血清miR-184、miR-513c-5p表达与复发性流产相关性研究及临床意义

目的研究血清微小RNA-184(miR-184)、微小RNA-513c-5p(miR-513c-5p)表达与复发性流产(RSA)相关性及临床意义。方法选取2019年3月至2022年7月我院收治的67例RSA患者(RSA组)及67例正常早孕期女性(对照组),比较两组、RSA组血清miR-184、miR-513c-5p表达,将RSA组根据妊娠结局分为再次流产与未再次流产亚组,比较两亚组血清miR-184、miR-513c-5p表达。依次运用Pearson、受试者工作特征(ROC)曲线、临床决策分析曲线(DCA)、比值比(OR)进行相关性、预测效能、临床效用、危险度分析。结果RSA组妊娠前、后血清miR-184、miR-513c-5p均高于对照组,且RSA组妊娠后高于妊娠前(P<0.05);RSA组再次流产患者妊娠后血清miR-184、miR-513c-5p高于未再次流产患者(P<0.05)。RSA组妊娠前、后血清miR-184均与miR-513c-5p呈显著正相关(r=0.800、0.750,P<0.001);血清miR-184+miR-513c-5p表达预测RSA再发流产的ROC曲线下面积(AUC)为0.901,高于单独的血清miR-184、miR-513c-5p(Z=3.892、3.411,P<0.05)。采用该预测方案进行预测和干预,具有良好的临床效用。妊娠后血清miR-184高表达RSA患者再发流产的风险是低表达患者的7.407倍,血清miR-513c-5p高表达RSA患者再发流产的风险是低表达患者的18.125倍(P<0.05)。结论血清miR-184、miR-513c-5p的高表达与RSA及其再妊娠结局有关,联合检测两者可为再妊娠结局的预测提供一定参考,从而指导做出进一步的决策与治疗。

MiR-184通过调节FOXO3促进卵巢癌细胞增殖能力

目的 探讨miR-184通过调节FOXO3促进卵巢癌细胞增殖能力的影响。方法 荧光定量PCR检测样品中miR-184的表达水平;将miR-184mimic和miR-184 inhibitor转染至人源SKOV3卵巢癌细胞株中,并采用MTT法对转染目的基因成功的人源SKOV3卵巢癌细胞进行体外增殖活力的检测,同时检测cyclin D1、p27和FOXO3 mRNA的表达水平。结果 卵巢癌组织和细胞中miR-184的表达显著高于癌旁组织,SKOV3细胞中miR-184的表达显著高于人卵巢上皮细胞IOSE80;与IOSE80细胞相比,SKOV3细胞中FOXO3和p27 mRNA表达水平显著降低,而cyclin D1 mRNA表达水平显著升高。MTT试验表明,过表达miR-184后,SKOV3细胞增殖活性显著提高;当抑制miR-184表达后,SKOV3细胞增殖活性显著降低。此外,过表达miR-184后,SKOV3细胞的cyclin D1 mRNA表达量显著升高,而FOXO3和p27 mRNA表达量则显著降低(P<0.05)。与此相反,当抑制miR-184的表达后,SKOV3细胞的cyclin D1 mRNA表达量显著降低,而FOXO3和p27 mRNA表达量则显著升高(P<0.05)。结论 miR-184能影响卵巢癌细胞的增殖能力,并调节细胞周期相关基因的表达。

