多模态MRI联合血清miR-125b对乳腺癌新辅助化疗疗效的预测价值

目的:探讨乳腺癌治疗前多模态MRI联合血清miR-125b水平预测新辅助化疗疗效的价值。方法:研究对象为于我院首次接受全程新辅助化疗并行手术切除治疗的90例女性乳腺癌患者。治疗前对患者进行乳腺MRI检查,记录病灶直径、边缘、形状、平扫T_(2)WI图像上病灶内是否高信号和时间信号强度曲线(TIC)类型、表观扩散系数(ADC)、单纯扩散系数(D)、伪扩散系数(D*)及灌注分数(f)。依据Miller-Payne分级标准对病理学反应进行评估,分为病理反应不佳(NR)组和病理反应良好(R)组。结果:乳腺癌患者新辅助化疗后R组52例(57.78%),NR组38例(42.22%),两组的年龄、临床分期、病理类型、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。R组中Ki-67>14%的比例显著高于NR组(P<0.05)。R组与NR组的肿瘤直径、边缘、形状、T_(2)WI信号、D值和D*值差异均无统计学意义(P>0.05)。R组的TIC类型为Ⅲ型的比例显著高于NR组,ADC值显著低于NR组,f值显著高于NR组(P<0.05)。R组的血清miR-125b相对表达量显著低于NR组(t=-11.007,P<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示,较高的ADC值、血清miR-125b水平和较低的f值是乳腺癌新辅助化疗后疗效为NR的独立危险因素(P<0.05)。ADC值、f值、血清miR-125b水平及三者联合预测乳腺癌新辅助化疗疗效的AUC分别为0.863(95%CI:0.799~0.927,P<0.001)、0.819(95%CI:0.744~0.893,P<0.001)、0.832(95%CI:0.755~0.908,P<0.001)和0.958(95%CI:0.929~0.988,P<0.001)。结论:治疗前多模态MRI联合血清miR-125b水平对乳腺癌患者新辅助化疗疗效具有一定的预测价值。

Linc-smad7通过靶向miR-125b/SIRT1轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA smad7(long non-coding RNA smad7,Linc-smad7)对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞侵袭、迁移的作用及其作用机制。方法qRT-PCR检测PC组织及细胞系中Linc-smad7的表达;Transwell小室观察过表达Linc-smad7对PaCa-2细胞迁移、侵袭能力的影响;荧光素酶报告基因检测Linc-smad7对miR-125b,以及miR-125b对沉默调节蛋白1(Sirtuin1,SIRT1)的结合作用;qRT-PCR检测Linc-smad7在PaCa-2细胞中对miR-125b表达的调控作用,qRT-PCR、Western blotting检测miR-125b对SIRT1表达的调控作用。结果Linc-smad7在PC组织及细胞系中明显升高;Linc-smad7表达上调的PaCa-2细胞迁移、侵袭能力增强,miR-125b表达下降;miR-125b表达上调后,SIRT1表达显著下降;荧光素酶报告基因结果提示Linc-smad7直接靶向结合miR-125b,miR-125b直接结合SIRT1;过表达Linc-smad7或是下调miR-125b表达可逆转SIRT1沉默对PaCa-2细胞侵袭、迁移能力的影响。结论Linc-smad7通过miR-125b/SIRT1轴促进PaCa-2细胞侵袭和迁移。

