血清miR-873、miR-125b-2表达水平联合检测对早期异位妊娠诊断与治疗效果的评估价值

目的 探索早期异位妊娠(EP)孕妇的血清miR-873、miR-125b-2表达水平,及两者联合检测对患者诊断与治疗效果的评估价值。方法 选取2019年1月至2021年1月榆林市第一医院收治的110例EP患者作为观察组,其中治疗后有效组90例,无效组20例,另选取100例同时期来我院体检正常妊娠孕妇作为对照组。检测并比较观察组孕妇治疗前和对照组的血清miR-873、miR-125b-2水平,同时比较有效组和无效组患者的血清miR-873、miR-125b-2水平。采用Pearson相关性分析血清miR-873与miR-125b-2水平的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-873、miR-125b-2及两者联合诊断EP和评估治疗效果的价值。结果 观察组患者治疗前的血清miR-873、miR-125b-2的相对表达量分别为0.46±0.14、2.10±0.58,明显低于对照组的0.82±0.22、4.14±0.83,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,有效组患者的血清miR-873、miR-125b-2的相对表达量分别为0.76±0.20、3.71±0.64,明显高于无效组的0.50±0.21、1.72±0.51,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,血清miR-873与miR-125b-2水平呈正相关(r=0.573,P<0.05);经ROC分析结果显示,miR-873以0.59为截断值时诊断EP的灵敏度为80.45%,特异度为78.13%,ROC曲线下面积为0.884 (95%CI:0.843~0.933,P=0.001);miR-125b-2以2.86为截断值时诊断EP的灵敏度为85.91%,特异度为82.08%,ROC曲线下面积为0.892 (95%CI:0.854~0.939,P=0.001);两者联合诊断的灵敏度为93.36%,特异度为89.25%,ROC曲线下面积为0.943 (95%CI:0.902~0.971,P=0.001),明显高于miR-873或miR-125b-2单独检测(P<0.05)。结论 miR-873与miR-125b-2在EP患者血清中表达水平显著降低,两者联合检测可提高对EP患者诊断和治疗效果的评估价值。

miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR检测miR-125b-2-3p在人永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞中的表达。荧光定量PCR检测上调和下调miR-125b-2-3p表达转染效率。实验分为control组(未处理)、mimics NC组(Lip 2000+mimics NC)、miR-125b-2-3p mimics组(Lip 2000+miR-125b-2-3p mimics)、inhibitor NC组(Lip 2000+inhibitor NC)和miR-125b-2-3p inhibitor组(Lip 2000+miR-125b-2-3p inhibitor)。CCK-8实验、细胞集落形成实验和活细胞/死细胞双染色实验检测细胞增殖的情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;DAPI细胞核染色检测细胞核的形态变化;线粒体膜电位检测细胞早期凋亡情况。结果与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌细胞中miR-125b-2-3p的表达较高(P<0.05)。与control组和mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组miR-125b-2-3p表达上调(P<0.01);与control组和inhibitor NC组相比,miR-125b-2-3p inhibitor组miR-125b-2-3p表达下调(P<0.01)。与mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组细胞增殖能力较强(P<0.01),细胞凋亡能力较弱(P<0.01),线粒体膜电位较高(P<0.01);相较于inhibitor NC组,miR-125b-2-3p inhibitor组细胞增殖能力被抑制(P<0.01),细胞凋亡能力较强(P<0.01),核固缩核碎裂较多,线粒体膜电位较低(P<0.05)。结论下调miR-125b-2-3p能抑制鼻咽癌细胞HNE1的增殖,促进细胞的凋亡。

