高危型急性肺血栓栓塞症患者血清miR-34a-3p和miR-106b-5p的表达及意义

目的探讨高危型急性肺血栓栓塞症(APTE)患者血清微小RNA(miR)-34a-3p和miR-106b-5p的表达和意义。方法选取该院2022年2月至2023年2月收治的85例高危型APTE患者作为研究组;选择同期在该院就诊的80例非高危型APTE患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有研究对象血清miR-34a-3p和miR-106b-5p水平。采用Pearson相关分析高危型APTE患者血清中miR-34a-3p与miR-106b-5p水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析高危型APTE发生的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-34a-3p与miR-106b-5p对高危型APTE的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。高危型APTE患者血清miR-34a-3p水平与miR-106b-5p水平呈正相关(r=0.764,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-34a-3p与miR-106b-5p水平升高是发生高危型APTE的保护因素(P<0.05)。血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平单独及二者联合检测诊断高危型APTE的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.772和0.828,二者联合检测诊断高危型APTE的AUC明显大于血清miR-106b-5p单独检测(Z=2.231,P=0.030),与miR-34a-3p单独检测诊断高危型APTE的AUC比较,差异无统计学意义(Z=1.156,P=0.248)。结论高危型APTE患者血清中miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,二者可能对高危型APTE具有较高的临床诊断价值。

肺动脉平滑肌细胞外泌体上调miR-106b-5p增强肺动脉内皮细胞Warburg效应促进动脉型肺动脉高压的分子机制

目的探讨肺动脉平滑肌细胞与内皮细胞的胞间通讯在促进动脉型肺动脉高压(PAH)疾病进展中的作用机制。方法采集并分离健康个体(HC)和PAH患者外周血浆中的外泌体,并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析。体外缺氧诱导处理原代人肺动脉平滑肌细胞(h PASMCs)和原代肺动脉内皮细胞(hPAECs),分为常氧组和缺氧诱导组。生物信息学分析miR-106b-5p和USP32的序列互作位点。腺病毒转染过表达/敲低h PASMCs内miR-106b-5p,过表达/敲低hPAECs内PKM2。双荧光素酶报告基因分析确证二者的负作用方式。Western blot法测定胞内USP32、PKM2、GLUT1、HK2、LDHA蛋白质的表达水平。结果微阵列测定和差异表达分析结果显示,与HC组相比,PAH组外周血浆中外泌体内miR-106b-5p的水平明显上调。在体外,与常氧组相比,miR-106b-5p的水平在缺氧诱导组hPASMCs上清液外泌体内明显上调,而在h PAECs细胞上清液外泌体中则无此变化。miR-106b-5p负调控USP32的表达。与miR-NC组/Inhibitor-NC组相比,在h PASMCs中miR-106b-5pmimic/miR-106b-5pinhibitor处理后,胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显增强/抑制。与shRNA-NT组/vector组相比,在hPAECs中PKM2 shRNA/PKM2-OE处理后,胞内PKM2、GLUT1、HK2和LDHA蛋白质表达明显抑制/增强(P<0.05)。结论hPASMCs通过外泌体上调miR-106b-5p增强hPAECs胞内Warburg效应,在动脉型肺动脉高压中具有潜在的促进疾病进展的作用。

