miR-17-5p、miR-17-3p和miR-20a-5p在胃间质瘤中表达

目的探讨miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p在胃间质瘤(gastric stromal tumor,GST)中的差异表达及其与临床病理因素的关系。方法提取正常胃组织及GST组织共72例标本的总RNA,应用Real time RT-PCR方法检测miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p的表达,用SPSS 19.0分析其与临床病理因素的关系及3个miRNA间的相关性。结果在GST中,miR-17-3p、miR-17-5p在肿瘤组织中表达较胃正常组织低(P<0.001),但是在低危组和中高危组GST中表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-20a-5p表达在胃正常组织、低危组和中高危组之间均有差异表达,且随着恶性度的增加而下降(P<0.001),3种miRNA的表达水平与肿瘤的侵袭、转移、年龄、肿瘤最大直径和核分裂象密切相关,而与瘤体是否破溃无关。结论 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-20a-5p在GST中下调并相互作用可能是促进GST发生、发展因素之一。

miR-17-3p在寻常型银屑病患者中的表达研究

目的:研究miR-17-3p在寻常型银屑病皮损及外周血中的表达情况,探讨其参与寻常型银屑病的发病机制。方法:收集寻常型银屑病患者(17例)的皮损组织和外周血及正常对照组(4例)皮肤组织和外周血,提取miRNA。采用Real-time PCR技术检测miR-17-3p miRNA的表达并进行比较。免疫组化法检测寻常型银屑病皮损组织(25例)和正常皮肤组织(15例)中miR-17-3p的可能靶基因FNIP1蛋白的表达,Pearson相关分析银屑病患者外周血中miR-17-3p的表达水平与患者PASI评分的相关性。结果:Real-time PCR显示miR-17-3p miRNA在寻常型银屑病患者组皮损及外周血中表达量较正常对照组均明显降低(t值分别为34.62、9.16,P值均<0.05)。miR-17-3p外周血中表达量与患者PASI评分呈负相关(r=-0.56,P=0.019)。寻常型银屑病患者皮损中FNIP1蛋白表达阳性率明显高于对照组(X^2=9.72,P<0.05)。结论:寻常型银屑病患者皮损及外周血中miR-17-3p表达下调可能与银屑病的发病有关,miR-17-3p可能通过调节靶基因FNIP1参与银屑病发病。通过检测外周血中miR-17-3p的表达量可能可以评估患者病情严重程度。

miR-17-3p靶向KCTD15调控延边黄牛前体脂肪细胞分化

旨在探究miR-17-3p是否可以通过靶向KCTD15调节延边黄牛前体脂肪细胞的分化。本研究使用生物信息学软件鉴定miR-17-3p的同源性,预测miR-17-3p的靶基因;通过在延边黄牛的前体脂肪细胞中转染miR-17-3p mimic或miR-17-3p inhibitor及阴性对照实现细胞内miR-17-3p过表达或抑制表达;采用双荧光素酶报告基因检测系统确定miR-17-3p与KCTD15的靶标关系;使用qRT-PCR和Western blot技术在mRNA和蛋白水平上检测miR-17-3p对KCTD15基因以及脂代谢标志基因PPARγ和C/EBPα表达水平的影响。结果表明,生物信息学软件预测KCTD15可作为miR-17-3p的靶基因,且miR-17-3p在哺乳动物中具有较高的同源性;转染miR-17-3p mimic后脂代谢标志基因PPARγ和C/EBPα的mRNA和蛋白表达量显著或极显著高于转染NC-mimic的对照组(P<0.05或P<0.01);抑制miR-17-3p的表达后,PPARγ和C/EBPα的表达量则显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);双荧光素酶报告基因验证分析显示,过表达miR-17-3p极显著抑制了含有KCTD153′UTR片段的载体的荧光活性(P<0.01);过表达miR-17-3p也会显著或极显著抑制候选靶基因KCTD15 mRNA和蛋白质的表达量(P<0.05或P<0.01);而抑制miR-17-3p的表达则会显著提高靶基因KCTD15的mRNA和蛋白质的表达量(P<0.05)。这些结果说明,miR-17-3p可能通过抑制KCTD15的表达促进延边黄牛前体脂肪细胞分化。

