CircRHOT1调节miR-187-3p/SOX4轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:研究环状RNA ras同源物基因家族成员T1(CircRHOT1)调节miR-187-3p/性别决定区Y框蛋白4(SOX4)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外培养的人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231中CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;将体外培养的MCF-7细胞随机分为对照组、CircRHOT1敲低(转染CircRHOT1 siRNA质粒)组、miR-187-3p mimics(转染miR-187-3p mimics)组、共转染阴性对照(转染空载质粒和miR-187-3p inhibitor阴性对照)组、CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor(转染CircRHOT1 siRNA质粒和miR-187-3p inhibitor)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;采用EdU染色和平板集落形成实验检测各组细胞增殖;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2)。各组细胞与人外周血淋巴细胞共培养并分组转染后,采用流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;采用MTT法检测人外周血淋巴细胞对各组MCF-7细胞的杀伤率。采用双荧光素酶报告实验检测MCF-7细胞CircRHOT1对miR-187-3p、miR-187-3p对SOX4的靶向调控。结果:与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231细胞CircRHOT1、SOX4蛋白与mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-187-3p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,CircRHOT1敲低组、miR-187-3p mimics组细胞SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率降低(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率升高(P<0.05)。与CircRHOT1敲低组相比,CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor组细胞CircRHOT1表达差异无统计学意义(P>0.05),SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率升高(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低CircRHOT1可通过上调miR-187-3p而降低SOX4表达,从而减弱乳腺癌细胞增殖活性,并促进其凋亡,还可抑制CD8^(+)T细胞活化并增强其癌细胞杀伤力,减弱乳腺癌细胞免疫逃逸。

加味柴胡疏肝汤联合穴位埋线治疗脑梗死后继发癫痫的效果及对miR-187、P38MAPK的影响

目的:探究加味柴胡疏肝汤联合穴位埋线治疗脑梗死后继发癫痫的效果及对微小RNA-187(miR-187)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的影响。方法:纳入2020年2月~2022年2月期间本院收治的76例脑梗死后继发癫痫患者进行分析,依据治疗方案不同分组,观察组40例和对照组36例。对照组予以常规治疗联合穴位埋线治疗,观察组基于此基础上联合使用加味柴胡疏肝汤。2组疗程均为2个月。比较两组临床疗效、不良反应以及治疗前后的症状控制情况(癫痫发作频率、持续时间)、脑电图特征(痫样放电及累及导联数)、血清指标[同型半胱氨酸(Hcy)、D-二聚体]以及miR-187、P38MAPK mRNA表达量。结果:观察组的治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);两组治疗后的癫痫发作频率、持续时间、痫样放电、累及导联数较治疗前均下降,且观察组低于对照组(P<0.05)。实验室指标方面,两组治疗后的Hcy、D-二聚体、P38MAPK水平均降低,且观察组均低于对照组(P<0.05);而两组miR-187mRNA均升高,且观察组高于对照组(P<0.05);不良反应对比两组无明显差异(P>0.05)。结论:加味柴胡疏肝汤联合穴位埋线对于脑梗死后继发癫痫患者的治疗效果明显,可调节脑电波,显著改善癫痫症状及促进神经元恢复,其可能与促进miR-187表达、激活P38MAPK通路有关。