LncRNA SNHG16通过miR-106b-5p/PHF1轴调节结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)通过miR-106b-5p/聚梳组蛋白家族指蛋白1(PHF1)轴对结直肠癌(CRC)细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CRC组织、相邻正常组织及体外培养的CRC细胞系(LoVo、Caco-2、HCT116和SW480)和正常人结肠上皮细胞(CCD 841 CON)中SNHG16、miR-106b-5p、PHF1表达。将SW480细胞随机分组为对照组、si-NC组、si-SNHG16组、si-SNHG16+inhibitor-NC组、si-SNHG16+miR-106b-5p inhibitor组、si-PHF1组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-106b-5p+pcDNA组、miR-106b-5p+pcDNA-PHF1组。采用qRT-PCR检测各组SW480细胞中SNHG16、miR-106b-5p和PHF1的表达水平。MTT法、流式细胞术和Transwell法分别检测SW480细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16、miR-106b-5p和PHF1之间的相互作用。Western blot检测PHF1的蛋白水平。结果SNHG16和PHF1在CRC组织和细胞中高表达,miR-106b-5p低表达(P<0.05)。选择SNHG16表达最高的SW480细胞进行转染实验。SNHG16的下调降低了SW480细胞的增殖、迁移、侵袭,促进了SW480细胞的凋亡(P<0.05)。miR-106b-5p可与SNHG16相互作用,其抑制剂恢复沉默SNHG16对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。PHF1是miR-106b-5p的靶点,沉默PHF1可抑制SW480细胞的进展(P<0.05)。PHF1过表达恢复了miR-106b-5p对SW480细胞进展的抑制作用(P<0.05)。SNHG16通过下调miR-106b-5p促进SW480细胞中PHF1的表达(P<0.05)。结论LncRNA SNHG16通过靶向调控miR-106b-5p/PHF1轴促进CRC细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制凋亡。

白皮杉醇调控miR-106b-5p/RUNX3轴对宫颈癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探究白皮杉醇(PIC)调控微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/RUNT相关转录因子3(RUNX3)轴对宫颈癌(CC)细胞迁移及侵袭的影响。方法使用不同浓度PIC(0、20、40、80和160μmol/L)培养液处理人CC Hela细胞,通过CCK-8法检测PIC对细胞增殖活力的影响,以确定PIC最佳使用浓度。将Hela细胞分为Control组、PIC组、PIC+NC mimics组、PIC+miR-106b-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组及miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组。实时荧光定量PCR检测各组Hela细胞miR-106b-5p表达水平;Transwell法检测各组Hela细胞迁移及侵袭能力;Western blot法检测各组Hela细胞中RUNX3、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-106b-5p与RUNX3靶向关系。结果Hela细胞增殖活力随着PIC处理浓度的增高而呈现降低趋势(P<0.05),其中80μmol/L PIC对Hela细胞的抑制作用接近半数抑制浓度(IC50),故选择80μmol/L为后续研究的PIC浓度。与Control组相比,PIC组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平均降低,迁移和侵袭细胞数量减少,RUNX3表达水平增加(P<0.05);与PIC+NC mimics组相比,PIC+miR-106b-5p mimics组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多,RUNX3表达水平降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验证实RUNX3为miR-106b-5p的靶基因。与NC inhibitor组相比,miR-106b-5p inhibitor组RUNX3表达水平增加,miR-106b-5p、MMP2与MMP9表达水平降低,迁移和侵袭细胞数量减少(P<0.05);与miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组相比,miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组RUNX3表达水平降低,miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多(P<0.05)。结论PIC通过抑制miR-106b-5p表达、促进RUNX3表达来抑制CC细胞迁移及侵袭。

IL-37调控miR-106b-5p/PTEN抑制肾细胞癌细胞生物学行为

目的:探讨IL-37对肾细胞癌细胞生物学行为的影响和潜在机制。方法:RT-qPCR检测肾细胞癌组织中IL-37mRNA和miR-106b-5p表达。Western blot检测肾细胞癌组织中10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达。将肾细胞癌细胞786-0分为对照组、IL-37(10、50、100 ng/ml)组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p组、IL-37+miR-NC组、IL-37+miR-106b-5p组。采用MTT法、平板克隆实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测786-0细胞增殖、迁移和凋亡能力。荧光素酶实验检测miR-106b-5p与PTEN的靶向关系。结果:肾细胞癌组织中miR-106b-5p表达量显著升高(P<0.05),IL-37 mRNA和PTEN蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与对照组比较,IL-37(10、50、100 ng/ml)组细胞活力、集落形成数、迁移距离、miR-106b-5p表达显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著降低(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05)。与IL-37+miR-NC组比较,IL-37+miR-106b-5p组细胞活力、集落形成数、迁移距离显著升高(P<0.05),凋亡率、PTEN蛋白表达显著降低(P<0.05)。PTEN是miR-106b-5p的靶基因。结论:外源性IL-37可抑制肾细胞癌细胞的增殖和迁移,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能是通过抑制miR-106b-5p/PTEN途径发挥作用。