ssc-miR-17-3p调控脂肪沉积的靶基因生物信息学分析

【目的】找到与猪脂肪沉积相关的候选靶基因,为ssc-miR-17-3p参与脂肪沉积调控机制研究提供相关理论依据。【方法】利用miRDB,miRWalk和TargetScan数据库获得了miRNA-17-3p候选靶基因;利用DAVID和KOBAS数据库对候选靶基因进行了KEGG/GO功能富集分析,并通过Cytoscape可视化工具构建了其可能参与的调控网络。【结果】结果表明,ssc-miR-17-3p候选靶基因TSTD2、CSDE1、SCGB1D1、TEAD1、GPD2、NFATC3、MBNL1、PPP1R12B、CAMK2D、HBEGF、LRRC28、UBE2D4、MAP4与脂肪沉积有关。GPD2、CAMK2D、HBEGF等可能在催产素信号通路、MAPK信号通路、GnRH信号通路,以及脂质代谢、甘油磷脂代谢、糖醇代谢、大分子代谢,细胞代谢等过程发挥了作用。【结论】ssc-miR-17-3p可能通过调控多个靶基因,信号通路和生物过程影响脂肪的沉积与代谢,其功能有待进一步实验室试验验证。

miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及临床意义。方法:提取100例MM患者(病例组)和100名健康人群(对照组)血清RNA。实时荧光定量PCR测定血清miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p表达水平,分析其表达量与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存分析法分析三种不同基因相对表达量与患者预后的关系。结果:病例组血清miRNA-720、miR-17-3p相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-215-5p相对表达量低于对照组(P<0.05);血清miR-17-3p相对表达量与ISS分期有统计学差异(P<0.05),血清miR-215-5p相对表达量与血红蛋白水平有统计学差异(P<0.05);血清miRNA-720高表达患者初次化疗有效率低于低表达患者(P<0.05),血清miR-215-5p低表达患者初次化疗有效率低于高表达患者(P<0.05);miRNA-720及miR-17-3p低表达和miR-215-5p高表达患者生存情况较好(P<0.05)。结论:miRNA-720、miR-17-3p及miR-215-5p可能与MM密切相关,可作为MM诊断、治疗及预后的评估指标。

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞迁移和侵袭作用的影响。方法qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞(乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D)LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21(实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组),抑制miR-17-3p表达(实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组),过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达(实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组)。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织(0.48±0.03 vs.1.03±0.06,t=11.714,P<0.01),miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织(2.93±0.17 vs.1.02±0.04,t=15.593,P<0.01)。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A(P<0.01)。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达(P<0.05)。结论LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。

血浆miR-17-3p对初诊老年多发性骨髓瘤患者总生存情况的预测价值

目的 探讨血浆miR-17-3p对初诊老年多发性骨髓瘤(MM)患者总生存情况的预测价值。方法 选取该院收治的80例初诊老年多发性骨髓瘤患者纳入MM组,并选择同期80例体检健康老年人为对照组,比较两组血浆miR-17-3p,血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、β微球蛋白(β-MG),血浆清蛋白(ALB)水平。比较不同临床特征MM患者间miR-17-3p水平。分析MM组患者miR-17-3p水平与IgA、IgG、β-MG、ALB的相关性。对所有MM患者随访3年,根据存活状态分为存活组和死亡组,比较两组血浆miR-17-3p水平。根据MM组患者miR-17-3p平均值分为miR-17-3p高表达组和miR-17-3p低表达组,比较两组临床特征及IgA、IgG、β-MG、ALB水平,采用Kaplan-Meier生存曲线比较两组累积生存期。结果 相较于对照组,MM组ALB水平更低,而miR-17-3p、IgA、IgG、β-MG水平更高(P<0.05)。随着MM组国际分期体系(ISS)分期上升,患者miR-17-3p水平也有所上升(P<0.05)。相关性分析结果显示,MM组患者miR-17-3p水平与ALB呈负相关,而与IgA、IgG、β-MG呈正相关(P<0.05)。相较于存活组,死亡组miR-17-3p水平更高(P<0.05);miR-17-3p高表达组与miR-17-3p低表达组在ISS分期的构成比、IgA、IgG、β-MG水平上比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,miR-17-3p高表达组及miR-17-3p低表达组累积生存期分别为(26.83±1.20)、(33.03±0.68)个月,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MM患者血浆miR-17-3p水平显著上升,并与病情严重程度密切相关,血浆miR-17-3p高表达患者可能生存情况不佳。

