Hsa-miR-193b抑制人子宫内膜腺癌细胞株HEC-1B侵袭能力

目的探讨Hsa-miR-193b对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭的影响及其相关机制。方法将Hsa-miR-193b模拟物(mimics)、Hsa-miR-193b抑制剂(inhibitor)转染HEC-1B细胞,Real-time PCR证实转染是否成功;Transwell小室法检测转染Hsa-miR-193b mimics后HEC-1B细胞的侵袭能力;通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查Hsa-miR-193b指向与侵袭相关的靶基因;Real-time PCR检测转染Hsa-miR-193b mimics转染组和对照组mRNA水平;Western blot检测各组GRB7蛋白表达的水平。结果①Hsa-miR-193b mimics、Hsa-miR-193b inhibitor转染HEC-1B细胞成功,两转染组Hsa-miR-193b表达水平与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②转染Hsa-miR-193b mimics组与对照组比较,肿瘤细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。③转染后,靶基因GRB7蛋白Hsa-miR-193b mimics组表达下降(P<0.05)、Hsa-miR-193b inhibitor组表达增加(P<0.05),且各组GRB7 mRNA水平无显著变化。结论在HEC-1B中转染Hsa-miR-193b mimics能下调GRB7蛋白表达,并抑制HEC-1B细胞的侵袭。

过表达miR-193b对黑色素细胞中MITF和TYR表达的影响

旨在探讨miR-193b对黑色素生成关键基因MITF和TYR表达的影响,进而说明miR-193b对黑色素形成的影响。本研究通过细胞转染技术,在绵羊黑色素细胞中过表达miR-193b,检测黑色素细胞中黑色素含量的变化,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别对转染细胞中MITF和TYR mRNA和蛋白表达水平进行测定。结果显示:过表达miR-193b的黑色素细胞,黑色素含量明显减少;MITF mRNA和TYR mRNA表达均显著降低(P<0.01),分别降低0.233倍和0.198倍;MITF和TYR蛋白表达量也显著降低(P<0.01),分别降低0.232倍和0.321倍。本研究表明,过表达miR-193b使黑色素细胞中MITF和TYR表达量降低而间接影响黑色素生成。

miR-193b及其靶基因Kit在不同毛色羊驼皮肤中的表达

本研究旨在检测miR-193b及其靶基因Kit在不同毛色羊驼皮肤中的表达,并分析它们与羊驼毛色的关系。试验以不同毛色的成年羊驼为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)对miR-193b及Kit在不同毛色羊驼皮肤中的相对表达量进行检测。结果显示,miR-193b在棕色羊驼中显著表达,其相对表达量是白色羊驼的1.741346倍;而Kit在白色羊驼中显著表达,其相对表达量是棕色羊驼的4.6029倍。通过以上研究结果显示miR-193b及其靶基因Kit可能参与羊驼毛色形成过程。提示,miR-193b可能通过负调控Kit参与羊驼毛色形成。

miR-193b与肿瘤相关性的研究进展

miRNAs已被证实是基因表达的关键调控因子,不同水平的表达与各种疾病相关。大多数的研究表明,miRNAs表达谱中的miR-193b参与机体多种病理生理过程,在肿瘤发生、发展过程中发挥抑癌基因的作用,可抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。因此,miR-193b在疾病的诊断、治疗和预后评估等方面将会发挥更大的作用,有着广阔的应用前景。本文就miR-193b与肿瘤相关性研究进展作一综述。

MiR-193b在肝癌组织中的表达及临床意义

观察microRNA-193b(miR-193b)在肝癌组织中的表达,并探讨其临床意义。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测40例肝癌组织及相应的癌旁非肿瘤组织标本中miR-193b表达,分析miR-193b表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移等临床病理参数的关系,并比较miR-193b高、低表达患者5年生存率。结果显示,相对于癌旁非肿瘤组织,肝癌组织中miR-193b表达水平明显降低(P<0.01),miR-193b表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P>0.05);与miR-193b低表达组患者相比,高表达组患者5年生存率明显增加(P<0.05)。MiR-193b在肝癌组织呈低表达,可作为评估肿瘤恶性程度及判断预后的分子标记物。