血清miR-125b-2-3p对闭合性颅脑损伤预后判断的价值分析

目的寻找闭合性颅脑损伤预后血清标志物,为闭合性颅脑损伤预后判断提供依据。方法对基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)GSE123336数据集进行生物信息分析,筛选出有潜在研究价值的miRNA-miR-125b-2-3p。利用mirPATH数据库进行富集分析和miRNA靶基因预测。判断可能的失调机制。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-125b-2-3p在我院临床搜集的闭合性颅脑损伤病人血清样本中的表达。分析miR-125b-2-3p是否存在差异表达以及与格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS)和格拉斯哥预后评分(Glasgow Outcome Scale,GOS)有无相关性。结果GEO GSE123336数据库中top3差异基因为miR-125b-2-3p、miR-10b-5p、miR-99b-5p。差异miRNA的富集分析提示,miR-125b-2-3p与MAPK通路和Sphingolipid(鞘磷脂类)信号通路关联紧密。miR-125b-2-3p表达量在头部击打后(23.79±24.96)较头部击打前(5.35±6.28)上升,差异有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR结果证实,miR-125b-2-3p在我院样本中表达量随着颅脑损伤严重程度增加而增加(轻型1.02±0.36、中型2.23±0.53、重型3.33±0.90、特重型3.74±1.06),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125b-2-3p表达量和病人GCS评分负相关,和损伤严重程度显著正相关。miR-125b-2-3p血清表达量与GOS分级呈现负相关(Ⅰ/Ⅱ4.12±0.74,Ⅲ3.45±0.51,Ⅳ2.40±0.66,Ⅴ1.34±0.71,P<0.05)。结论血清miR-125b-2-3p是闭合性颅脑损伤潜在的预后标记物。血清miR-125b-2-3p高表达预示着不良预后。

基于转录组学筛选miR-125b-2敲除小鼠睾丸发育相关基因及信号通路的研究

旨在研究miR-125b-2对动物精子发生和成熟的调节作用,挖掘与miR-125b-2有密切靶向关系的功能基因及信号通路。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建了miR-125b-2基因敲除小鼠模型。将3只野生型(WT)小鼠和3只miR-125b-2敲除型(KO)小鼠睾丸的总RNA样分别制成样品池,采用Illumina HiSeq TM 4000平台进行转录组测序(RNA-seq),将组装得到的Unigene序列注释到Nr和KEGG数据库中注释,并进行睾丸差异表达基因(DEGs)聚类分析。结果显示,在WT和KO组睾丸组织中共筛选出324个DEGs,其中被GO注释的180个DEGs显著富集到80个包括精子染色质缩合在内的生物学过程,22个含有线粒体内膜预序列转位酶复合物在内的细胞组成以及41个包括核糖体结构组成在内的分子功能。同时KEGG分析显示,所有被注释的DEGs显著富集到74条信号通路,其中排前3位极显著的信号通路依次为:RNA转运、信使RNA监视通路和合硒化合物新陈代谢。综上表明,敲除miR-125b-2主要影响睾丸中与精子染色质结构和线粒体功能相关基因的表达,其中与精子发生相关的3个基因Papolb、Tssk 1和Slc 22a14表达均显著上调。结果为进一步研究miR-125b-2对精子生成的功能调节提供基础。

基于生物信息学分析肝硬化与miR-125a-5p和miR-125b-5p的相关研究

目的:基于生物信息学分析肝硬化与miR-125a-5p和miR-125b-5p的功能富集通路以及关键基因,以期为肝硬化诊断与治疗提供新思路。方法:通过miRDB、miRWalk和TargetScan数据库获得miR-125a-5p和miR-125b-5p的靶基因,从GEO数据库获得肝硬化相关数据集GSE14323和GSE25097,筛选正常组织样本和肝硬化组织样本差异表达基因,将GSE25097和GSE14323所得差异表达基因取交集,获得肝硬化数据集的共表达基因,将miR-125a-5p和miR-125b-5p的靶基因与肝硬化数据集GSE14323和GSE25097的共表达基因取交集得到核心基因,对核心基因进行GO和KEGG富集以及构建PPI网络互作图。结果:GO富集分析中主要在糖氧代谢过程和线粒体外膜的活性中富集,KEGG富集分析中主要在脂肪酸生物合成和类固醇生物代谢等中富集,通过构建PPI网络互作图,得到miR-125a-5p和miR-125b-5p与肝硬化相关的4个关键基因NPL、H6PD、KIAA0319L和RFX5。结论:得到的相关通路以及4个关键基因NPL、H6PD、KIAA0319L和RFX5以期为肝硬化发病机制以及肝硬化发生发展过程中相关分子靶点和早期筛查的手段提供新思路,从而指导疾病诊疗计划和管理。