miR-17-3p、NLR水平对多发性骨髓瘤的诊断价值

目的探讨miR-17-3p、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)对多发性骨髓瘤(MM)的诊断价值。方法选取2016年10月-2017年9月在浙江衢化医院就诊的80例多发性骨髓瘤患者作为多发性骨髓瘤组,另选取同时期的80例健康体检者为健康对照组。比较两组miR-17-3p、NLR水平,并评估这两种指标在MM中的诊断价值。结果多发性骨髓瘤组血浆miR-17-3p、NLR水平较健康对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-17-3p及NLR诊断MM的AUC分别为0.890、0.830,灵敏度分别为71.2%、60.0%,特异度分别为97.5%、96.2%。结论miR-17-3p、NLR水平升高,对多发性骨髓瘤具有一定的诊断价值。

MiR-17-3P对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:探究miR-17-3P对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-17-3P在MM细胞系RPMI 8226、U266和KM3及正常人骨髓细胞中的表达情况。合成miR-17-3P模拟物和抑制物,分别转染U266细胞,采用MTT法测细胞活力,PI染色流式细胞仪测细胞周期,观察U266细胞增殖情况。结果:MM细胞株RPMI8226、U266、KM3中miR-17-3P相对表达量均明显高于正常人骨髓细胞;利用模拟物上调miR-17-3P后,U266的细胞活力较对照组明显提高,48h时作用效果最为显著;相反,下调miR-17-3P后,U266的细胞活力降低;上调miR-17-3P后,G1期细胞比例较对照组有所减少,S期细胞比例明显增多;相反,下调miR-17-3P后,细胞多被阻滞在G1期。结论:Mi R-17-3P可能促进多发性骨髓瘤细胞增殖。

多发性骨髓瘤患者血浆miR-17-3p表达及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血浆miR-17-3p的表达及其临床意义。方法90例MM患者为MM组,30例其他血液疾病患者为非MM组,30例体检健康者为对照组;采用实时荧光定量PCR法检测3组血浆miR-17-3p相对表达量,分析MM患者血浆miR-17-3p相对表达量与临床病理特征的关系;以血浆miR-17-3p相对表达量均值3.125为临界值,将MM患者分为高表达(miR-17-3p≥3.125)组43例和低表达(miR-17-3p<3.125)组47例,采用Kaplan-Meier生存分析法分析不同miR-17-3p相对表达量患者的预后情况。结果MM组血浆miR-17-3p相对表达量(3.125±0.710)高于非MM组(1.205±0.353)和对照组(1.146±0.261)(P<0.05),非MM组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ISS分期Ⅲ期MM患者血浆miR-17-3p相对表达量(3.707±0.715)高于Ⅱ期(3.079±0.713)和Ⅰ期(2.915±0.708)患者(P<0.05),Ⅱ期患者高于Ⅰ期患者(P<0.05),不同年龄、性别、DS分期、诊断分型、血清乳酸脱氢酶、血钙及血红蛋白水平患者血浆miR-17-3p相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高表达组患者3年总体生存率(25.6%)低于低表达组(65.9%)(P<0.05)。结论MM患者血浆miR-17-3p表达升高,与ISS分期和患者不良预后有关,有可能成为新的MM肿瘤标志物。