lncRNA MALAT1调节miR-106b-5p/TLR4轴对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织炎性损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)调节miR-106b-5p/Toll样受体4(TLR4)轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织炎性损伤的影响。方法以气管滴注脂多糖溶液并联合烟熏法构建COPD模型大鼠,随机分成5组(每组12只模型大鼠):模型组、lncRNA MALAT1敲低组、miR-106b-5p antagomir组、阴性对照组、lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组,选12只正常大鼠气管内滴注与造模大鼠等剂量的生理盐水,且不进行烟熏,作对照组,分组干预处理后,检测大鼠肺功能,比较各组用力肺活量(FVC)、呼气峰流值(PEF)、吸气阻力(Ri)、潮气量(VT);实时荧光定量PCR实验检测肺组织lncRNA MALAT1、miR-106b-5p及TLR4 mRNA表达;Giemsa染色对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数;HE染色观察各组大鼠肺组织炎性损伤,并做Holfbauer评分;酶联免疫吸附测定(ELASA)法测量各组大鼠BALF和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-10(IL-10)水平;双荧光素酶报告基因实验检测L2细胞中lncRNA MALAT1对miR-106b-5p、miR-106b-5p对TLR4的靶向调节。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织发生炎性损伤,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。与模型组比较,lncRNA MALAT1敲低组大鼠肺组织肺炎性损伤减轻,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平升高(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05);miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05);阴性对照组大鼠各指标无显著差异(P>0.05)。与lncRNA MALAT1敲低组比较,lncRNA MALAT1敲低+miR-106b-5p antagomir组大鼠肺组织肺炎性损伤加重,FVC、PEF、肺组织miR-106b-5p表达、BALF和血清中IL-10水平降低(P<0.05),Ri、VT、肺组织lncRNA MALAT1及TLR4 mRNA表达、Holfbauer评分、BALF中白细胞计数、BALF和血清中TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05)。L2细胞中lncRNA MALAT1可靶向下调miR-106b-5p,且miR-106b-5p可靶向下调TLR4表达。结论下调lncRNA MALAT1可通过促进miR-106b-5p分泌而降低TLR4表达,进而减少促炎因子产生,增加抗炎因子产生,阻止炎症发生发展,最终减轻COPD大鼠肺组织炎性损伤。

基于miR-106b-5p调控CCND1基因研究幽门螺杆菌促进食管癌细胞增殖的功能机制

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染通过miR-106b-5p/细胞周期蛋白D1(CCND1)途径促进食管癌细胞增殖的作用机制。方法收集手术切除的食管癌组织46份,检测Hp感染情况及miR-106b-5p、CCND1的表达水平。培养食管癌TE-1细胞株,分别给予不处理、Hp感染、转染阴性对照(NC)序列、转染miR-106b-5p模拟物、转染NC序列同时加入Hp菌液、转染miR-106b-5p模拟物同时加入Hp菌液处理,分别作为对照组、Hp组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-NC+Hp组、miR-106b-5p+Hp组,检测细胞增殖情况、细胞周期及miR-106b-5p、CCND1的表达水平。结果Hp阳性的食管癌组织中miR-106b-5p的表达水平低于Hp阴性的食管癌组织,CCND1的表达水平高于Hp阴性的食管癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。食管癌组织中miR-106b-5p与CCND1的表达水平呈负相关(r=-0.414,P=0.004);Hp组TE-1细胞的A_(490)水平、细胞周期S期及G2/M期比例、CCND1的表达水平高于对照组,G0/G1期比例及miR-106b-5p的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106b-5p组TE-1细胞中野生型CCND1报告基因的荧光值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106b-5p+Hp组TE-1细胞的A_(490)水平、细胞周期S期及G2/M期比例、CCND1的表达水平低于miR-NC+Hp组,G0/G1期比例及miR-106b-5p的表达水平高于miR-NC+Hp组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染食管癌细胞促进细胞增殖、加速细胞周期,这一作用与调控miR-106b-5p/CCND1途径有关。