雷公藤甲素通过调节miR-181b-5p/SMAD2抑制结直肠癌细胞的增殖和转移

目的识别雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖,迁移和侵袭的影响并识别其作用机制。方法CCK-8和EdU检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖的影响;使用Transwell检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响。qRT-PCR检测结直肠癌细胞中miR-181b-5p和SMAD2 mRNA的表达;使用Western blot实验检测结直肠癌细胞中SMAD2蛋白的表达。结果CCK-8实验表明随着雷公藤甲素浓度增加,结直肠癌细胞存活率逐渐降低。EdU实验表明雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞增殖率。Transwell实验显示雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭数目。qRT-PCR结果证实雷公藤甲素可显著促进miR-181b-5p的表达并抑制SMAD2 mRNA和蛋白表达。此外,过表达SMAD2可部分逆转雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论雷公藤甲素以浓度依赖的方式抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-181b-5p/SMAD2轴有关。

雷公藤甲素通过miR-34b-5p/Notch1轴抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并诱导其铁死亡

目的:探究雷公藤甲素(TPL)通过miR-34b-5p调控Notch1表达对骨肉瘤U2OS细胞铁死亡影响的机制。方法:常规培养U2OS细胞,将其分为对照组、TPL(10μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+Fer-1(铁死亡抑制剂,20μmol/L)组、miR-NC组、miR-34b-5p组、miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组、TPL(10μmol/L)+anti-miR-34b-5p组、anti-miR-34b-5p+Fer-1(20μmol/L)组。qPCR法、CCK-8法、铁离子检测试剂、DHE-荧光探针和WB法分别检测各组U2OS细胞中miR-34b-5p的表达、增殖能力、Fe2+水平、ROS水平以及铁死亡相关蛋白(GPX4、SLC7A11及Notch1蛋白)的表达,双萤光素酶报告基因实验验证miR-34b-5p与Notch1的靶向结合关系。结果:TPL可促进U2OS细胞中miR-34b-5p表达,Fer-1和anti-miR-34b-5p则抑制miR-34b-5p的表达(均P<0.05)。TPL明显抑制U2OS细胞的增殖、GPX4、SLC7A11、Notch1蛋白的表达、增加细胞中Fe2+和ROS的含量,Fer-1可逆转TPL对U2OS细胞的作用(均P<0.05)。过表达miR-34b-5p与TPL对U2OS细胞的作用相似(均P<0.05)。miR-34b-5p可靶向结合Notch1(均P<0.05)。miR-34b-5p抑制剂可明显抑制TPL对U2OS细胞的影响,Fer-1可增强miR-34b-5p抑制剂的作用(均P<0.05)。结论:TPL可抑制U2OS细胞的增殖能力并促进其铁死亡,其作用机制可能与miR-34a-5p靶向调节Notch1表达有关。

癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p和miR-7及FGL2表达特征的关系

目的探讨癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p、miR-7及纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达特征的关系。方法选取接受治疗的癫痫患者124例作为观察组(癫痫发作轻度患者36例、中度患者51例及重度患者37例,脑电图轻度异常患者65例、中度异常35例及重度异常24例),同时选取体检健康者120例作为对照组;比较观察组和对照组、不同程度癫痫发作患者、不同程度脑电图异常的癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2表达差异,分析癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2与疾病程度和脑电图异常的相关性。结果观察组miR-130b-3p、FGL2高于对照组(P<0.05),miR-7低于对照组(P<0.05);癫痫发作重度患者miR-130b-3p、FGL2高于轻度和中度患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度患者(P<0.05);全面性癫痫发作患者miR-130b-3p、FGL2高于部分性发作患者(P<0.05);脑电图重度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度和中度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度异常患者(P<0.05);脑电图中度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度异常患者(P<0.05);癫痫患者miR-130b-3p及FGL2与疾病严重程度、脑电图异常程度呈正相关(P<0.05),miR-7与疾病严重程度、脑电图异常程度呈负相关(P<0.05)。结论癫痫患者血液miR-130b-3p及FGL2表达上调,而miR-7下调,3项指标均与与癫痫患者疾病严重程度、脑电图异常程度存在相关关系。

