LncRNA-NEAT1调控miR-182-5p表达对狼疮性肾炎肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁丛组装转录本1(NEAT1)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)中通过微小RNA(miR)-182-5p/叉头盒蛋白O1(FoxO1)/β-连环蛋白(β-catenin)轴对肾系膜细胞损伤的影响。方法收集2019年3月至2021年7月凉山州第二人民医院收治的32例LN患者(LN组)外周血和32例体检健康者(健康对照组)外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞中NEAT1以及miR-182-5p、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量。采用20%LN患者血清处理肾系膜细胞的方法构建LN肾系膜细胞模型,造模完成后将细胞分为对照组(正常培养,不转染)、模型组(加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NC组(转染si-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(共转染si-NEAT1和anti-miR-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-182-5p组(共转染si-NEAT1和anti-miR-182-5p后加入5μg/mL脂多糖培养)。qRT-PCR法检测各组细胞NEAT1、miR-182-5p表达水平;ELISA法测定各组细胞炎症因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH含量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测各组细胞增殖活力;流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组细胞FoxO1、β-catenin蛋白表达水平。结果与健康对照组比较,LN组患者外周血单个核细胞中NEAT1、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平以及血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著上升,miR-182-5p表达水平显著下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾系膜细胞增殖活力、FoxO1和β-catenin蛋白水平以及LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显增加,miR-182-5p表达水平明显降低(P<0.05)。敲低NEAT1后,细胞增殖活力和炎症反应减弱,FoxO1和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);抑制miR-182-5p表达可减轻NEAT1敲低对LN肾系膜细胞模型细胞增殖、炎症因子及FoxO1、β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。各组细胞间凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论敲低NEAT1可通过靶向负调控miR-182-5p表达,抑制LN肾系膜细胞过度增殖,降低炎症反应,其可能与抑制FoxO1/β-catenin通路有关。

血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平与急性脑梗死患者病情及预后的关系

目的 检测急性脑梗死患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并探讨其与患者病情及预后的关系。方法 选取2020年3月至2022年10月安阳市人民医院神经内科收治的136例急性脑梗死患者纳入脑梗死组,另选取本院同期136例体检健康志愿者作为对照组。根据病情程度将脑梗死组患者分为轻度组(n=42)、中度组(n=59)和重度组(n=35)。根据患者90 d随访情况分为预后良好组103例和预后不良组33例。采用qRT-PCR法检测两组受检者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并比较各组受试者miR-182-5p、miR-372-3p表达水平和美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分。采用Spearman相关性分析急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p与NIHSS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析急性脑梗死预后的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-182-5p、miR-372-3p预测急性脑梗死患者预后的价值。结果 脑梗死组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.56±0.16、0.39±0.11,明显低于对照组的0.99±0.23、1.00±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);随着脑梗死患者病情程度的加重,轻度组、中度组、重度组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平逐渐降低,而NIHSS评分逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p水平与NIHSS评分均呈负相关(r=-0.483、-0.648,P<0.05);预后良好组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.62±0.17、0.42±0.12,明显高于预后不良组的0.39±0.12、0.30±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-182-5p和miR-372-3p低表达以及重度梗死是急性脑梗死预后不良的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-182-5p、miR-372-3p水平联合预测急性脑梗死预后不良的曲线下面积(AUC)明显大于miR-182-5p单独预测的AUC (Z=1.991,P=0.046)及miR-372-3p单独预测的AUC (Z=2.294,P=0.022)。结论 急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p表达降低,两者是急性脑梗死患者不良预后的危险因素,且与病情程度密切相关,可作为急性脑梗死预后的生物标志物。