miR-184在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-18和TLR-8表达的调控作用机制

目的:检测miR-1、miR184与多巴胺转运体在多巴胺细胞系SH-SY5Y内的表述,研究miR、miR-184在SH-SY5Y细胞系中对DAT基因表述的作用与其体制。方法:使用microRNA.org、miRBase、TargetScan.等网络数据库预估与文献检索相融合的模式,选择可以作用于DAT基因的候补miRNAs,并化学合成候补miRNAs模拟物转染到SH-SY5Y细胞内。依次转染后12h与24h后,提炼NC-mimics组、NC-inhibitor组、miRNAs mimics组与miRNAs inhibitor组细胞总RNA与蛋白;使用实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞内的候补miRNA、DATmRNA表述情况;使用Western Blot检测各组细胞内DAT蛋白表述水平。结果:(1)通过生物信息理论检测融合检索资料选择出的候补miRANs是miR-1、miR-184;(2)miRNAs表述水平:miR-1 mimics 12h组与miR-1 mimics 24h组的miR-1表述量明显超过对照组(Ps<0.001),miR-1 inhibitor 12h组、miR-1 inhibitor 24h组合对照组比较没有明显差异(Ps>0.05);miR-184 mimics24h处理组中miR-184的表述量和对照组比较都有明显差异(P<0.01),miR-184 inhibitor 12h、miR-184 mimics12h与miR-184 inhibitor 24h处理组与对照组比较并无明显差异(Ps>0.05);(3)DATmRNA表述水平:miR-1 mimics 12h处理组内DAT mRNA的表述量和对照组比较有明显差异(P<0.05),miR-1 mimics 24h、miR-1 inhibitor 12h组与miR-1inhibitor 24h组DAT mRNA的表述量和对照组比较都缺乏明显差异(Ps>0.05),miR-184 mimics 12h组、miR-184 inhibitor 12h组与miR-184 inhibitor 24h组DAT mRNA的表述量和对照组比较都缺乏明显差异(Ps<0.05)。结论miR-1、miR-184参加SH-SY5Y细胞内DAT基因表述的控制,过表达的miR-1与miR-184都能压抑SH-SY5Y细胞内的DAT蛋白的表述。

白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率及Cleaved-caspase3蛋白表达量(P<0.05),同时显著降低了软骨细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α表达量(P<0.05),且呈浓度依赖性。上调SNHG9显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞OD值(P<0.05),显著降低了细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达量及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α表达量(P<0.05),而下调SNHG9与上调SNHG9的作用相反。SNHG9靶向负调控miR-184。白杨素促进IL-1β诱导的软骨细胞中SNHG9的表达,而抑制了miR-184的表达。下调SNHG9逆转白杨素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症因子表达的抑制作用。结论 白杨素可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎性因子表达,其可能通过调控SNHG9/miR-184轴发挥作用。

基于Wnt信号通路探究上调miR-184对糖尿病视网膜病变模型大鼠的干预效果

目的基于Wnt信号通路探究上调miR-184对糖尿病视网膜病变模型大鼠的干预效果。方法选取40只SD健康大鼠,10只作为正常组,剩余30只建立糖尿病视网膜病变模型,并随机分为模型组、下调miR-184组、上调miR-184组。对4组大鼠分别进行干预,同时对4组大鼠视网膜组织进行苏木素-伊红(HE)染色处理。对总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、空腹血糖水平进行检测对比。采用免疫比浊法、酶联免疫吸附试验分别对谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平进行检测。结果与正常组相比,模型组TC、TG、空腹血糖、VEGF、TNF-α、NO水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,下调miR-184组TC、TG、空腹血糖、VEGF、TNF-α、NO水平显著升高(P<0.05);与下调miR-184组相比,上调miR-184组TC、TG、空腹血糖、VEGF、TNF-α、NO水平显著降低(P<0.05);与正常组相比,模型组GSH显著下降(P<0.05);与模型组相比,下调miR-184组GSH显著下降(P<0.05);与下调miR-184组相比,上调miR-184组GSH显著上升(P<0.05);与正常组相比,模型组糖原合成激酶(GSK)-3β表达显著升高、β-连环蛋白(catenin)、原癌基因(C-Myc)表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,下调miR-184组GSK-3β表达显著升高、β-catenin、C-Myc表达显著降低(P<0.05);与下调miR-184组相比,上调miR-184组GSK-3β表达显著降低,β-catenin、C-Myc表达显著升高(P<0.05)。结论上调miR-184干预糖尿病视网膜病变模型大鼠,对血脂、血糖水平具有调控作用,可改善眼底视网膜环境,有效降低血管通透性,从而达到治疗糖尿病视网膜病变的效果。

miR-184靶向TNFAIP2调控肺癌血管新生的分子机制

目的 探讨微小RNA(miR)-184靶向肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导蛋白(TNFAIP)2对肺癌增殖、血管新生的调控作用及其分子机制。方法 聚合酶链式反应(PCR)检测正常人及非小细胞肺癌患者血清miR-184与TNFAIP2 mRNA的表达,qRT-PCR及Western印迹分别检测人支气管黏膜上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌A549细胞miR-184与TNFAIP2 mRNA及蛋白的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血管内皮生长因子(VEGF)蛋白,血管形成实验检查各组血管新生能力。过表达miR-184及干扰TNFAIP2后,观察各组细胞增殖及血管新生能力,双荧光色素酶试验验证miR-184与TNFAIP2的结合位点。结果 miR-184在肺癌组表达水平显著降低,VEGF蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。A549细胞miR-184表达水平显著低于BEAS-2B细胞,而TNFAIP、VEGF蛋白表达水平显著高于BESA-2B细胞(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-184组血管新生能力明显减弱,而干扰TNFAIP2表达后,si-TNFAIP2组血管新生能力也明显减弱(P<0.05)。结论 miR-184抑制肺癌A549细胞血管新生,其主要分子机制是通过靶向TNFAIP2调控VEGF的表达而发挥作用。