超声弹性成像联合血清miR-26b-5p及环氧化酶-2检测对早期子宫肌瘤的临床诊断价值

目的:探讨超声弹性成像联合血清微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)、环氧化酶-2(COX-2)检测对早期子宫肌瘤的诊断价值。方法:选取2020年10月至2022年9月在无锡联勤保障中心第九〇〇医院诊断的228例疑似子宫肌瘤患者,以病理切片检查结果为“金标准”,将其分为阳性组(124例)和阴性组(104例),两组均行超声弹性成像检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者血清miR-26b-5p表达水平,酶联免疫吸附法检测血清COX-2水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),分析血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值,采用四表格法分析超声弹性成像以及超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值。结果:经病理切片检查,228例患者中子宫肌瘤阳性124例,阴性104例;超声弹性成像结果显示阳性117例,阴性111例,超声弹性成像检查诊断的灵敏度为74.19%,特异度为75.96%,准确率为75.00%。阳性组患者血清miR-26b-5p水平明显低于阴性组,COX-2水平明显高于阴性组,两组比较差异有统计学意义(t=4.519、5.601,P<0.05)。血清miR-26b-5p诊断子宫肌瘤的AUC为0.749,灵敏度为95.97%,特异度为46.15%,最佳截断值为1.10;血清COX-2诊断子宫肌瘤的AUC为0.835,灵敏度为66.13%,特异度为84.62%,最佳截断值为40.58 mg/L;超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断的灵敏度为93.55%,特异度为86.54%,准确率为90.35%,与单独诊断比较差异有统计学意义(χ^(2)=23.158、17.169,P<0.05)。结论:超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断早期子宫肌瘤具有较高的效能。

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨miR-125b-5p调控RAB3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过qRT-PCR检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞h FOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达明显下调(P<0.05)。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p表达量升高,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05);miR-125b-5p表达量降低,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05),而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断(P<0.05)。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制研究

目的 探讨LncRNA-MALAT1/miR-125b-5p/PDCD4分子轴参与心力衰竭发生发展的机制。方法 购置SD大鼠40只,随机取大鼠10只为对照组,剩余大鼠30只采用结扎大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死后形成心肌梗死模型,于第14日取材组织并完成HE染色;观察组随机分为模型组、空载组和MALAT1沉默组,利用慢病毒转染干扰LncRNA-MALAT1序列(LV-shMALAT1)及其空载(LV-Control)观察治疗大鼠的干预效果。采用实时荧光PCR法和Western Blot检测LncRNA MALAT1、miR-125b-5p和PDCD4表达水平;采用酶联免疫吸附试验测定炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)。结果 观察组EF及左室短轴缩短率低于对照组(P<0.05);MALAT1沉默组EF及左室短轴缩短率高于模型组及空载组(P<0.05);HE染色结果显示,模型组和空载组心肌纤维断裂,细胞核紊乱、肥大、间隙增宽、染色加深;MALAT1沉默组心肌纤维断裂有所改善,细胞排列相对整齐;MALAT1沉默组LncRNA MALAT1 mRNA、miR-125b-5p及蛋白表达低于模型组与空载组(P<0.05);PDCD4mRNA及蛋白表达高于模型组与空载组(P<0.05);模型组与空载组炎性因子TNF-α和IL-1β水平差异无统计学意义(P>0.05);MALAT1沉默组炎性因子TNF-α和IL-1β水平低于模型组与空载组(P<0.05)。结论 心力衰竭大鼠中LncRNA-MALAT1表达显著下调,能竞争性结合miR-125b-5p,使其解除对PDCD4的抑制,促进PDCD4表达,从而抑制炎性反应。