miR-17-3p对角质形成细胞增殖的影响

目的研究miR-17-3p在银屑病组织来源的角质形成细胞中的表达及其对角质形成细胞增殖的影响和机制。方法分离培养银屑病和正常皮肤组织来源的角质形成细胞,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定miR-17-3p表达。在正常皮肤组织来源的角质形成细胞中分别转染mimics control、miR-17-3p mimics、inhibitor control、miR-17-3p inhibitor,命名为第1转染组、第2转染组、第3转染组、第4转染组。在正常皮肤组织来源的角质形成细胞中共转染miR-17-3p mimics、pcDNA 3.1和miR-17-3p mimics、pcDNA 3.1-缺氧诱导因子1α(HIF-1α),分别命名为第5转染组和第6转染组;在正常皮肤组织来源的角质形成细胞中共转染miR-17-3p inhibitor、siRNA control和miR-17-3p inhibitor、HIF-1αsiRNA,分别命名为第7转染组和第8转染组。用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,用蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测细胞角蛋白10(Keratin10)、细胞角蛋白14(Keratin14)和HIF-1α蛋白蛋白表达。结果miR-17-3p在银屑病来源的角质形成细胞、正常皮肤组织来源的角质形成细胞中表达量分别为0.35±0.05和1.00±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。第1,2,3,4,5,6,7,8转染组细胞存活率分别为(100.00±10.23)%,(74.29±6.81)%,(100.00±9.80)%,(136.51±12.07)%,(75.61±8.15)%,(96.32±8.12)%,(137.54±12.05)%和(110.32±10.20)%;miR-17-3p mRNA水平分别为1.00±0.11,3.26±0.28,1.00±0.10,0.25±0.03,3.22±0.23,2.15±0.15,0.26±0.02和0.84±0.08;Keratin10蛋白相对表达量分别为1.00±0.09,1.45±0.13,1.01±0.15,0.48±0.06,1.48±0.14,0.86±0.08,0.45±0.05和0.89±0.09;Keratin14蛋白相对表达量分别为1.00±0.12,3.25±0.32,1.02±0.11,0.66±0.05,3.01±0.32,1.26±0.14,0.70±0.10和2.25±0.23;HIF-1α蛋白相对表达量分别为1.00±0.08,0.45±0.04,1.00±0.11,2.03±0.23,0.48±0.06,0.96±0.10,1.99±0.17和1.02±0.13。上述指标,第2转染组与第1转染组比较,第4转染组与第3转染组比较,第6转染组与第5转染组比较,第8转染组与第7转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-17-3p在银屑病组织来源的角质形成细胞中表达下调,其可以促进角质形成细胞增殖并改变细胞分化状态。

miR-125a-3p和miR-17-5p在激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨激素性股骨头坏死中miRNA的差异性表达变化。方法取激素性股骨头坏死的坏死区域骨组织为实验组,其股骨颈基底部骨组织为对照组;分别提取总RNA并进行质检;采用miRNA芯片技术检测miRNAs的表达并对其表达谱进行分析;运用实时定量PCR对差异明显的miR-125a-3p和miR-17-5p进行验证。结果对激素性股骨头坏死中miRNA表达谱进行差异性分析。和对照组相比,实验组中倍数大于2倍,P<0.05的miRNA共有11个。8个miRNA表达上调,3个表达下调。实时定量PCR证实miR-125a-3p在坏死标本中高表达,而miR-17-5p呈现低表达,与miRNA芯片结果一致。结论激素性股骨头坏死区域骨组织与对照组相比miRNAs表达发生明显变化,以miR-125a-3p和miR-17-5p差异最为明显。这表明了它们最有可能参与了激素性股骨头坏死病理过程的调控。

