miR-146a G>C基因多态性与中国原发性肝癌患者遗传易感性的Meta分析

目的:对国内外公开发表的中国原发性肝癌与miR-146a G>C(rs2910164)遗传易感性的相关文献进行Meta分析。方法:检索Pub Med数据库、Cochrane Library数据库、中国学术期刊全文数据库(CNKI)和万方数据库获得文献。检索时限为自建库至2017年3月。采用Stata 12.0软件进行Meta分析,计算各基因型的合并比值比(OR)及95%置信区间(CI)。结果:共纳入9篇病例对照研究,累计病例组3 937例,健康对照组5 025例,研究间存在中等强度的异质性。固定效应的合并OR值及95%CI在显性模型[(GG+GC)/CC]和隐性模型[GG/(GC+CC)]分别为1.26(1.12,1.41)(P=0.00)和1.23(1.12,1.34)(P=0.00),随机效应等位模型(G/C)为1.17(1.10,1.25)(P=0.00)。Meta回归分析发现显性模型样本的地域来源与合并OR值正相关。亚组分析表明,在中东人群和西部人群及采用PCR-RFLP分型时,miR-146a G>C与原发性肝癌的遗传易感性密切相关;而在西南人群和采用非PCR-RFLP(Non-PCR-RFLP)分型时无明显相关性。三个基因型的敏感性分析结果稳定,也没有发表偏倚。结论:miR-146a G>C与原发性肝癌的遗传易感性密切相关,携带G等位的个体有更高的发病风险,该位点基因多态性具有成为原发性肝癌的生物标记物的潜能。

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与GPRC5A-3′UTR-WT+miR-204 NC组比较,GPRC5A-3′UTR-WT+miR-204 mimic组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论 过表达miR-204可能靶向下调GPRC5A基因表达,抑制人结肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭行为。

广西人群miR-365基因rs121224C/G和rs178553A/G位点多态性分布

目的 探讨miR-365基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs121224C/G和rs178553A/G在广西地区健康人群中的分布,并与其他不同种族人群进行比较。方法 采用SNPscan高通量技术检测294例广西地区健康人rs121224C/G和rs178553A/G位点分型,统计分析其基因型和等位基因频率,并与人类基因组单体型图(HapMap)公布的HapMap-CEU(欧洲人)、HapMap-CHB(北京汉族人)、HapMap-JPT(日本人)、和HapMap-YRI(非洲人)进行数据比较,统计分析其差异。结果 广西人群miR-365基因rs121224C/G位点存在CC(27.9%)、GC(49.0%)和GG(23.1%)3种基因型及C(52.4%)和G(47.6%)2种等位基因,其基因型和等位基因频率与CEU、YRI比较,差异均有统计学意义(P值分别为0.015和0.004;P值均<0.001),但与CHB、JPT比较,差异均无统计学意义(P值分别为0.504和0.441;P值分别为0.149和0.067)。rs178553A/G存在AA(22.4%)、AG(49.0%)和GG(28.6%)3种基因型及A(46.9%)和G(53.1%)2种等位基因,其基因型和等位基因频率与CEU、JPT和YRI比较,差异均有统计学意义(P值均<0.001;P值分别为0.046和0.018;P值均<0.001),但同CHB比较,差异无统计学意义(P值分别为0.508和0.921)。此外,在不同性别组间对比发现两位点的基因型和等位基因频率差异无统计学意义(P值分别为0.185和0.466;P值分别为0.130和0.532)。结论 miR-365基因rs121224C/G和rs178553A/G位点多态性在不同人群间存在不同程度的差异。

miR-520a-5p靶向TGR5调控H9c2细胞中高糖引起的心肌肥大

目的探讨高糖引起H9c2细胞心肌肥大的潜在机制。方法通过高糖处理H9c2细胞后,检测其表面积大小以及心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平。通过高通量测序检测高糖处理H9c2细胞表达的差异mi RNA。过表达差异mi RNA后检测心脏肥大标志物ANP的表达水平。通过mi RDB在线分析mi RNA的潜在底物。结果高糖可使心肌细胞H9c2的大小增加(P<0.05)、表面积增加(P<0.05)。高糖处理后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P<0.05)。敲低mi R-520a-5p后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均下降(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积减少(P<0.05)。过表达mi R-520a-5p后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积增加(P<0.05)。mi R-520a-5p靶向TGR5的3端非编码区(P<0.05)。过表达mi R-520a-5p后,TGR5表达水平下降。敲低TGR5后,TGR5表达水平上升。敲低TGR5后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积增加(P<0.05)。过表达TGR5后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均下降(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积减少(P<0.05)。结论高糖处理后,mi R-520a-5p的表达水平上升,mi R-520a-5p通过靶向TGR5 m RNA的3端非编码区后降解了TGR5 mRNA,降低了TGR5的蛋白水平,随后引起了H9c2细胞的心肌肥大。