黄芩素经由miR-125b-5p/IRF4轴进而促进喉癌细胞死亡并抑制其侵袭的机制研究

目的:探讨黄芩素诱导人喉癌细胞凋亡的机制。方法:选取AMC-HN-8细胞为研究对象,以不同浓度黄芩素(0、10、30、100、300μmol/L)作用于细胞,采用CCK-8法检测其半数抑制浓度(IC50);采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Bax、cleaved-caspase-3、Cyto-c、IRF4蛋白表达;RTqPCR检测miR-125b-5p和IRF4的表达;双荧光素酶报告基因验证Targetscan预测结果(miR-125b-5p与IRF4-3'UTR的结合);凋亡和坏死抑制剂探索黄芩素诱导喉癌细胞的死亡方式。再将AMCHN-8分为:空白组、黄芩素(IC50)、miR-125b-5p inhibitor组、黄芩素+inhibitor NC组、黄芩素+miR-125b-5p inhibitor组,细胞侵袭和克隆形成实验分别检测细胞的侵袭和增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果:黄芩素以剂量依赖性方式抑制AMC-HN-8细胞的增殖,其IC50值为47.31μmol/L;与空白组相比,47.31μmol/L的黄芩素诱导了细胞凋亡和抑制了细胞侵袭,同时上调了miR-125b-5p的表达,抑制了IRF4的mRNA和蛋白的水平。荧光素酶结果表明,相对于NC模拟物(mimic)组,miR-125b-5p mimic能够抑制IRF4-3'UTR启动子的活性。黄芩素以凋亡的方式诱导喉癌细胞死亡。另外,47.31μmol/L的黄芩素与miR-125b-5p inhibitor联合影响AMC-HN-8细胞行为学的结果表明,与空白组比较,黄芩素组细胞克隆数减少,侵袭能力减弱,凋亡增加;miR-125b-5p inhibitor组细胞克隆数增加,侵袭能力加强,凋亡减少;黄芩素+inhibitor NC组则与黄芩素一致,inhibitor NC对细胞行为学没有显著影响;黄芩素+miR-125b-5p inhibitor组细胞克隆、侵袭、凋亡则介于黄芩素组与miR-125b-5p inhibitor组之间。结论:黄芩素能抑制AMC-HN-8细胞增殖,其机制可能与miR-125b-5p靶向抑制IRF4的表达,诱导促凋亡蛋白Bax、cleaved-caspase-3、Cyto-c,抑制凋亡抑制蛋白Bcl-2从而诱导细胞凋亡有关。

MiR-125b-5p靶向BACH1增强β-地中海贫血单核细胞吞噬活性的机制研究

目的探讨miR-125b-5p通过靶向BACH1增强β-地中海贫血(β-thal)单核细胞吞噬活性的机制。方法收集健康儿童与HbE型β-thal(HbE/β-thal)患儿外周血,流式细胞仪分析外周血单核细胞(PBMC)表型,qRT-PCR法测定miR-125b-5p的表达量,分析HbE/β-thal患儿miR-125b-5p表达与病情及激活表型的关系,双荧光素酶报告基因系统检验miR-125b-5p与BACH1的靶向关系,western blot检测BACH1与HO-1的表达量,在正常PBMC中同时上调miR-125b-5p与BACH1,在HbE/β-thal来源PBMC中同时下调miR-125b-5p与BACH1,测定PBMC吞噬活性的变化。结果2组儿童PBMC数量没有明显差异(P>0.05),但HbE/β-tha患儿CD14hiCD16+表型PBMC比例增加(P<0.05),HbE/β-thal患儿PBMC内miR-125b-5p表达量显著高于健康儿童(P<0.05),miR-125b-5p的表达与RBC计数、Hb含量、Hct、MCH均呈负相关(P<0.05),而与CD14hiCD16+比例呈现正相关(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统与western blot证实miR-125b-5p能靶向抑制BACH1表达(P<0.05),且与正常儿童比较,HbE/β-thal患儿PBMC中BACH1表达量降低(P<0.05),而HO-1表达量升高(P<0.05);miR-125b-5p上调可以显著增强健康儿童来源PBMC的吞噬能力(P<0.05),而过表达BACH1能逆转该情况(P<0.05),相反,抑制miR-125b-5p能降低具有高吞噬能力的HbE/β-thal患儿来源PBMC的吞噬活性(P<0.05),而抑制BACH1能逆转该现象(P<0.05)。结论miR-125b-5p通过抑制BACH1来增强HbE/β-thal患儿PBMC吞噬活性。

