miR-146a-5p靶向SMAD4抑制人前列腺癌细胞系PC-3增殖和侵袭

目的探究miR-146a-5p可否靶向调控SMAD4对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法RT-qPCR检测前列腺癌组织及各细胞系中miR-146a-5p的表达量,分析其表达与Gleason评分的关系;MTT实验、BrdU实验、集落生成实验、划痕实验、Transwell小室法及裸鼠成瘤实验分析miR-146a-5p对前列腺癌细胞增殖、成瘤、迁移及侵袭等能力的影响;RT-qPCR检测组织SMAD4的表达量,分析其与miR-146a-5p表达量的关系;荧光素酶报告基因实验分析miR-146a-5p与SMAD4的靶向关系,功能回复实验验证miR-146a-5p/SMAD4信号轴在前列腺癌中的作用;Western blot检测miR-146a-5p及SMAD4对细胞核内SMAD2/SMAD3复合体表达量的影响,并通过荧光素酶报告基因实验及染色质免疫共沉淀实验探究miR-146a-5p/SMAD4/SMAD2/SMAD3信号轴对TIM3的靶向调控作用。结果miR-146a-5p在前列腺癌组织及细胞系中低表达(P<0.05),其表达量与Gleason评分负相关(P<0.05),且在PC-3细胞中的表达量最低;miR-146a-5p抑制PC-3细胞的增殖及侵袭能力(P<0.05);SMAD4为miR-146a-5p的下游靶基因;SMAD4促进SMAD2/SMAD3复合体入核并靶向激活TIM3。结论miR-146a-5p靶向调控SMAD4抑制PC-3细胞的增殖及侵袭,SMAD2/SMAD3/TIM3信号通路可能为其下游机制。

MiR-146a靶向调控Smad4抑制非小细胞肺癌细胞系A549的增殖及迁移

目的:探究miR-146a对非小细胞肺癌细胞系A549的增殖及迁移的影响,进一步研究miR-146a的靶向基因及其作用。方法:miR-146a mimics转染非小细胞肺癌A549细胞;CCK8及Transwell检测过表达miR-146a对非小细胞肺癌细胞系A549增殖及迁移的影响;利用Targetscan预测及荧光素酶报告基因系统确认miR-146a可能结合的靶基因;反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western Blot检测过表达miR-146a对靶基因的影响。结果:过表达miR-146a显著抑制非小细胞肺癌细胞系A549增殖(P<0.001)及迁移(P<0.001);miR-146a结合的潜在靶基因为Smad4;过表达miR-146a显著上调其靶基因Smad4基因的表达(P<0.05)。结论:miR-146a通过上调其靶基因Smad4抑制非小细胞肺癌细胞系A549的增殖及迁移。

MiR-146a-5p targeting SMAD4 and TRAF6 inhibits adipogenensis through TGF-β and AKT/mTORC1 signal pathways in porcine intramuscular preadipocytes

Background: Intramuscular fat(IMF) content is a vital parameter for assessing pork quality. Increasing evidence has shown that microRNAs(miRNAs) play an important role in regulating porcine IMF deposition. Here, a novel miRNA implicated in porcine IMF adipogenesis was found, and its effect and regulatory mechanism were further explored with respect to intramuscular preadipocyte proliferation and differentiation.Results: By porcine adipose tissue miRNA sequencing analysis, we found that miR-146a-5p is a potential regulator of porcine IMF adipogenesis. Further studies showed that miR-146a-5p mimics inhibited porcine intramuscular preadipocyte proliferation and differentiation, while the miR-146a-5p inhibitor promoted cell proliferation and adipogenic differentiation. Mechanistically, miR-146a-5p suppressed cell proliferation by directly targeting SMAD family member 4(SMAD4) to attenuate TGF-β signaling. Moreover, miR-146a-5p inhibited the differentiation of intramuscular preadipocytes by targeting TNF receptor-associated factor 6(TRAF6) to weaken the AKT/mTORC1 signaling downstream of the TRAF6 pathway.Conclusions: MiR-146a-5p targets SMAD4 and TRAF6 to inhibit porcine intramuscular adipogenesis by attenuating TGF-β and AKT/mTORC1 signaling, respectively. These findings provide a novel miRNA biomarker for regulating intramuscular adipogenesis to promote pork quality.

MiR-146a 在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中作用机制的研究

目的：探讨长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化中 miR-146a 的表达情况，以及上调 miR-146a 表达对其靶基因 Smad4及细胞光老化的影响。方法以10 J/cm2 UVA 照射 HSF （UVA 照射组），分别在0、3、7、14 d 提取 RNA，实时定量 PCR 检测 miR-146a 的表达量。通过慢病毒转染上调 miR-146a 的表达（miR-146a 过表达组），在7 d、14 d 后用荧光显微镜观察转染效率，并通过实时定量 PCR 验证细胞内miR-146a 表达量。空白对照组为正常培养的 HSF（不做任何处理），miR-146a 过表达组为慢病毒转染 HSF 后，再用 UVA 照射。MTT 法检测空白对照组、UVA 照射组、miR-146a 过表达组、miR-146a 过表达组细胞增殖吸光度（A 值），实时定量 PCR 检测各组细胞内老化相关基因 p53、p16和 p21 mRNA 的表达，Western 印迹法检测各组细胞内 Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。结果重复测量的方差分析显示，随培养时间的延长，UVA 照射组和空白对照组 miR-146a 的表达量均逐渐下降（F =213.840， P 〈0.01）；UVA 照射组表达量低于空白对照组（F =52.55，P 〈0.01），且照射时间越长，下调越明显。慢病毒转染HSF 后，细胞内均有较高的荧光表达，miR-146a 过表达组在第7天（10.31±0.17）与第14天时（9.65±0.19）的miR-146a 表达量差异无统计学意义（P 〉0.05），但较空白对照组（分别为8.33±0.13和7.86±0.11）显著增高，组间差异有统计学意义（F =42.49，P 〈0.01）。析因设计的方差分析显示，UVA 照射对细胞增殖活性有抑制作用（P 〈0.01），UVA 照射组、UVA ＋ miR-146a 组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a 过表达组（P 〈0.01）；慢病毒转染上调 miR-146a 的表达对细胞增殖活性也有影响（P 〈0.01），但 miR-146a 过表达组与空白对照组差异无统计学意义（P 〉0.05），UVA ＋ miR-146a 组显著高于 UVA 照射组（P 〈0.01）。实时定量 PCR 和 Western 印迹法结果显示，UVA 照射可上调 p21、p53、p16 mRNA 的表达（均 P 〈0.01），同时对细胞内 Smad4蛋白表达有促进作用（P 〈0.01）；UVA 照射组、UVA ＋ miR-146a 组 p21、p53、p16 mRNA 和 Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a 过表达组（均 P 〈0.01），而 miR-146a 过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义（均 P 〉0.05）， UVA ＋ miR-146a 组均显著低于 UVA 照射组（均 P 〈0.01）。结论在 UVA 诱导光老化的 HSF 中，miR-146a 的表达受到抑制，上调其表达能够抑制 Smad4的表达，促进光老化细胞增殖，起到抗细胞光老化的作用。