LncRNA HAND2-AS1靶向调控miR-106b-5p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA HAND2-AS1对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用qRT-PCR法检测对照组、骨关节炎组血浆中HAND2-AS1、miR-106b-5p的表达量;采用IL-1β诱导人正常软骨细胞C28/I2建立细胞损伤模型,随机分为con组、IL-1β组、IL-1β+pcDNA组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+miR-106b-5p Inhibitor组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-NC组、IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-106b-5p mimic组;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率;ELISA法检测IL-6、TNF-α的水平;双荧光素酶报告实验检测HAND2-AS1与miR-106b-5p的靶向关系。结果与对照组比较,骨关节炎组患者血浆中HAND2-AS1的表达量降低(P<0.05),miR-106b-5p的表达量升高(P<0.05);与con组比较,IL-1β组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05);与IL-1β+pcDNA组、IL-1β组比较,IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1组细胞IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率降低(P<0.05);HAND2-AS1可靶向调控miR-106b-5p的表达;与IL-1β+anti-miR-NC组比较,IL-1β+miR-106b-5p Inhibitor组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率降低(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05);与IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-NC组比较,IL-1β+pcDNA-HAND2-AS1+miR-106b-5p mimic组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05)。结论HAND2-AS1过表达可通过靶向调控miR-106b-5p的表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

miR-106b-5p靶向调控细胞周期蛋白D1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-106b-5p对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR检测miR-106b-5p在CRC组织与相应的癌旁组织、永生化的肠上皮细胞以及肠癌细胞中的表达量;CCK8实验检测DLD1细胞增殖能力;细胞划痕实验检测DLD1细胞的迁移能力;Transwell实验检测DLD1细胞的侵袭能力;生物信息学预测miR-106b-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)是miR-106b-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-106b-5p与CCND1之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中CCND1的蛋白表达水平。结果:与癌旁组织相比较,miR-106b-5p在结直肠癌组织中表达量降低(P<0.05);与永生化的肠上皮细胞相比较,miR-106b-5p在结直肠癌细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8、细胞划痕实验以及Transwell实验表明,在DLD1细胞中,过表达miR-106b-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);运用Starbase数据库预测miR-106b-5p下游靶基因为CCND1,miR-106b-5p作用于CCND1的3'-UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与RNA结合蛋白免疫沉淀实验验证了miR-106b-5p与CCND1之间的相互作用;CCND1在结直肠癌组织与细胞中明显高表达(P<0.05),在DLD1细胞中过表达miR-106b-5p明显抑制CCND1的表达(P<0.05)。结论:miR-106b-5p在CRC组织和细胞中表达降低,miR-106b-5p通过抑制CCND1表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭。