微小miR-184在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制探究

目的:探究微小miR-184(miR-184)在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法:利用定量的反转录(PCR)技术检测62例女性滋养层细胞组织中微小miR-184的表达,以分析和观察女性滋养层细胞组织中的miR-184在人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/Svneo)和滋养层细胞系(Swan71)两种细胞中的表达水平和对细胞增殖与凋亡的作用机制。结果:miR-184在人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/Svneo)和人滋养层细胞(Swan71)两种细胞中的相对表达水平在滋养层细胞中比在正常的上皮组织细胞中更高(均P<0.05);转染小干扰RNA(siRNA)沉默miR-184促使miR-184的表达能够抑制HTR8/SVneo和Swan71细胞的增殖,利用si-miR-184的转染降低miR-184的表达水平能够阻碍女性滋养层细胞的凋亡(P<0.01),而miR-184的过度表达能够明显推动女性滋养层细胞的凋亡(P<0.01)。结论:通过抑制miR-184表达可以调控和诱导滋养层细胞凋亡的保护作用。

miR-184及miR-205在绵羊不同生长时期毛囊及其他组织中的表达研究

为了研究miR-184及miR-205在绵羊毛囊发育过程中的作用,本研究以绵羊为研究材料,检测了miR-184及miR-205在毛囊3个发育时期及不同组织中的表达情况,进行了基因组定位及前体预测,并预测了可能的靶基因及调控的基因通路。结果发现,miR-184的表达量从毛囊生长期到衰退期呈逐步上升的趋势,而miR-205则表现为先上升后下降,其在衰退期表达量最高。2个microRNA在绵羊的多个组织中均有表达。两者的候选靶基因涉及15个基因通路,可能通过Wnt通路调控毛囊的生长周期。

miR-184靶向AGO2调控AKT/mTOR信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的研究miR-184在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其相关机制。方法收集2015年1月至2017年1月南阳市中心医院87例膀胱癌患者的手术切除标本,采用qRT-PCR检测膀胱癌及癌旁组织中miR-184的表达;通过生物信息学方法预测miR-184的靶基因并采用双荧光素酶实验及免疫荧光进行验证。在人膀胱癌细胞系T24中转染miR-184过表达质粒,MTT、Transwell侵袭和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blot检测AKT/mTOR通路蛋白的表达。结果miR-184在膀胱癌组织中的相对表达水平1.238±0.026明显低于癌旁组织2.601±0.054,差异有统计学意义(t=22.57,P<0.01);且其表达水平与膀胱癌患者的TNM分期(t=-5.61,P<0.001)、淋巴结转移(t=-2.35,P=0.011)及组织学分级存在明显相关(t=2.171,P=0.033)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-184能直接靶向结合AGO2基因3′-UTR。体外实验结果表明,转染miR-184模拟物后,膀胱癌细胞T24中AGO2 mRNA和蛋白的表达水平明显下调,细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,p-mTOR、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-184在膀胱癌组织中低表达,上调miR-184表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与AKT/mTOR信号通路的调节有关。

MiR-184通过MAPK信号通路促进多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖

目的:研究microRNA-184(miR-184)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)中的作用,并初步探讨其潜在的作用机制。方法:采用qRT-PCR检测24例PCOS卵巢组织标本、20例正常卵巢组织标本及人卵巢颗粒细胞KGN和人正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-184的表达情况。通过细胞转染法抑制KGN细胞中miR-184的表达,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Western印迹法检测细胞中p-p38 MAPK和p-ERK1/2蛋白表达水平。以终浓度为20μmol/L的MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580处理下调miR-184的KGN细胞,按照上述方法检测对细胞增殖的影响。结果:PCOS卵巢组织和KGN细胞中miR-184的表达显著上调。在KGN细胞中转染mi R-184抑制剂可显著抑制mi R-184的表达。下调mi R-184的表达后,KGN细胞增殖和细胞克隆形成能力显著降低,细胞中p-p38 MAPK和p-ERK1/2蛋白表达水平显著下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制剂SB203580处理下调miR-184的KGN细胞,细胞增殖和细胞克隆形成能力显著降低,与单纯下调miR-184的细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-184能够促进卵巢颗粒细胞的增殖,其作用机制与MAPK信号通路的激活有关,可为PCOS的治疗提供潜在的作用靶点。