miR-182-5p促进心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究miR-182-5p对心肌细胞凋亡的影响,进而以更好的阐明miR-182-5p在心肌梗死中的作用和意义。方法:构建大鼠心肌梗死模型,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)法检测心肌凋亡、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测miR-182-5p及凋亡相关分子的表达。使用miR-182-5p mimics及inhibitor转染大鼠心肌细胞H9c2,构建缺氧模型,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测心肌细胞活力,Western Blot法检测凋亡相关指标表达水平,半胱氨酰蛋白酶3/7(Caspase-3/7)活性检测试剂盒检测Caspase-3/7的活性。使用pAAV9-CMV腺相关病毒构建miR-182-5p的过表达病毒,通过尾静脉注射至心肌梗死模型小鼠体内,检测AAV9-miR-182-5p对心肌梗死诱导的心肌凋亡水平的影响。结果:大鼠心肌梗死模型中miR-182-5p表达水平减少,且细胞凋亡水平增加。在H9c2心肌缺氧模型中,miR-182-5p可以加重缺氧对心肌细胞活力的抑制,并减少抗凋亡分子B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、增加促凋亡分子Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,同时对Caspase-3/7的活性有明显的促进作用。而AAV9-miR-182-5p的注射可以显著加重小鼠心肌梗死模型中心肌细胞的凋亡水平。结论:miR-182-5p可以加重心肌梗死下的心肌损伤,其途径是通过促进凋亡来实现的。

LncRNA GAS5通过miR-182-5p/FOXF2轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)调节微小RNA-182-5p(miR-182-5p)/叉头盒蛋白F2(FOXF2)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法收集45例确诊为OSCC的癌组织以及癌旁组织,体外培养人口腔上皮细胞系HOEC及人OSCC细胞系CAL-27、HSC-3、SCC-25,qRT-PCR检测组织、细胞中LncRNA GAS5、miR-182-5p、FOXF2的表达;择细胞株CAL-27分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-GAS5组、pcDNA-GAS5+miR-NC组及pcDNA-GAS5+miR-182-5p mimics组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western Blot检测癌细胞中FOXF2、bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及E-cadherin蛋白表达,双萤光素酶报告实验验证miR-182-5p与LncRNA GAS5、FOXF2的关系。结果与癌旁组织相比,OSCC组织中LncRNA GAS5、FOXF2 mRNA表达降低,miR-182-5p表达升高(P<0.05);CAL-27、HSC-3、SCC-25细胞与HOEC相比,LncRNA GAS5、miR-182-5p、FOXF2表达趋势与OSCC组织内一致,且在CAL-27表达最明显,选择其作为后续实验的细胞株;与ctrl组、pcDNA组比较,pcDNA-GAS5组CAL-27细胞中GAS5、FOXF2 mRNA、细胞凋亡率及BAX、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),miR-182-5p表达、细胞增殖、迁移和侵袭数及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);上调miR-182-5p可减弱过表达LncRNA GAS5对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,也可抑制癌细胞凋亡;LncRNA GAS5靶向负调控miR-182-5p表达,miR-182-5p靶向负调控FOXF2表达。结论上调GAS5可能通过抑制miR-182-5p来增加FOXF2表达,进而抑制CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭,促进CAL-27细胞的凋亡。

lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。

基于SATB2/nox4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用

目的 基于特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白(SATB)2/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox)4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用。方法 收集经手术切除的结肠癌及癌旁组织各43例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析癌组织及癌旁组织中miR-182-5p与SATB2相对表达,分析miR-182-5p与SATB2在结肠癌中的相关性。SW480细胞分为对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组并进行相应转染。TargetScanHuman预测、双荧光素酶报告基因检测、染色质免疫共沉淀分析miR-182-5p与SATB2的靶向调节关系。噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖、迁移能力;qRT-PCR、Western印迹法检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞SATB2、nox4、E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达情况。体内异种移植实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤发展能力,免疫组化检测肿瘤SATB2、nox4表达情况。结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织miR-182-5p表达量明显升高,SATB2表达量明显降低(P<0.05),miR-182-5p与SATB2水平呈负相关(P<0.001)。miR-182-5p与SATB2存在结合位点,过表达SATB2导致miR-182-5p与SATB2的结合能力明显下降。与对照组、NC-mimics组、NC-inhibitor组相比,miR-182-5p-mimics组细胞增殖能力明显加强,迁移率明显升高,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显下降,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖能力明显降低,迁移率明显下降,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显升高,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显下降(P<0.05)。与对照组、NC-mimics组相比,miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组肿瘤体积、质量明显更大,SATB2表达量明显降低,nox4表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤体积、质量明显更小,SATB2表达量明显上升,nox4表达量明显下降(P<0.05)。结论 miR-182-5p对结肠癌细胞的增殖和迁移能力具有促进作用,能够降低SATB2表达并影响SATB2/nox4信号通路及其相关蛋白,SATB2能够反向调控miR-182-5p表达。