miR-106b-5p靶向KLF4调控山羊肌内前体脂肪细胞分化

旨在明确miR-106b-5p对山羊肌内前体脂肪细胞分化的影响,并确定这种作用是通过靶向KLF4来实现的。本研究利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,通过脂质体转染技术将miR-106b-5p mimic和miR-106b-5p inhibitor转入体外培养的山羊肌内前体脂肪细胞,油红O染色法从形态学验证miR-106b-5p对脂肪细胞中脂滴积聚的影响,qRT-PCR检测预测的靶标基因KLF4和脂肪分化标志基因的表达情况,利用双荧光素酶报告系统鉴定miR-106b-5p与KLF4的靶标关系。qRT-PCR结果显示,miR-106b-5p在山羊肌内前体脂肪细胞诱导分化第3天时表达量最高。在山羊肌内脂肪细胞中干扰miR-106b-5p后油红O染色显示脂滴聚积减少,过表达miR-106b-5p后脂滴聚积增加。在山羊肌内前体脂肪细胞中转染miR-106b-5p inhibitor后PPARγ表达量显著降低(P<0.05),而KLF4表达量极显著升高(P<0.01);转染miR-106b-5p mimic后LPL和PPARγ表达量极显著升高(P<0.01)。荧光素酶活性试验结果显示,过表达miR-106b-5p可显著抑制KLF4荧光活性。miR-106b-5p通过靶向并负调节KLF4的表达促进山羊肌内脂肪细胞分化。

针刺结合亚低温对脑缺血再灌注损伤大鼠脑缺血侧海马区差异miRNA功用及miR-106b-5p表达的影响

目标:观察针刺结合亚低温对缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠脑缺血侧海马区微小RNA(microRNA,miRNA)的调控作用,探讨针刺结合亚低温促CIRI的修复机制。方法:90只大鼠随机分为正常组、假手术组、造模组,造模组大鼠参照改良版Zea Longa线栓法复制大脑中动脉缺血再灌注模型后再随机分为模型组、针刺组、亚低温组及针刺结合亚低温组,正常组不予处理,针刺组针刺“人中”“百会”“大椎穴”,亚低温组保持72 h鼓膜(31±1)℃与肛温(33±1)℃,针刺结合亚低温组联合针刺与亚低温处理,各组于造模后、72h后行神经功能症状评分,72 h后取材行TTC染色、基因芯片检测及荧光定量PCR检测。结果:与正常组比较,模型组神经功能症状评分、脑梗死面积比、miR-106b-5p表达上升(P<0.01),差异表达4种miRNA,功能涉及调节细胞增殖及细胞凋亡;与模型组比较,亚低温组、针刺组及针刺结合亚低温组神经功能症状评分、脑梗死面积比、miR-106b-5p表达下降(P<0.01或P<0.05),分别激发7、16、23种差异miRNA,功能除涉及调节细胞增殖及细胞凋亡,还可调节神经元分化、轴突延伸、基因表达及炎症反应;与亚低温组比较,针刺结合亚低温组脑梗死面积比、miR-106b-5p表达下降(P<0.05),且各功能差异miRNA数目增加。结论:针刺结合亚低温法通过下调miR-106b-5p或激发miRNA多层次功用等机制,改善CIRI,从而实现脑保护作用。

急性缺血性脑卒中患者血清miR-106b-5p的异常表达及意义

目的检测急性缺血性脑卒中（IS）患者血清miR-106b-5p表达水平,探讨其作为IS分子诊断指标的可行性。方法用miRNA表达谱芯片筛选4例急性IS及10例健康体检者（NC）血清中差异表达的miRNAs。用实时荧光定量PCR法检测53例急性IS患者及50例NC血清中miR-106b-5p的含量。通过分析受试者工作特征曲线（ROC）判断miR-106b-5p在急性IS诊断中的敏感性和特异性。结果 IS组患者血清miR-106b-5p含量（67.13±4.13）fmol/L高于NC组（40.48±2.62）fmol/L,差异有统计学意义（t=5.41,P〈0.01）。miR-106b-5p诊断急性IS的ROC曲线下面积为0.78（95%CI：0.69-0.87）。当cut off值为40 fmol/L时,miR-106b-5p诊断急性IS的敏感性为79.25%,特异性为64.71%。结论 miR-106b-5p在IS患者血清中表达水平升高,与临床症状结合可提高诊断的准确性。