加味柴胡疏肝汤对急性癫痫小鼠海马miR-187/Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的探讨加味柴胡疏肝汤对急性癫痫小鼠miR-187/Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法制备匹罗卡品急性癫痫小鼠模型后,将小鼠随机分为模型组、加味柴胡疏肝汤组、卡马西平组、加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组、加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组,每组10只,除模型组之外,其余组别分别给予相应药物灌胃进行干预,2次/d,连续14 d。脑电图检测小鼠痫性波,苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法进行正常组与模型组病理组织学观察,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测小鼠海马组β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3 mRNA表达水平,免疫蛋白印迹法(western blot,WB)检测小鼠海马组织β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3蛋白表达水平,免疫荧光检测小鼠海马组织β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3的表达水平。结果脑电图结果显示,与正常组相比,模型组小鼠脑电图观察到连续性痫性放电,表现为棘波、尖波、棘-慢综合波;与模型组比较,加味柴胡疏肝汤组与卡马西平组均能减少癫痫小鼠脑电图痫性波次数;与加味柴胡疏肝汤组比较,加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组小鼠脑电图中痫性放电次数明显减少,加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组小鼠脑电图中痫性放电次数明显增加。RT-PCR结果显示,与正常组相比,模型组β-catenin、cyclin D1、c-myc和wnt3基因表达显著升高;与模型组相比,加味柴胡疏肝汤组和加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组小鼠海马组织中β-catenin、cyclin D1、c-myc和wnt3基因表达均明显减低,且较单纯使用加味柴胡疏肝汤组明显减低;加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组cyclin D1较模型组明显降低;卡马西平组β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3基因表达水平均明显降低。WB结果显示,与正常组相比,模型组β-catenin、cyclin D1、c-myc和wnt3蛋白表达显著升高;与模型组相比,加味柴胡疏肝汤组和卡马西平组小鼠海马组织中β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3蛋白表达量均减低;加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3蛋白表达量较模型组和加味柴胡疏肝汤组均明显减低;加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组c-myc、wnt3蛋白表达量较模型组比均明显降低;免疫荧光结果基本同WB。结论加味柴胡疏肝汤上调miR-187的表达,抑制β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3的表达,抑制癫痫的发生和发展。

急性ST段抬高型心肌梗死患者血清miR-187-5p、DYRK2水平变化及预后价值评估

目的:探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血清微小RNA-187-5p(miR-187-5p)、人双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(DYRK2)的水平变化,并分析对患者预后评估的意义。方法:选取本院2019-05-2021-12入院治疗的102例急性STEMI患者(研究组),以同期在本院进行体检的40例健康者作为对照组,收集整理患者一般临床资料进行分析,采用Pearson相关性分析急性STEMI患者血清miR-187-5p、DYRK2表达的关系;随访102例患者治疗后6个月内情况,根据是否发生不良心血管事件(MACE)将其分为MACE组(45例)和非MACE组(57例),采用Logistic回归分析影响急性STEMI患者预后的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-187-5p、DYRK2对患者预后的预测价值。结果:研究组血清miR-187-5p水平显著低于对照组,DYRK2水平显著高于对照组(P<0.01);MACE组血清miR-187-5p表达水平显著低于非MACE组,血清DYRK2水平显著高于非MACE组(P<0.01);血清miR-187-5p与DYRK2水平呈负相关(r=-0.228,P<0.05);血清DYRK2、miR-187-5p、cTnT、LVEF、TG均为STEMI患者预后的影响因素(P<0.01);ROC曲线分析显示,miR-187-5p和DYRK2联合检测对患者预后评估的ROC曲线下面积为0.872,敏感度、特异度分别为88.89%、75.44%。结论:STEMI患者血清miR-187-5p水平降低,DYRK2水平升高,二者联合检测对患者预后评估具有一定的预测价值。

LINC00341通过靶向miR-187对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体(pcDNA3.1-LINC00341)转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)法检测Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2和E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。双荧光素酶报告实验联合RT-qPCR验证LINC00341对miR-187的靶向调控关系。将miR-187模拟物(miR-187 mimics)和pcDNA3.1-LINC00341共转染DU145细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化。结果 过表达LINC00341抑制DU145细胞Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的表达,促进P21、Bax和E-cadherin蛋白的表达水平,抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。miR-187是LINC00341的靶基因,LINC00341靶向负性调控miR-187表达。过表达miR-187可逆转LINC00341过表达对DU145细胞的增殖、迁移侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论 LINC00341通过靶向下调miR-187抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-187-3p调控FOXK1/NF-κB信号通路影响破骨细胞增殖、凋亡及分化的分子机制