miR-146a在系统性红斑狼疮患者血清中表达及意义

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清中miR-146a表达变化及其在SLE诊断及判断病情活动中的意义。方法收集22例系统性红斑狼疮患者(SLE)和健康对照20例的血清,应用实时定量PCR(Q-RT-PCR)检测血清中miR-146a的表达变化,并分析其与实验指标相关性。结果 SLE患者血清中miR-146a的相对表达低于对照组(P=0.024);血清中miR-146a表达与患者血沉(r=-0.464,P=0.030)和C反应蛋白(r=-0.525,P=0.012)均呈负相关,与补体C3(r=0.487,P=0.021)和C4(r=0.580,P=0.005)水平均呈正相关;miR-146a作为SLE标志物敏感性为63.64%,特异性为75%。结论以上结果表明,miR-146a可作为标志物,用于SLE的诊断及判断病情的活动。

miR-146a和miR-155与慢性阻塞性肺疾病炎症表型的相关性分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)的炎症表型与血清miR-146a和miR-155表达的相关性。方法179例研究对象根据炎症表型分为粒细胞缺乏型、嗜酸性粒细胞型、嗜中性粒细胞型、混合粒细胞型四组,采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测血清miR-146a、miR-155表达水平,检测受试者呼出气一氧化氮(FeNO)、血清髓过氧化物酶(MPO)、C反应蛋白(CRP)水平,并分析血清miR-146a、miR-155水平与患者炎症表型的相关性。结果与粒细胞缺乏型相比,嗜酸性粒细胞型血清FeNO、miR-146a水平显著升高(P<0.05),嗜中性粒细胞型MPO、CRP、miR-155水平显著升高(P<0.05),混合粒细胞型FeNO、MPO、CRP、miR-146a、miR-155水平均显著升高(P<0.05);与嗜中性粒细胞型相比,嗜酸性粒细胞型、混合粒细胞型FeNO、miR-146a水平显著升高(P<0.05),与嗜酸性粒细胞相比,嗜中性粒细胞型、混合粒细胞型MPO、CRP、miR-155水平显著升高(P<0.05);Pearson相关性分析表明,嗜酸性粒细胞型患者中,miR-146a水平与FeNO呈正相关(P<0.05);嗜中性粒细胞型患者中,miR-155水平与MPO、CRP水平呈正相关(P<0.05),混合粒细胞型患者中miR-146a、miR-155水平与FeNO、MPO、CRP水平均呈正相关(P<0.05),粒细胞缺乏型患者中,miR-146a、miR-155水平与FeNO、MPO、CRP水平均无相关性(P>0.05)。结论血清miR-146a、miR-155水平与COPD患者炎症表型密切相关。

miR-196a2和miR-146a基因多态性与中国汉族人群口腔鳞癌的相关性

目的:探究miR-196a2 rs11614913(T>C)和miR-146a rs2910164(G>C)多态性与中国汉族人群口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的相关性。方法:选取127例OSCC患者为病例组,120例性别、年龄均匹配的无肿瘤外伤患者为对照组。提取2组受试者基因组DNA进行PCR后测序,比较miR-196a2 T>C及miR-146a G>C在两组研究对象间的分布频率。结果:关联研究结果示miR-196a2基因SNPs位点rs11614913 TC、CC基因型及C等位基因人群OSCC患病风险增加。分层模型结果示不吸烟不饮酒人群该位点突变与OSCC有显著统计学意义(P<0.05)。结论:miR-196a2基因SNP位点rs11614913与中国汉族人群OSCC的发生密切相关。

miR-146aC>G,miR-149T>C基因多态性与缺血性脑卒中易感性的研究

目的:探讨中国汉族人群中miR-146aC>G,miR-149T>C基因多态性与缺血性脑卒中易感性的关系。方法:利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测196例缺血性脑卒中患者和205例健康对照中miR-146aC>G,miR-149T>C的基因型,统计学方法比较两组间基因型及等位基因分布差异。结果:miR-146aC>G位点各基因型在病例组和对照组分布无明显差异,但等位基因G会增加缺血性脑卒中的患病风险;miR-149T>C位点各基因型在病例组和对照组分布无明显差异。在分层分析中,miR-146aC>G会增加女性和非高血压患者缺血性脑卒中的患病风险,miR-149T>C会增加非高血压患者缺血性脑卒中的患病风险。结论:miR-146aG等位基因,miR-149C等位基因与汉族人群缺血性脑卒中易感性有一定的相关性。