弱精子症和非梗阻性无精子症患者精浆中miR-106b-5p和miR-202-3p的表达检测及临床价值

目的探讨miR-106b-5p和miR-202-3p在弱精子症和非梗阻性无精子症(NOA)患者精浆中的表达情况及其临床价值。方法选取2018年12月至2020年10月于唐山市妇幼保健院就诊的男性不育症患者和精液参数正常的志愿者为研究对象,根据精液检查参数和临床资料不同分为3组:精子浓度>15×10^(6)/ml且精子前向运动(PR)<32%为弱精子症组(n=106),NOA患者为NOA组(n=92),同期精液检查参数正常的男性为对照组(n=119)。提取各组研究对象的精浆miRNA,采用实时定量PCR(qRT-PCR)法分析各组对象精浆miR-106b-5p和miR-202-3p的表达情况;采用受试者工作特征曲线(ROC)评价精浆miR-106b-5p和miR-202-3p对NOA的诊断价值。结果qRT-PCR检测结果显示,NOA组miR-106b-5p和miR-202-3p的表达水平显著低于对照组及弱精子症组(P<0.05),而弱精子症组中两者的表达水平与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。ROC分析结果显示,miR-106b-5p诊断NOA的ROC曲线下面积(AUC)为0.750[95%CI(0.665,0.835),P<0.0001],灵敏度和特异性分别为72.1%和61.2%;miR-202-3p诊断NOA的AUC为0.873[95%CI(0.810,0.936),P<0.0001],灵敏度和特异性分别为88.6%和82.9%。结论NOA患者精浆中miR-106b-5p和miR-202-3p的表达显著降低,二者可能成为NOA临床诊断的新标志物。

儿童原发免疫性血小板减少症miR-106b-5p的表达及其与T细胞的相关性研究

目的 探讨血浆miR-106b-5p在原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)中的表达及其与辅助性T细胞17(T helper cells 17,Th17)、调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)、Th17/Treg的相关性。方法 选取79例ITP患儿(ITP组)和40例健康儿童(对照组)为研究对象。79例ITP患儿根据治疗效果分为完全有效组(40例)、有效组(18例)、无效组(21例)。采用实时荧光定量PCR技术检测miR-106b-5p表达水平,流式细胞技术检测Th17和Treg,计算Th17/Treg,分析血浆miR-106b-5p表达水平与Th17、Treg及Th17/Treg的相关性。结果 ITP组miR-106b-5p、Th17及Th17/Treg水平高于对照组(P<0.05),Treg水平低于对照组(P<0.05)。ITP组患儿治疗后miR-106b-5p、Th17、Th17/Treg水平低于治疗前(P<0.05),Treg水平高于治疗前(P<0.05)。完全有效组miR-106b-5p、Th17、Th17/Treg水平低于有效组和无效组(P<0.05),Treg水平高于有效组和无效组(P<0.05)。相关分析显示,ITP患儿血浆miR-106b-5p表达水平与Th17、Th17/Treg均呈正相关(分别r=0.730、0.816,均P<0.001),与Treg呈负相关(r=-0.774,P<0.001)。结论 ITP患儿存在miR-106b-5p高表达和Th17/Treg比例失衡,在ITP患儿治疗过程中检测miR-106b-5p、Th17、Treg及Th17/Treg水平,对ITP患儿的疗效判断具有较好的指导作用。