肺癌患者miR-125b、miR-145、miR-146a表达与肺部感染的关系探讨

目的:探讨肺癌患者miR-125b、miR-145、miR-146a表达与肺部感染的关系。方法:选取2021年1月-2023年4月于我院进行手术治疗的163例肺癌患者为研究对象,根据术后3d是否发生肺部感染将患者分为感染组(28例)和未感染组(135例)。比较2组术后24h血清miR-125b、miR-145、miR-146a水平,分析术后24h血清各指标水平与临床有差异指标的相关性,Logistic回归分析术后发生肺部感染的危险因素,ROC分析术后24h血清各指标联合检测对术后发生肺部感染的预测价值。结果:2组合并糖尿病、合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分比较,差异显著(P<0.05);术后24h感染组血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达水平高于未感染组,且各指标水平与合并糖尿病、合并COPD、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分均呈正相关(P<0.05);合并糖尿病、合并COPD、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分、术后24h血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达水平为肺癌患者术后发生肺部感染的危险因素,且血清各指标联合预测术后发生肺部感染的AUC为0.817,大于各单项指标(P<0.05)。结论:肺癌患者术后并发肺部感染人群血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达上调,其联合检测可作为早期预测术后是否发生肺部感染的有效指标。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

血清miR-873、miR-125b-2表达水平联合检测对早期异位妊娠诊断与治疗效果的评估价值

目的 探索早期异位妊娠(EP)孕妇的血清miR-873、miR-125b-2表达水平,及两者联合检测对患者诊断与治疗效果的评估价值。方法 选取2019年1月至2021年1月榆林市第一医院收治的110例EP患者作为观察组,其中治疗后有效组90例,无效组20例,另选取100例同时期来我院体检正常妊娠孕妇作为对照组。检测并比较观察组孕妇治疗前和对照组的血清miR-873、miR-125b-2水平,同时比较有效组和无效组患者的血清miR-873、miR-125b-2水平。采用Pearson相关性分析血清miR-873与miR-125b-2水平的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-873、miR-125b-2及两者联合诊断EP和评估治疗效果的价值。结果 观察组患者治疗前的血清miR-873、miR-125b-2的相对表达量分别为0.46±0.14、2.10±0.58,明显低于对照组的0.82±0.22、4.14±0.83,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,有效组患者的血清miR-873、miR-125b-2的相对表达量分别为0.76±0.20、3.71±0.64,明显高于无效组的0.50±0.21、1.72±0.51,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,血清miR-873与miR-125b-2水平呈正相关(r=0.573,P<0.05);经ROC分析结果显示,miR-873以0.59为截断值时诊断EP的灵敏度为80.45%,特异度为78.13%,ROC曲线下面积为0.884 (95%CI:0.843~0.933,P=0.001);miR-125b-2以2.86为截断值时诊断EP的灵敏度为85.91%,特异度为82.08%,ROC曲线下面积为0.892 (95%CI:0.854~0.939,P=0.001);两者联合诊断的灵敏度为93.36%,特异度为89.25%,ROC曲线下面积为0.943 (95%CI:0.902~0.971,P=0.001),明显高于miR-873或miR-125b-2单独检测(P<0.05)。结论 miR-873与miR-125b-2在EP患者血清中表达水平显著降低,两者联合检测可提高对EP患者诊断和治疗效果的评估价值。

miR-125b调控动物肌肉生长发育的研究进展

miR-125b属于miR-125家族,是一种小的、高度保守的ncRNA,在多种生物学功能中发挥关键作用。miR-125b对动物肌肉组织(包括骨骼肌、心肌和平滑肌)发育的调控受到广泛关注。对miR-125b的生物起源和生物学功能以及在动物肌肉组织发育的调控进行了总结,并着重关注其对动物骨骼肌、心肌、平滑肌细胞发育过程及疾病的分子机制研究,为miR-125b在肌肉疾病的治疗和畜禽产肉性能的分子改良提供新的参考依据。