Akt信号通路调控miR-193b抑制胃癌细胞增殖

目的研究胃癌相关miR-193b调控胃癌细胞增殖的功能作用,并通过研究其与Akt信号通路的关系探讨miR-193b的调控机制。方法在PTEN基因特异性敲除(PTEN^(-/-))小鼠胃癌组织中,Northern Blot法检测miR-193b的表达变化;在胃上皮正常细胞系GES-1和5种胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、N87、SNU-16中,Real-Time PCR和Western Blot分别检测miR-193b与p Akt、Akt的表达水平;激活或抑制胃癌细胞Akt信号通路,RealTime PCR检测miR-193b表达改变;在胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中过表达miR-193b,检测细胞的增殖变化。结果 miR-193b在Akt异常激活的小鼠胃癌组织中表达显著下调;胃癌细胞中Akt信号通路激活程度与miR-193b表达水平呈负相关,Akt信号通路抑制miR-193b表达;过表达miR-193b抑制胃癌细胞增殖。结论 miR-193b抑制胃癌细胞增殖并受Akt信号通路负向调节,其表达下调可能参与Akt信号通路调控的细胞增殖与胃癌发生。

lncRNA CYTOR/miR-193b-3p/HMGB1轴调控T细胞急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4增殖与凋亡的作用研究

目的 探讨lncRNA CYTOR对T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养人正常骨髓基质细胞系HS-5和T-ALL细胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1),采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞中lncRNA CYTOR、miR-193b-3p和HMGB1 mRNA表达;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中HMGB1蛋白表达。分别转染si-CYTOR、miR-193b-3p mimics、si-HMGB1及共转染si-CYTOR与anti-miR-193b-3p至MOLT-4细胞,以CCK-8法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡,以Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白表达。通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-193b-3p、miR-193b-3p与HMGB1的调控关系。结果 与HS-5细胞比较,T-ALL细胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)中lncRNA CYTOR、HMGB1 mRNA及其蛋白表达均升高,miR-193b-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调lncRNA CYTOR、上调miR-193b-3p或下调HMGB1后,MOLT-4细胞增殖受到抑制,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率和细胞中Bax、cleaved-caspase3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA CYTOR竞争性吸附miR-193b-3p,HMGB1是miR-193b-3p的靶基因。上调HMGB1表达可逆转lncRNA CYTOR对T-ALL细胞MOLT-4增殖和凋亡的作用。敲低miR-193b-3p可逆转lncRNA CYTOR对MOLT-4细胞增殖和凋亡的作用。结论 lncRNA CYTOR在T-ALL细胞系中表达上调,其可能通过竞争性吸附miR-193b-3p进而上调HMGB1的表达来促进T-ALL细胞增殖,并阻碍细胞凋亡,其有可能成为T-ALL治疗的分子靶点。

MiR-193b体外协同增强顺铂对宫颈癌细胞的抗肿瘤效应

目的:研究microRNA-193b(miR-193b)是否能增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性并探讨其机制。方法:用RT-q PCR方法检测宫颈癌患者及健康对照者病理组织标本的miR-193b表达水平。MTT法检测miR-193b联合顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学、定量PCR及Western blot方法验证miR-193b是否调节宫颈癌细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-193b联合顺铂治疗宫颈癌疗效的影响。结果:宫颈癌患者病理组织miR-193b表达水平显著低于对照组病理组织。miR-193b联合顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性显著高于顺铂单治疗组。miR-193b转染后,Hela细胞Mcl-1的mRNA表达水平及蛋白表达水平均下降。miR-193b联合顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-193b联合顺铂组。结论:MiR-193b可能通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性。

miR-193b通过负向调控MCT7基因的表达抑制人胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭

为探讨miR-193b对人胶质瘤U251细胞的迁移和侵袭能力的影响,利用HiPerFect转染试剂瞬时转染miR-193b模拟物(mimics)上调U251细胞中miR-193b的表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其转染效率,然后进行细胞划痕实验及侵袭实验,分别检测miR-193b对U251细胞迁移及侵袭能力的影响.结果显示过表达miR-193b可抑制U251细胞迁移和侵袭的能力.应用生物信息学软件预测,提示单羧酸转运蛋白7(MCT7)基因可能是miR-193b的潜在靶基因.进而构建双荧光素酶报告基因系统从转录水平上证明MCT7为miR-193b调控的靶基因;qRT-PCR及蛋白质免疫印记(Western blot)分别在mRNA和蛋白水平上进一步证明MCT7基因的表达受miR-193b的负调控.由此可见,miR-193b很可能通过负向调控MCT7基因的表达来抑制U251细胞的迁移与侵袭.