血浆miR-27b-3p、PG联合G -17在早期胃癌筛查中的应用价值

目的探讨血浆miR-27b-3p、PG以及G-17联合检测在早期胃癌筛查中的应用价值。方法选取2017年12月到2019年12月来我院住院治疗的60例胃癌手术患者和60例同时期进行健康体检者分别设为研究组和对照组,比较两组miR-27b-3p、PGI、PGII、G-17水平以及PGI/PGII值,并分析miR-27b-3p、PGI、G-17水平以及PGI/PGII值单独检测和联合检测胃癌的诊断效能。结果研究组PGII和G-17水平均高于对照组(P<0.05);研究组miR-27b-3p水平和PGI水平与PGI/PGII值均明显低于对照组(P<0.05);随着胃癌患者的临床分期升高,患者PGII和G-17水平随之升高,而miR-27b-3p水平和PGI水平与PGI/PGII值均明显降低(P<0.05);miR-27b-3p、G-17以及PGI/PGII对胃癌均有较好的诊断价值(AUC=0.758、0.755、0.821,P<0.05)。结论胃癌患者的miR-27b-3p、PG、G-17水平表达异常,且水平高低与临床分期密切相关,联合检测可提高胃癌诊断效能,在胃癌早期筛查中具有较高的应用价值。

缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值

目的探讨缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值。方法选取2019年1月-2020年6月收治的缺血性脑卒中136例,根据颅内外动脉是否狭窄将其分为狭窄组(95例)和对照组(41例)两组,根据颅内外动脉狭窄程度将狭窄组分为轻度狭窄组(28例)、中度狭窄组(31例)和重度狭窄组(36例)3个亚组。比较狭窄组、对照组及轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组临床资料(一般资料、一般实验室指标和血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平),绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-17-5p和miR-27b-3p及二者联合检测对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值。结果狭窄组血清尿酸、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、miR-17-5p和miR-27b-3p水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血清尿酸、TC、LDL-C、miR-17-5p和miR-27b-3p水平轻度狭窄组和中度狭窄组低于重度狭窄组,轻度狭窄组低于中度狭窄组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值的曲线下面积血清miR-17-5p和miR-27b-3p及二者联合检测分别为0.677、0.688和0.804,血清miR-17-5p和miR-27b-3p二者联合检测明显高于单独检测(P<0.05)。结论血清miR-17-5p和miR-27b-3p水平与缺血性脑卒中患者颅内外动脉狭窄密切相关;缺血性脑卒中患者颅内外动脉狭窄程度越高,血清miR-17-5p和miR-27b-3p水平越高。血清miR-17-5p和miR-27b-3p联合检测对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值高于血清miR-17-5p和miR-27b-3p单独检测。

miR-6819-3p及其IL-17信号通路中靶基因在斑秃病变部位的表达

目的研究miR-6819-3p及其IL-17信号通路中靶基因在斑秃病变部位的表达。方法收集2020年6-12月于山西省人民医院皮肤性病科诊疗的斑秃患者病变部位头皮和外科手术所获得的正常头皮组织,将其分为斑秃组和正常组。通过荧光定量PCR检测斑秃组和正常组的miR-6819-3p及其IL-17信号通路中靶基因(CSF3、CXCL8、FOS、FOSB、JUN和NFKBIA)的表达情况,并利用生物信息学分析miR-6819-3p与这些预测靶基因间的调控位点、以及它们在IL-17信号通路中的分布和相互作用关系。结果与正常组相比,斑秃组miR-6819-3p表达量降低(P<0.05),而CSF3、CXCL8、FOS、FOSB、JUN和NFKBIA基因表达量均呈现不同程度的增加(P<0.05)。生物信息学分析显示,CSF3、CXCL8、FOS、FOSB、JUN和NFKBIA是miR-6819-3p的潜在靶基因,且是IL-17发挥作用的下游关键基因。结论miR-6819-3p可以通过对靶基因以及IL-17信号通路的调控在斑秃的发病中发挥作用,提示这些基因可以成为斑秃诊断和治疗中的生物靶标。