miR-93-5p和miR-106b-5p在酒精相关性肝癌中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-93-5p和miR-106b-5p在酒精性肝硬化肝癌(酒精相关性肝癌)患者中的表达水平及其临床意义。方法:选取酒精相关性肝癌患者穿刺组织蜡块10例,根据性别、年龄配对原则选取10例酒精性肝硬化患者穿刺组织蜡块,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测组织中的miR-93-5p和miR-106b-5p表达水平。另收集河北医科大学第四医院2014年1月1日—2016年12月31日住院治疗的酒精相关性肝癌患者资料71例,治疗前抽取患者外周血,q PCR法检测血清中miR-93-5p和miR-106b-5p的表达水平,分析miR-93-5p和miR-106b-5p表达水平与患者临床病理指标和预后的关系。结果:酒精相关性肝癌患者癌组织中miR-93-5p和miR-106b-5p的表达水平显著高于酒精性肝硬化患者(均P<0.01)。miR-93-5p或miR-106b-5p高表达组肿瘤最大径较低表达组显著增加(P<0.01),且临床分期较晚(P<0.01)。全组患者中,年龄<60岁组患者生存率显著优于≥60岁组患者(P=0.03);肿瘤最大径<5 cm组患者生存率显著优于≥5 cm组患者(P=0.01);TNM分期Ⅰ+Ⅱ期患者生存率高于Ⅲ期患者(P=0.02);miR-93-5p或miR-106b-5p高表达组患者生存率较低表达组患者显著降低(P≤0.01);年龄和miR-106b-5p表达水平是患者预后的独立影响因素(P值分别为0.02和0.03)。结论:miR-93-5p和miR-106b-5p有作为酒精相关性肝癌肿瘤标志物的潜力,治疗前检测其表达水平可以预测患者临床病理指标和预后。

circITCH靶向miR-106b-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞IL-6、TNF-α表达和细胞凋亡的影响

目的探讨cirITCH对高糖(HG)诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子IL-6、TNF-α表达和凋亡的影响和可能机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,RT-qPCR法检测细胞中cirITCH和miR-106b-5p表达。分别转染cirITCH过表达载体、miR-106b-5p抑制剂或共转染cirITCH过表达载体与miR-106b-5p模拟物至HK-2细胞后,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-6和TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证cirITCH和miR-106b-5p调控关系。结果HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中circITCH表达降低,而miR-106b-5p表达升高。上调cirITCH或下调miR-106b-5p可减少高糖诱导的HK-2细胞分泌IL-6和TNF-α,并降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达,而增加Bcl-2蛋白表达。circITCH靶向负调控miR-106b-5p表达,上调miR-106b-5p降低上调cirITCH对高糖诱导的HK-2细胞IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡的影响。结论上调cirITCH可能通过靶向负调控miR-106b-5p抑制高糖诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡,cirITCH/miR106b-5p可能为糖尿病肾病的治疗提供了新的分子靶点。

miR-106b-5p对人结直肠癌HT-29细胞迁移和侵袭的影响及作用机制研究

目的:探讨miR-106b-5p对人结直肠癌HT-29细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法:体外培养人结直肠癌HT-29细胞,分为anti-miR-106b-5p组(转染miR-106b-5p inhibitors)、anti-NC组(转染inhibitors control)和Blank组(未转染)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-106b-5p的表达水平,Transwell实验分析各组细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析上皮间质转化(EMT)标志分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-106b-5p是否靶向B细胞转位基因3(BTG3)。结果:与Blank组和anti-NC组相比,anti-miR-106b-5p组HT-29细胞中miR-106b-5p的表达量明显降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数明显减少(P<0.05),上皮相关E-cadherin的表达上调(P<0.05),间充质相关N-cadherin和Vimentin的表达下调(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实miR-106b-5p可靶向负调控BTG3的表达。结论:抑制miR-106b-5p的表达能够抑制人结直肠癌HT-29细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与miR-106b-5p靶向促进BTG3的表达、阻碍EMT进程有关。

miR-106b-5p靶向调控SIRT7/SMAD4信号通路对口腔鳞状细胞癌侵袭和迁移的影响机制探究

该文探讨了miR-106b-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其机制。采用qRT-PCR检测OSCC组织与细胞系中mi R-106b-5p表达情况,将SCC15、OECM1细胞分为Control组、miR-NC组、miR-106b-5p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p、anti-miR-106b-5p+si-NC组、anti-miR-106b-5p+si-SIRT7组,分别检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力, Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、SIRT7、SMAD4蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因实验与RIP实验验证miR-106b-5p与SIRT7的靶向关系。结果显示, miR-106b-5p在OSCC组织与细胞中表达水平升高(P<0.05),过表达mi R-106b-5p可显著促进OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,抑制miR-106b-5p表达可显著抑制OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实, miR-106b-5p与SIRT7存在靶向关系(P<0.05);抑制SIRT7表达可逆转抑制miR-106b-5p表达对OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制作用(P<0.05)。总之, miR-106b-5p在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制miR-106b-5p表达可通过调节SIRT7/SMAD4信号通路,抑制OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。