胃癌组织中miR-184、Beclin1、LC3B的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中miR-184、自噬相关基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达及临床意义。方法收集103例胃癌患者的临床及病理资料,通过荧光实时定量PCR技术测量miR-184、Beclin1及LC3B的表达情况,并分析其临床特征。采用Pearson相关分析法检验miR-184、Beclin1及LC3B的相关性。结果胃癌组织中miR-184、Beclin1及LC3B的表达量较癌旁组织下降(P均<0.05)。存在淋巴结转移及TNM分期Ⅲ-Ⅳ期患者胃癌组织中miR-184、Beclin1及LC3B的表达降低(P均<0.05)。miR-184和Beclin1、miR-184和LC3B、Beclin1和LC3B的表达量均呈显著正相关(r分别为0.845、0.787、0.793,P均<0.05)。结论胃癌组织中miR-184、Beclin1及LC3B的表达均降低,且与淋巴结转移和TNM分期密切相关,能够在一定程度上评估患者病情。

扶正消积汤含药血清通过下调miR-184促进人肺腺癌SPC-A1细胞凋亡的影响

目的探讨扶正消积汤含药血清通过下调miR-184促进人肺腺癌SPC-A1细胞凋亡的影响。方法将实验分为对照组、扶正消积汤含药0.05%、0.1%和0.2%组,分别处理24 h和48 h后对其进行检测,使用倒置显微镜观察各组细胞形态的变化,使用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,使用流式细胞仪检测并计算细胞凋亡率,实时定量PCR检测PIEN和PDCD4 mRNA表达水平,最后使用Graphpad Prism 5软件进行统计分析。结果CPS-A1细胞的活力随着扶正消积汤含药浓度和时间的上升而下降,并且细胞增殖抑制率显著上升,当扶正消积汤含药为0.2%时,细胞增殖抑制率在48 h可达到80%;随着扶正消积汤含药浓度的上升,细胞形态可见明显变化,细胞在0.2%的浓度时,开始出现细胞膜边缘出现小气泡和整体萎缩等凋亡形态;SPC-A1细胞早期凋亡率随着扶正消积汤含药浓度的升高而升高,并且可见48 h的细胞早期凋亡率显著高于24 h;miR-184在0.1%浓度扶正消积汤含药血清处理SPC-A1细胞12 h后明显下降,PTEN和PDCD4表达则显著上升。结论扶正消积汤含药血清可显著抑制人肺腺癌细胞SPC-A1的细胞增殖,并可改变细胞的形态,抑癌基因PTEN和PDCD4的表达随着miR-184表达的下降而上升,从而达到促进肺癌细胞凋亡的抗肿瘤作用。

miR-184在氧糖剥夺诱导SK-N-SH细胞缺血损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2表达的调节

目的:探讨miR-184在氧糖剥夺(OGD)诱导SK-N-SH细胞缺血缺氧损伤中的作用及其对抗凋亡基因AKT2的调节。方法:应用RT-PCR检测miR-184在SK-N-SH细胞OGD后的表达情况,并瞬时转染miR-184的类似物、抑制物及其阴性对照,分别行RT-PCR检测miR-184和AKT2的表达,MTT染色检测细胞存活率。结果:与正常细胞相比,miR-184在OGD诱导的缺血损伤模型中表达下调(P<0.05);且过表达或抑制miR-184可显著改变AKT2的表达,影响缺血损伤细胞的存活率(P<0.05);而在非OGD作用下,miR-184对SK-N-SH细胞的活力无显著影响。结论:miR-184通过负性调节AKT2的表达水平,在OGD诱导的缺血损伤中发挥重要作用。