目的探讨miR-187-3p对破骨细胞增殖、凋亡、分化的影响及其对叉头框转录因子(FOX)K1/核因子(NF)-κB信号通路的调控作用。方法选取49例骨质疏松(OP)患者为OP组,同时选取绝经后骨质疏松性无骨折患者49例为control组;18只SPF级雌性大鼠,分为正常组与模型组,每组9只;原代分离培养OP大鼠破骨细胞,miR-NC、miR-187-3p mimics、pcDNA-NC、pcDNA-FOXK1、miR-187-3p mimics与pcDNA-NC、miR-187-3p mimics与pcDNA FOXK1转染入破骨细胞;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹分别检测OP患者血清与破骨细胞中miR-187-3p、FOXK1的表达量;采用qRT-PCR法检测破骨细胞中耐酒石酸酸性磷酸酶(Acp)-5、基质金属蛋白酶(MMP)9、组织蛋白酶(Cathepsin K)、整合素(Integrinαv)的表达量;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测miR-187-3p与FOXK1的靶向关系;Western印迹检测Ki-67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3、p-p65、p-核因子κB抑制蛋白(IкB)α蛋白表达量。结果与control组比较,OP组血清中miR-187-3p表达水平明显降低,FOXK1表达水平明显升高(均P<0.05);与正常组比较,模型组miR-187-3p表达水平明显降低,FOXK1表达水平明显升高(均P<0.05);与miR-NC组比较,miR-187-3p组细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Acp-5、MMP9、Cathepsin K、Integrinαv、p-p65、p-IкBα表达水平明显降低,Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(均P<0.05);与pcDNA-NC组或miR-187-3p+pcDNA-NC组比较,pcDNA-FOXK1组或miR-187-3p+pcDNA-FOXK1组细胞活力明显升高,细胞凋亡率明显降低,Ki-67、Acp-5、MMP9、Cathepsin K、Integrinαv、p-p65、p-IкBα表达水平明显升高,Cleaved-caspase-3蛋白水平明显降低(均P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实FOXK1是miR-187-3p的靶基因。结论miR-187-3p过表达可通过下调FOXK1的表达从而抑制破骨细胞增殖、分化及促进破骨细胞凋亡,其作用机制与抑制NF-κB信号通路的活化有关。

miR-187影响结肠癌LOVO细胞恶性生物学行为的研究

目的:探讨miR-187对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭转移等恶性生物学行为的影响。方法:应用miR-187 mimics转染结肠癌LOVO细胞,利用MTT实验、流式细胞术和Transwell实验观察miR-187对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭转移的影响。结果:与对照细胞相比,MTT显示转染miR-187的LOVO细胞增殖速度变快,流式细胞术表明miR-187mimics转染可以减少LOVO细胞的凋亡,Transwell实验证实转染miR-187mimics可以促进LOVO细胞迁移,增强LOVO细胞的侵袭转移能力。结论:miR-187促进结肠癌LOVO细胞的恶性增殖、抑制凋亡、促进侵袭和转移,提示miR-187在结肠癌的恶性生物学进程中可能发挥重要作用。

miR-187-5p对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调控作用

目的利用小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化模型,探讨miR-187-5p在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法通过切除雌性小鼠双侧卵巢构建小鼠骨质疏松模型;应用qRT-PCR技术检测组织和细胞中miR-187-5p的表达;应用基因转染技术观察过表达或敲减miR-187-5p对BMSCs向成骨分化的影响;应用茜素红和碱性磷酸酶染色检测BMSCs中矿化结节的数量和矿化区域的染色面积。结果qRT-PCR结果显示miR-187-5p在骨质疏松模型小鼠的骨组织及BMSCs中均表达下降。过表达miR-187-5p可提高ALP、Collagen-1、Runx2、BMP4、OCN和OPN等成骨分化相关基因mRNA的表达,促进BMSCs向成骨分化;而敲减miR-187-5p降低ALP等成骨分化相关基因mRNA的表达,抑制BMSCs向成骨分化。在体实验同样证实,过表达miR-187-5p可以显著促进骨质疏松小鼠BMSCs向成骨分化,改善小鼠的骨质疏松表型。结论过表达miR-187-5p促进BMSCs向成骨分化,敲减miR-187-5p抑制BMSCs向成骨分化。

