧张素(1-7)、miR-106b表达情况,Pearson检验分析血管紧张素(1-7)、miR-106b和病理分期间的相关性,并以有序多分类逻辑回归分析子宫内膜癌病理分期和血管紧张素(1-7)、miR-106b间的关系。结果:患病组患者血管紧张素(1-7)和miR-106b水平均高于健康组(均P<0.05),Ⅰ-Ⅱ期组血管紧张素(1-7)低于Ⅲ-Ⅳ期组,Ⅰ-Ⅱ期组miR-106b高于Ⅲ-Ⅳ期组(均P<0.05);Pearson检验表明子宫内膜癌患者血管紧张素(1-7)与病理分期呈正相关,miR-106b表达与病理分期呈负相关(均P<0.05);Logistic回归分析表明,子宫内膜癌患者子宫内膜血管紧张素(1-7)、miR-106b表达和其病理分期间关系密切(均P<0.05)。结论:子宫内膜癌患者存在子宫内膜组织血管紧张素(1-7)和miR-106b的异常升高,且其表达和TNM病理分期关系密切,血管紧张素(1-7)与病理分期呈正相关,miR-106b与其呈负相关,临床可将其作为不同病理分期患者的治疗靶点。