血清miR-182-5p、CFB和ADAM12在孕早期产前筛查唐氏综合征中的应用价值

目的探讨孕早期血清微小核糖核酸(miR)-182-5p、补体因子B(CFB)和解整合素金属蛋白酶12(ADAM12)水平在产前唐氏综合征(DS)筛查中的应用价值。方法选取2015年1月至2022年1月雅安市人民医院收治的150例DS胎儿孕妇为DS组,另选取同期87名健康胎儿孕妇为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测孕早期血清miR-182-5p水平,酶联免疫吸附法检测CFB、ADAM12水平。通过多因素Logistic回归分析DS的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平对DS的预测价值。结果DS组年龄大于对照组,吸烟比例和CFB水平高于对照组,miR-182-5p、ADAM12水平低于对照组,差异均有统计学意义(χ^(2)/t/Z值介于3.141~8.793之间,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄增加、吸烟、CFB升高为DS的独立危险因素,miR-182-5p、ADAM12升高为独立保护因素,其OR值及95%CI分别为1.122(1.012~1.243)、4.290(1.216~15.131)、1.460(1.268~1.681)、0.656(0.563~0.765)、0.996(0.994~0.998),P<0.05;ROC曲线分析显示,孕早期血清miR-182-5p、CFB和ADAM12水平联合预测DS的曲线下面积(AUC)为0.913,大于各指标单独预测(Z值分别为5.233、4.414、4.809,P<0.05)。结论孕妇血清miR-182-5p、CFB和ADAM12在孕早期产前筛查唐氏综合征中具有潜在应用价值,三者联合有利于在孕早期筛查唐氏综合征。

miR-182-5p在膀胱癌中的表达及其机制

目的:探究miR-182-5p及FOXO3在膀胱癌中的表达意义及其参与膀胱癌可能的机制。方法:收集2017年6月至2019年6月64例于郑州人民医院行手术切除膀胱癌患者的组织标本和临床资料,采用RT-qPCR检测膀胱癌组织及膀胱癌细胞中的miR-182-5p和FOXO3表达,按照其表达水平分为miR-182-5p高表达组和miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组和FOXO3低表达组,采用Western blot实验检测FOXO3蛋白的表达。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-182-5p和FOXO3与膀胱癌患者预后的相关性。采用双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与FOXO3的靶向关系,并采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot检测转染miR-182-5p抑制剂对FOXO3表达的影响;分别采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术检测转染miR-182-5p抑制剂对T24细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果:miR-182-5p在膀胱癌组织中的表达量为2.27±0.66,显著高于癌旁组织的1.04±0.36,两者比较差异具有统计学意义(P<0.001),与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);FOXO3在膀胱癌组织中低表达,与肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);miR-182-5p高表达组、FOXO3低表达组的患者的生存率显著低于miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组(P=0.038,P=0.004)。T24细胞中miR-182-5p高表达(P<0.05)。抑制miR-182-5p上调FOXO3表达,抑制miR-182-5p表达能抑制T24细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-182-5p在膀胱癌组织中高表达,而FOXO3低表达。miR-182-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,抑制其凋亡,可能与负调控FOXO3有关。