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨miR-125b-5p调控RAB3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过qRT-PCR检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞h FOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达明显下调(P<0.05)。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p表达量升高,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05);miR-125b-5p表达量降低,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05),而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断(P<0.05)。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

miR-125b通过靶向B7-H4对再生障碍性贫血T细胞活化的影响

目的:探讨miR-125b在再生障碍性贫血(AA)患者T细胞活化中的作用及分子机制。方法:纳入山东省滨州医学院附属医院从2018年1月至2021年10月30例AA患者,15名健康个体作为健康对照(HC)组,分离外周血单个核细胞(PBMC),RT-q PCR检测PBMC中miR-125b、B7-H4 mRNA的水平。免疫磁珠分选AA患者和健康对照者naive T细胞和non-naive T细胞,检测miR-125b、B7-H4 mRNA的水平。转染慢病毒LV-NC inhibitor、LV-miR-125b inhibitor至细胞中,流式细胞术检测T细胞活化。双荧光素酶报告基因实验检测miR-125b和B7-H4之间的靶向关系。RT-q PCR和Western blot检测miR-125b、CD40L、ICOS、IL-10 mRNA和B7-H4蛋白的水平。结果:与HC组比较,AA患者PBMC中miR-125b表达上调(P<0.05),B7-H4 mRNA表达下调(P<0.05),CD4+CD69+T细胞和CD8+CD69+T细胞比例较高(P<0.05)。AA患者的naive T细胞和non-naive T细胞中miR-125b的表达均显著上调,B7-H4 mRNA表达下调(P<0.05),且non-naive T细胞较naive T细胞更明显(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-125b inhibitor组中miR-125b的表达显著降低(P<0.05),PBMC中CD4+和CD8+T细胞上CD69的表达水平显著降低(P<0.05),miR-125b inhibitor和B7-H4-3′UTR-WT共转染后荧光素酶活性显著升高(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-125b inhibitor组细胞中B7-H4 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05)。与miR-125b inhibitor+shRNA组比较,miR-125b inhibitor+sh-B7-H4组CD4+和CD8+T细胞上的CD69表达水平显著升高(P<0.05),CD40L、ICOS和IL-10mRNA水平亦显著升高(P<0.05)。结论:miR-125b可能通过靶向B7-H4促进AA患者T细胞活化。

miR-125b对肝脏血管新生调控作用的实验研究

目的探讨miR-125b对肝脏血管新生的调控作用,为肝纤维化的防治提供新的靶点。方法用miR-125b模拟物和抑制物对人肝窦内皮细胞进行转染,而后使用qRT-PCR和ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF)、分化抗原簇31(CD31)、血管性血友病因子(vWF)、Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)、层粘连蛋白(LN)的mRNA和蛋白表达,荧光探针检测一氧化氮(NO)的表达;扫描电镜检测人肝窦内皮细胞表面窗孔的改变;血管形成实验观察各组血管新生情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-125b与VEGF的靶向关系。结果qRT-PCR和ELISA检测显示与阴性对照组相比,miR-125b模拟物转染后VEGF、CD31、vWF、CollagenⅣ、LN的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),而miR-125b抑制物转染后VEGF、CD31、vWF、CollagenⅣ、LN的mRNA和蛋白表达增加(P<0.05);荧光探针检测显示与阴性对照组相比,miR-125b模拟物转染后NO平均荧光强度表达下降(P<0.05),而miR-125b抑制物转染后NO平均荧光强度表达增加(P<0.05);电镜检测发现与阴性对照组相比,miR-125b模拟物转染后人肝窦内皮细胞表面窗孔数量增加(P<0.05),而miR-125b抑制物转染后人肝窦内皮细胞表面窗孔数量下降(P<0.05);血管形成实验检测显示与阴性对照组相比,miR-125b模拟物转染后血管新生数量下降(P<0.05),而miR-125b抑制物转染后血管新生数量增加(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示与阴性对照组相比,VEGF野生型转染miR-125b模拟物相对荧光强度表达降低(P<0.05),而VEGF突变型转染miR-125b模拟物相对荧光强度表达降低(P>0.05)。结论miR-125b能够抑制肝脏血管新生,从而发挥抗肝纤维化的作用,为慢性肝病防治和新药研发提供新的参考。

circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究

目的:探究circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究。方法:将SCC9/DDP细胞分为SCC9/DDP组、si-NC组、si-VAPA组、miR-125b组、miR-NC组、pcDNA-VAPA组、miR-HOXA7组。qRT-PCR检测细胞中circVAPA和miR-125b表达,MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞耐药、增殖、侵袭和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中HOXA7蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证VAPA、miR-125b和HOXA7的靶向关系。结果:和HOK相比,SCC9和SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显升高,miR-125b表达明显降低(P<0.05);且SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显高于SCC9细胞,miR-125b表达明显低于SCC9细胞(P<0.05)。和SCC9/DDP组相比,si-VAPA组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加(P<0.05)。和miR-NC组相比,miR-125b组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加(P<0.05)。靶向关系结果显示,miR-125b组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.05);si-VAPA组细胞中miR-125b表达明显高于si-NC组(P<0.05),miR-125b组细胞中HOXA7表达明显低于miR-NC组(P<0.05)。和miR-125b组相比,pcDNA-VAPA组和miR-HOXA7组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05)。结论:低表达circVAPA可通过调控miR-125b/HOXA7轴来逆转口腔癌细胞化疗耐药,抑制口腔癌化疗耐药细胞增殖、侵袭并诱导凋亡。

LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制研究

目的 探讨LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制。方法 购置SD大鼠40只,随机取大鼠10只为对照组,剩余大鼠30只采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成心肌梗死模型,于第14日取材组织并完成HE染色;观察组随机分为模型组、空载组和MALAT1沉默组,利用慢病毒转染干扰LncRNA-MALAT1序列(LV-shMALAT1)及其空载(LV-Control)观察治疗大鼠的干预效果。采用实时荧光PCR法和Western Blot检测LncRNA MALAT1、miR-125b-5p和PDCD4表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)。结果 观察组EF及左室短轴缩短率低于对照组(P<0.05);MALAT1沉默组EF及左室短轴缩短率高于模型组及空载组(P<0.05);HE染色结果显示,模型组和空载组心肌纤维断裂,细胞核紊乱、肥大、间隙增宽、染色加深;MALAT1沉默组心肌纤维断裂有所改善,细胞排列相对整齐;MALAT1沉默组LncRNA MALAT1 mRNA、miR-125b-5p及蛋白表达低于模型组与空载组(P<0.05);PDCD4mRNA及蛋白表达高于模型组与空载组(P<0.05);模型组与空载组炎性因子TNF-α和IL-1β水平差异无统计学意义(P>0.05);MALAT1沉默组炎性因子TNF-α和IL-1β水平低于模型组与空载组(P<0.05)。结论 心力衰竭大鼠中LncRNA-MALAT1表达显著下调,能竞争性结合miR-125b-5p,使其解除对PDCD4的抑制,促进PDCD4表达,从而抑制炎性反应。

miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR检测miR-125b-2-3p在人永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞中的表达。荧光定量PCR检测上调和下调miR-125b-2-3p表达转染效率。实验分为control组(未处理)、mimics NC组(Lip 2000+mimics NC)、miR-125b-2-3p mimics组(Lip 2000+miR-125b-2-3p mimics)、inhibitor NC组(Lip 2000+inhibitor NC)和miR-125b-2-3p inhibitor组(Lip 2000+miR-125b-2-3p inhibitor)。CCK-8实验、细胞集落形成实验和活细胞/死细胞双染色实验检测细胞增殖的情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;DAPI细胞核染色检测细胞核的形态变化;线粒体膜电位检测细胞早期凋亡情况。结果与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌细胞中miR-125b-2-3p的表达较高(P<0.05)。与control组和mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组miR-125b-2-3p表达上调(P<0.01);与control组和inhibitor NC组相比,miR-125b-2-3p inhibitor组miR-125b-2-3p表达下调(P<0.01)。与mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组细胞增殖能力较强(P<0.01),细胞凋亡能力较弱(P<0.01),线粒体膜电位较高(P<0.01);相较于inhibitor NC组,miR-125b-2-3p inhibitor组细胞增殖能力被抑制(P<0.01),细胞凋亡能力较强(P<0.01),核固缩核碎裂较多,线粒体膜电位较低(P<0.05)。结论下调miR-125b-2-3p能抑制鼻咽癌细胞HNE1的增殖,促进细胞的凋亡。