黄芩苷通过CDH5/miR-125b-5p信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移机制研究

目的 探讨黄芩苷抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管内皮细胞增殖和迁移机制。方法 采用TargetScan、miRTarBase软件预测miR-125b-5p与血管内皮钙粘蛋白(CDH5)的靶向关系;MTT法评价黄芩苷对Hcy诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用;细胞划痕(Transwell)实验检测VSMCs的迁移能力;蛋白印迹(Western Blot)检测黄芩苷对CDH5、抗增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测miR-125b-5p的表达;双荧光素酶报告基因检测技术验证miR-125b-5p与CDH5的靶向关系。结果 黄芩苷呈浓度依赖性抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移,并降低细胞增殖相关蛋白CDH5、PCNA、Cyclin D1的表达;黄芩苷可诱导miR-125b-5p基因的表达。双荧光素酶实验结果显示, miR-125b-5p类似物可显著抑制野生型CDH5-UTRwt的荧光酶活性,而对突变型CDH5-UTRmut无活性。结论 黄芩苷通过CDH5/miR-125b-5p信号通路抑制Hcy诱导的VSMCs增殖和迁移。

circFADS2靶向miR-125a-5p调控MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的机制

目的:探究circFADS2靶向miR-125a-5p调控帕金森病(PD)细胞炎症反应和凋亡的机制。方法:100μmol/L MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD模型,分为Con组、PD组、PD+pcDNA组、PD+pcDNA-circFADS2组、PD+anti-miR-NC组、PD+anti-miR-125a-5p组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-NC组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-125a-5p组。qRT-PCR检测circFADS2和miR-125a-5p表达;ELISA检测IL-1β、TNF-α含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circFADS2与miR-125a-5p的靶向关系。结果:与Con组相比,PD组circFADS2表达降低,miR-125a-5p表达、凋亡率、IL-1β、TNF-α含量、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达升高(P<0.05)。circFADS2过表达或干扰miR-125a-5p表达可降低MPP+诱导的SK-N-SH细胞凋亡率、IL-1β、TNF-α含量、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达(P<0.05)。circFADS2靶向负调控miR-125a-5p表达,上调miR-125a-5p表达逆转了circFADS2过表达对PD细胞炎症反应和凋亡的作用。结论:circFADS2过表达通过降低miR-125a-5p表达抑制PD细胞炎症反应和凋亡。

母体血清miR-125b-2直接检测应用于无创产前诊断的相关研究

目的通过孕妇血清miR-125b-2直接检测,探讨其应用于无创产前诊断的可能性。方法应用茎环RT-PCR技术直接检测96例正常孕妇和46例异常孕妇血清miR-125b-2水平,通过比较平均Cq值观察各组间miR-125b-2水平的差异。结果 96例正常孕妇血清miR-125b-2平均Cq值为34.11,妊娠早期、中期、晚期平均Cq值分别为34.70,33.64,33.97。妊娠中、晚期平均Cq值低于妊娠早期,miR-125b-2在妊娠中、晚期的水平高于妊娠早期(P<0.05),而妊娠中、晚期之间没有明显差异(P>0.05);唐氏筛查高危孕妇平均Cq值(32.61)低于正常妊娠中期孕妇平均Cq值(33.64),其miR-125b-2水平高于正常妊娠中期孕妇(P<0.05);最终确诊为异常的孕妇平均Cq值(31.90)低于正常孕妇(34.11),其血清miR-125b-2水平明显高于正常孕妇(P<0.05);此外,异位妊娠孕妇平均Cq值(30.56)低于正常孕妇(34.11),其血清miR-125b-2的水平也明显高于正常孕妇(P<0.05)。结论母体外周循环的miRNAs可能成为无创产前诊断的另一类新的生物标记物。

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P<0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P<0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