miR-187在肺癌组织中的表达及其效应

目的:探讨微小RNA(micro RNA,miR)-187在肺癌组织中的表达及其效应。方法:以U6为内参,采用茎环实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法检测32例肺癌及其癌旁正常组织标本miR-187的表达量,并分析其表达与肺癌临床病理特征间的关系。采用miR-187模拟物(mimics)上调A549肺癌细胞内miR-187表达水平,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,通过流式细胞术检测细胞周期。结果:与癌旁正常组织比较,miR-187在肺癌组织中表达显著下调(t=5.236,P<0.001)。临床病理特征相关性分析结果显示,肿瘤组织miR-187的表达与肺癌病理分级及临床分期相关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟史、肿块大小、病理类型及淋巴结转移情况未见明显相关性(P>0.05)。采用miR-187 mimics上调A549肺癌细胞内miR-187表达后,细胞增殖明显受到抑制,G0/G1期细胞比例增高,G2/M期细胞比例明显降低。结论:miR-187在肺癌组织中的下调表达可能参与了肺癌的发生发展过程。

miR-187在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨microRNA-187(miR-187)在胃癌中的表达及其对胃癌增殖、侵袭和迁移的影响。方法:收集24对人胃癌组织和癌旁正常组织,采用实时定量PCR检测miR-187的表达,蛋白质印迹法检测CD276的表达,分析miR-187与CD276表达的相关性,并分析这两项指标与各临床指标的关系。用转染沉默法分别抑制人胃腺癌细胞SGC-7901中miR-187和CD276的表达;用CCK-8法检测SGC-7901细胞增殖率;用Transwell法检测SGC-7901细胞侵袭性及迁移性;蛋白质印迹法检测SGC-7901细胞中MMP-9的表达。结果:与癌旁组织比较,miR-187在胃癌肿瘤组织中表达明显升高(P<0.01),在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌组织表达呈进行性升高趋势;胃癌组织CD276表达均明显降低(P<0.01);胃癌组织中miR-187表达与CD276表达呈负相关,决定系数R2值为0.840;miR-187在SGC-7901表达高于人胃黏膜GES细胞(P<0.01)。与对照组比较,miR-187抑制剂能明显抑制SGC增殖,CD276-siRNA促进SGC增殖(P<0.01);miR-187抑制剂能明显抑制SGC侵袭和迁移,CD276-siRNA促进SGC-7901细胞的侵袭和迁移。蛋白质印迹检测结果显示,miR-187抑制剂组CD276表达明显升高(P<0.05),MMP-9表达显著降低(P<0.05);CD276-siRNA组MMP-9表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-187可能是通过下游基因CD276,参与胃癌的增殖及迁移。

补肾安胎冲剂对复发性流产小鼠胎盘滋养细胞miR-187、VEGF、VEGF-R2表达的影响

目的观察补肾安胎冲剂对复发性流产(RSA)小鼠胎盘滋养细胞miR-187、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGF-R2表达的影响,探讨其相关作用机制。方法将雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠合笼饲养建立RSA小鼠模型,雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/c小鼠合笼饲养作为正常妊娠小鼠,分离并培养胎盘滋养细胞,将细胞分为正常对照组(正常妊娠小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)、模型组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)、补肾安胎冲剂组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+20%含药血清)、miR-187 inhibitor NC组(RSA小鼠胎盘滋养细胞转染空白miR-187 inhibitor+空白血清)、miR-187 inhibitor组(RSA小鼠胎盘滋养细胞转染miR-187 inhibitor+空白血清)、联合组(RSA小鼠胎盘滋养细胞转染miR-187 inhibitor+20%含药血清)。RT-qPCR检测miR-187、VEGF、VEGF-R2 mRNA表达,Western blot检测VEGF、VEGF-R2蛋白表达,双荧光素酶实验检测miR-187和VEGF靶向关系,采用Spearman法分析miR-187与VEGF、VEGF-R2 mRNA表达量的相关性。结果与正常对照组比较,模型组细胞miR-187表达显著升高,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,补肾安胎冲剂组细胞miR-187表达显著降低,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与miR-187 inhibitor NC组比较,miR-187 inhibitor组细胞miR-187表达显著降低,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与补肾安胎冲剂组及miR-187 inhibitor组比较,联合组细胞miR-187表达显著降低,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-187能够与VEGF靶向结合。Spearman相关性分析显示,miR-187与VEGF、VEGF-R2 mRNA表达呈负相关。结论补肾安胎冲剂可通过下调miR-187活性,靶向上调VEGF、VEGF-R2表达,介导血管新生,促进母胎界面血管重构,从而对RSA发挥治疗作用。