BMSCs分泌的miR-125b通过外泌体途径对体外成骨分化的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)分泌的miR-125b是否通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。方法提取BMSCs原代,通过流式细胞仪进行其表面抗原(CD45、CD90)的鉴定来确定纯度,分别进行成骨诱导,茜素红染色检测成骨效果;成脂诱导,油红染色检测成脂效果。检测P3代上清液外泌体标志性蛋白CD9、CD63的表达量,电镜下观察确定外泌体提取成功。成骨诱导后的第0、7、14、21天进行qRT-PCR测定外泌体内miR-125b及细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runx2的mRNA的表达量。BMSCs侵染miR-125b模拟物及模拟物阴性对照剂,miR-125b抑制剂及其抑制物阴性对照剂,转染后验证转染效率。转染后五组(前四组+生理盐水空白对照组)细胞上清液外泌体提取,提取后与BMSCs共培养,继续成骨诱导48 h,qPCR及蛋白质免疫印迹(Western Blot)分别测定BMSCs细胞ALP、Runx2、miR-125b的表达量。结果(1)成功分离的BMSCs向成脂、成骨分化。(2)成骨诱导分化期间,P3代BMSCs的成骨标志基因ALP mRNA表达量明显增加,Runx2基因的表达趋势与其相同,而在上清液所提取的外泌体中,miR-125b趋势相反,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)转染后共培养组中模拟物组较模拟物阴性对照组其成骨标志基因ALP、Runx2 mRNA和ALP蛋白表达显著下降,而抑制组较抑制剂阴性对照组其成骨基因ALP、Runx2 mRNA和ALP蛋白表达显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMSCs来源miR-125b能通过外泌体途径抑制其体外成骨分化。

黄芩素经由miR-125b-5p/IRF4轴进而促进喉癌细胞死亡并抑制其侵袭的机制研究

目的:探讨黄芩素诱导人喉癌细胞凋亡的机制。方法:选取AMC-HN-8细胞为研究对象,以不同浓度黄芩素(0、10、30、100、300μmol/L)作用于细胞,采用CCK-8法检测其半数抑制浓度(IC50);采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bax、cleaved-caspase-3、Cyto-c、IRF4蛋白表达;RTqPCR检测miR-125b-5p和IRF4的表达;双荧光素酶报告基因验证Targetscan预测结果(miR-125b-5p与IRF4-3'UTR的结合);凋亡和坏死抑制剂探索黄芩素诱导喉癌细胞的死亡方式。再将AMCHN-8分为:空白组、黄芩素(IC50)、miR-125b-5p inhibitor组、黄芩素+inhibitor NC组、黄芩素+miR-125b-5p inhibitor组,细胞侵袭和克隆形成实验分别检测细胞的侵袭和增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:黄芩素以剂量依赖性方式抑制AMC-HN-8细胞的增殖,其IC50值为47.31μmol/L;与空白组相比,47.31μmol/L的黄芩素诱导了细胞凋亡和抑制了细胞侵袭,同时上调了miR-125b-5p的表达,抑制了IRF4的mRNA和蛋白的水平。荧光素酶结果表明,相对于NC模拟物(mimic)组,miR-125b-5p mimic能够抑制IRF4-3'UTR启动子的活性。黄芩素以凋亡的方式诱导喉癌细胞死亡。另外,47.31μmol/L的黄芩素与miR-125b-5p inhibitor联合影响AMC-HN-8细胞行为学的结果表明,与空白组比较,黄芩素组细胞克隆数减少,侵袭能力减弱,凋亡增加;miR-125b-5p inhibitor组细胞克隆数增加,侵袭能力加强,凋亡减少;黄芩素+inhibitor NC组则与黄芩素一致,inhibitor NC对细胞行为学没有显著影响;黄芩素+miR-125b-5p inhibitor组细胞克隆、侵袭、凋亡则介于黄芩素组与miR-125b-5p inhibitor组之间。结论:黄芩素能抑制AMC-HN-8细胞增殖,其机制可能与miR-125b-5p靶向抑制IRF4的表达,诱导促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、Cyto-c,抑制凋亡抑制蛋白Bcl-2从而诱导细胞凋亡有关。