男性不育患者精浆exosome中miR-184水平变化及临床意义

目的:探讨男性不育患者精浆外泌体(exosome)中miR-184的水平变化及临床意义。方法:收集2015~2019年在江苏省中医院、东部战区总医院及温州医科大学附属第一医院就诊的97例无精子症患者、96例弱精子症患者及同期募集的92例正常生育男性精浆标本,分离精浆exosome后运用透射电镜、Nanosight和Western印迹对exosome进行鉴定;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测exosome miR-184的水平,统计分析miR-184变化、临床价值及与精液参数的相关性,进一步用生物信息学方法预测和分析miR-184靶基因、相关信号通路及与男性不育关系。结果:透射电镜、Nanosight和Western印迹结果显示,精浆中含有大量exosome。qRT-PCR结果显示,无精子症患者精浆exosome miR-184水平显著低于正常对照[0.227 (0.092, 0.790)vs 0.650 (0.408, 1.061)](P<0.01),弱精子症患者精浆exosome中miR-184水平显著高于正常对照[1.176 (0.661, 1.946)vs 0.650 (0.408, 1.061)](P<0.01)。受试者工作特征曲线(ROC)分析结果显示,精浆exosome miR-184无精子症、弱精子症患者的曲线下面积(AUC)为0.866(95%CI 0.815~0.916)和0.724(95%CI 0.653~0.795);区分弱精子症和无精子症患者的AUC为0.964(95%CI 0.943~0.985)。相关性分析显示,弱精子症患者精浆exosome miR-184水平与精子浓度呈显著正相关(r=0.243,P=0.017),与前向运动精子百分率呈显著负相关(r=-0.407,P=0.006)。生物信息学分析发现miR-184的靶基因显著富集于男性生殖和精子发生密切相关的蛋白调控通路。结论:男性不育患者精浆exosome miR-184水平与正常生育男性具有统计学差异,具备作为男性不育辅助诊断标志物潜能并可能参与男性不育的发生发展。

miR-184通过JNK信号通路调控卵巢癌的增殖与凋亡

目的:探讨miR-184通过JNK信号通路对卵巢癌增殖与凋亡的影响。方法:收集卵巢癌患者的癌组织与癌旁组织标本,荧光定量PCR检测miR-184表达;采用Lipofectamine 2000将miR-184 inhibitor和miR-184 mimic分别转入卵巢癌细胞株OVCAR3,qPCR检测其转染效率,MTT及细胞凋亡实验检测miR-184表达对细胞增殖及凋亡的影响;Westerm blot检测miR-184表达对JNK信号通路中total JNK及p-JNK蛋白的影响。结果:卵巢癌组织中miR-184表达较癌旁组织明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);高表达miR-184后,OVCAR3细胞增殖率显著提高,细胞凋亡率显著下降,磷酸化p-JNK表达明显上调(P均<0.05);下调miR-184表达后,OVCAR3细胞增殖率明显下降,细胞凋亡率显著升高,磷酸化p-JNK表达明显下调(P均<0.05)。结论:miR-184可促进卵巢癌细胞增殖并抑制细胞凋亡,其机制可能与JNK信号通路有关。

血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的表达水平及其诊断效能

目的分析血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的表达水平,及其对非小细胞肺癌的诊断效能。方法选取非小细胞肺癌患者112例、肺炎患者60例、体检健康者40例作为研究对象,分别收集3组血浆标本,提取经纯化鉴定的血清外泌体中miRNA,采用QRT-PCR法检测3组血清外泌体miR-184的表达水平,利用ROC曲线评价血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中的诊断效能。结果本研究纯化的样品中含有大量外泌体颗粒且具备既往报道的外泌体特性;3组血清外泌体miR-184的表达量,组间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05),且非小细胞肺癌患者血清外泌体miR-184表达量明显高于肺炎患者和体检健康者(P<0.05);ROC曲线图下血清外泌体miR-184对非小细胞肺癌的诊断敏感性为92.54%,特异性为84.19%,其曲线下面积为0.913[95%CI(0.726,1.031)]。结论血清外泌体miR-184在非小细胞肺癌中呈高表达,其临床诊断效能较高,可能成为非小细胞肺癌早期诊断的生物学标志物。