MIR-187影响胃癌细胞恶性生物学行为的研究

探讨mir-187对胃癌细胞恶性生物学行为的影响;采用q PCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞、MKN45细胞和人永生化胃黏膜上皮细胞GES细胞中的表达,应用miR-187 mimics转染SGC7901细胞和MKN45细胞,通过MTT实验、流式细胞术和裸鼠成瘤实验检测miR-187对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。结果 SGC7901、MKN45细胞中miR-187的表达明显高于GES细胞;与对照细胞相比,MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌SGC7901细胞的增殖增快(P<0.05),流式细胞检测表明miR-187mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P<0.05),裸鼠成瘤实验提示转染miR-187mimics可以促进SGC7901细胞成瘤(P<0.05)。说明miR-187可以促进胃癌细胞生长、抑制凋亡和促进增殖,提示miR-187在胃癌恶性生物学行为中发挥重要作用,有可能成为诊断胃癌的新标志和治疗胃癌的新靶点。

miR-187在骨质疏松性骨折患者血清中表达及其作用机制

目的探讨微小RNA-187(miR-187)在骨质疏松性骨折患者血清中的表达意义及其对骨质疏松大鼠破骨细胞增殖、凋亡的影响。方法收集60例骨质疏松性骨折患者作为实验组,50例骨折但未发生骨质疏松患者作为对照组。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测两组患者血清miR-187的表达水平;采用Pearson法分析骨质疏松性骨折患者血清miR-187与骨密度(BMD)的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-187对骨质疏松性骨折的诊断价值。采用去除卵巢法建立骨质疏松大鼠模型,从建模成功的大鼠中提取破骨细胞。分别将miR-187 mimics及miR-con转染至破骨细胞,不转染任何基因的破骨细胞作为NC组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western迹法检测细胞增殖、凋亡相关蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl相关蛋白(Bax)与Notch信号通路中的主要蛋白[Notch1、Jagged1、Delta样蛋白(DLL)3、Notch2]的表达量。结果实验组血清miR-187相对表达量明显低于对照组(P<0.05);Pearson分析显示miR-187与BMD呈正相关(r=0.357,P<0.05);ROC曲线分析显示miR-187诊断时AUC为0.856,敏感度为0.700,特异度为0.883。与NC组、miR-con组比较,miR-187组破骨细胞活力显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2、Notch2表达量显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),p21、Bax、Notch1、Jagged1、DLL3表达量显著升高(P<0.05)。结论miR-187在骨质疏松性骨折患者血清中低表达,可预测骨质疏松性骨折发生风险,并可通过调控Notch信号通路从而抑制破骨细胞增殖并诱导破骨细胞凋亡。

miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平。在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组)。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系。结果与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01)。与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)%、(4.61±1.01)%比(20.38±3.44)%]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3’非编码区(UTR)存在靶向关系。结论miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关。

miR-187通过抑制胃癌细胞凋亡影响胃癌多药耐药

目的:探讨miR-187对胃癌多药耐药的影响。方法:应用q PCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞和SGC7901ADR细胞中的表达。miR-187 mimics转染上述细胞,MTT检测转染后细胞对多种化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC7901ADR细胞中miR-187的表达明显高于SGC7901细胞。MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌细胞对化疗药物的敏感性均明显降低(P<0.05)。流式细胞检测表明miR-187 mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P<0.05)。结论:miR-187通过抑制胃癌细胞凋亡参与胃癌多药耐药,可能成为逆转胃癌多药耐药的新靶点。