原发性舍格伦综合征患者血清miR-193b表达水平及其临床价值研究

目的探讨原发性舍格伦综合征(primary Sjogren’s syndrome,pSS)患者血清中miR-193b表达变化以及临床意义。方法选取2015年9月~2020年9月在黄石市中心医院治疗的98例pSS患者作为病例组,45例健康体检者作为对照组。根据患者病情严重程度分为轻度组(n=31)、中度组(n=43)和重度组(n=24)。收集临床资料,实时荧光定量PCR法检测血清中miR-193b表达量,采用Pearson相关分析分析pSS患者血清中miR-193b表达量和临床指标间相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清中miR-193b表达量对pSS患者诊断价值。结果pSS患者血清中miR-193b表达量在对照组、pSS轻度组、pSS中度组和pSS重度组依次升高(1.79±0.311,1.91±0.21,2.46±0.25,3.11±0.22),差异有统计学意义(F=165.948,P<0.001),且pSS重度组>pSS中度组>pSS轻度组>对照组(t=10.720,9.924,2.029,均P<0.05);Pearson相关分析结果显示,pSS患者血清中miR-193b表达量与B细胞比例、ESR,IgG,ESSDAI评分和ESSPRI评分呈正相关(r=0.432,0.554,0.448,0.356和0.361,均P<0.05),而与白细胞数、唾液流率和泪流率呈负相关(r=-0.215,-0.323,-0.369,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清中miR-193b表达量在预测pSS发生时曲线下面积为0.864(95%CI:0.805~0.923),当血清中miR-193b表达量为2.06时,灵敏度和特异度分别为78.57%,82.22%。结论miR-193b在pSS患者血清中表达量升高,与pSS病情轻重和患者腺体分泌有关,检测血清miR-193b有助于诊断pSS。

miR-193b对子宫内膜癌侵袭的影响

目的探讨miR-193b对人子宫内膜癌细胞侵袭的影响及其机制。方法人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞转染miR-193b抑制剂(miR-193b inhibitor)24h后,利用Transwell小室评价分析其侵袭能力的变化。进一步,我们利用Westernblot验证侵袭相关基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果 miR-193b inhibitor有效抑制HEC-1A细胞细胞内miR-193b表达,并且其侵袭能力较对照组明显下降(P<0.05)。Western blot验证miR-193b inhibitor可有效抑制MMP-2、MMP-9蛋白表达。结论 miR-193b通过可调节侵袭相关MMP-2、MMP-9蛋白表达有效调控HEC-1A细胞细胞侵袭能力。

基于circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1探讨肥胖性高血压发生的分子机制

目的基于circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1轴探讨肥胖性高血压发生的分子生物学机制。方法90只SD大鼠采用随机数字表法将其分为空白对照组(n=30)、肥胖性高血压组(n=30)、NRG-1阻断剂组(n=30)三组,检测大鼠的血压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油和总胆固醇水平及胸主动脉中circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1的表达;微阵列分析肥胖性高血压大鼠中circNRG-1的表达;双荧光素酶分析circNRG-1与miR-193b-5p的靶向关系。结果微阵列结果发现,在空白对照组和肥胖性高血压组之间有382个circRNAs的差异表达,其中235个表达上调,147个表达下调(>2倍);与空白对照组比较,肥胖性高血压组的MMU-CircRNA-42742(其父本基因为NRG-1)上调,肥胖性高血压组大鼠的收缩压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油、总胆固醇、胸主动脉中NRG-1、circNRG-1、miR-193b-5p的mRNA表达均升高,且血管壁增生,血管中膜增厚;与肥胖性高血压组比较,NRG-1阻断剂组大鼠的收缩压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油、总胆固醇、胸主动脉中NRG-1、circNRG-1、miR-193b-5p的mRNA表达均降低,且血管出现重构现象。结论肥胖性高血压大鼠中circNRG-1、NRG-1表达上调,miR-193b-5p表达下调,阻断NRG-1后肥胖性高血压大鼠症状有所改善,circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1轴可能是治疗肥胖性高血压的潜在靶点。