血清miR-182-5p表达水平对脓毒症患儿继发急性肾损伤的早期预测价值

目的:探讨血清miR-182-5p表达对脓毒症患儿继发急性肾损伤(AKI)的早期预测价值。方法:选取2016年1月~2019年6月海南省第三人民医院收治的脓毒症患儿196例,分为继发AKI组(AKI组,n=72)和未继发AKI组(非AKI组,n=124),检测两组血清miR-182-5p、血肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C)及肾损伤分子-1(KIM-1)水平。应用多因素Logistic回归分析脓毒症患儿继发AKI的危险因素。绘制ROC曲线分析血清miR-182-5p、Scr、Cys-C及KIM-1水平对AKI的早期预测价值,Pearson相关分析检测血清miR-182-5p表达水平与Scr、Cys-C及KIM-1的相关性。结果:AKI组血清miR-182-5p(1.46±0.62 vs 0.35±0.08)、Scr(460.28±84.26 vs 90.42±10.35,μmol/L)、Cys-C(1.83±0.57 vs 0.58±0.12,mg/L)及KIM-1(22.90±6.35 vs 4.75±0.62,μg/L)水平明显高于非AKI组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现血清miR-182-5p(OR=2.903,95%CI:1.870~5.116)、Scr(OR=1.704,95%CI:1.105~2.940)、Cys-C(OR=2.063,95%CI:1.434~3.970)及KIM-1(OR=2.530,95%CI:1.524~4.613)水平升高是脓毒症患儿继发AKI的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-182-5p、Scr、Cys-C及KIM-1水平四项联合预测脓毒症患儿继发AKI的曲线下面积(0.956,95%CI:0.903~0.997)最大,其敏感度和特异度较高,为96.4%和90.8%。Pearson相关分析显示,AKI组血清miR-182-5p表达水平与Scr、Cys-C及KIM-1均呈正相关(r=0.683、r=0.795、r=0.847,P<0.01)。结论:血清miR-182-5p表达水平在脓毒症患儿继发AKI中明显升高,是脓毒症患儿继发AKI的独立危险因素,联合Scr、Cys-C及KIM-1水平对预测AKI具有较高的价值。

miR-182-5p调控FHIT对喉鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-182-5p调控脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)对喉鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法选取喉鳞癌组织和癌旁正常组织标本各39例,将anti-miR-NC、anti-miR-182-5p、miR-NC、miR-182-5p载体质粒分别转染至FD-LSC-1喉鳞癌细胞中,分别记为anti-miR-NC组、anti-miR-182-5p组、miR-NC组、miR-182-5p组;将anti-miR-182-5p质粒分别与si-NC、si-FHIT载体质粒共转染至FD-LSC-1细胞中,分别记为anti-miR-182-5p+si-NC组、anti-miR-182-5p+si-FHIT组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测喉癌组织、癌旁组织中的FHIT及miR-182-5p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测FHIT、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测miR-182-5p和FHIT的靶向关系。结果与癌旁组织相比,喉鳞癌组织中miR-182-5p表达水平显著升高,FHIT表达水平显著降低。抑制miR-182-5p表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,提高细胞凋亡率,降低CyclinD1、Bcl-2、MMP-2表达水平,提高p21、Bax、E-cadherin表达水平。miR-182-5p可靶向调控FHIT,抑制FHIT能逆转抑制miR-182-5p对喉鳞癌细胞FD-LSC-1增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡促进作用。结论抑制miR-182-5p表达可抑制喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与FHIT表达相关。

丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响

目的 探讨丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响。方法 采用缺氧诱导体外培养的HTR-8/SVneo细胞,丙泊酚干预,采用CCK-8检测细胞的活力、Transwell测定细胞迁移和侵袭,TUNEL检测细胞凋亡。通过qRT-PCR测量miR-182-5p和HIF-1α相对mRNA表达水平。Western blot检测相关通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较,缺氧组细胞迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平降低,HIF-1α、VEGF表达水平升高(P <0.05)。与缺氧组比较,丙泊酚干预后,细胞迁移、侵袭能力恢复,细胞凋亡率降低(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平升高,HIF-1α、VEGF表达水平降低(P <0.05)。转染抑制剂后则逆转了丙泊酚的治疗作用。结论 丙泊酚通过调节miR-182-5p/HIF-1α轴改善缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞毒性。