Circ_LAS1L/miR-125b/Sfrp5通路抑制急性心肌梗死后心肌纤维化

目的探讨circ_LAS1L/miR-125b/Sfrp5通路在心肌纤维化(MF)过程中的作用。方法心肌成纤维细胞转染后加入AngⅡ刺激培养;构建急性心肌梗死(AMI)小鼠模型后,尾静脉分别注射miR-125b antagomir、miR-125b antagomir加Sfrp5 siRNA、Sfrp5过表达质粒。CCK-8检测细胞存活力,Transwell检测细胞迁移,荧光定量PCR、Western blot、ELISA和免疫组化检测相关因子的表达水平,Masson染色检测小鼠MF水平。结果AngⅡ抑制circ_LAS1L和Sfrp5的表达,而促进miR-125b、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P均<0.05)。circ_LAS1L过表达、miR-125b inhibitors和Sfrp5过表达均能明显减弱AngⅡ的促存活、活化和迁移作用(P均<0.05)。miR-125b、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ在AMI小鼠中的表达上调,而Sfrp5表达减少(P均<0.05)。抑制miR-125b表达和上调Sfrp5表达均能显著减少梗死面积和胶原纤维数量,并下调α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达;同时抑制miR-125b和Sfrp5表达时,梗死面积和纤维化水平并无改善(P均>0.05)。结论miR-125b/Sfrp5通路上调可抑制小鼠急性心肌梗死后纤维化。

MiR-125b-5p靶向BACH1增强β-地中海贫血单核细胞吞噬活性的机制研究

目的探讨miR-125b-5p通过靶向BACH1增强β-地中海贫血(β-thal)单核细胞吞噬活性的机制。方法收集健康儿童与HbE型β-thal(HbE/β-thal)患儿外周血,流式细胞仪分析外周血单核细胞(PBMC)表型,qRT-PCR法测定miR-125b-5p的表达量,分析HbE/β-thal患儿miR-125b-5p表达与病情及激活表型的关系,双荧光素酶报告基因系统检验miR-125b-5p与BACH1的靶向关系,western blot检测BACH1与HO-1的表达量,在正常PBMC中同时上调miR-125b-5p与BACH1,在HbE/β-thal来源PBMC中同时下调miR-125b-5p与BACH1,测定PBMC吞噬活性的变化。结果2组儿童PBMC数量没有明显差异(P>0.05),但HbE/β-tha患儿CD14hiCD16+表型PBMC比例增加(P<0.05),HbE/β-thal患儿PBMC内miR-125b-5p表达量显著高于健康儿童(P<0.05),miR-125b-5p的表达与RBC计数、Hb含量、Hct、MCH均呈负相关(P<0.05),而与CD14hiCD16+比例呈现正相关(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统与western blot证实miR-125b-5p能靶向抑制BACH1表达(P<0.05),且与正常儿童比较,HbE/β-thal患儿PBMC中BACH1表达量降低(P<0.05),而HO-1表达量升高(P<0.05);miR-125b-5p上调可以显著增强健康儿童来源PBMC的吞噬能力(P<0.05),而过表达BACH1能逆转该情况(P<0.05),相反,抑制miR-125b-5p能降低具有高吞噬能力的HbE/β-thal患儿来源PBMC的吞噬活性(P<0.05),而抑制BACH1能逆转该现象(P<0.05)。结论miR-125b-5p通过抑制BACH1来增强HbE/β-thal患儿PBMC吞噬活性。