超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足下肢血管病变的诊断价值

目的:探究超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足(DF)下肢血管病变(LEVD)的诊断价值。方法:选取2021年3月至2023年6月在我院就诊的90例DF患者为研究对象,根据是否合并LEVD分为LEVD组42例和非LEVD组48例。采用实时荧光定量PCR检测DF患者血清miR-106a-5p、miR-20b-5p表达水平,并对所有患者进行下肢血管超声检查。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对DF患者合并LEVD的诊断价值;采用一致性Kappa检验分析超声单独及联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p与金标准的一致性。结果:超声检查结果与金标准诊断结果一致性较高,Kappa值为0.642(P<0.05)。LEVD组血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平显著高于非LEVD组(P<0.05)。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者发生LEVD的曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.757。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p检查结果与金标准诊断结果一致性均为中度,Kappa值分别为0.503、0.492(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平检查结果与金标准诊断结果一致性极高,Kappa值为0.866(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的准确度、阴性预测值显著高于三者单独诊断(P<0.05)。结论:超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的价值较高,值得推广。

血清miR-106b-5p、miR-760联合低剂量螺旋CT诊断早期肺癌的临床价值

目的探讨微RNA(miR)-106b-5p、miR-760在早期肺癌患者血清中的水平以及联合低剂量螺旋CT在诊断早期肺癌中的临床价值。方法收集2022年1月至2023年3月于河北省沧州市人民医院进行治疗的90例早期肺癌患者(肺癌组)作为研究对象, 同时选取同期90例经病理确诊为肺部良性病变(良性肺结节)的患者作为对照组。比较两组患者血清miR-106b-5p、miR-760水平, 对低剂量螺旋CT检查结果进行分析;绘制受试者操作特征曲线, 确定血清miR-106b-5p、miR-760的最佳截断值;四格表分析血清miR-106b-5p、miR-760联合低剂量螺旋CT对早期肺癌的诊断效能。结果肺癌组患者血清miR-106b-5p水平高于对照组(1.39±0.31比1.04±0.30), 血清miR-760水平低于对照组(0.75±0.24比1.02±0.26), 差异均有统计学意义(t=7.70, P<0.001;t=7.24, P<0.001)。miR-106b-5p、miR-760、低剂量螺旋CT诊断早期肺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.83、0.81、0.82, 准确率分别为76.67%、77.22%、81.67%, 敏感性分别为84.44%、81.11%、76.67%, 特异性分别为68.89%、73.33%、86.67%。血清miR-106b-5p、miR-760联合低剂量螺旋CT诊断早期肺癌的AUC为0.96, 准确率为90.00%, 敏感性为94.44%, 特异性为85.56%。三项联合诊断的准确率高于miR-106b-5p、miR-760、低剂量螺旋CT单独诊断(χ^(2)=11.52, P=0.001;χ^(2)=10.72, P=0.001;χ^(2)=5.14, P=0.023);三项联合诊断的敏感性高于miR-106b-5p、miR-760、低剂量螺旋CT单独诊断(χ^(2)=4.77, P=0.029;χ^(2)=7.46, P=0.006;χ^(2)=11.51, P=0.001);三项联合诊断的特异性高于miR-106b-5p、miR-760单独诊断(χ^(2)=7.11, P=0.008;χ^(2)=4.12, P=0.042)。结论早期肺癌患者血清miR-106b-5p水平显著升高, miR-760水平显著降低, miR-106b-5p、miR-760联合低剂量螺旋CT对早期肺癌具有较高的诊断价值。