去甲斑蝥素通过调控miR-182-5p抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的:研究去甲斑蝥素(ND)对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制。方法:CCK-8和Transwell检测不同浓度的ND给药后SKOV3细胞增殖和侵袭能力变化;qRT-PCR和Western blot检测给药前后LKB1/AMPK信号通路蛋白和上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达;加入LKB1/AMPK通路激动剂GSK621后,CCK-8和Transwell分别检测SKOV3细胞增殖和侵袭能力变化;qRT-PCR和Western blot检测给药前后EMT相关蛋白和LKB1/AMPK信号通路蛋白变化;si-miR-182-5p转染SKOV3细胞后CCK-8和Transwell检测miR-182-5p对SKOV3细胞增殖和侵袭能力影响;qRT-PCR和Western blot检测转染前后LKB1/AMPK信号通路蛋白和EMT相关蛋白表达。结果:30μmol/L ND对SKOV3细胞增殖抑制效果最明显;ND显著抑制SKOV3细胞侵袭同时显著激活LKB/AMPK信号通路和EMT。加入GSK621可以部分消除ND对SKOV3细胞增殖和侵袭影响,ND抑制miR-182-5p表达而激活LKB1/AMPK磷酸化和EMT。结论:ND可能通过抑制miR-182-5p阻滞LKB1/AMPK信号通路和EMT发生抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。

miR-182-5p通过靶向调节KLF7抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-182-5p对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法:用qRT-PCR检测法比较人骨肉瘤细胞系(U2OS、MG63、SAOS2)、人正常细胞和人成骨细胞(HFOB1.19)中miR-182-5p的表达水平。转染miRNA模拟物或抑制剂或模拟物+KLF7,以转染miR-182-5p表达的上调或下调。通过EDU、迁移分析和侵袭分析来检测细胞功能。双荧光素酶报告分析检测miR-182-5p与KLF7的关系,蛋白质印迹分析检测KLF7的表达。结果:miR-182-5p在骨肉瘤细胞系中被下调。miR-182-5p过表达抑制肿瘤生长、迁移和侵袭。随后的研究显示,KLF7是骨肉瘤细胞中miR-182-5p的直接和功能靶点。miR-182-5p通过调节KLF7来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。结论:miR-182-5p通过靶向调节KLF7而起到抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。

右美托咪定介导miR-182-5p/BDNF改善肝叶切除术后大鼠早期认知功能障碍的机制研究

目的探讨右美托咪定(DEX)通过调控微小RNA-182-5p/脑源性神经营养因子(miR-182-5p/BDNF)轴对肝叶切除术后大鼠早期认知功能障碍的影响。方法将60只无特定病原体(SPF)级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、DEX低剂量组(25μg/kg)、DEX中剂量组(50μg/kg)、DEX高剂量组(100μg/kg)和DEX+miR-182-5p模拟剂组,每组10只。模型组大鼠吸入七氟醚麻醉后行部分肝叶切除术;DEX低、中、高剂量组大鼠预先通过腹腔注射25、50、100μg/kg DEX,30 min后吸入七氟醚麻醉后行部分肝叶切除术;DEX+miR-182-5p模拟剂组大鼠处理方法同DEX高剂量组,术后每2 d通过尾静脉注射miR-182-5p模拟剂(50μg);对照组大鼠通过腹腔注射2 mL/kg生理盐水,并吸入七氟醚进行麻醉2 h。采用Morris水迷宫试验与神经功能缺损评估量表(NSS)评估各组大鼠的术后认知功能与神经功能损伤。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定大鼠海马组织中miR-182-5p的水平。采用蛋白质免疫印迹法测定大鼠海马组织中BDNF的蛋白表达水平。采用生物信息学分析miR-182-5p与BDNF的3′UTR的结合区域,并利用双荧光素酶报告基因实验检测miR-182-5p与BDNF的靶向关系。结果与对照组相比,模型组大鼠术后2~5 d的Morris水迷宫测试逃避潜伏期延长,术后1、3、7 d的NSS评分升高;与模型组相比,DEX治疗组大鼠术后2~5 d的Morris水迷宫测试逃避潜伏期缩短,术后3、7 d的NSS评分降低,且呈剂量依赖性;与DEX高剂量组相比,DEX+miR-182-5p模拟剂组术后2~5 d的Morris水迷宫测试逃避潜伏期延长,术后3、7 d的NSS评分升高;与对照组相比,模型组大鼠术后海马组织中miR-182-5p水平升高,BDNF水平降低;与模型组相比,DEX治疗组大鼠术后海马组织中miR-182-5p水平降低,BDNF水平升高,且呈剂量依赖性;与DEX高剂量组相比,DEX+miR-182-5p模拟剂组术后海马组织中miR-182-5p水平升高,BDNF水平降低;上述组间差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验验证了miR-182-5p与BDNF的靶向结合。结论DEX通过抑制miR-182-5p提高BDNF水平,改善肝叶切除术后大鼠的早期认知功能障碍。