黄芩苷通过CDH5/miR-125b-5p信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移机制研究

目的 探讨黄芩苷抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管内皮细胞增殖和迁移机制。方法 采用TargetScan、miRTarBase软件预测miR-125b-5p与血管内皮钙粘蛋白(CDH5)的靶向关系;MTT法评价黄芩苷对Hcy诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用;细胞划痕(Transwell)实验检测VSMCs的迁移能力;蛋白印迹(Western Blot)检测黄芩苷对CDH5、抗增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测miR-125b-5p的表达;双荧光素酶报告基因检测技术验证miR-125b-5p与CDH5的靶向关系。结果 黄芩苷呈浓度依赖性抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移,并降低细胞增殖相关蛋白CDH5、PCNA、Cyclin D1的表达;黄芩苷可诱导miR-125b-5p基因的表达。双荧光素酶实验结果显示, miR-125b-5p类似物可显著抑制野生型CDH5-UTRwt的荧光酶活性,而对突变型CDH5-UTRmut无活性。结论 黄芩苷通过CDH5/miR-125b-5p信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移。

miR-125b通过靶向抑制Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化

目的:研究miR-125b是否通过调控其预测的靶基因Smad4表达而调节骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化。方法:构建Smad4 3'-UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-125b对Smad4 3'-UTR-荧光素酶活性的影响;分离培养人骨髓MSCs,在MSCs中转染miR-125b mimics并进行成骨诱导,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测Smad4表达水平;Smad4 siRNA转染MSCs并进行成骨诱导,通过检测碱性磷酸酶(AKP)活性及RUNX2 mRNA表达水平变化考察Smad4下调对MSCs成骨分化的影响。结果:双荧光素报告检测显示miR-125b能特异性地与Smad4 mRNA的3'-UTR结合,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。过表达miR-125b能抑制MSCs成骨分化过程中Smad4表达水平。干扰Smad4表达能抑制AKP活性及RUNX2 mRNA表达水平,它能部分模拟miR-125b调控MSCs成骨分化的功能。结论:miR-125b通过抑制靶基因Smad4的表达调控MSCs成骨分化。

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P<0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P<0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

MiR-125b表达与子宫内膜癌细胞侵袭及迁移的研究

目的:探讨微小RNA分子miR-125b的表达与子宫内膜癌临床特性的关系及其对子宫内膜癌株HEC-1B细胞的侵袭及迁移能力的影响。方法:收集2012年11月至2013年11月期间四川省妇幼保健院30例子宫内膜癌患者组织标本,利用Taqman Quantitative Realtime-PCR技术检测miR-125b在不同临床分期及不同转移状态的子宫内膜癌患者肿瘤组织中的相对表达情况,分析其表达与子宫内膜癌临床分期及远处转移间的关系;恢复HEC-1B细胞内miR-125b的表达,分别运用Transwell体外侵袭及迁移实验检测其对HEC-1B细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:Ⅳ期子宫内膜癌组织中miR-125b的表达较Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期肿瘤组织均明显下降,无远处转移患者组织中miR-125b表达较伴有转移患者表达明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明,miR-125b组穿膜细胞数(184±35个)较未处理组(410±45个)和对照组(398±40个)明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);侵袭实验结果表明,过表达miR-125b组穿膜细胞细胞数(123±32个)同样明显少于未处理组(220±30个)和对照组(215±35个),差异有统计学意义(P<0.01)。进一步的蛋白印迹结果显示,过表达miR-125b后细胞中基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达下降。结论:miR-125b的低表达与子宫内膜癌有无远处转移及临床病理分期有关,恢复其在HEC-1B细胞中的表达能够明显抑制细胞体外侵袭及迁移,这可能与抑制细胞中MMP-13表达有关。