癫痫鼠电击下颞叶相关miRNA(miR-187)表达谱的下调表达

目地:目地:本研究目的证实微小NRA(miNRA)在癫痫动物模型中的异常表达,探索导致癫痫发作潜在的基因片段。方法:从NCBI GEO数据库中下载癫痫大鼠齿状回扁桃体电击下颞叶7天,14天,30天和90天miRNA表达基因片段GSE49850的20个样本及相应的20个对照样本,比较找到电刺激样本miRNA的表达显著不同基因序列。整合两个miRNA数据库miRDB和microRNA.org中的预测靶基因,从中挑选目标miRNA的靶基因。用DAVID软件对筛选得到的靶基因进行功能富集分析,并对miRNA和目标基因的互补序列分析。结果:与对照组比较,rno-miRNA-187证实电刺激后下调表达且与所对应的预测靶基因功能与神经系统密切相关。序列CUGUGC是rno-miR-187与部分交集靶基因结合的共有序列。结论:rno-miR-187电击刺激后四个不同阶段表达持续下调,与神经系统功能密切关联,其表达特异性可能成为癫痫大鼠后颞叶组织中miRNA变化的分子靶标,所调控的靶基因可能为颞叶组织与癫痫疾病关联的基因。

超声微泡介导miR-187-3p调节S100A4对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探究超声微泡(UM)介导miR-187-3p对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法qRT-PCR检测不同乳腺细胞中miR-187-3p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-187-3p与S100钙结合蛋白A4(S100A4)的靶向关系。使用miR-187-3p mimic、miR-NC或UM介导的miR-187-3p mimic、miR-NC处理MDA-MB-231细胞,并过表达S100A4进行回复实验,采用qRT-PCR、Westernblot检测细胞中miR-187-3p、S100A4mRNA和蛋白表达水平,CCK-8、EdU染色检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 miR-187-3p在人乳腺癌细胞中低表达,其中MDA-MB-231细胞中miR-187-3p表达水平变化最为明显。过表达miR-187-3p可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭;UM介导的miR-187-3p进一步增强了miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用;经验证,MDA-MB-231细胞中miR-187-3p与S100A4存在靶向调控关系,且过表达S100A4可部分减弱UM介导的miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 UM介导的miR-187-3p可能通过负靶向调节S100A4抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-187在胃癌组织中的表达及意义

目的本研究旨在探讨microRNA(miR)-187在胃癌组织中的表达情况,并分析miR-187表达的改变与胃癌分化程度和TNM分期之间的关系。方法 32例胃癌及相应癌旁正常胃黏膜组织标本提取RNA后,采用茎环逆转录实时荧光定量PCR(real time-PCR)方法,分别检测miR-187在胃癌及癌临近正常胃黏膜组织中的表达量,并进一步观察miR-187表达的变化同胃癌分化程度以及TNM分期之间存在的联系。结果胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中均可以检测到miR-187,且与癌临近的正常胃黏膜组织相比,miR-187的表达量发生显著的改变,其在胃癌组织中表达出现显著性的下降(P<0.05)。胃癌组织中的miR-187表达量与胃癌的分化程度(P<0.05)及TNM分期(P<0.05)均显著相关。结论在胃癌组织及癌临近胃黏膜组织中,miR-187的表达呈明显减少的趋势,差异具有统计学意义;且胃癌组织中miR-187表达的减少与胃癌的分化程度以及TNM分期均呈显著的相关性。以上研究结果表明,miR-187表达的减少与胃癌的发生、发展密切相关。

miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路抑制骨质疏松症中的破骨细胞活性

目的探讨miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路对骨质疏松症中破骨细胞活性的影响及机制分析。方法使用小鼠巨噬细胞264.7细胞株(RAW246.7),设置正常组(con)、核因子κB配体的受体激活子(receptor activator of nuclear factor-κBligand,RANKL)诱导的骨质疏松症组(RANKL-induced OP)、阴性对照(mimic negative control,mimic NC)、OP+miR-187-5p模拟物(OP+miR-187-5p mimic),通过细胞计数试剂盒(the cell counting kit 8,CCK8)检测破骨细胞的增殖水平,RT-qPCR检测TRAPmRNA、miR-187-5p表达水平,免疫印迹检测p65和TNFα蛋白表达。最后,通过双荧光素酶报告基因(dual luciferase reporter assays)检测miR-187-5p和p65间的相互作用。结果RAW264.7细胞转染miR-187-5p后,OP组的细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著高于con组(P=0.008、0.017),OP+miR-187-5p mimic组细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著低于OP+miR-187-5p NC组(P=0.023、0.037)。而miR-187-5p在OP组显著低于con组(P=0.031),转染miR-187-5p mimic后升高其表达水平(P=0.041)。此外,OP组的p65和TNFα蛋白水平明显高于con组(P=0.034;P=0.024),OP+miR-187-5p mimic组的p65和TNFα蛋白水平显著低于OP+miR-187-5p NC组(P=0.028;P=0.036)。同时OP组的p65显著高于con组(P=0.039),OP+miR-187-5p mimic组的p65基因水平明显高于OP+miR-187-5p NC(P=0.025)。双荧光素酶报告分析,miR-187-5p与p65间存在靶向关系。结论miR-187-5p通过抑制NFκB信号通路抑制破骨细胞的活性。

血清miR-187-3p对肝细胞癌诊断和预后判断临床价值研究

目的 miRNA在血清中具有良好的稳定性和特异性,是近年来发现的一种在肿瘤诊断及预后判断中具有重要潜在应用价值的新型生物标志物。肝细胞癌患者血清中目前已发现多种具有诊断价值和预后相关的miRNAs。本研究旨在探索肝细胞癌患者血清miR-187-3p的相对含量与临床病理特征的相关性,分析血清miR-187-3p作为肝细胞癌生物标志物在诊断和预后中的价值。方法收集2012-01-01-2016-11-30于中国人民解放军成都军区总医院初诊为肝细胞癌的81例患者(患者未经任何治疗)血样,随机抽取同一时期年龄与性别基本一致的81名健康人血样作为对照。前期miRNA芯片筛选出Huh7肝癌细胞和Huh7肝癌干细胞中差异表达的miRNAs,并采用qRT-PCR验证在Huh7肝癌细胞和Huh7肝癌干细胞及10对临床肝癌组织和癌旁组织中表达差异最明显的6个miRNAs,筛选出差异具有统计学意义的miRNAs作为后续血清检测的候选miRNAs。检测和统计分析候选miRNAs在肝细胞癌患者和健康人群血清中的含量差异,分析其含量与患者部分临床病理学特征的相关性及其作为肝细胞癌诊断血清标志物的诊断效能,并分析其与肝细胞癌患者生存状况的关系。结果 (1)miR-187-3p在81例肝细胞癌患者血清中的平均相对含量为3.38±0.44,在81例健康人群血清中的平均相对含量为1.08±0.067,差异有统计学意义,χ~2=7.382,P<0.001。肝细胞癌患者血清中miR-187-3p含量和患者年龄、肿瘤大小、Child分级、AFP、ALT、门静脉癌栓和肿瘤转移情况无明显相关性,但与巴塞罗那分期相关,χ~2=4.007,P=0.049。(2)miR-187-3p诊断肝细胞癌的ROC曲线下面积为0.84,最佳灵敏度和特异度分别为76.53%和82.71%,95%CI为0.77~0.89,P=0.001。(3)42例miR-187-3p低含量组肝细胞癌患者中位无病进展期(median progression free survival,mPFS)为9.4个月,39例miR-187-3p高含量组肝细胞癌患者mPFS为2.2个月,差异有统计学意义,χ~2=23.192,P=0.001。40例miR-187-3p低含量组肝细胞癌患者中位总生存期(median overall survival,mOS)为15.6个月,39例miR-187-3p高含量组肝细胞癌患者mOS为3.8个月,差异有统计学意义,χ~2=39.074,P=0.001。结论血清miR-187-3p可能成为肝细胞癌诊断及预后判断较为特异和敏感的生物标志物。