miR-182-5p靶向原癌基因Bcl-2对骨肉瘤细胞增殖和迁移的调节作用

目的 探讨miR-182-5p靶向原癌基因Bcl-2对骨肉瘤细胞增殖和迁移的调节作用。方法 收集2017年10月—2018年5月我院经病理检查确诊为骨肉瘤的组织及癌旁正常组织,检测miR-182-5p和Bcl-2在人骨肉瘤组织中表达情况。将骨肉瘤细胞株MG-63分为实验组、对照组和空白组;实验组将miR-182-5p过表达后转染到骨肉瘤细胞,对照组不做处理,空白组加入同等剂量的Bcl-2空白转染液。采用蛋白免疫印迹实验检测骨肉瘤细胞株MG-63中miR-182-5p调控Bcl-2的表达情况,细胞划痕实验检测miR-182-5p对骨肉瘤细胞株MG-63迁移能力的影响,MTT实验检测miR-182-5p对骨肉瘤细胞株MG-63增殖能力的影响。结果 人骨肉瘤组织中miR-182-5p表达水平低于癌旁正常组织( P <0.01)。过表达miR-182-5p后骨肉瘤细胞株MG-63中Bcl-2的表达水平相对上调。实验组miR-182-5p表达水平高于对照组和空白组,细胞增殖率低于空白组和对照组( P <0.05)。实验组骨肉瘤细胞株MG-63迁移距离低于空白组和对照组( P <0.05)。结论 miR-182-5p靶向原癌基因Bcl-2对骨肉瘤细胞增殖和迁移有一定的抑制作用,表明miR-182-5p在人骨肉瘤的发生发展过程中扮演着重要角色。

miR-182-5p通过HOXB7基因调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭迁移

目的探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常膀胱上皮细胞(HUC)和膀胱癌细胞(T24、5637、SW780)中miR-182-5p和同源异型盒基因B7(HOXB7)表达;生物学信息预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-182-5p和HOXB7的靶向关系;蛋白质印迹法(Western Blot)检测过表达miR-182-5p或抑制HOXB7表达对SW780细胞中HOXB7、P53和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白水平的影响;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移。共转染pcDNA-HOXB7和miR-182-5p模拟物,观察过表达HOXB7对miR-182-5p作用于膀胱癌细胞的影响。结果HUC细胞相比,miR-182-5p在膀胱癌细胞系中表达下调(P<0.05),HOXB7 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。miR-182-5p在SW780细胞中的表达量最低。HOXB7是miR-182-5p的靶基因。miR-182-5p过表达可抑制细胞活力、侵袭和迁移,降低P53和MMP-2蛋白表达量,差异有统计学意义(P<0.05),与抑制HOXB7表达结果相同。过表达HOXB7可以逆转miR-182-5p对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论miR-182-5p通过靶向调控HOXB7表达抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移。

白山毛桃根提取物通过调控miR-182-5p/PCDH10表达抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨白山毛桃根提取物是否调控miR-182-5p/PCDH10表达影响非小细胞肺癌细胞生物学行为。方法设置对照组(无白山毛桃根提取物)、白山毛桃根提取物组(浓度40 mg/ml)、白山毛桃根提取物+miR-182-5p组、白山毛桃根提取物+miR-NC组、anti-miR-182-5p组、anti-miR-NC组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)法检测各组细胞增殖。Transwell检测各组细胞的侵袭和迁移;qRT-PCR检测非小细胞肺癌H1299细胞中miR-182-5p和PCDH10 mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测PCDH10蛋白表达。双荧光素酶报告实验检测荧光活性。结果相较于对照组,白山毛桃根提取物组非小细胞肺癌H1299细胞迁移和侵袭数量显著减少(P<0.05),PCDH10 mRNA和蛋白表达升高,miR-182-5p表达显著降低(P<0.05);miR-182-5p可靶向调控PCDH10的表达。抑制miR-182-5p表达后,迁移和侵袭的H1299细胞数量显著降低(P<0.05)。miR-182-5p过表达可逆转白山毛桃根提取物对非小细胞肺癌的影响。结论白山毛桃根提取物可能通过下调miR-182-5p/PCDH10轴对非小细胞肺癌H1299细胞发挥抗增殖、抗迁移和抗侵袭作用。