miR-184靶向ZNRF3调控口腔鳞状细胞癌增殖和转移的分子机制

目的探讨微小RNA-184(miR-184)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用的分子生物学机制。方法利用qRT-PCR与Western印迹技术分别检测舌鳞癌细胞系及正常口腔黏膜细胞中miR-184、ZNRF3 mRNA及蛋白表达水平。将anti-miR-184、si-ZNRF3及其阴性对照分别或共同转染入舌鳞癌细胞SCC-9中,采用噻唑蓝(MTT)与Transwell法检测转染后各组细胞增殖、迁移及侵袭能力的改变。双荧光素酶报告基因方法检测miR-184与ZNRF3的靶向关系。Western印迹法检测细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达。结果相对于正常口腔黏膜细胞,OSCC细胞系中miR-184表达水平显著上调,而ZNRF3 mRNA及蛋白表达水平显著下调;双荧光素酶报告基因实验验证ZNRF3是miR-184的靶基因;SCC-9细胞中转染anti-miR-184能显著抑制miR-184表达水平,降低SCC-9细胞增殖、迁移及侵袭能力,而共转染si-ZNRF3可逆转anti-miR-184对SCC-9细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;沉默miR-184后SCC-9细胞中CDK4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平显著下调,而β-catenin、E-cadherin蛋白表达水平显著上调,而共转染si-ZNRF3可逆转其作用。结论miR-184可通过抑制ZNRF3表达调控EMT进程进而促进OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

心理应激致血浆外泌体miR-184-3p抑制血管内皮细胞增殖、迁移功能的作用分析

目的探讨心理应激源性血浆外泌体miR-184-3p在调控血管内皮细胞增殖、迁移功能中的作用。方法(1)将60只6~8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和心理应激组,每组30只。采用21 d慢性不可预知性心理应激刺激建模。通过行为学实验(旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验)评价建模效果。提取血浆外泌体进行电镜分析,qPCR检测血浆外泌体miR-184-3p表达水平。(2)体外培养小鼠肺微血管内皮细胞(MPVEC),分别转染对照组小鼠血浆外泌体(C-EXO组)、心理应激组小鼠血浆外泌体(S-EXO组)、NC mimic组和miR-184-3p mimic组。划痕实验分析细胞迁移情况,EdU染色分析细胞增殖情况。结果(1)心理应激组小鼠探索行为较对照组显著降低,不动时间显著增加(P<0.01)。电镜分析验证血浆外泌体直径为30~200 nm的双层膜囊泡结构,qPCR证实心理应激组小鼠血浆外泌体中miR-184-3p的表达量显著增加(P<0.05)。(2)细胞实验结果显示S-EXO组细胞迁移和增殖能力较C-EXO组下降(P<0.01);同时miR-184-3p mimic组细胞增殖和迁移能力较NC mimic组下降(P<0.05)。结论慢性心理应激源性血浆外泌体可以通过介导miR-184-3p抑制血管内皮细胞的增殖和迁移。

慢病毒载体miR-184过表达对前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响

目的 探讨负载microRNA-184(miR-184)的慢病毒过表达miR-184对前列腺癌细胞PC-3生物活动的影响。方法 实验分为3组:过表达慢病毒组、阴性对照组以及空白组,将过表达的miR-184慢病毒转染前列腺癌细胞PC-3,转染72h后,通过荧光显微镜评估细胞转染情况以及实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-184相对表达量;并利用CCK-8试剂盒测定转染后细胞孵育第24h、48h、72h后PC-3细胞的增殖情况;再通过Transwell小室实验的测定分析PC-3细胞的侵袭能力和划痕细胞试验的观察划痕后第72h迁移范围。结果 PC-3细胞经慢病毒转录感染后,经荧光显微镜及实时荧光定量PCR验证转染成功,过表达组细胞的增殖、侵袭、迁移能力较阴性对照组和空白组减弱(P <0.001)。结论 过表达miR-184可以抑制前列腺癌细胞PC-3增殖、侵袭、迁移。

miR-184对顺铂耐药肺癌细胞PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响

目的:探讨miR-184对顺铂耐药的肺癌细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法:选择人肺腺癌A549和鳞癌SKMES1细胞系分别建立顺铂耐药细胞模型。构建miR-184过表达和低表达质粒载体并成功转染耐药A549和SKMES1细胞,构建过表达和低表达miR-184的耐药细胞。实验分为对照组(未处理的肺癌细胞)、耐药组、过表达组和低表达组,各组细胞培养24、48和72 h后采用MTT法检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,培养72 h后Western blot法检测细胞中PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达。结果:耐药组A549和SKMES1细胞中miR-184表达水平高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞增殖率升高;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞增殖率升高,而低表达组降低(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞凋亡率降低;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞凋亡率降低,而低表达组升高(P<0.05)。与对照组比较,耐药组A549和SKMES1细胞PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达水平升高;与耐药组比较,过表达组A549和SKMES1细胞PI3K、AKT和mTOR蛋白的表达水平升高,而低表达组降低(P<0.05)。结论:miR-184可能通过激活PI3K/AKT/mTOR细胞信号通路,促进顺铂耐药肺癌细胞增殖、抑制细胞凋亡。