组织miR-193b表达及甲基化状态对前列腺癌患者术后骨转移的预测价值

目的:探究组织miR-193b表达及甲基化状态对前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者术后发生骨转移的预测价值。方法:回顾性分析2016年09月至2018年07月期间在我院首次接受根治性前列腺切除术的154例患者,将骨转移作为本研究的主要研究终点,比较组织miR-193b表达及其甲基化状态与PCa患者发生骨转移的相关性。结果:骨转移组肿瘤组织miR-193b相对表达量低于非骨转移组,同时miR-193b基因启动子甲基化率高于非骨转移组(P<0.05)。miR-193b基因启动子甲基化组织中miR-193b相对表达量较非甲基化组织降低(P<0.05)。经Pearson法分析,肿瘤组织中miR-193b表达和基因启动子甲基化呈负相关性(r=-0.45,P<0.05)。经单因素和多因素Logistic回归分析,bGS>7分、cTx:T_(3)-T_(4)、tPSA水平升高、组织miR-193b基因启动子甲基化都是影响PCa患者发生骨转移的独立危险因素。经受试者工作特征曲线分析,组织miR-193b表达预测PCa患者发生骨转移的AUC为0.912(95%CI:0.863~0.960)。结论:miR-193b基因启动子高甲基化是PCa患者术后发生骨转移的独立危险因素,且肿瘤组织中miR-193b表达与基因启动子甲基化状态呈负相关性,因此检测组织miR-193b表达可用于预测PCa患者术后骨转移风险。

血清miR-193b-3p与动脉瘤性蛛网膜下腔出血病人不良预后的关系

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-193b-3p与动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)病人不良预后的关系。方法2019年1月1日至2021年12月1日前瞻性收集aSAH共159例,采用RT-PCR检测入院24 h内血清miR-193b-3p水平。发病90 d,采用GOS评分评估预后,其中4~5分为预后良好,1~3分为预后不良。结果159例中,预后良好153例,预后不良56例(35.2%),其中死亡39例。ROC曲线分析显示,入院24 h内血清miR-193b-3p水平预测aSAH不良预后的曲线下面积为0.912(95%CI 0.870~0.954),最佳截断值为0.62,灵敏度和特异度分别为75.7%和94.6%。入院24 h内血清miR-193b-3p水平与入院时Hunt-Hess分级呈明显负相关(r=-0.384,P<0.001),与入院时Fisher分级呈明显负相关(r=-0.200,P=0.011),与入院时GCS评分呈明显正相关(r=0.409,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,入院24 h内血清miR-193b-3p≥0.62是aSAH病人预后不良的独立危险因素(OR=3.148;95%CI 1.017~5.167;P<0.001)。结论本文结果提示入院24 h内血清miR-193b-3p作为非侵入性生物标志物,不仅可以用于评估aSAH病人的病情严重程度,还可以在早期用于预测病人的预后。

CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂(DDP)耐药的影响。方法:培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组、sh CircNRIP1+inhibitor NC组、sh CircNRIP1+mi R-193b-3p inhibitor组,测定各组AGS/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭能力以及STMN1蛋白水平;测定mi R-193b-3p与CircNRIP1、STMN1靶向关系。结果:与AGS细胞比较,AGS/DDP细胞CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白水平升高,细胞增殖抑制率、miR-193b-3p降低(P<0.05);与AGS/DDP组相比,sh CircNRIP1组细胞增殖抑制率、凋亡率、mi R-193b-3p升高,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白减少(P<0.05);与sh CircNRIP1组相比,sh CircNRIP1+miR-193b-3p inhibitor组细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-193b-3p降低,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白升高(P<0.05);miR-193b-3p与CircNRIP1、STMN1均存在靶向关系。结论:沉默AGS/DDP细胞中CircNRIP1表达,可靶向mi R-193b-3p/STMN1抑制AGS/DDP细胞增殖、侵袭,促进AGS/DDP细胞凋亡,实现AGS/DDP细胞对DDP耐药的逆转。

含miR-193b前体基因的重组腺病毒感染K562细胞可抑制其增殖

目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacI线性化后转入HEK293细胞包装、扩增。倍比稀释法测定病毒滴度。实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力。结果pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组。结论K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖。