miR146a（rs2910164）G〉C多态性与儿童急性淋巴细胞白血病易感性的关系

目的探讨miR146a（rs2910164）G〉C多态性与儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）易感性的关系。方法选取2010年3月至2016年10月保定市第一中心医院ALL患儿血液标本200份作为病例组，健康儿童血液标本100份作为健康对照组，病例组和健康对照组性别、年龄比较差异均无统计学意义（χ2=0．430，P=0．512;χ2=2.839，P=0．092），病例组和健康对照组基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡，采用限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）方法检测MiR146a（rs2910164）G〉C多态性。基因型和ALL的关系以比值比（odds ratio，OR）和95％可信区间（credibility interval，CI）表示。结果miR146a（rs2910164）GG、GC和CC基因型在病例组和健康对照组的频率分别为16．0％、44．5％、39．5％和29．0％、41．0％、30．0％。GC／CC基因型在病例组的频率显著高于健康对照组（以GG基因型为参照，GC基因型：OR=1．967，95％CI：1．054～3．672，P=0．037；CC基因型：OR=2．386，95％CI：1．239～4．595，P=0．012）。结论miR146a（rs2910164）G〉C多态性与儿童ALL易感性密切相关。

GPR146经P-JNK通路对肺动脉高压小鼠血管重塑的影响

目的 分析G蛋白偶联受体146(orphan G protein-coupled receptor 146, GPR146)经磷酸化氨基末端蛋白激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase, P-JNK)通路对肺动脉高压(pulmonary hypertension, PH)肺血管重构(pulmonary vascular remodeling, PVR)致肺血管压力升高的影响。方法 构建PH模型,采用SD大鼠10只,分为对照组和SuHx组,每组5只;采用小鼠20只,分为Control组、SuHx组、SuHx+SiNC组、SuHx+SiGPR146组,共4组。测量每组右心室收缩压(right ventricular systolic pressure, RVSP)和右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index, RVHI)。免疫荧光(immunofluorescence, IFC)染色观察GPR146表达,免疫印迹检测GPR146、P-JNK与增殖细胞抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)表达。结果 与Control组相比,SuHx组大鼠肺组织GPR146升高(P<0.05,t=4.742)。GPR146主要在α-actin染色血管中膜层平滑肌细胞表达;SuHx组小鼠肺组织GPR146升高,SuHx+SiGPR146组GPR146比SuHx+SiNC组低(P<0.05,F=8.576)。SuHx组小鼠肺组织P-JNK与PCNA升高,干扰GPR146后P-JNK与PCNA表达降低(P<0.05,F=6.048,25.55);SuHx组小鼠RVSP和RVHI高于Control组,干扰GPR146后SuHx+SiGPR146组小鼠RVSP和RVHI低于SuHx+SiNC组;SuHx组小鼠肺血管壁厚度比Control组厚;敲除GPR146后,SuHx+siGPR146组小鼠肺血管壁厚度小于SuHx+siNC组(P<0.05,F=4.106);HYP+SiGPR146组PASMCs中GPR146下调(P<0.05,F=6.907),与SiNC组相比,HYP+SiNC组PASMCs中P-JNK与PCNA表达上调,敲除GPR146后HYP+SiGPR146组中P-JNK与PCNA蛋白相较于HYP+SiNC组下调(P<0.05,F=7.436,33.68)。结论 GPR146经P-JNK通路促进肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖,加剧PH进展,可为预防和治疗PH可行靶点。

miR-146a在系统性红斑狼疮患者血清中表达及意义

系统性红斑狼疮是一种累积多脏器的慢性自身免疫性疾病,目前病因及发病机制不清。microRNA(miRNA)是一种通过调节蛋白质表达而参与调节机体各种生理及病理活动的非编码小RNA,在各种组织细胞和体液中均有表达。收集22例系统性红斑狼疮患者(SLE)和健康对照20例的血清,应用实时定量PCR(Q-RT-PCR)检测miR-146a的表达。SLE患者血清中miR-146a的表达低于对照组(P=0.024)。分析表明,血清中miR-146a表达与患者血沉呈负相关(r=-0.464,P=0.030),与C反应蛋白呈负相关(r=-0.525,P=0.012),与补体C3呈正相关(r=0.487,P=0.021)、与补体C4呈正相关(r=0.580,P=0.005),ROC分析表明,miR-146a作为SLE标志物敏感度为63.64%,特异度为75%(P=0.034)。这些结果提示血清中miR-146a不仅可以用于SLE的诊断,而且还可能与疾病活动相关。