Hsa_circ_USP42竞争性结合miR-182-5p抑制三阴性乳腺癌转移的机制研究

目的探索hsa_circ_USP42作为miR-182-5p海绵在TNBC中的生物学功能及调控机制。方法 RT-PCR技术检测hsa_circ_USP42在TNBC癌组织及癌旁组织中表达;通过双荧光素酶报告基因分析等技术研究hsa_circ_USP42和miR-182-5p的相互作用;过表达hsa_circ_USP42,qPCR技术及Western印迹法检测靶miRNA miR-182-5p及靶基因MTSS1的表达水平;Transwell及CCK8实验检测hsa_circ_USP42对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果 Hsa_circ_USP42在TNBC中表达明显下调(P=0.000),淋巴结阳性组表达低于淋巴结阴性组(P=0.003)。双荧光素酶实验证实hsa_circ_USP42与靶miR-182-5P可有效结合;细胞功能实验表明,过表达hsa_circ_USP42可抑制TNBC细胞迁移、侵袭和增殖。体外实验表明,过表达hsa_circ_USP42后,靶miRNA miR-182-5p上调,而靶基因MTSS1在转录水平及蛋白水平均降低。结论 Hsa_circ_USP42在TNBC中低表达,与miR-182-5p有效结合,可发挥miRNA海绵上调MTSS1表达,抑制TNBC侵袭及转移,是参与TNBC生物学行为机制之一。

基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移

近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。

miR-182-5p和自噬在外周血单个核细胞和THP-1细胞痛风性关节炎模型炎症反应中的研究

目的:探讨miR-182-5p及自噬参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法:采用尿酸盐(MSU)晶体刺激健康男性外周静脉血建立痛风炎症模型,在0、1、2、4、6、8 h分离血浆及提取外周血单个核细胞(PBMCs)。培养THP-1细胞,给予MSU晶体刺激建立痛风炎症模型,分别在0、3、6、9、12 h时间点收集细胞及上清液。实时荧光定量PCR检测PBMC和THP-1中IL-1βmRNA、linc00173、linc00963、miR-182-5p和LC3-2 mRNA水平;Western Blot技术检测IL-1β蛋白和LC3-2蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测血浆和上清液中IL-1β蛋白浓度。结果:MSU刺激健康男性外周血后PBMCs中IL-1βmRNA水平在1、2、4、6、8 h较0 h增高(P<0.05),血浆IL-1β蛋白浓度水平在1、2、4、6 h较0 h增高(P<0.05),PBMCs中IL-1β蛋白水平在2、4、6、8 h较0 h增高(P<0.05)。PBMCs中linc00173水平在1、2、4 h较0 h增高(P<0.05),linc00963水平在1、2 h较0 h增高(P<0.05),miR-182-5p水平在4 h较0 h降低(P>0.05),在8 h较0 h增高(P<0.05)。PBMCs中LC3-2 mRNA水平在4、6、8 h较0 h增高(P<0.05);LC3-2蛋白水平在6、8 h较0 h增高(P<0.05)。MSU刺激THP-1细胞:THP-1细胞中IL-1βmRNA水平和上清液IL-1β蛋白浓度在3、6、9、12 h较0 h增高(P<0.05),THP-1细胞IL-1β蛋白水平在9、12 h较0 h增高(P<0.05)。linc00173水平在9、12 h较0 h增高(P<0.05),miR-182-5p水平在6 h较0 h增高(P<0.05)。LC3-2 mRNA水平在6、9、12 h较0 h增高(P<0.05),LC3-2蛋白水平在12 h较0 h增高(P<0.05)。结论:miR-182-5p可能与linc00173和linc00963相互作用,通过调控自噬参与痛风炎症反应。