长链非编码RNA ZFAS1通过miR-193b-3p影响胶质瘤顺铂敏感性研究

目的 研究长链非编码RNA锌指结构反义转录本1(ZFAS1)在胶质瘤细胞中对顺铂敏感性的作用及其潜在机制。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验分析敲低ZFAS1对胶质瘤细胞顺铂敏感性,分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒质粒)、sh#1组(转染sh-ZFAS1-1慢病毒质粒)、sh#2组(转染sh-ZFAS1-2慢病毒质粒)。双荧光素酶实验验证ZFAS1与miR-193b-3p之间的相互作用,分为ZFAS1-WT+NC inhibitor组(转染ZFAS1野生型质粒和NC inhibitor)、ZFAS1-WT+miR-193b-3p inhibitor组(转染ZFAS1野生型质粒和miR-193b-3p inhibitor)、ZFAS1-Mut+NC inhibitor组(转染ZFAS1突变型质粒和NC inhibitor)、ZFAS1-Mut+miR-193b-3p inhibitor组(转染ZFAS1突变型质粒和miR-193b-3p inhibitor)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和原位末端标记(TUNEL)实验分析ZFAS1/miR-193b-3p影响胶质瘤细胞对顺铂敏感性,分为空白对照组(0μg·mL^(-1)顺铂处理U251细胞)、0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh-NC+NC inhibitor组(0.5μg·mL^(-1)顺铂处理共转染sh-NC慢病毒质粒和NC inhibitor的U251细胞)、0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh#1+NC inhibitor组(0.5μg·mL^(-1)顺铂处理共转染sh-NC慢病毒质粒和NC inhibitor的U251细胞)和0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh#1+miR-193b-3p inhibitor组(0.5μg·mL^(-1)顺铂处理共转染sh-ZFAS1-1慢病毒质粒和miR-193b-3p inhibitor的U251细胞)。结果 sh-NC组、sh#1组和sh#2组的ZFAS1的表达水平分别为1.00±0.17、0.48±0.06和0.68±0.08。ZFAS1-WT+NC inhibitor组、ZFAS1-WT+miR-193b-3p inhibitor组、ZFAS1-Mut+NC inhibitor组、ZFAS1-Mut+miR-193b-3p inhibitor组的荧光活性分别为1.00±0.10、1.45±0.11、1.02±0.09和0.97±0.13。空白对照组、0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh-NC+NC inhibitor组、0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh#1+NC inhibitor组、0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh#1+miR-193b-3p inhibitor组的72 h增殖率分别为(100.00±14.13)%、(96.62±9.82)%、(60.56±6.08)%和(78.64±7.22)%;72 h凋亡率分别为(9.52±1.11)%、(10.12±1.34)%、(16.08±1.52)%和(12.22±1.19)%。空白对照组与0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh-NC+NC inhibitor组比较,0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh#1+NC inhibitor组与0.5μg·mL^(-1)顺铂+sh#1+miR-193b-3p inhibitor组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 本研究揭示了ZFAS1在胶质瘤中对顺铂敏感性的重要作用,并阐明了其通过调控miR-193b-3p影响药物敏感性的机制。

星形胶质细胞源性外泌体miR-193b-3p靶向TRPM2改善脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/再氧合损伤的机制研究