LncRNA-SNHG17通过调控miR-23b-3p促进非小细胞肺癌进展

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)在非小细胞肺癌中的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测SNHG17在肺癌细胞系和正常气管上皮细胞中的表达;通过转染pLCDH-SNHG17质粒或SNHG17-siRNA,过表达或沉默SNHG17,检测不同肺癌细胞株增殖、细胞周期和迁移能力;采用生物信息学方法预测并鉴定SNHG17相互作用的微小RNA (miRNA)。结果 SNHG17在NSCLC细胞系中表达上调,SNHG17的沉默能抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;SNHG17的上调促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;沉默SNHG17导致非小细胞肺癌细胞系中miR-23b-3p水平升高,过表达miR-23b-3p在非小细胞肺癌细胞系中抑制SNHG17的表达。结论 LncRNA-SNHG17在非小细胞肺癌细胞系中高表达,可能通过竞争性结合miR-23b-3p参与非小细胞肺癌的发生。

miR-328-3p靶向下调FOXP3抑制IL-17诱导的Caco-2人结直肠癌细胞侵袭和迁移

目的研究miR⁃328⁃3p对白细胞介素17(IL⁃17)诱导的结直肠癌Caco⁃2细胞转移的影响和机制。方法实时定量PCR检测Caco⁃2结直肠上皮细胞和结直肠癌细胞中miR⁃328⁃3p、叉头盒P3(FOXP3)和IL⁃17 mRNA表达。将miR⁃328⁃3p模拟物(mimics)转染至结直肠癌Caco⁃2细胞中,然后给予IL⁃17诱导处理后,Transwell^(TM)小室测定细胞侵袭和迁移,明胶酶谱法测定细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9活性。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃328⁃3p与FOXP3的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测miR⁃328⁃3p mimics对Caco⁃2细胞中FOXP3蛋白表达的影响。将FOXP3过表达载体(pcDNA3.1⁃FOXP3)和miR⁃328⁃3p mimics共转染到Caco⁃2细胞,利用上述相同方法测定细胞侵袭、迁移和细胞MMP2、MMP9活性。结果与结直肠上皮细胞比较,miR⁃328⁃3p在结直肠癌细胞中的表达水平降低,FOXP3和IL⁃17 mRNA水平升高。转染miR⁃328⁃3p mimics可降低IL⁃17诱导处理后的Caco⁃2细胞侵袭和迁移能力及细胞MMP2、MMP9活性。miR⁃328⁃3p靶向结合并抑制Caco⁃2细胞FOXP3蛋白表达。转染pcDNA3.1⁃FOXP3可降低miR⁃328⁃3p mimics对IL⁃17诱导的Caco⁃2细胞侵袭、迁移及细胞MMP2、MMP9活性的影响。结论miR⁃328⁃3p可能通过靶向抑制FOXP3减弱IL⁃17诱导的结直肠癌Caco⁃2细胞的侵袭和迁移能力。