过氧化氢处理的脐静脉血管内皮细胞miR-125b-5p水平降低但Smad4表达增加

目的探讨miR-155、miR-125b-5p、miR-210及其靶基因蛋白在氧化应激血管内皮细胞中的表达和作用。方法分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并通过免疫荧光染色法检测内皮细胞Ⅷ因子相关抗原、流式细胞术检测CD31的表达进行鉴定;将分离的HUVEC进行原代培养,采用子痫前期患者血清和H2O2建立氧化应激的血管内皮细胞的模型,实验分为正常妊娠血清组、子痫前期血清组、0μmol/L H2O2组、100μmol/L H2O2组;实时定量PCR检测造模后24 h细胞内miR-155、miR-125b-5p、miR-210的水平;Western blot法检测细胞内miR-125b-5p靶基因Smad4蛋白的水平;免疫荧光染色法检测细胞内Smad4蛋白的表达;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与0μmol/L H2O2组相比,100μmol/L H2O2处理的内皮细胞miR-125b-5p显著降低、Smad4蛋白显著增加、细胞凋亡率和坏死率显著增加。与正常孕妇血清组相比,子痫前期血清处理的内皮细胞凋亡率和坏死率显著增加,但miR-125b-5p及Smad4蛋白变化不明显。结论 H2O2处理的HUVEC miR-125b-5p降低,Smad4蛋白增加。

子痫前期患者血清及尿液中miR-125a/b-5p的表达及相关临床研究

目的了解miR-125a/b-5p在子痫前期患者外周血血清、尿液中的表达,探讨外周循环miR-125a/b-5p在子痫前期发病中的作用。方法收集子痫前期患者(n=20)及正常妊娠组(n=20)的外周血血清及尿液,miR-125a/b-5p的表达采用基于茎环的qRT-PCR检测,同时结合临床资料进行分析。结果血清miR-125b-5p在子痫前期组中的表达与正常妊娠组比较显著降低,差异有统计学意义(Z=-2.272,P=0.023);血清miR-125a-5p在两组间比较,差异无统计学意义(Z=-0.622,P=0.547);尿液miR-125a/b-5p在两组间比较,差异均无统计学意义(Z=-0.663,-0.189,P>0.05);在子痫前期患者中,舒张压与尿miR-125b-5p存在负相关(r=-0.513,P=0.021);正常妊娠者中,尿素氮与血清miR-125b-5p呈正相关(r=0.472,P=0.036);收缩压与尿液miR-125b-5p,尿液miR-125a-5p呈正相关(r=0.526,0.502,P=0.017,0.024)。结论血清miR-125b-5p的降低与子痫前期的发病相关。

卵巢癌组织中miR-125B-5p通过调控己糖激酶-2降低肿瘤能量代谢和抑制肿瘤细胞增殖

背景与目的细胞内能量代谢异常是肿瘤的十大特征之一,微小RNA(microRNA,miRNA)可能通过调节有氧糖酵解相关酶的表达来介导有氧糖酵解,从而调控肿瘤细胞代谢和增殖。本研究对卵巢癌患者肿瘤组织中miR-125B-5p和己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)的表达水平与肿瘤能量代谢和增殖的关系进行了初步研究。方法采用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qRCR)法检测了10例原发性卵巢癌患者的癌组织和配对的癌旁组织中HK2的mRNA和miR-125B-5p的表达水平。采用RT-qRCR法检测了人正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV3中miR-125B-5p的表达水平。采用MTT法检测转染了miR-125B-5p模拟物(miR-125B-5p mimics)或模拟对照miRNA(miR-125B-5p NC)的SKVO3细胞在不同时间点的增殖情况。采用RT-qPCR法检测转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞中HK2的mRNA表达水平。采用流式细胞术分析转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞的凋亡情况。检测转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞中葡萄糖、乳酸和ATP水平。结果与配对的癌旁组织相比,在卵巢癌组织中miR-125B-5p表达下调,HK2的mRNA表达上调(P<0.05)。与转染miR-125B-5p NC的SKVO3细胞相比,在miR-125B-5p mimics转染12、36和72 h后,过表达miR-125B-5p的SKVO3细胞的增殖率显著降低(P<0.05),细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡升高(P<0.05),HK2的mRNA表达下调(P<0.05),葡萄糖相对消耗量、乳酸相对生成量和ATP浓度降低(P<0.05)。结论miR-125B-5p通过负调控HK2降低卵巢癌细胞的糖酵解,从而抑制肿瘤细胞生长。