目的通过构建体外氧糖剥夺/再氧合(OGD/R)模型,探讨脑缺血再灌注过程中星形胶质细胞(AS)源性外泌体对脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法(1)通过双荧光素酶报告基因检测确定miR-193b-3p对抑制瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)的调控作用。采用miR-193b-3p模拟物/阴性序列转染bEnd.3细胞后进行OGD/R造模(分别为OGD/R+miR-193b-3p模拟物组及OGD/R+miR-193b-3p阴性序列组),通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-193b-3p表达、Western blotting实验检测TRPM2、Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。(2)从C57BL/6乳鼠大脑皮层提取AS并鉴定。通过CCK-8法确定AS造模时间并通过超高速离心法提取AS培养基中的外泌体,采用电镜、粒径和标志蛋白进行鉴定,采用RT-qPCR法检测AS及其外泌体中miR-193b-3p含量。随后采用miR-193b-3p抑制序列转染AS后提取低表达miR-193b-3p的外泌体,与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育(OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组);采用miR-193b-3p阴性序列转染AS后提取外泌体,与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育(OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组);正常外泌体与OGD/R造模的bEnd.3细胞共孵育为OGD/R+AS外泌体组。通过RT-qPCR法检测各组细胞miR-193b-3p表达,通过Western blotting实验检测TRPM2、Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达,采用流式细胞术检测凋亡率,采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果(1)双荧光素酶报告基因检测显示miR-193b-3p可结合TRPM2 mRNA,且转染miR-193b-3p模拟物后TRPM2蛋白表达明显减少,与OGD/R组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与OGD/R组相比,OGD/R+miR-193b-3p模拟物组细胞Cleaved-Caspase-3、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2、ZO-1和Claudin-5蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。提示miR-193b-3p可改善OGD/R过程中由TRPM2介导的bEnd.3细胞凋亡和紧密连接减少。流式细胞术进一步验证了上述结论,表现为与OGD/R组(21.34%)比较,OGD/R+miR-193b-3p模拟物组细胞凋亡率(13.93%)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)研究中提取的外泌体呈脂质双层杯状、粒径主要在126.5 nm左右,外泌体标志蛋白Cal为阴性、CD81和SG101为阳性,提示外泌体提取成功。造模后,AS及其外泌体中miR-193b-3p含量均降低,与Control组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。进一步研究发现,与OGD/R组比较,OGD/R+AS外泌体组及OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组中miR-193b-3p表达明显升高,TRPM2、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达明显降低,ZO-1、Claudin-5和Bcl-2表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞上述蛋白表达无明显改变,组间差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术凋亡检测结果与之一致,表现为与OGD/R组(18.22%)相比,OGD/R+AS外泌体组、OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组细胞组细胞凋亡率(14.09%、13.79%)明显降低,差异有统计均意义(P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞凋亡率(18.41%)无明显改变,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验显示,与OGD/R组(13.55%)相比,OGD/R+AS外泌体组、OGD/R+AS转染阴性序列外泌体组细胞迁移能力(43.01%、40.59%)明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);而OGD/R+AS转染抑制剂外泌体组细胞迁移能力无明显改变(16.26%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论AS源性外泌体可通过miR-193b-3p远距离抑制脑微血管内皮细胞上的TRPM2蛋白表达,改善OGD/R造成的脑微血管内皮细胞损伤,进而改善OGD/R损伤。

甲状腺癌组织中C-kit、miR-193b-3p的表达及临床意义

目的:探究甲状腺癌组织中C-kit、miR-193b-3p的表达及临床意义。方法:收集2020年1-7月首都医科大学附属北京积水潭医院甲状腺癌患者术中切除的甲状腺癌组织、癌旁组织标本103例。采用免疫组织化学法(IHC)检测C-kit蛋白表达,采用qRT-PCR法检测miR-193b-3p的相对表达水平;采用Spearman分析C-kit与miR-193b-3p在癌组织中表达相关性;采用Kaplan-Meier法分析C-kit和miR-193b-3p表达与患者预后之间的关系;采用多因素Cox分析影响患者预后的因素。结果:与癌旁组织相比,甲状腺癌组织中的miR-193b-3p的相对表达量及C-kit阳性表达率显著降低(P<0.05);且TNM分期、淋巴结转移以及分化程度不同的甲状腺癌患者的miR-193b-3p、C-kit表达差异均具有统计学意义(P<0.05);在癌组织中C-kit和miR-193b-3p表达呈正相关(P<0.05);甲状腺癌组织中miR-193b-3p高表达患者3年生存率(90.57%)高于低表达患者(70.00%);C-kit阳性表达患者3年生存率(93.1%)高于阴性表达患者(75.68%);且C-kit、miR-193b-3p为影响甲状腺癌患者预后不良的保护因素(P<0.05)。结论:在甲状腺癌组织中,C-kit、miR-193b-3p表达降低,对甲状腺癌患者的预后具有敏感性,可作为诊断标志物应用。

miR-193b对胃癌细胞浸润和转移的影响

目的探讨miR-193b转染对胃癌细胞浸润、转移的影响及其作用机制。方法应用microRNA芯片检测TGF-β1处理胃癌细胞BGC823前后miRNA的差异表达谱;应用划痕实验,transwell迁移浸润及裸鼠成瘤等实验分别检测瞬时转染miR-193b抑制剂前后胃癌细胞株生物学行为的变化。结果 TGF-β1处理胃癌细胞BGC823前后miRNA的表达谱存在6个差异表达,包括3个(miR-27a,miR-29b-1和miR-194)表达上调,3个(miR-193b,miR-574-3p和miR-130b)表达下调。转染miR-193b抑制剂后,胃癌细胞株BGC823迁移、浸润和转移的能力明显增强。结论 TGF-β1可能通过下调miR-193b的表达负向调控胃癌细胞的迁移、浸润和转移。