新生儿败血症患儿外周血CD4^(+)T细胞miR-146a-3p降低、IL-17水平增加

目的研究新生儿败血症患儿外周血CD4^(+)T细胞微小RNA-146a-3p(miR-146a-3p)、白细胞介素17(IL-17)的表达及机制。方法应用实时定量PCR检测66例败血症患儿、40例感染性疾病患儿及40例健康新生儿(对照组)CD4^(+)T细胞miR-146a-3p、IL-17 mRNA的表达,ELISA检测外周血IL-17水平。双荧光素酶报告实验验证miR-146a-3p对IL-17的靶向作用关系。分离CD4^(+)T细胞,采用miR-146a-3p模拟物(miR-146a-3p mimic)或miR-146a-3p抑制物(miR-146a-3p inhibitor)促进或抑制CD4^(+)T细胞miR-146a-3p表达后,流式细胞术检测Th17细胞比例变化,甲基化特异PCR检测miR-146a-3p基因甲基化情况。CD4^(+)T细胞中加入甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞嘧啶(5-Aza-dC)后,观察Th17细胞比例变化及IL-17表达变化。结果与感染性疾病患儿及对照组相比,败血症组患儿外周血CD4^(+)T细胞miR-146a-3p表达降低,IL-17 mRNA水平增加,外周血IL-17水平升高。CD4^(+)T细胞中转染miR-146a-3p mimic能够显著抑制IL-173′非翻译区(3′UTR)野生型的荧光素酶活性。转染miR-146a-3p mimic后,CD4^(+)T细胞IL-17 mRNA显著降低,培养上清中IL-17水平和Th17细胞比例显著降低,而转染miR-146a-3p inhibitor后,IL-17 mRNA表达显著升高,上清中IL-17水平显著升高,Th17细胞比例升高。败血症组外周血miR-146a-3p基因启动子甲基化阳性率明显高于对照组及感染组,CD4^(+)T细胞中加入5-Aza-dC后,miR-146a-3p表达升高,IL-17 mRNA表达降低,上清中IL-17水平降低,Th17细胞比例明显降低。结论新生儿败血症患儿外周血CD4^(+)T细胞miR-146a-3p表达下调,IL-17表达上调。

子宫内膜异位症患者血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平与病情程度及不孕关系

目的:探讨子宫内膜异位症(EMS)患者血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平与病情程度及不孕关系。方法:回顾性收集2017年4月—2019年4月本院收治的EMS患者78例临床资料。检测并比较患者血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平,采用Spearman相关分析与患者临床分期、痛经程度关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-1304-3p、miR-17-5p检测对EMS患者合并不孕症的诊断价值。结果:不同r-AFS分期及不同痛经程度的EMS患者血清miR-1304-3p、miR-17-5p水平有差异(P<0.05),血清miR-1304-3p随分期增加而升高、 miR-17-5p随分期增加而降低(P<0.05),血清miR-1304-3p随痛经程度增加而升高、miR-17-5p随痛经程度增加而降低(P<0.05)。相关分析,血清miR-1304-3p水平与EMS患者r-AFS分期、痛经程度均呈正相关(r=0.714、0.753,P<0.01),血清miR-17-5p水平与EMS患者r-AFS分期、痛经程度均呈负相关(r=-0.619、-0.690,P<0.01)。合并不孕症组血清miR-1304-3p高于无不孕症组、miR-17-5p低于无不孕症组(P<0.05)。ROC曲线显示,血清miR-1304-3p、miR-17-5p联合检测(AUC=0.924,P<0.01)诊断价值较高。结论:EMS患者血清miR-1304-3p水平随病情严重程度增高而升高,且合并不孕症患者水平更高,而血清miR-17-5p水平随病情严重程度增高而降低,且合并不孕症患者水平更低;联合检测血清二项指标可作为诊断EMS合并不孕症的辅助手段。

血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p联合检测对妊娠期糖尿病的诊断价值

目的探讨血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p对妊娠期糖尿病的诊断价值。方法选择2018年5—6月该院收治的妊娠期糖尿病患者10例和妊娠24~28周的健康孕妇10例,采用转录组测序技术(RNA-seq)分析血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平。选择2018年5月至2020年5月该院收治的妊娠期糖尿病患者100例为观察组,妊娠24~28周的健康孕妇100例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测2组受试者血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p单独或联合检测对妊娠期糖尿病的诊断价值。结果RNA-seq检测结果显示,10例妊娠期糖尿病患者血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平较10例健康孕妇高8倍以上。观察组血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p单独检测对妊娠期糖尿病的诊断灵敏度分别为95%、97%、94%,特异度分别为95%、96%、95%,血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p联合检测对妊娠期糖尿病的诊断灵敏度为98%,特异度为93%,准确性为96%。结论血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p可作为妊娠期糖尿病的潜在诊断标志物。